具体实施方式

本公开部分涉及制备哌仑他韦

(CAS编号1353900-92-1)，一种NS5A抑制剂的方法。

制备哌仑他韦的方法适用于按照良好操作实践以商业规模制造药物物质。本文所述方法提供的哌仑他韦的杂质分布非常低，同时仍保持了所期望的改良的可制造性，以获得适于商业规模生产的基本上纯的活性物质。

本公开内容还部分涉及化合物(IIa)，

其可用于制备化合物(I)

化合物(I)是哌仑他韦合成的中间体。

本文所述的方法提供了改良的可制造性，以获得适于商业规模制造的基本上纯的活性物质。所期望的产品必须使用能够提供严格的纯度标准以满足法规要求并且在经济上也可行的方法制备。许多因素会影响经济可行性，包括原材料成本、工艺产率、工艺吞吐量和总合成时间。

本详细描述仅旨在使本领域的其它技术人员熟悉本公开、其原理以及其实际应用，以便本领域的其它技术人员可以以其多种形式来改编和应用本公开，因为这些多种形式可能最适合于特定用途的要求。本描述和其特定实例仅用于说明目的。因此，本公开不限于本专利申请中描述的实施例，并且可以进行各种修改。

定义

注意，如在本说明书和预期的权利要求书中所使用的，单数形式的“一个(种)(a/an)”和“所述”包括复数个指示物，除非上下文另外明确指出。因此，例如，提及“一种化合物”包括单一化合物以及一种或多种相同或不同的化合物，提及“一种药学上可接受的载体”是指单一药学上可接受的载体以及一种或多种药学上可接受的载体，等。

如在说明书和所附权利要求书中使用的，除非有相反的说明，否则下列术语具有所指示的含义：

在一些情况下，部分中的碳原子数由前缀“C_x-C_y”表示，其中x是取代基中的最小碳原子数，而y是最大碳原子数。因此，例如，“C₁-C₆烷基”意指含有1到6个碳原子的烷基取代基，而“C₁-C₃烷基”意指含有1到3个碳原子的烷基取代基。同样，例如，本文所用的“C₆-C₁₀芳基”意指具有6到10个环碳原子的苯基或双环芳基。

如本文所用，术语“烷基”意指饱和的直链或支链的烃链基团。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1-乙基丙基和1,2,2-三甲基丙基。

本文所用的术语“芳基”意指单环，双环稠合或三环稠合的烃环系统基团，其中一个或多个烃环是芳香族的。双环芳基为萘基，或与C₃-C₆单环环烷基稠合的苯基，或与C₄-C₆单环环烯基稠合的苯基。双环芳基和三环芳基通过环系统中所含的任何碳原子连接至母体分子部分。芳基的代表性实例包括苯基、二氢茚基、茚基、萘基、二氢萘基和四氢萘基。

本文所用的术语“杂芳基”意指含有一个或多个杂原子的芳环基或含有一个或多个杂芳基环的环系统。单环杂芳基是五或六元环。五元环含有两个双键。五元环可含有一个选自O或S的杂原子；或一个、两个、三个或四个氮原子和任选一个氧或硫原子。六元环含有三个双键和一个、两个、三个或四个氮原子。单环杂芳基的代表性实例包括但不限于呋喃基、咪唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、1,3-噁唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、1,3-噻唑基、噻吩基、三唑基和三嗪基。双环杂芳基由以下组成：与苯基稠合的单环杂芳基、或与单环环烷基稠合的单环杂芳基、或与单环环烯基稠合的单环杂芳基、或与单环杂芳基稠合的单环杂芳基、或与单环杂环稠合的单环杂芳基。双环杂芳基的代表性实例包括但不限于苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噁二唑基、6,7-二氢-1,3-苯并噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、萘啶基、吡啶并咪唑基、喹啉基、噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基、噻唑并[5,4-d]嘧啶-2-基和5,6,7,8-四氢喹啉-5-基。

如本文所用，术语“药物产品”通常是指包含一种或多种治疗剂，例如小分子的组合物。所述药物产品适合于施用于需要治疗剂的个体，例如人类个体。举例来说，药物产品可以包含一种或多种治疗剂以及缓冲剂和/或赋形剂。

如本文所用，术语“药物物质”是指包含治疗剂，例如小分子的组合物，所述组合物需要进一步处理以变成药物产品。举例来说，药物物质可以包含治疗剂，但是不适合出于治疗目的施用，并且需要进一步加工以成为药物产品。

如本文所用，术语“杂质(impurity/impurities)”意指本文具体描述的那些杂质；衍生自方法的那些杂质，包括方法中使用的试剂或溶剂；方法中使用的中间体；或降解物，包括方法中所合成的化合物的降解物。

如本文所用，术语“基本上纯的”在提及化合物使用时是指这样的调配物或组合物，其中所述调配物/组合物含有按重量计超过97％的化合物，优选地按重量计超过98％的化合物，且更优选重量计超过99％的化合物。

可以按照以下反应流程中的说明制备哌仑他韦。如流程1所示，化合物(III)的手性还原得到S,S-二醇和R,S-二醇，即分别是化合物(I)和(II)的混合物。通过HPLC方法B测定，化合物(I)和(II)的混合物可包含至少约80％的化合物(I)。在其它方面，通过HPLC方法B测定，混合物包含至少约85％的化合物(I)。在又其它方面，通过HPLC方法B测定，混合物包含至少约90％的化合物(I)。

流程1

化合物(I)用于哌仑他韦的合成。纯化化合物(I)和(II)的混合物以提高化合物(I)与(II)的比率。尽管如Wagner,R.等人.《药物化学杂志(J.Med.Chem.)》2018,61(9),4052-4066所述，柱色谱法可用于分离化合物(I)和(II)，但色谱法由于成本和低通量而对于制造规模来说并不理想。通过制造规模的固液分离，更方便且更经济地进行分离。

申请人惊奇地发现化合物(IIa)，其是1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷与化合物(II)的复合物。

