绞股蓝皂苷及包含绞股蓝皂苷的药物组合物在卵巢储备和功能保护中的应用
阅读说明：本技术 绞股蓝皂苷及包含绞股蓝皂苷的药物组合物在卵巢储备和功能保护中的应用 (Application of gypenoside and pharmaceutical composition containing gypenoside in ovary reserve and function protection ) 是由 王世宣 张金金 陈骞 于 2020-12-17 设计创作，主要内容包括：本发明涉及生物医学和药物学技术领域,尤其涉及绞股蓝皂苷及包含绞股蓝皂苷的药物组合物在卵巢储备和功能保护中的应用。本发明通过化疗性卵巢损伤动物模型进行绞股蓝皂苷卵巢储备和功能的验证。研究发现,在化疗药物处理前后经过绞股蓝皂苷干预的小鼠相较于未经皂苷干预的小鼠而言,卵巢得到有效保护,其雌激素和孕酮分泌水平不下降,反而有所升高；产仔数也显著增加；卵泡形态良好,健康卵泡数量更多。本发明提出通过绞股蓝皂苷干预减轻化疗药物所致卵巢损伤,这对于化疗过程中的卵巢功能储备和保护有重要意义。(The invention relates to the technical field of biomedicine and pharmacology, in particular to application of gypenoside and a pharmaceutical composition containing the gypenoside in ovary reserve and function protection. The invention verifies the storage and function of the gypenoside ovary through a chemotherapeutic ovarian injury animal model. Researches show that compared with mice without saponin intervention, ovaries of the mice subjected to gypenoside intervention before and after chemotherapy drug treatment are effectively protected, and the secretion levels of estrogen and progesterone are not reduced but are increased; the litter size also increases significantly; the follicle morphology is good, and the number of healthy follicles is more. The invention provides the intervention and alleviation of ovarian injury caused by chemotherapeutic drugs through gypenoside, which has important significance for ovarian function storage and protection in the chemotherapeutic process.)
技术领域
本发明涉及生物医学和药物学技术领域，尤其涉及绞股蓝皂苷及包含绞股蓝皂苷的药物组合物在卵巢储备和功能保护中的应用。
背景技术
卵巢功能和生育能力是影响女性生存质量的重要因素。现有影响女性卵巢功能的因素有：年龄、遗传、免疫、医源性、感染性、环境、行为学、社会心理等多种因素。探索卵巢储备和功能保护的药物更为迫切和重要。其中化疗导致的医源性卵巢损伤在临床常见且急需得到改善。
目前，癌症的发生率仍逐年升高。随着医疗技术的飞速发展，癌症患者的生存率得到显著提升，女性肿瘤幸存患者将面临关乎生命尊严的生存质量问题：卵巢功能和生育能力。
化疗性卵巢损伤是癌症幸存患者卵巢功能和生育力丧失的主要原因。随着癌症患者年轻化、发病率的增高、癌症治愈率的增高，越来越多的女性患者在接受化疗后饱受卵巢功能下降甚至绝经不育的痛苦。卵巢功能和生育能力是影响女性生活质量的重要原因之一。同时，女性绝经后，体内雌激素水平降低，和雌激素有关的衰老相关疾病如心血管疾病、骨质疏松等的发病率显著上升，化疗药物导致的过早绝经会对女性进入中老年后的工作和生活产生严重不良影响。因此，女性肿瘤幸存患者生存质量急需得到改善。
