一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法
阅读说明：本技术 一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法 (MXene biological response characteristic metabonomics analysis method ) 是由 张定坤 龚萌 于 2020-12-31 设计创作，主要内容包括：本发明属于代谢组学分析技术领域,具体涉及一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法。针对上述现有技术中的困难,本发明提供的分析方法包括如下步骤：(1)将MXene纳米材料与细胞共培养后得到待分析生物样品；(2)提取待分析生物样品中的非靶向水溶性代谢物样品、非靶向脂溶性代谢物样品和靶向水溶性代谢物样品中的至少一种；(3)通过液相色谱-质谱对非靶向水溶性代谢物样品,和/或,非靶向脂溶性代谢物样品进行检测,和/或,通过气相色谱-质谱对靶向水溶性代谢物样品进行检测。本发明还对生物样品的处理条件、提取条件及检测条件进行了优选。本发明为后续MXene纳米材料的改性与临床应用研究提供新的研究方法,应用前景广阔。(The invention belongs to the technical field of metabonomics analysis, and particularly relates to an MXene biological response characteristic metabonomics analysis method. In view of the above-mentioned difficulties in the prior art, the analysis method provided by the present invention comprises the following steps: (1) co-culturing MXene nanometer material and cells to obtain a biological sample to be analyzed; (2) extracting at least one of a non-targeted water-soluble metabolite sample, a non-targeted lipid-soluble metabolite sample, and a targeted water-soluble metabolite sample in a biological sample to be analyzed; (3) detecting a non-targeted water-soluble metabolite sample, and/or a non-targeted fat-soluble metabolite sample, by liquid chromatography-mass spectrometry, and/or detecting a targeted water-soluble metabolite sample by gas chromatography-mass spectrometry. The present invention also optimizes the treatment conditions, extraction conditions and detection conditions of the biological sample. The invention provides a new research method for the subsequent modification and clinical application research of MXene nano-materials, and the application prospect is wide.)
技术领域
本发明属于代谢组学分析技术领域，具体涉及一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法。
背景技术