化合物(IIa)可以是固体形式。化合物(IIa)也可以是结晶形式。1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷与化合物(II)的比率是约1:1。在一个方面，化合物(IIa)具有X射线粉末衍射图，当在约25℃下用Cu-K_α1辐射以测量时，所述衍射图在11.2、11.9、14.7、16.3、17.7、19.4、19.9、22.7、25.0、27.0°2θ±0.2处包含峰。在另一方面，化合物(IIa)具有X射线粉末衍射图，当在约25℃下用Cu-K_α1辐射以测量时，所述衍射图在11.2、11.9、14.7、16.3、17.7、19.4、19.9、22.7、25.0、27.0°2θ±0.1处包含峰。在又另一方面，化合物(IIa)具有X射线粉末衍射图，当在约25℃下用Cu-K_α1辐射以测量时，所述衍射图在11.2、11.9、14.7、16.3、17.7、19.4、19.9、22.7、25.0、27.0°2θ处包含峰。化合物(IIa)具有基本上如图1所示的X射线粉末衍射图。

解析化合物(IIa)的晶体结构，并且参数如实例部分中所述。在一个方面，化合物(IIa)具有三斜晶格类型，其具有P-1空间群，晶胞a值为约晶胞b值为约且晶胞c值为约在另一方面，化合物(IIa)具有三斜晶格类型，其具有P-1空间群，晶胞a值为约晶胞b值为约晶胞c值为约晶胞角α为约92.4°，晶胞角β为约102.7°，且晶胞角γ为约91.8°。在另一方面，化合物(IIa)具有三斜晶格类型，其具有P-1空间群，晶胞a值为约晶胞b值为约晶胞c值为约11.2，晶胞角α为约92.4°，晶胞角β为约102.7°，晶胞角γ为约91.8°，且晶胞体积为约

化合物(IIa)可以通过添加1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷由化合物(II)制备。举例来说，化合物(II)可以溶解在合适的溶剂中，所述溶剂包括但不限于甲苯和四氢呋喃的混合物。1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷接着可以无溶剂形式或以于合适溶剂中的溶液形式加入，所述溶剂包括但不限于甲苯/四氢呋喃。化合物(IIa)也可以通过向化合物(I)和(II)的混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷由所述混合物制备。化合物(I)和(II)的混合物可以溶解在合适的溶剂中，所述溶剂包括但不限于甲苯和四氢呋喃的混合物。在一些方面，1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷的量可以基于混合物中化合物(II)的量。举例来说，可以添加相对于化合物(I)和(II)的混合物中存在的化合物(II)的量不超过1.5摩尔当量的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷。在其它方面，可以使用不超过1.4摩尔当量的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷。在又其它方面，可以使用约1.0到1.5摩尔当量的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷。在又其它方面，可以使用约1.3到1.5摩尔当量的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷。

添加到化合物(I)和(II)的混合物中的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷的量影响分离出的用于合成哌仑他韦的化合物(I)的数量和产率。举例来说，可以用表1所示的不同量的1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷处理化合物(I):(II)于甲苯:四氢呋喃(84:16)比率中的的84:16混合物。表1中的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷的当量是基于被还原以形成化合物(I和II)的粗混合物的化合物(III)的摩尔数。化合物(IIa)从溶液中沉淀出来，并与滤液分离。然后如实例2中所述从滤液中分离出化合物(I)。通常，随着1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷的当量提高，化合物(I)的产率降低，并且利用化合物(I):(II)的比率指示的纯度提高。申请人已经发现，使哌仑他韦的产率最大化而不牺牲哌仑他韦纯度的最佳操作条件是相对于被还原以形成化合物(I和II)的粗混合物的化合物(III)的摩尔数，使用0.23当量的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷。在一个方面，相对于化合物(III)的摩尔数，使用约0.13-0.33当量的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷。在另一方面，相对于化合物(III)的摩尔数，使用约0.18-0.28当量的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷。在又另一方面，相对于化合物(III)的摩尔数，使用约0.23当量的1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷。

表1.DABCO当量与化合物(I)的产率和纯度

还考虑了可以与化合物(I)分离的化合物(II)的其它复合物。举例来说，化合物(II)可以与其它二胺复合。二胺的实例包括但不限于在Toda等人,《化学通讯(ChemistryLetters)》,1986,1905-1908中描述的那些，所述文献特此以引用的方式并入。二胺的具体实例包括分别形成复合物化合物(IIb、IIc、IId和IIe)的1,4-二甲基哌嗪、1,4-二(丙-2-基)哌嗪、N¹,N¹,N²,N²-四甲基乙烷-1,2-二胺和吡嗪。

在一个实施例中，制备化合物(I)的方法包含分离化合物(IIa)与化合物(I)。在一个方面，所述方法包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷；形成化合物(IIa)，以及将化合物(IIa)与化合物(I)分离。以这种方式，纯化化合物(I)以用于哌仑他韦的合成。

化合物(IIa)可以通过本领域技术人员已知的任何方式与化合物(I)分离。在一个方面，通过沉淀化合物(IIa)将化合物(IIa)与化合物(I)分离。举例来说，可以将1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷加入化合物(I)和(II)于合适的溶剂中的混合物中，所述溶剂包括但不限于甲苯/四氢呋喃、庚烷/四氢呋喃、庚烷/2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯和丙酮。化合物(IIa)优先从溶液中沉淀出来，因为化合物(IIa)的溶解度低于由化合物(I)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷形成的复合物。化合物(IIa)可通过过滤与化合物(I)分离，得到包含化合物(I)的滤液。通过HPLC方法B测定，滤液具有的化合物(I)相对于化合物(II)的相对百分比为至少90面积％。在其它方面，通过HPLC方法B测定，滤液具有的化合物(I)相对于化合物(II)的相对百分比为至少92面积％。

沉淀化合物(IIa)是纯化化合物(I)和(II)的混合物的有利方式。以这种方式，提高了滤液中化合物(I)与化合物(II)的比率，从而可以分离纯化的化合物(I)。举例来说，可以通过将溶剂交换成合适的溶剂并沉淀化合物(I)而从滤液中分离出化合物(I)。将滤液溶剂交换为异丙醇，然后加入HCl和水，引起固体化合物(I)沉淀，所述固体化合物(I)可以通过过滤分离。通过HPLC方法B测定，形成的分离的化合物(I)包含至少92面积％的化合物(I)和不超过8面积％的化合物(II)。在其它方面，通过HPLC方法B测定，分离的化合物(I)包含至少95面积％的化合物(I)和不超过5面积％的化合物(II)。在又其它方面，通过HPLC方法B测定，分离的化合物(I)包含至少98面积％的化合物(I)和不超过2面积％的化合物(II)。在再其它方面，通过HPLC方法B测定，分离的化合物(I)包含至少99面积％的化合物(I)和不超过1面积％的化合物(II)。化合物(I)的面积％计算为100×(化合物(I)的面积％)/(化合物(I)的面积％+化合物(II)的面积％)。化合物(II)的面积％计算为100×(化合物(II)的面积％)/(化合物(I)的面积％+化合物(II)的面积％)。分离的化合物(I)的对映异构体纯度为至少99面积％(S,S)对映异构体和不超过1面积％(R,R)对映异构体。在其它方面，化合物(I)的对映异构体纯度为至少99.9面积％(S,S)对映异构体和不超过0.1面积％(R,R)对映异构体。使用HPLC方法B测定化合物(I)的对映异构体纯度。