现有卵巢功能保护措施主要有胚胎、卵母细胞和卵巢组织冻存， GnRHa等。但这些措施多为有创操作，适用范围窄，可能耽误化疗，效果尚存争议；且主要适用于生育力保护，无法长期维持卵巢功能。药物性防治策略具有很大潜力，但新药的研发耗时费力，从老药或者天然植物中寻找潜在药物成为趋势。
绞股蓝素有“南方人参”的称号，是一种“药食同源”物质。其主要活性成分绞股蓝皂苷有四型和人参皂苷完全相同。绞股蓝皂苷具有抗氧化、抗癌、调节免疫等多种生理功能。
发明内容
为了解决现有技术存在的问题，本发明绞股蓝皂苷及包含绞股蓝皂苷的药物组合物在卵巢储备和功能保护中的应用。本发明通过绞股蓝皂苷减轻各类环境因素所致卵巢损伤，可以有效保护卵巢储备和功能，使其受到的损害减小。
第一方面，本发明提供绞股蓝皂苷在卵巢储备和功能保护中的应用。
本发明进一步提供绞股蓝皂苷在对抗卵巢衰老和/或防止卵巢损伤中的应用。
本发明进一步提供绞股蓝皂苷在对抗卵巢衰老和/或防止卵巢损伤的药物中的应用。
进一步地，所述卵巢衰老为遗传、环境、行为学、感染或免疫导致的卵巢衰老；和/或，所述卵巢损伤为遗传、环境、行为学、感染或免疫导致的卵巢损伤。
进一步地，所述卵巢衰老和所述卵巢损伤均为化疗药物所致。
进一步地，所述化疗药物为环磷酰胺、顺铂、紫杉醇或多柔比星中的一种或多种。
进一步地，所述应用为：抑制化疗药物使用过程中的卵泡数量下降，以及抑制化疗药物使用过程中的雌、孕激素分泌降低。
第二方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物用于对抗卵巢衰老和/或防止卵巢损伤，所述药物组合物以绞股蓝皂苷为有效成分。
进一步地，以质量比计，所述绞股蓝皂苷在药物组合物中的含量为60％～80％。
进一步地，所述药物组合物的剂型为片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、膏剂、霜剂、凝胶剂、吸入剂、喷雾剂、膜剂、混悬剂、锭剂、酏剂、糖浆剂、油包水或水包油乳剂、口服液或滴丸剂中的一种或多种；
根据所述药物组合物的剂型，所述药物组合物还包括稳定剂、增溶剂、缓冲剂、防腐剂、增稠剂或其他赋形剂中的任意一种或多种。
本发明提供的药物组合物可通过任何合适途径施用，例如以注射形式通过肠胃外施用，或以以下形式通过口服途径施用：例如，片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、糖衣丸、丸剂、糖锭剂、含水或无水溶液、混悬剂、油包水或水包油乳剂、酏剂或糖浆剂。对于肠胃外施用，所述药物组合物可制备成分散剂、混悬剂、乳剂、无菌注射溶液或含无菌粉的分散剂。所述药物组合物也作为长效注射剂提供。所述药物组合物的其他合适施用形式为：栓剂、喷雾剂、膏剂、霜剂、凝胶剂、吸入剂和皮肤贴剂。所述药物组合物可使用本领域任何已知方法来制备成上述所列举的任何形式。
本发明提供的药物组合物以受试哺乳动物体可接受的方式，如注射、口服、喷鼻、灌胃、直肠、阴道等各种方式给与受试个体。本发明优选灌胃。
其中，所述受试哺乳动物体包括但不限于大鼠、小鼠、非人灵长类、人、犬、猫、马、牛、绵羊、猪、山羊。优选为人或小鼠。
根据所制备成的剂型，本发明提供的药物组合物可搭配多种载体，例如稳定剂、增溶剂、缓冲剂、防腐剂、增稠剂或其他赋形剂后进行相应形式的混合制备得到上述多种剂型的药物组合物。
本发明还提供一种药盒，包括上述药物组合物和使用说明书。
本发明具备如下有益效果：
本发明研究发现，绞股蓝皂苷具备保护卵巢储备和卵巢功能的能力，并通过构建化疗性卵巢损伤小鼠模型进行了验证，发现绞股蓝皂苷可以在化疗药导致的卵巢损伤过程中有效抑制卵泡数量的下降和、孕激素的降低，由此，可以将绞股蓝皂苷制备成多种形式的制剂，应用于卵巢储备和功能的保护。
附图说明
图1为本发明提供的给药期间小鼠体重记录和卵巢系数检测结果；其中，A为小鼠体重变化情况，B为小鼠卵巢卵巢系数检测结果，A 和B中的NC为空白对照组，CTX为单纯造模组，G-L为低剂量绞股蓝皂苷组，G-H为高剂量绞股蓝皂苷组；
图2为本发明提供的小鼠卵巢内分泌功能检测结果；其中，A为动情周期统计图，B为规律动情周期百分比，C为血清雌激素水平，D 为血清孕激素水平；
图3为本发明提供的小鼠生殖功能检测结果；其中A为血清雌激素水平，B为血清孕激素水平；
