一种新型核酸免提取保存液
阅读说明：本技术 一种新型核酸免提取保存液 (Novel nucleic acid hand-free storage solution ) 是由 刘涛 刘硕 夏正邦 于 2021-02-09 设计创作，主要内容包括：本发明“一种新型核酸免提取保存液”,公开了一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法,该保存液包括如下组份：表面活性剂0.1-2％,酸碱缓冲剂0.1-2％,柠檬酸盐1-5％,弱酸0.1-5％,胍盐0-10％,蛋白酶K0-0.1％,螯合剂0.1-1％,防腐剂0.1-2％,其余为水,该保存液用于组织、细胞分析样本的保存,不仅包括冠状病毒、流感病毒、手足口病毒、麻疹风疹病毒,也包括其他类别的病毒和支原体、衣原体,鼻、咽拭子置于该保存液后其独特组份可以保护核酸RNA免受RNA酶的降解以及保护脱氧核糖核酸DNA免受DNA酶的降解,联合使用多种防腐剂使该试剂具有较强的抗细菌和抗真菌作用。(The invention discloses a novel nucleic acid hands-free preservation solution, and discloses a preservation solution which can be directly used for detection without subsequent nucleic acid extraction and a preparation method thereof, wherein the preservation solution comprises the following components: 0.1-2% of surfactant, 0.1-2% of acid-base buffer agent, 1-5% of citrate, 0.1-5% of weak acid, 0-10% of guanidine salt, 0-0.1% of proteinase K0, 0.1-1% of chelating agent, 0.1-2% of preservative and the balance of water, the preservative solution is used for preserving tissue and cell analysis samples, and not only comprises coronavirus, influenza virus, hand-foot-and-mouth virus and measles rubella virus, but also comprises other types of viruses, mycoplasma and chlamydia, and unique components of a nose swab and a throat swab can protect RNA from degradation of RNase and DNA from degradation of DNase after being placed in the preservative solution, and the preservative solution is combined with a plurality of preservatives to ensure that the reagent has strong antibacterial and antifungal effects.)
技术领域：
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种新型的无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法。
背景技术：
核酸是指脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子聚合物，为生命的最基本物质之一，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是所有生物分子中最重要的物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，核酸由核苷酸组成，而核苷酸单体由五碳糖、磷酸基和含氮碱基组成；如果五碳糖是核糖，则形成的聚合物是RNA；如果五碳糖是脱氧核糖，则形成的聚合物是DNA。病毒(Virus)是一种个体微小、结构简单、只含一种核酸(DNA或RNA)且必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物，如新型冠状病毒2019-nCoV、乙肝病毒、流感病毒等。
对于病毒的保存，传统的方法多采用磷酸盐、氯化钠等常用成份，其不足之处在于仅能用于保存，后续检测前仍需要再次提取核酸，即为传统保存-提取-检测步骤之一，操作麻烦。因此，研究一种保存与提取合二为一的试剂来替代常规保存液用于新冠病毒等样本的检测具有重要意义，目前已有部分替代物用于病毒样本的保存。发明专利“一种免核酸提取的病毒保存液(申请号为202010148767.4)”公开了一种免核酸提取的病毒保存液，虽然可以进行病毒保存，但有如下不足：1、吐温20更易起泡沫，由于一般采样管容积较小，泡沫容易溢出管外造成交叉感染，同时吐温20影响溶液外观和透光度；2、酸性蛋白酶价格较贵，较难大面积普及使用。发明专利“一种核酸免提取试剂及其使用方法(申请号为202011191934.X)”公开了一种核酸免提取试剂的技术，但有如下不足：1、Chelex-100和洋地黄皂苷价格较贵且不易获得；2、仅有Tris-Hcl单一缓冲剂，缓冲能力不强。
发明内容
：为了解决上述技术的不足，本发明“一种新型核酸免提取保存液”旨在提供一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液及其制备方法，该保存液包括如下组份：表面活性剂0.1-2％，酸碱缓冲剂0.1-2％，柠檬酸盐1-5％，弱酸0.1-5％，胍盐0-10％，蛋白酶K0-0.1％，螯合剂0.1-1％，防腐剂0.1-2％，其余为水，包括该核酸免提取保存液的制备方法，该病毒保存液用于组织、细胞分析样本的保存，不仅包括冠状病毒、流感病毒、手足口病毒、麻疹风疹病毒，也包括其他类别的病毒和支原体、衣原体，将采集到的具有代表性的病毒保存于该保存液，鼻、咽拭子置于该新型核酸免提取保存液后其独特组份可以保护核酸RNA免受RNA酶的降解以及保护脱氧核糖核酸DNA免受DNA酶的降解，联合使用多种防腐剂使该试剂具有较强的抗细菌和抗真菌作用。
本发明所采用的技术方案是：