在一些方面，形成化合物(I)的方法包含还原化合物(III)以形成化合物(I)和(II)的混合物，提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷；形成化合物(IIa)，以及将化合物(IIa)与化合物(I)分离。在其它方面，形成化合物(I)的方法包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷；形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，分离化合物(IIa)与化合物(I)，以及氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)。化合物(IIa)可以如实例9中所述或使用如Imai,S.等人.《四面体(Tetrahedron)》,2016,72(44),6948-6954中或Kopach,M.等人.《有机加工研究与开发(Org.Process Res.Dev.)》2010,14(5),1229-1238中所述的那些氧化方法氧化为化合物(III)。化合物(IIa)可以在通过氧化成化合物(III)来制备哌仑他韦的工艺中再循环。化合物(III)可以使用实例1中所述的条件进行手性还原，得到化合物(I)和(II)的混合物。化合物(IIa)的再循环减少了废物并增加了化合物(I)的产量，这使得生产工艺的效率提高并节省成本。通过在制备哌仑他韦的工艺中形成和分离化合物(IIa)，提高了化合物(I)的纯度，这提高了下游中间体的产率，并且还通过减少了下游中间体所需的纯化量而改良了加工。化合物(IIa)的发现通过提高工艺上游的产率和纯度，提高了所述工艺的总体效率和可操作性，从而在哌仑他韦的制造中取得了进展。

通过HPLC方法A测定，通过本文所述的方法制备的化合物(I)具有至少92％的纯度。在一些方面，纯度为至少95％。在其它方面，纯度为至少97％。在又其它方面，纯度为至少98％。在再其它方面，纯度为至少99％。在一个方面，通过HPLC方法B测定，通过本文所述方法制备的化合物(I)具有约92-99面积％的化合物(I)和1-8面积％的化合物(II)。在其它方面，通过本文所述方法制备的化合物(I)具有约95-99面积％的化合物(I)和1-5面积％的化合物(II)。在另一方面，通过本文所述的方法制备的化合物(I)具有约98-99面积％的化合物(I)和1-2面积％的化合物(II)。

制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法包含分离化合物(IIa)与化合物(I)。在一个方面，制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法还包含向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，并形成化合物(IIa)。在另一方面，制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，以及将化合物(IIa)与化合物(I)分离。在另一方面，制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，将化合物(IIa)与化合物(I)分离，以及从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)。

制备哌仑他韦的方法还可包含通过氧化将化合物(IIa)再循环为化合物(III)。举例来说，制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法可以包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，将化合物(IIa)与化合物(I)分离，从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)，以及氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)。

在另一方面，制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，将化合物(IIa)与化合物(I)分离，从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)，氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)，以及将化合物(I)转化为化合物(V)。如流程2所示，化合物(I)可以转化为化合物(V)。在合适的碱，包括但不限于三乙胺的存在下，通过用甲磺酰氯处理将化合物(I)转化为化合物(IV)。然后可以在合适的碱，包括但不限于N,N-二异丙基乙胺存在下在高温下用3,5-二氟-4-(4-(4-氟苯基)哌啶-1-基)苯胺处理化合物(IV)，从而影响吡咯烷环的形成，得到化合物(V)。

流程2

在另一方面，制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，分离化合物(IIa)与化合物(I)，从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)，氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)，将化合物(I)转化为化合物(V)，以及将化合物(V)转化为化合物(VI)。

流程3

在另一方面，制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，分离化合物(IIa)与化合物(I)，从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)，氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)，将化合物(I)转化为化合物(V)，将化合物(V)转化为化合物(VI)，以及将化合物(VI)转化为化合物(VII)。如流程3中所示，化合物(V)可以在钯催化剂(包括但不限于三(二亚苄基丙酮)二钯(0))、手性二齿配体(如Xantphos)和碱(包括但不限于Cs₂CO₃)存在下与(S)-2-氨基甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯偶合，得到化合物(VI)。化合物(VI)的硝基可以在合适的氢化条件下还原为相应的伯胺，所述伯胺继而被环化为化合物(VII)的苯并咪唑。

在另一方面，制备呈基本上纯形式的哌仑他韦的方法包含提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，分离化合物(IIa)与化合物(I)，从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)，氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)，将化合物(I)转化为化合物(V)，将化合物(V)转化为化合物(VI)，将化合物(VI)转化为化合物(VII)，以及将化合物(VII)转化为哌仑他韦。如本领域技术人员已知的，可以在酸性条件下除去化合物(VII)的boc氮保护基，得到化合物(VIII)，所述化合物(VIII)继而与(2S,3R)-3-甲氧基-2-((甲氧基羰基)氨基)丁酸偶合，得到哌仑他韦。

在一个实施例中，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少95重量％的哌仑他韦和不超过5重量％的杂质；并且其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备。在一些方面，所述组合物包含至少96重量％的哌仑他韦和不超过4重量％的杂质。在一个方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；并且其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备。在一些方面，所述组合物包含97到99.9重量％的哌仑他韦和0.1到3重量％的杂质。在其它方面，所述组合物包含至少98重量％的哌仑他韦和不超过2重量％的杂质。所述组合物可包含98到99重量％的哌仑他韦和0.1到2重量％的杂质。在又其它方面，所述组合物包含至少99重量％的哌仑他韦和不超过1重量％的杂质。所述组合物可包含99到99.9重量％的哌仑他韦和0.01到1.0重量％的杂质。在再其它方面，所述组合物包含至少99.9重量％的哌仑他韦和不超过0.1重量％的杂质。所述组合物可包含99.9到99.99重量％的哌仑他韦和0.01到0.1重量％的杂质。哌仑他韦的重量百分比可以通过使用HPLC方法D测定。杂质的重量百分比可以通过使用HPLC方法C测定。杂质化合物(xi)的重量百分比可以通过使用HPLC方法E测定。