图4为本发明提供的光学显微镜下，小鼠卵泡的计数结果；其中 A为卵巢HE染色图，B为各级卵泡计数结果。
具体实施方式
本发明公开了一种绞股蓝药物组合物及其制备方法和在卵巢功能保护中的应用。化疗导致的卵巢损伤，是实验研究中常见且得到公认的卵巢损伤模型，基于此模型研究的治疗方式对多种卵巢损伤因素的治疗均具有借鉴意义。具体的，通过给与受试哺乳动物体一定剂量的CTX溶液以诱导产生化疗性卵巢损伤，并对受试哺乳动物体给与含有效剂量的绞股蓝皂苷药物组合物及单纯对照组的受试哺乳动物体给与生理盐水，连续给药一段时间后检测受试哺乳动物体的卵巢功能，结果发现含有效剂量的绞股蓝皂苷药物组合物有利于减轻化疗药物所致的卵巢损伤，同时对受试哺乳动物体的重要脏器也没有产生不良反应。
本发明术语的定义和使用：
绞股蓝皂苷：是中药绞股蓝的主要组成成分，是从绞股蓝中分离得到的皂苷类物质的总称，具有抗氧化、抗癌、免疫调节、抗炎等作用。
化疗：是化学药物治疗的简称，通过使用化学治疗药物杀灭癌细胞达到治疗目的。在临床上化疗药物也有不同的种类，根据其作用机制不同，可以分为烷化剂，抗代谢类，抗生素类，抗肿瘤药物，植物类抗肿瘤药物，激素类抗肿瘤药物，以及杂类的药物等。大部分患者需要联合使用两种以上的化疗药物治疗的，也包括口服化疗药物以及静脉用药等，另外，部分患者也可以采取介入的方式通过动脉灌注药物。
CTX：环磷酰胺，是进入人体内被肝脏或肿瘤内存在的过量的磷酰胺酶或磷酸酶水解，变为活化作用型的磷酰胺氮芥而起作用的氮芥类衍生物。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本发明所述应用方法包括以下步骤：
S1，制备化疗性卵巢损伤小鼠模型：
避光条件下，用生理盐水配置浓度为10mg/ml的CTX溶液，充分混匀溶解；称取小鼠体重，根据CTX给予120mg/kg的量计算每只小鼠注射量；
左手固定小鼠，右手吸取相应量CTX溶液腹腔注射入小鼠体内；空白对照组给予相应量的生理盐水，余过程与模型建立相同；
S2，药物治疗：
化疗前灌胃给予低剂量绞股蓝皂苷组小鼠(G-L组)绞股蓝皂苷 100mg/kg、高剂量绞股蓝皂苷组小鼠(G-H组)绞股蓝皂苷400mg/kg 共14天，化疗后继续给予相应剂量绞股蓝皂苷14天，空白对照组和单纯造模组小鼠给予相同体积生理盐水。
S3，一般状况和药物安全性：
给药期间每两天检测一次小鼠体重并记录；干预结束后，动情间期处死小鼠，取重要脏器称重并拍照，计算卵巢指数；结果如图1所示：结合图1中的A可知第14天给予CTX干预后CTX、G-L、G-H组小鼠体重出现下降，最终G-L和G-H组小鼠体重高于CTX组；结合图1中的B可知G-L和G-H组小鼠卵巢指数显著高于CTX组。
S4，卵巢内分泌功能检测：
连续十天用生理盐水蘸取小鼠阴道分泌物进行动情周期检测；利用Elisa试剂盒检测小鼠血清雌孕激素水平；结果如图2所示：从图2中的A可以看出，G-L和G-H组小鼠动情周期更规律。进一步在图2B看出，经过绞股蓝皂苷处理的小鼠，统计所得动情周期规律比例更高。从图2中的C和D可以看出，经过绞股蓝皂苷处理的小鼠，雌激素和孕酮水平没有下降，反而有所提高，且G-H组相较于G-L组提升水平更高。
S5，生殖功能检测：
每组留取5只小鼠进行合笼，合笼期间将每只雌鼠和一只雄鼠单独放一起，10天后将雄鼠取出，随后20天观察雌鼠有无怀孕和产仔数；每30天为一个周期，共进行6个周期；结果见图3所示，CTX组小鼠的每窝产仔数和平均产仔次数显著下降。而经过绞股蓝皂苷处理的小鼠的平均产仔次数下降不明显，且每窝产仔数显著高于CTX组。
S6，卵巢储备功能检测：
小鼠卵巢同福尔马林固定后送连续切片，每隔80μm取一张卵巢切片进行HE染色，光学显微镜下计数各级卵泡；结果如图4所示，图4中的A显示在光学显微镜下，NC组、G-L组、G-H组小鼠卵巢切片多见始基卵泡和生长卵泡，而CTX组小鼠卵巢切片所见以闭锁卵泡为主。图4中的B显示，经过绞股蓝皂苷处理的小鼠的始基卵泡和生长卵泡数目较CTX组显著更高，同时闭锁卵泡数目有所下降。(PMF为始基卵泡；PF为初级卵泡、SF为次级卵泡、ANF为窦卵泡，三者合称生长卵泡；ATF为闭锁卵泡)
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
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