代谢组学作为一种具有各类特征和显著优势的经典检测和分析技术，其内在相关原理和实际应用目前已引起了研究者们的巨大的关注。而该技术在揭示体内代谢过程与生命行为等领域同样显示出了卓越的优势，同时基于现代代谢组学的进一步技术创新和发展的研究也已经持续了多年且成果丰硕。目前代谢组学已成功实现对数千种代谢物小分子(<1500Da)结构与含量进行检测与分析，揭示了它们与生物体的固有联系。由于代谢组学所具有的表型的生物相容性、高通量分析过程、低廉的检测成本和信息丰富的分析结果等优势，其已被广泛用于微生物，细胞，植物，哺乳动物和环境等各类生命体系，考察生命体内的代谢变化规律。同时，代谢组学在毒理学评价，新药物开发，临床诊断，疾病治疗，食品安全和环境化学等研究领域也取得了许多前沿而有意义的结果。近期基于代谢组学的相关研究主要集中于技术改进和新型研究领域的开发，这对代谢物检测种类与灵敏度的发展提出了更高的要求。
为了实现这一目标，将现代分析技术与化学计量学统计软件相结合的新型代谢组学研究平台成功实现了代谢物的有效检测以及后续数据的整合处理，并根据所得结果总结了内源性和异源性代谢过程。在现有的检测手段中，液相色谱-串联质谱(LC-MS)和气相色谱-质谱(GC-MS)是代谢组学研究的强大工具，具有高灵敏度，样品处理简单，覆盖范围广，时间短等优点，实现了数千种代谢物的同时检测并被广泛利用。目前基于LC-MS，GC-MS和数据统计软件的组学分析平台已被广泛用于非靶向-靶向联用代谢组学研究。毫无疑问，该组学分析平台将为未来生命体内在变化的研究与技术优化发挥至关重要的作用，为非靶向-靶向联用代谢组学的实际应用和技术改进提供了宝贵的理论与实践参考。
二维薄片状Ti3C2(MXene)纳米片因其优良的理化特性和超薄形貌引起了研究者们的关注。MXene的高导电性，易于表面改性，良好的机械性能等特点使其成为各个研究领域富有潜力的新星。近年来，最近，MXene在多个生物医学领域如仿生学，器官再生，生物成像，抗菌和光热治疗的应用日渐增多。而为了在生物医疗领域更好地对MXene进行应用，通常需要根据MXene的应用场景针对性地研究“生物体-MXene”相互作用体系的内在干预过程和分子机理。其中需要研究的问题包括不同生物体系(组织细胞不同)和不同条件下(比如温度、纳米材料的用量)下，MXene对代谢通路的影响。针对该问题，代谢组学分析技术是一种非常好的选择。
然而，在代谢组学研究中，其中一个难题是如何从生物样品中分离出各种代谢物并进行有效的检测。通常，生物体的代谢产物化学成分复杂，且各种待分析的目标化合物存在多种杂质干扰，因而在进行LC-MS和GC-MS检测前，通常需要特定的方法对生物样品进行处理和提取。且LC-MS和GC-MS的检测条件也应当根据待检测目标代谢物的种类和含量进行设计。
目前对于MXene与生物体的相互作用认识还很少，其相互作用体系的内在干预过程和分子机理仍然不清楚的情况下，无法根据待检测的目标代谢物确定代谢组学分析方法中生物样品的处理条件、提取条件及检测条件。
发明内容
针对上述现有技术中的困难，本发明提供一种MXene生物响应特性非靶向-靶向联用代谢组学分析方法，其目的在于：提供优选的生物样品的处理条件、提取条件及检测条件，使其适用于MXene与生物体相互作用体系的代谢组学研究。为后续MXene纳米材料的改性与临床应用研究提供新的研究方法。
一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法，包括如下步骤：
(1)取与MXene纳米材料作用后的待分析生物样品；
(2)提取待分析生物样品中的非靶向水溶性代谢物样品、非靶向脂溶性代谢物样品和靶向水溶性代谢物样品中的至少一种；
(3)通过液相色谱-质谱对非靶向水溶性代谢物样品，和/或，非靶向脂溶性代谢物样品进行检测，和/或，通过气相色谱-质谱对靶向水溶性代谢物样品进行检测；
其中，所述非靶向水溶性代谢物样品检测时溶于水中，色谱条件为：流动相以体积分数5-10％的乙腈水溶液为A相，体积分数90-95％的乙腈水溶液为B相；色谱柱采用酰胺基亚乙基桥杂化颗粒为填料；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品检测时溶于二氯甲烷/甲醇混合溶液中，色谱条件为：流动相以体积分数60-70％的乙腈水溶液为A相，体积分数90-95％异丙醇的乙腈溶液为B相；色谱柱采用C30或C18硅胶色谱柱；
和/或，所述靶向水溶性代谢物样品检测时溶于甲醇中，色谱条件为：载气为氦气；色谱柱采用聚二甲基硅氧烷颗粒为填料。
优选的，步骤(1)中，所述细胞为人血管内皮细胞、肝细胞或者肾细胞；