在包含哌仑他韦和杂质的组合物的一个方面，所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；且所述组合物通过包含以下的方法制备：提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，分离化合物(IIa)与化合物(I)，以及从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)。

在包含哌仑他韦和杂质的组合物的另一方面，所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；且所述组合物通过包含以下的方法制备：提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，分离化合物(IIa)与化合物(I)，从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)，以及氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)。

在包含哌仑他韦和杂质的组合物的一个方面，所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；且所述组合物通过包含以下的方法制备：提供化合物(I)和(II)的混合物，向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷，形成化合物(IIa)，沉淀化合物(IIa)，分离化合物(IIa)与化合物(I)，从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)，氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)，以及将化合物(III)转化为哌仑他韦。

在一个方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中所述杂质选自由以下组成的组：

以及

在一个方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少98重量％的哌仑他韦，且所述杂质的总和不超过2重量％；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中所述杂质选自由化合物(i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x和xi)组成的组。在其它方面，所述组合物包含至少99重量％的哌仑他韦，且杂质的总和不超过1重量％。在又其它方面，所述组合物包含至少99.9重量％的哌仑他韦，且杂质的总和不超过0.1重量％。

在另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(i)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.50重量％的化合物(i)。

在另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(ii)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.50重量％的化合物(ii)。

在又另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(iii)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.50重量％的化合物(iii)。

在另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(iv)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.25重量％的化合物(iv)。

在一个方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(v)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.35重量％的化合物(v)。

在另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(vi)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.15重量％的化合物(vi)。

在另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(vii)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.15重量％的化合物(vii)。

在另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(viii)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.50重量％的化合物(viii)。

在一个方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(ix)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.15重量％的化合物(ix)。

在另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(x)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.10重量％的化合物(x)。

在又另一方面，提供了包含哌仑他韦和杂质的组合物，其中所述组合物包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述组合物通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中杂质是化合物(xi)。在一些方面，所述组合物包含不超过0.10重量％的化合物(xi)。

由于化合物(xi)不是很稳定，因此难以分析化合物(xi)。出于分析目的，化合物(xi)用亲核试剂衍生以形成更稳定的化合物，然后对所述更稳定的化合物进行分析。与异氰酸酯基反应形成稳定化合物的任何合适的亲核试剂可用于衍生步骤。亲核试剂的实例包括但不限于醇和胺。醇(R^a-OH)和胺(R^bR^cNH)在与化合物(xi)反应时，得到衍生的式(XIII)化合物：

其中，

R是-OR^a或-NR^bR^c；

R^a是C₁-C₆烷基、-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)、C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基；

R^b是氢、C₁-C₆烷基、-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)、C₆-C₁₀芳基、5-10元杂芳基；且

R^c是C₁-C₆烷基、-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)、C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基。

在一个方面，胺R^bR^cNH(其中R^b是氢、C₁-C₆烷基、-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)、C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基；且R^c是C₁-C₆烷基、-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)、C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基)与化合物(xi)反应以形成衍生的式(XIII)化合物，其中R是-NR^bR^c；R^b是氢、C₁-C₆烷基、-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)、C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基；且R^c是C₁-C₆烷基、-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)、C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基。在另一方面，胺R^bR^cNH(其中R^b是氢、C₁-C₆烷基或-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)；且R^c是C₁-C₆烷基或-CH₂-(C₆-C₁₀芳基))与化合物(xi)反应以形成衍生的式(XIII)化合物，其中R是-NR^bR^c；R^b是氢、C₁-C₆烷基或-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)；且R^c是C₁-C₆烷基或-CH₂-(C₆-C₁₀芳基)。在又另一方面，胺R^bR^cNH(其中R^b是氢或C₁-C₆烷基；且R^c是C₁-C₆烷基)与化合物(xi)反应以形成衍生的式(XIII)化合物，其中R是-NR^bR^c；R^b是氢或C₁-C₆烷基；且R^c是C₁-C₆烷基。在另一方面，选自由二甲胺、二乙胺和二苄基胺组成的组的胺与化合物(xi)反应。

在一个方面，使二乙胺与化合物(xii)反应，得到衍生的化合物(xii)，

使用HPLC方法E分析化合物(xii)。可以基于分析的化合物(xii)的量计算样品中化合物(xii)的量。在一个方面，将化合物(xi)转化为化合物(xii)，随后通过色谱分析。

在一个实施例中，提供了一种包含药物物质的药物产品，其中所述药物物质包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中药物物质通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备。在一些方面，药物物质包含97到99.9重量％的哌仑他韦和0.1到3重量％的杂质。在其它方面，药物物质包含至少98重量％的哌仑他韦和不超过2重量％的杂质。药物物质可包含98到99重量％的哌仑他韦和0.1到2重量％的杂质。在又其它方面，药物物质包含至少99重量％的哌仑他韦和不超过1重量％的杂质。药物物质可包含99到99.9重量％的哌仑他韦和0.01到0.1重量％的杂质。在再其它方面，药物物质包含至少99.9重量％的哌仑他韦和不超过0.1重量％的杂质。

在一个实施例中，提供了一种包含药物物质的药物产品，其中所述药物物质包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中药物物质通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备；且其中杂质选自由化合物(i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x和xi)组成的组。

在一个方面，提供了一种包含药物物质的药物产品，其中所述药物物质包含哌仑他韦和杂质，其中所述药物物质包含至少97重量％的哌仑他韦，且所述杂质的总和不超过3重量％；其中药物物质通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备，并且其中所述杂质选自由化合物(i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x和xi)组成的组。在一个方面，所述药物物质包含至少98重量％的哌仑他韦，且杂质的总和不超过2重量％。在其它方面，所述药物物质包含至少99重量％的哌仑他韦，并且杂质的总和不超过1重量％。在又其它方面，药物物质包含至少99重量％的哌仑他韦，并且杂质的总和不超过1重量％。在再其它方面，药物物质包含至少99.9重量％的哌仑他韦，且杂质的总和不超过0.1重量％。

在一个实施例中，提供了一种包含药物物质的药物产品，其中所述药物物质包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中药物物质通过包含分离化合物(IIa)与化合物(I)的方法制备；并且其中杂质是化合物(xi)。在一些方面，药物物质包含不超过0.80重量％的化合物(xi)。将化合物(xi)转化为化合物(xii)，随后通过色谱分析。在 其它