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，上述保存液包括如下组份：表面活性剂0.1-2％，酸碱缓冲剂0.1-2％，柠檬酸盐1-5％，弱酸0.1-5％，胍盐0-10％，蛋白酶K0-0.1％，螯合剂0.1-1％，防腐剂0.1-2％，其余为水，包括该核酸免提取保存液的制备方法，是一种无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存液。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的表面活性剂是指曲拉通100、曲拉通114、吐温40、吐温60、吐温80、NP-40的一种或多种的混合物。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的酸碱缓冲剂是指磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、Tris的一种或多种的混合物。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的柠檬酸盐是指柠檬酸钠、柠檬酸钾一种或两种。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的弱酸是指甲酸、丙酸、丁酸的一种或两种。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的胍盐是指异硫氰酸胍、盐酸胍的一种或两种。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的蛋白酶K是指诊断试剂级以上级别的蛋白酶K。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的螯合剂是指EDTA.2Na、EDTA.2K、EGTA.2Na、EGTA.2K的一种或多种的混合物。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的防腐剂是指庆大霉素、硫柳汞钠、ProClin300、两性霉素的一种或多种的混合物。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的水是指蒸馏水、去离子水的一种或两种。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，所述的制备方法包括如下操作步骤：取上述表面活性剂、酸碱缓冲剂、柠檬酸盐、弱酸、胍盐、蛋白酶K、螯合剂、防腐剂、水，依次加入混合混匀。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液无需进行后续核酸提取步骤，可直接用于检测。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于动物、植物、细菌、真菌、病毒和细胞样本的保存。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于RNA病毒、DNA病毒的保存。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于核酸检测、免疫组化检测、蛋白检测、胶体金试纸条及其他分子生物学检测。
一种新型核酸免提取保存液，其特征在于，该保存液用于临床检测试剂和科研试剂。
本发明“一种新型核酸免提取保存液”中的新型核酸免提取保存液的制备方法包括如下操作步骤：取上述表面活性剂、酸碱缓冲剂、柠檬酸盐、弱酸、胍盐、蛋白酶K、螯合剂、防腐剂、水，依次加入混合混匀，50-300目过滤，密闭保存，即为新型核酸免提取保存液。
需要说明的是，在所述的新型核酸免提取保存液的制备过程中，各所述的试剂应分批依次加入。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述组成的用量和配比可根据具体需要进行调整，从而制备出不同特点的核酸免提取保存液。
本发明“一种新型核酸免提取保存液”与现有技术相比具有以下优点：
1、不含有毒物质，不易对人体造成危害，对人体和环境影响也极小。
2、该保存液无需进行后续核酸提取，可直接用于核酸检测。
3、该保存液与保存液相比，简便快捷。
附图说明：
图1为本发明“一种新型核酸免提取保存液”保存慢病毒的肉眼示意图，图1-1为实施例一以磷酸盐缓冲液(A管)和新型核酸免提取保存液(B管)未加入慢病毒的状态，图1-2为实施例一以磷酸盐缓冲液(A管)和新型核酸免提取保存液(B管)加入含慢病毒采样拭子后的状态；
图2为本发明“一种新型核酸免提取保存液”保存慢病毒的荧光显微镜示意图，图2-1为实施例一以磷酸盐缓冲液对慢病毒保存3分钟的荧光显微镜观察结果，图2-2为实施例一以新型核酸免提取保存液对慢病毒保存3分钟的荧光显微镜观察结果。
具体实施方式
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以下具体实施方式进一步阐明本发明“一种新型核酸免提取保存液”的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、条件、步骤及应用所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例一
本发明“一种新型核酸免提取保存液”用于保存慢病毒，该保存液包括如下组份：表面活性剂0.7％，酸碱缓冲剂1％，柠檬酸盐3％，弱酸2％，胍盐0％，蛋白酶K0％，螯合剂0.15％，防腐剂0.13％，其余为水。以下实施例以相同处理时间、同一病毒、相同温度的磷酸盐缓冲液作为对照。
新型核酸免提取保存液的制备方法：取上述表面活性剂7ml、酸碱缓冲剂10g、柠檬酸盐30g、弱酸20ml、胍盐0g、蛋白酶K0g、螯合剂1.5g、防腐剂1.3g，补水至1000ml，依次混合，充分混匀，100目过滤，密闭保存，即为新型核酸免提取保存液。
取3ml磷酸盐缓冲液，对同一慢病毒保存3分钟；取3ml经上述步骤配制的新型核酸免提取保存液，对同一慢病毒保存3分钟；结果见附图1、2。
实验结果显示，以同一慢病毒保存时，在同等条件下，以实施例一的磷酸盐缓冲液与新型核酸免提取保存液对比，新型核酸免提取保存液未见病毒，磷酸盐缓冲液病毒仍然存在；由此说明新型核酸免提取保存液能够完全裂解该慢病毒，磷酸盐缓冲液无法裂解该慢病毒，即新型核酸免提取保存液无需进行后续核酸提取即可直接用于检测。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述处理时间、样本、温度可根据具体需要进行调整，而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍应属于本发明创造的保护范围内。
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