和/或，所述待分析生物样品是与MXene纳米材料共培养后的生物样品，共培养时间大于等于12小时，优选共培养时间为24～48小时。
优选的，步骤(2)中，所述非靶向水溶性代谢物样品的提取方法为：用磷酸缓冲液清洗所述待分析生物样品，加入胰蛋白酶，得到细胞悬浮液，用甲醇分离，取上清液，干燥，即得；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品的提取方法为：用磷酸缓冲液清洗所述待分析生物样品，加入胰蛋白酶，得到细胞悬浮液，用甲醇和甲基叔丁基醚分离，取上清液，浓缩，即得；
和/或，所述靶向水溶性代谢物样品的提取方法为：取非靶向水溶性代谢物样品，复溶，衍生化，并再次分离，取上清液，干燥，即得。
优选的，步骤(2)中，所述非靶向水溶性代谢物样品的提取方法为：用磷酸缓冲液清洗所述待分析生物样品，加入0.25wt.％的胰蛋白酶溶液，加入量为1～2ml/10000000个细胞，优选为1ml/10000000个细胞，得到细胞悬浮液，加入体积分数75-80％的甲醇水溶液，优选为，80％的甲醇水溶液，超声处理20～30min，优选为30min，涡旋震荡20～30min，优选为20min，10000～13000rpm离心5～10min，优选为13000rpm离心5min，取上清液，干燥，即得；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品的提取方法为：用磷酸缓冲液清洗所述待分析生物样品，加入0.25wt.％的胰蛋白酶溶液，加入量为1～2ml/
10000000个细胞，优选为1ml/10000000个细胞，得到细胞悬浮液，加入甲醇，涡旋震荡5～10min，优选为5min，依次加入甲基叔丁基醚和水，10000～13000rpm离心5～10min，优选为13000rpm离心5min，取上清液，浓缩，即得；
和/或，所述靶向水溶性代谢物样品的提取方法为：取非靶向水溶性代谢物样品，用吡啶复溶，衍生化，10000～13000rpm离心5～10min，优选为13000rpm离心5min，取上清液，干燥，即得。
优选的，所述衍生化的过程为：加入甲氧基胺盐酸盐的吡啶溶液在60-65℃下孵育90-100min，优选为在60℃下孵育90min；然后加入N-甲基-N-(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺在60-65℃下孵育20-30min，优选为在60℃下孵育30min。
优选的，所述靶向水溶性代谢物样品中包括如下特征代谢物中的至少一种：乌头酸，4-氨基丁酸，柠檬酸，磷酸二羟丙酮，富马酸，谷氨酸，1-磷酸甘油，α-酮戊二酸，乳酸，苹果酸，6-磷酸葡萄糖酸，3-磷酸甘油酸，天冬酰胺，天冬氨酸，丙氨酸，谷氨酰胺，甘氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，脯氨酸，缬氨酸，花生酸，二十碳五烯酸，反油酸，十七酸，亚油酸，十四酸，棕榈酸，壬酸和硬脂酸。
优选的，步骤(3)中，所述非靶向水溶性代谢物样品检测的色谱条件为：流动相以体积分数5％的乙腈水溶液为A相，体积分数95％的乙腈水溶液为B相；
和/或，所述非靶向水溶性代谢物样品检测的色谱条件还包括：所述A相中还包含5-10mM乙酸铵和0.1-0.5wt.％乙酸，优选为包含5mM乙酸铵和0.1wt.％乙酸，所述B相中还包含5-10mM乙酸铵和0.1-0.5wt.％乙酸，优选为包含5mM乙酸铵和0.1wt.％乙酸；
和/或，流动相以体积分数60％的乙腈水溶液为A相，体积分数90％异丙醇的乙腈溶液为B相；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品检测的色谱条件还包括：所述A相中还包含10-15mM甲酸铵和0.1-0.5wt.％甲酸，优选为包含10mM甲酸铵和0.1wt.％甲酸，所述B相中还包含10-15mM甲酸铵和0.1-0.5wt.％甲酸，优选为包含10mM甲酸铵和0.1wt.％甲酸。
优选的，步骤(3)中，所述非靶向水溶性代谢物样品检测的色谱条件还包括：洗脱梯度为：
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品检测的色谱条件还包括：洗脱梯度为：