在一个方面，提供了包含药物物质的药物产品，其中所述药物物质包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述药物物质通过包含以下的方法制备：提供化合物(I)和(II)的混合物；向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷；沉淀化合物(IIa)；分离化合物(IIa)与化合物(I)；以及从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)。

在一个方面，提供了包含药物物质的药物产品，其中所述药物物质包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述药物物质通过包含以下的方法制备：提供化合物(I)和(II)的混合物；向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷；沉淀化合物(IIa)；分离化合物(IIa)与化合物(I)；从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)；以及氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)。

在一个方面，提供了包含药物物质的药物产品，其中所述药物物质包含至少97重量％的哌仑他韦和不超过3重量％的杂质；其中所述药物物质通过包含以下的方法制备：提供化合物(I)和(II)的混合物；向所述混合物中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷；沉淀化合物(IIa)；分离化合物(IIa)与化合物(I)；从包含化合物(I)的滤液中分离固体化合物(IIa)；氧化化合物(IIa)以形成化合物(III)；以及将化合物(III)转化为哌仑他韦。

实例

为了可以更充分地理解本文所述的发明，阐述了以下实例。本申请中描述的合成实例是为了说明本文提供的化合物、多晶型物、药物组合物和方法而提供的，而不是以任何方式解释为限制其范围。

通篇使用的合成技术领域的普通技术人员众所周知的通用缩写：DABCO表示1,4-二氮杂双环[2.2.2.]辛烷；DMF表示N,N二甲基甲酰胺；HATU表示1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物六氟磷酸盐；THF表示四氢呋喃；以及Xantphos表示4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨。

通篇使用的本领域普通技术人员众所周知的其它缩写：APCI表示原子压化学电离；atm表示大气压力；ESI表示电喷雾电离；g表示克；h表示小时；HPLC表示高效液相色谱；L表示升；μL表示微升；M表示摩尔浓度；μm表示微米；mg表示毫克；min表示分钟；mL表示毫升；mmol表示毫摩尔；MS表示质谱；NMR表示核磁共振；PXRD表示粉末X射线衍射；psi表示磅/平方英寸；以及rt表示室温。

除非另有说明，否则所有试剂均为商业级试剂，且不经进一步纯化即按原样使用。市售无水溶剂用于在惰性气氛下进行的反应。除非另有说明，否则在所有其它情况下都使用试剂级溶剂。在硅胶60(35-70μm)上进行柱色谱。使用预涂的硅胶F-254板(厚度0.25mm)进行薄层色谱。在Agilent 400MHz NMR光谱仪或Bruker 700MHz光谱仪上记录¹H NMR光谱。¹H NMR光谱的化学位移(δ)相对于作为内标的四甲基硅烷(δ0.00)或适当的残留溶剂峰，即CHCl₃(δ7.27)以百万分率(ppm)报道。多重性按以下给出：单峰(s)，双峰(d)，双重双重双重峰(ddd)，双重双重双重双重峰(dddd)，双重双重四重峰(ddq)，双重双重三重峰(ddt)，双重四重峰(dq)，双重三重双重峰(dtd)，七重峰(hept)，三重峰(t)，三重双重双重峰(tdd)，三重四重峰(tq)，四重峰(q)，四重双重峰(qd)，四重三重峰(qt)，五重峰(quin)，多重峰(m)，以及宽峰(br)。使用Finnigan SSQ7000(ESI)质谱仪或APCI质谱仪进行质谱分析。

粉末X射线衍射(PXRD)分析按以下方式进行。通过将样品粉末散布在铝样品架上的薄层中并用玻璃显微镜载玻片轻轻调平，从而制备用于PXRD分析的样品。然后将铝样品架安装在XRG 3000衍射仪(Inel Corp.，法国阿特奈(Artenay,France))的旋转样品架上，并在环境条件下收集衍射数据。XRG 3000衍射仪配备了弯曲位置灵敏检测器和平行光束光学装置，并通过在40kV和30mA下通电的铜阳极管(1.5kW细聚焦)进行操作。利用入射光束锗单色仪提供单色K_α1辐射使用衰减的直接光束以一度的间隔校准衍射仪。使用硅粉线位置参考标准(NIST 640c)检查校准。仪器使用Symphonix软件(Inel Corp.，法国阿特奈)和MDI Jade软件(9.0版，Materials Data,Inc.，加利福尼亚州利弗莫尔(Livermore,CA))进行计算机控制。实例1是在约25℃下用Cu-K_α1辐射用在40kV和30mA下通电的Cu细聚焦X射线管测量的。

HPLC方法A

HPLC方法A用于测定化合物(I)的纯度。使用带有UV检测器的高效液相色谱(HPLC)，使用Supelco Ascentis Express C18，2.7μm色谱柱(150mm×4.6mm)或等效物分析样品。使用0.1％(v/v)H₃PO₄/水(A)和75:25(v/v)乙腈:甲醇(B)的梯度系统，流速为1.3mL/min(0-18.0分钟，线性梯度30-70％B；18.0-23.0分钟，线性梯度70-90％B；23.0-25.0分钟，90％B；25.0-26.0分钟，线性梯度90-30％B；26.0-30.0，30％B)。使用5μL的进样体积，将UV检测设置为在210nm的波长下收集，并将柱温设置为40℃。

HPLC方法B

HPLC方法B用于测定化合物(I)和(II)的相对量。使用带有UV检测器的高效液相色谱(HPLC)，使用Daicel Chiralpak AD-H，5μm色谱柱(250mm×4.6mm)或等效物分析样品。使用己烷(86％)(A)和0.1％三氟乙酸/乙醇(14％)(B)的等度体系，流速为1.0mL/min(35分钟)。将UV检测设置为在220nm的波长下收集，并将柱温设置为40℃。

HPLC方法C

HPLC方法C用于测定哌仑他韦中的杂质含量。使用带有UV检测器的高效液相色谱(HPLC)，使用Waters Cortecs C18，2.7μm色谱柱(150mm×3.0mm)或等效物分析样品。使用25mM乙酸铵pH 4.5缓冲溶液(A)和62:38乙腈:异丙醇(B)的梯度，流速为0.5mL/min(0-2.0分钟，57％A；2.0-35.0分钟，线性梯度57-50％A；35.0-50.0分钟，线性梯度50-15％A；50.0-55.0分钟，15.0％A；55.0-55.1，线性梯度15-57％A；55.1-60.0分钟，57％A)。将乙酸铵(3.85g)添加到水(2L)中，并用乙酸调节pH值为4.5±0.05，从而制备25mM pH 4.5的乙酸铵缓冲溶液。使用15μL的进样体积，将UV检测设置为在254nm波长下收集，并将柱温设置为40℃。

通过将哌仑他韦样品以约500μg/mL的浓度溶于50:50(v/v)乙腈:水中来制备用于通过HPLC方法C分析的样品。

相对于哌仑他韦，所选杂质的相对洗脱顺序如下，从先洗脱到后洗脱峰的顺序为：化合物(x)、(iii)、(vii)、(iv)、(ix)、(v)、(i)、(ii)、(viii)和(vi)。通过计算哌仑他韦样品中每种杂质的重量百分比来测定个别杂质水平。

HPLC方法D

HPLC方法D用于测定样品中哌仑他韦的重量百分比。使用带有UV检测器的高效液相色谱(HPLC)，使用Waters Cortecs C18，2.7μm色谱柱(150mm×3.0mm)或等效物分析样品。使用具有1％四氢呋喃(v/v)的25mM乙酸铵(A)和84.5:14.5:1乙腈:异丙醇:四氢呋喃(B)的梯度，流速为0.5mL/min(0-13.0分钟，47％A；13.0-13.1分钟，线性梯度47-10％A；13.1-16.0分钟，10％A；16.0-16.1分钟，线性梯度10-47％A；16.1-20.0，47％A)。通过将按体积计99份乙酸铵缓冲液与一份四氢呋喃混合来制备具有1％四氢呋喃的25mM乙酸铵。通过将乙酸铵(3.85g)添加到水(2L)中来制备乙酸铵缓冲液。通过将按体积计84.5份乙腈、14.5份异丙醇和1份四氢呋喃混合来制备84.5:14.5:1的乙腈:异丙醇:四氢呋喃。使用20μL的进样体积，将UV检测设置为在254nm波长下收集，并将柱温设置为30℃。

通过将哌仑他韦样品以约500μg/mL的浓度溶于50:50(v/v)乙腈:水中来制备用于通过HPLC方法D分析的样品。通过计算样品中哌仑他韦的重量百分比来测定样品中哌仑他韦的量。

HPLC方法E

HPLC方法E通过衍生化为化合物(xii)来测定样品中杂质(xi)的重量百分比。使用带有UV检测器的高效液相色谱(HPLC)，使用Poroshell 120EC-C18，2.7μm色谱柱(150mm×3.0mm)或等效物分析样品。使用25mM乙酸铵缓冲溶液(A)和90:10乙腈:异丙醇(B)的梯度，流速为0.5mL/min(0-25.0分钟，线性梯度62-57％A；25.0-50.0分钟，线性梯度57-45％A；50.0-65.0分钟，线性梯度45.0-10％A；65.0-78.0分钟，10.0％A；78.0-78.1，线性梯度10-62％A；78.0-85.0分钟，62.0％A)。通过将乙酸铵(9.64g)添加到水(5L)中来制备25mM乙酸铵缓冲溶液。通过将乙腈(4.5L)与异丙醇(0.5L)混合来制备90:10乙腈:异丙醇。使用10μL的进样体积，将UV检测设置为在254nm波长下收集，将柱温设置为36℃，并将样品盘设置为5℃。

衍生溶液(0.1％二乙胺/乙腈)通过以下方式制备：向5000mL容量瓶中加入二乙胺(5.0mL)，用乙腈稀释至一定体积，并充分混合。用于通过HPLC方法E分析的样品通过以下方式制备：将哌仑他韦样品(约200mg)放入500mL容量瓶中，添加衍生化溶液(250mL)，并混合60分钟。加入纯净水(200mL)，然后混合20分钟。将混合物用纯净水稀释至一定体积，并摇动烧瓶。将此溶液的等分试样转移到合适的离心管中，并以2880g(例如4000rpm)离心约10分钟。通过HPLC方法E分析澄清的上清液。化合物(xii)的相对保留时间相对于哌仑他韦为约1.09。

为了简单起见，以克为单位提供了某些实例。然而，反应可以按比例扩大，因此，在实例提供1.34g时，技术人员可以使用1.340kg，等等。

实例1

(1R,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二醇:1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷

向第一反应器中加入二苯基[(2R)-吡咯烷-2-基]甲醇(0.024g)、硼酸三甲酯(0.015mL)和甲苯(0.393mL)，并将得到的溶液在25℃下搅拌3小时。向配有氮气入口的单独的夹套反应器中加入1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二酮(0.200g)和甲苯(2.4mL)，并将混合物在25℃下搅拌。将第一反应器中的内容物转移到夹套反应器中，并将反应器冷却达到内部温度为-5℃。所得混合物经3小时用1M BH₃-THF(0.924mL)缓慢处理，温热到0℃，并搅拌72小时。反应完成后，缓慢加入甲醇(0.808mL)。甲醇添加完成后，将反应器的温度升至25℃。使用HPLC方法B分析粗物质，且发现其非对映异构体比率为84:16(S,S:R,S)以及对映异构体比率为99.78:0.22(S,S:R,R)。然后依次用1M HCl(0.800mL)、5％(w/v)NaHCO₃(0.800mL)以及5％(w/v)NaCl(0.800mL)洗涤溶液。将1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(0.012g)溶解在84:16(v/v)的甲苯:四氢呋喃混合物(0.1mL)中，并加入到有机层中。将得到的悬浮液搅拌16小时，然后过滤。保留滤液用于实例2。将固体干燥，得到标题化合物。根据HPLC方法B，非对映异构体比率为7.7:92.3(S,S:R,S)。¹H NMR(700MHz,DMSO-d₆)δ8.15(d,J＝6.7Hz,1H),7.78(d,J＝9.5Hz,1H),5.79-5.68(m,1H),4.88-4.78(m,1H),2.61(s,6H),1.80-1.72(m,1H),1.66-1.58(m,1H)。¹³C NMR(175MHz,DMSO-d₆)δ159.80(d,J＝255.5Hz),144.00(d,J＝3.0Hz),133.94(d,J＝16.3Hz),125.32(d,J＝4.2Hz),125.25(d,J＝5.3Hz),118.86(d,J＝28.1Hz),65.27,46.82,33.26。熔点:188-192℃。MS(ESI)m/z458.9935(M+Na)⁺。