优选的，步骤(3)中，所述非靶向水溶性代谢物样品检测的色谱条件还包括：流动相流速为200-300μl/min，优选为300μl/min，色谱柱温度为35-40℃，优选为35℃，进样量为2-5μl，优选为5μl；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品检测的色谱条件还包括：流动相流速为200-260μl/min，优选为260μl/min，色谱柱温度为40-45℃，优选为45℃，进样量为2-5μl，优选为2μl；
和/或，所述靶向水溶性代谢物样品检测的色谱条件还包括：色谱柱温度为35-40℃，优选为35℃，进样量为2-5μl，优选为5μl，载气流速为0.5-1ml/min，优选为0.5ml/min，进样器的温度为250-300℃，优选为250℃；
和/或，步骤(3)中，所述非靶向水溶性代谢物样品检测的质谱检测条件为：扫描方式为正、负离子同时扫描，毛细管温度为350-400℃，优选为350℃，鞘气流速为35-40单位，优选为35单位，辅助气流速为10-20单位，优选为10单位，喷雾电压为3.5-4kV，优选为3.5kV；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品检测的质谱检测条件为：扫描方式为正、负离子同时扫描，毛细管温度为320-350℃，优选为320℃，优选为鞘气流速为40-45单位，优选为45单位，辅助气流速为8-10单位，优选为8单位，喷雾电压为3.5-4kV，优选为3.5kV；
和/或，所述靶向水溶性代谢物样品检测的质谱检测条件为：全扫描模式m/z 50-600，碰撞电离能为70-80eV，优选为70eV，溶剂延迟设置为5.9-6min，优选为5.9min。
优选的，步骤(3)中，通过液相色谱-质谱和/或气相色谱-质谱检测得到的结果用于代谢途径的分析，所述代谢途径的分析包括如下步骤：
(4.1)基于R语言算法对液相色谱-质谱和/或气相色谱-质谱检测得到的结果进行代谢物分析与鉴定得到统计结果；
(4.2)对统计结果归一化后，执行主成分分析、偏最小二乘判别分析或正交偏最小二乘判别分析对代谢物进行分组；
(4.3)通过R语言MetaboAnalyst进行代谢途径分析，以鉴别代表性的代谢途径。
本发明提供的生物样品的检测方法中，分别对非靶向水溶性代谢物样品、非靶向脂溶性代谢物样品和靶向水溶性代谢物样品的检测条件进行了优化，能够满足对生物样本中各种特征代谢物的分离和检测。提高了代谢物的检测和鉴定的准确性，进而提高了后续代谢途径分析的准确性。通过本发明方法，能够实现对不同生物体系中和不同环境条件下MXene对生物代谢通路影响的研究。
此外，本发明中的非靶向代谢组学主要从宏观角度研究MXene对代谢物的影响程度，考察差异代谢物与代谢通路的种类与数量。而靶向代谢组学主要从微观角度具体分析存在密切联系的某几个代谢物和代谢通路，从细节角度出发总结MXene的影响规律。而靶向代谢组学考察的代谢物和代谢通路可基于非靶向代谢组学的分析结果进行选择，使其针对性更强，更有利于得到有意义和重要的生物学信息。
在检测方法的选择上，靶向检测需要利用气相色谱独有的窄时间窗口，保留时间稳定，操作简便等优点；而非靶向检测需要利用液相色谱独有的化合物种类覆盖范围广，灵敏度高等优点，本发明能够有效结合二者的优势，以期能够有效进行非靶向和靶向代谢组学研究，揭示MXene的生物响应特性。
本发明提还具有操作方便，成本经济实惠，材料环保，对环境友好，设计简洁，适用于实验室研究及户外测试，便于实时进行MXene纳米材料生物响应特性的非靶向-靶向联用代谢组学研究的优点。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的
具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1是本发明MXene生物响应特性的非靶向-靶向联用代谢组学分析方法的流程示意图；
其中，1为MXene纳米材料，2和6为细胞培养皿，3和7为细胞培养基，4为非靶向水溶性代谢物样品或非靶向脂溶性代谢物样品，5为非靶向液相色谱-质谱检测，8为靶向水溶性代谢物，9为靶向气相色谱-质谱检测，10为生物信息学统计与分析。
图2是本发明MXene生物响应特性的非靶向-靶向联用代谢组学分析方法应用时的逻辑示意图。
图3是本发明实施例1不同浓度MXene纳米材料(100ng/ml或500ng/ml)与HUVEC细胞共培养下对细胞(a)靶向代谢物和(b-c)代谢途径的影响结果。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的说明。若无特殊说明，所用实验方法为常规实验方法，所使用的仪器，试剂和原材料等均可通过商业途径获得。实施例中，未特别说明的情况下，溶液、混合溶液或混合气体的浓度均为体积浓度，比例均为体积比例。