结晶材料如下制备。向粗二醇(50g)、16.1:83.9(R,S):(S,S)-二醇于2-甲基四氢呋喃(250mL)和庚烷(250mL)中的溶液中一次性加入二氮杂双环[2.2.2]辛烷(2.05g)。将所得稀浆料加热到70℃以溶解固体，然后冷却到50℃，并加入富集(R,S)二醇(50mg)94:6(R,S):(S,S)-二醇作为籽晶。将得到的浆料冷却到20℃，保持两小时，然后冷却到5℃，并保持过夜。过滤此浆料，并将收集的固体用2-甲基四氢呋喃:庚烷(1:1)洗涤，并干燥，得到标题化合物。非对映异构体比率为87:13(R,S:S,S)。

粉末X射线衍射(PXRD)图显示在图1中。当在约25℃下用Cu-K_α1辐射用在40kV和30mA下通电的Cu细聚焦X射线管测量时，包含峰(±0.2)的衍射图包括表2中列出的那些：

表2a.(1R,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二醇:1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷的选定峰列表，±0.2

(1R,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二醇:1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷的其它选定峰列表描述在表2b中：

表2b.(1R,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二醇:1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷的选定峰列表，±0.2

(1R,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二醇:1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷的又其它选定峰列表描述在表2c中：

表2c.(1R,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二醇:1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷的选定峰列表，±0.2

使用Mo Ka辐射在Bruker APEX2衍射仪上收集单晶数据。在冷氮气流中将晶体冷却到100°K。使用ω扫描收集数据，最大分辨率为0.77A。所有非氢原子均经过各向异性精修。氢原子在跨骑位置被精修。最终拟合值为R＝4.8％且Rw＝11.4％。使用单晶XRD解析晶体结构。不对称单元仅含有分子的一半。由于二氮杂双环[2.2.2]辛烷分子位于晶体学反转中心附近，因此所述分子是无序的。晶体学信息如表3所示。

表3.(1R,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二醇:1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷的晶体学信息

实例2

(1S,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二醇

收集来自实例1的最终滤液，并加以分析，其具有92.9:7.1的非对映异构体比率(S,S:R,S二醇)。将来自实例1的最终滤液真空浓缩，溶于异丙醇(2.68g)，然后真空浓缩。向残余物中加入异丙醇(1.34g)，并将所得混合物通过硅藻土短柱过滤。将滤液转移到反应器中，并温热到内部温度为45℃。将1M HCl(1.0g)逐滴添加到反应器中，同时保持内部温度为45℃。接下来，将蒸馏水(1.2g)逐滴添加到反应器中，同时保持内部温度在45℃。加完水后，将混合物冷却到0℃。过滤固体，并用冷的(5℃)1:1(w/w)异丙醇:水(0.60g)的混合物洗涤。将固体在45℃的烘箱中真空干燥16小时，得到标题化合物。根据HPLC方法B的非对映异构体比率为95.6:4.4(S,S:R,S)。HPLC方法B未检测到(R,R)对映异构体。¹H NMR(700MHz,DMSO-d₆)δ8.13(d,J＝6.8Hz,2H),7.77(d,J＝9.5Hz,2H),5.72(dd,J＝4.9,3.3Hz,2H),4.86(t,J＝4.5Hz,2H),1.89-1.54(m,4H)。¹³C NMR(176MHz,DMSO-d₆)δ159.77(d,J＝255.8Hz),143.92(d,J＝3.1Hz),133.90(d,J＝16.3Hz),125.30(d,J＝8.9Hz),125.25(d,J＝4.3Hz),118.84(d,J＝28.0Hz)。MS(ESI)m/z 458.9956(M+Na)⁺。

实例3

二甲磺酸(1S,4S)-1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二基酯

将实例2(1.00g)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，并冷却到0℃。加入三乙胺(0.956mL)，然后加入甲磺酰氯(0.446mL)。将所得混合物在0℃下搅拌90分钟，然后在不加热的情况下在真空下浓缩到约四分之一体积。加入己烷(30mL)，得到固体，所述固体通过过滤收集，用水(30mL)洗涤，并风干，得到标题化合物(1.34g)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.30(d,J＝6.7Hz,2H),7.93(d,J＝9.8Hz,2H),5.88-5.81(m,2H),3.22(s,6H),2.21-1.88(m,4H)。

实例4

1-{4-[(2R,5R)-2,5-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)吡咯烷-1-基]-2,6-二氟苯基}-4-(4-氟苯基)哌啶

向实例3(0.60g)和3,5-二氟-4-(4-(4-氟苯基)哌啶-1-基)苯胺(0.31g)于无水乙腈(5mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.176mL)，并将反应混合物在75℃下搅拌36小时。将混合物冷却到室温，并在水(25mL)和乙酸乙酯(30mL)之间分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(25mL)洗涤。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。使用0-20％乙酸乙酯/己烷的溶剂梯度通过硅胶柱色谱纯化粗产物，得到标题化合物(0.364g)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.89(d,J＝9.7Hz,2H),7.76(d,J＝7.1Hz,2H),7.29-7.22(m,2H),7.10-7.03(m,2H),5.98(d,J＝11.8Hz,2H),5.55(d,J＝6.8Hz,2H),3.08-2.90(m,4H),2.61-2.36(m,5H),1.86-1.57(m,4H)。

实例5

(2S,2'S)-2,2'-{[(2R,5R)-1-{3,5-二氟-4-[4-(4-氟苯基)哌啶-1-基]苯基}吡咯烷-2,5-二基]双[(5-氟-2-硝基-4,1-亚苯基)氨基甲酰基]}二(吡咯烷-1-甲酸二叔丁酯)