实施例1 MXene纳米材料生物响应特性的非靶向-靶向联用代谢组学分析方法
MXene纳米材料：MXene(Ti3C2)纳米材料购买于南京先丰纳米材料科技有限公司。
共培养的培养基为包含10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素溶液的DMEM(DulbeccoModified Eagle Medium)培养基。
本实施例的具体步骤如图1、2所示，具体如下：
1、MXene纳米材料与细胞共培养
将接种有HUVEC细胞的培养皿在5％CO2的气氛中，于37℃的培养箱中培养。每两天更换一次培养基，以维持细胞的活力。
待细胞生长到指数增长期，用磷酸缓冲液清洗HUVEC细胞，然后加入1ml胰蛋白酶，得到细胞悬浮液。取2ml细胞悬浮液(细胞浓度为1×105个/mL)分散，并接种到6孔板的各个孔中。然后，将2种剂量的MXene纳米材料1分别加入孔板，混合均匀，使孔板中MXene纳米材料1的浓度分别为100ng/ml和500ng/ml，每种浓度五个孔。将加样后的培养皿在培养箱中共培养48h。即得待分析生物样品。
2、非靶向代谢物样品提取与检测
将步骤1共培养后得到的待分析生物样品用磷酸缓冲液清洗，然后加入1ml胰蛋白酶，得到细胞悬浮液。
(1)非靶向水溶性代谢物样品的制备：取1/2体积的细胞悬浮液，加入1ml预冷的80％甲醇水溶液淬灭30min。此后，将该细胞悬浮液在冰浴中超声处理30min并涡旋震荡20min，然后离心(13000rpm)处理5min后，将上清液转移至新试管中，并真空干燥3小时，得到非靶向水溶性代谢物样品，保存备用。
非靶向水溶性代谢物样品的检测：取非靶向水溶性代谢物，加水复溶，离心除去沉淀，取上清液装瓶，进入液相色谱-质谱进行检测，得到非靶向水溶性代谢物的液相色谱-质谱谱图原始数据。
其中，液相色谱设置条件为：流动相流速为300μl/min，流动相组成为(A)5％乙腈水溶液(包括5mM乙酸铵和0.1％乙酸)和(B)95％乙腈水溶液(包含5mM乙酸铵和0.1％乙酸)，相关洗脱梯度如表1所示。色谱柱采用酰胺基亚乙基桥杂化颗粒为填料(2.1mm×100mm，1.7μm)，温度设置为35℃。进样量为5μl。质谱设置条件为：质谱由加热电喷雾电离源(H-ESI)和Orbitrap质量分析仪组成，扫描方式为正、负离子同时扫描，毛细管温度为350℃，鞘气流速为35单位，辅助气流速为10单位，喷雾电压为3.5kV。
表1非靶向水溶性代谢物样品色谱分析中的洗脱梯度
(2)非靶向脂溶性代谢物样品的制备：取剩余1/2体积的细胞悬浮液，通过离心除去上清液，然后加入300μl甲醇，涡旋震荡5min后，将体系与1ml甲基叔丁基醚混合并轻轻摇动。随后，加入250μl H2O，并缓慢摇动1h。然后离心(13000rpm)处理5min后，将上清液转移至新试管中，并用氮气流处理30min进行浓缩，得到非靶向脂溶性代谢物，保存备用。
非靶向脂溶性代谢物样品的检测：取脂溶性代谢物，加甲醇和二氯甲烷复溶，进入液相色谱-质谱进行检测，得到脂溶性代谢物的液相色谱-质谱谱图原始数据。
其中，液相色谱设置条件为：流动相流速为260μl/min，流动相组成为(A)60％乙腈水溶液(含有10mM甲酸铵和0.1％甲酸)和(B)90％异丙醇的乙腈溶液(包括10mM甲酸铵和0.1％甲酸)，相关洗脱梯度如表2所示。C30色谱柱(2.1mm×150mm，2.6μm)温度设置为45℃。进样量为2μl。MS设置条件为：MS由加热电喷雾电离源(H-ESI)和Orbitrap质量分析仪组成，扫描方式为正、负离子同时扫描，毛细管温度为320℃，鞘气流速为45单位，辅助气流速为8单位，喷雾电压为3.5kV。
表2非靶向脂质样品色谱分析中的洗脱梯度
3、靶向代谢物样品提取与检测
取非靶向水溶性代谢物样品，用吡啶复溶，在60℃下将上述样品与30μl，40mg/ml甲氧基胺盐酸盐-吡啶混合并孵育90min。然后，在60℃下加入70μl N-甲基-N-(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺并孵育30min。经离心处理(13000rpm，10min，25℃)后，取上清液，干燥，得到靶向水溶性代谢物样品，保存备用。