实例4(0.360g)、(S)-2-氨基甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.273g)、Cs₂CO₃(0.497g)和Xantphos(53mg)于1,4-二噁烷(6mL)中的混合物用N₂鼓泡脱气。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.014g)，并向混合物中鼓入N₂。密封反应容器，并将混合物在100℃下搅拌90分钟。将混合物冷却到室温，并在水(30mL)与乙酸乙酯(30mL)之间分配。水层用乙酸乙酯(2×30mL)洗涤。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。使用0-40％乙酸乙酯/庚烷的溶剂梯度通过硅胶柱色谱纯化粗产物，得到标题化合物(0.29g)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.63-10.38(m,2H),8.02-7.58(m,4H),7.29-7.20(m,2H),7.12-7.00(m,2H),6.05(d,J＝12.2Hz,2H),5.56-5.47(m,2H),4.34-4.18(m,2H),3.45-3.32(m,4H),3.06-2.89(m,4H),2.59-2.39(m,3H),2.26-2.10(m,2H),1.97-1.75(m,8H),1.73-1.57(m,4H),1.41-1.24(m,18H)；MS(APCI)m/z 1064.2(M+H)⁺。

实例6

(2S,2'S)-2,2'-{[(2R,5R)-1-{3,5-二氟-4-[4-(4-氟苯基)哌啶-1-基]苯基}吡咯烷-2,5-二基]双[(5-氟-1H-苯并咪唑-6,2-二基)]}二(吡咯烷-1-甲酸二叔丁酯)

向实例5(0.38g)于四氢呋喃(2.5mL)和乙醇(2.5mL)中的溶液中加入Pt₂O(0.030g)。用N₂冲洗反应烧瓶，并将混合物在1atm H₂下搅拌90分钟。将混合物通过硅藻土过滤并在真空下浓缩。向残余物中加入甲苯(4mL)和乙酸(0.20mL，3.5mmol)，并将得到的混合物在70℃下搅拌3小时。使混合物冷却到室温，并在饱和NaHCO₃水溶液(30mL)与乙酸乙酯(30mL)之间分配。水层用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。使用0-10％甲醇/二氯甲烷的溶剂梯度通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，得到标题化合物(0.22g)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.40-12.06(m,2H),7.46-7.37(m,1H),7.30(dd,J＝10.3,3.1Hz,1H),7.27-7.13(m,3H),7.09-6.89(m,3H),5.95-5.76(m,3H),5.63-5.44(m,2H),4.89(d,J＝8.0Hz,1H),4.85-4.77(m,1H),3.58-3.43(m,2H),3.40-3.31(m,2H),3.02-2.77(m,5H),2.56-2.49(m,2H),2.29-2.10(m,1H),2.02-1.71(m,8H),1.70-1.52(m,4H),1.41-0.89(m,18H)；MS(ESI)m/z 967.2(M+H)⁺。

实例7

6,6'-[(2R,5R)-1-{3,5-二氟-4-[4-(4-氟苯基)哌啶-1-基]苯基}吡咯烷-2,5-二基]双{5-氟-2-[(2S)-吡咯烷-2-基]-1H-苯并咪唑}

将实例6(2.46g)和2N HCl于1,4-二噁烷(25.4mL)中的溶液在室温下搅拌2小时。将溶液在真空下浓缩，并将残余物在3:1的二氯甲烷/异丙醇与1N的NaOH水溶液之间分配。有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，且滤液在真空下浓缩，得到标题化合物(1.78g)。

实例8

((2S,2′S,3R,3′R)-((2S,2′S)-2,2′-(6,6′-((2R,5R)-1-(3,5-二氟-4-(4-(4-氟苯基)哌啶-1-基)苯基)吡咯烷-2,5-二基)双(5-氟-1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(吡咯烷-2,1-二基))双(3-甲氧基-1-氧代丁烷-2,1-二基))二氨基甲酸二甲酯

向(2S,3R)-3-甲氧基-2-((甲氧基羰基)氨基)丁酸(0.33g)于无水N,N二甲基甲酰胺(2.92mL)中的溶液中加入HATU(0.600g)和N,N-二异丙基乙胺(0.125mL)。将得到的混合物在室温下搅拌10分钟，并加入实例7(0.55g)和N,N-二异丙基乙胺(0.125mL)于无水N,N二甲基甲酰胺(2.92mL)中的溶液。将所得溶液在室温下搅拌15分钟。添加水以产生沉淀，将所述沉淀通过过滤收集并在真空下干燥。使用0-3.5％甲醇/二氯甲烷的溶剂梯度通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，得到标题化合物(0.538g)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.43-12.00(m,2H),7.41-7.34(m,2H),7.34-7.28(m,2H),7.27-7.16(m,3H),7.13-6.96(m,5H),5.93-5.79(m,2H),5.61-5.41(m,2H),5.12-5.03(m,2H),4.21(q,J＝8.0Hz,2H),3.85-3.70(m,3H),3.50(s,3H),3.49(s,3H),3.47-3.36(m,1H),3.29-3.05(m,4H),3.04-2.83(m,6H),2.59-2.49(m,2H),2.23-1.52(m,14H),1.27-1.16(m,1H),1.06-0.86(m,6H)；MS(ESI)m/z 1113.4(M+H)⁺。

实例9

1,4-双(4-氯-2-氟-5-硝基苯基)丁烷-1,4-二酮

化合物(IIa)再循环成化合物(III)：将实例1(5.17g)在乙酸乙酯(49.9mL)与1NHCl(50mL)之间分配。如下所述将含有粗化合物(II)的乙酸乙酯有机层继续进行。向碳酸氢钠(2.505g)和0.5M KBr水溶液(11.18mL)的混合物中加入漂白剂(38.8g)。向此混合物中缓慢加入含有上述粗化合物(II)和2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(TEMPO，0.204g)于乙酸乙酯(49.9mL)中的乙酸乙酯有机层。将反应物搅拌30分钟，然后过滤。收集的固体用乙酸乙酯(10mL)洗涤，并在空气下干燥，得到粗制二酮，将所述粗制二酮吸收于二噁烷(58mL)中。将混合物加热到100℃，冷却到室温过夜，过滤，用二噁烷(10mL)洗涤，用水(10mL)洗涤，然后干燥，得到标题化合物。

通过阅读本专利申请，本领域技术人员将清楚申请人发明的其它益处。

应当理解，前述详细描述和所附实例仅是示例性的，并且不应被视为对本公开的范围的限制，本公开的范围由所附权利要求和其等同物限定。对所描述的实施例的各种改变和修改对于本领域技术人员将是显而易见的。在不背离本公开的精神和范围的情况下，可以进行这样的改变和修改，包括但不限于与化学结构、取代基、衍生物、中间体、合成、调配物或方法有关的那些改变和修改，或使用本公开的这些改变和修改的任何组合。