靶向水溶性代谢物的检测：取靶向水溶性代谢物，加甲醇复溶，离心除去沉淀，取上清液装瓶，进入气相色谱-质谱进行检测，得到靶向水溶性代谢物的气相色谱-质谱谱图原始数据。
其中，气相色谱设置条件为：色谱柱填料为聚二甲基硅氧烷颗粒，色谱柱温度为35℃；进样量为5μl；载气为氦气，载气流速为0.5ml/min；进样器的温度为250℃。采用的质谱条件为：质谱的扫描模式为全扫描模式(m/z50-600)，碰撞电离能为70eV，溶剂延迟设置为5.9min。
4、生物信息学统计分析
数据预处理：将非靶向水溶性代谢物的液相色谱-质谱谱图原始数据导入到Progenesis QI软件中，将非靶向脂溶性代谢物的液相色谱-质谱谱图原始数据导入到MS-DIAL软件中，将靶向水溶性代谢物的气相色谱-质谱谱图原始数据导入到MassHunter软件中，原始数据经过基线校正，去噪，平滑，时间窗分割和多元曲线解析算法，进行信息提取，得到MXene处理后的液相色谱-质谱和/或液相色谱-质谱谱图的特征峰的保留时间和强度。
基于人类代谢组数据库(HMDB)，采用R语言算法对处理后的液相色谱-质谱和/或液相色谱-质谱谱图谱图进行代谢物鉴定，得到统计结果。
通过KNN算法与LOESS信号校正进行进一步缺失值归因处理。然后，执行主成分分析(PCA)，偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)，将各代谢物进行比较，考察MXene对细胞代谢组学的影响特性。
通过R语言MetaboAnalyst实现代谢途径分析，以鉴定MXene干预下细胞的代表性代谢途径。
分析结果显示，MXene纳米材料与HUVEC细胞共培养，MXene的浓度(100ng/ml或500ng/ml)对细胞的靶向代谢产物和代谢途径有影响，具体分析实验结果如图3所示：
由图3a可知，本发明实施例中，100ng/ml或500ng/ml MXene纳米材料与HUVEC细胞共培养后，提取得到的靶向特征代谢物包含氨基酸，有机酸，脂肪酸等，具体包括：乌头酸，4-氨基丁酸，柠檬酸，磷酸二羟丙酮，富马酸，谷氨酸，1-磷酸甘油，α-酮戊二酸，乳酸，苹果酸，6-磷酸葡萄糖酸，3-磷酸甘油酸，天冬酰胺，天冬氨酸，丙氨酸，谷氨酰胺，甘氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，脯氨酸，缬氨酸，花生酸，二十碳五烯酸，反油酸，十七酸，亚油酸，十四酸，棕榈酸，壬酸，硬脂酸。其中，与空白组(control，即不加入MXene的情况下，采用相同的条件培养细胞并提取和检测样品)相比，高浓度500ng/ml MXene对细胞靶向代谢物的影响较大，而低浓度100ng/ml MXene对细胞靶向代谢物的影响较小。
由图3b可知，低浓度100ng/ml MXene干预HUVEC细胞所涉及的靶向代谢途径主要包含氮代谢，乙醛酸和二羧酸代谢，谷氨酰胺和谷氨酸代谢，氨基酸生物合成，精氨酸和脯氨酸代谢，丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢，2-氧代羧酸代谢。差异代谢路径相对较少且各个代谢路径相对空白组变化趋势不大。
由图3c可知，高浓度500ng/ml MXene干预HUVEC细胞所涉及的靶向代谢途径主要包含缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸代谢，三羧酸循环，乙醛酸和二羧酸代谢，甘油磷脂代谢，甘油脂代谢，脂肪酸生物合成，谷氨酰胺和谷氨酸代谢，不饱和脂肪酸生物合成，氨基酸生物合成，精氨酸生物合成，精氨酸和脯氨酸代谢，丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢，2-氧代羧酸代谢。差异代谢路径相对较多且各个代谢路径相对空白组变化趋势较大。
通过上述实施例可见，采用本发明方法提供的处理条件、提取条件及检测条件，能够有效地分析MXene纳米材料与生物体相互作用体系的代谢物组学。相对于传统的单一代谢组学分析技术，本发明中联用代谢组学分析方法能够分别从宏观与微观两个角度全面考察MXene干预下代谢组学的变化规律与机理，兼顾了全面性与特殊性，能够有效揭示MXene对于细胞代谢组学的影响原理，为评估MXene的生物响应特性提供了依据，可用于MXene在不同的生物体系和不同环境条件下对生物体系代谢通路影响的评价，应用前景广阔。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种绝缘纸老化特征产物含量的测定方法