阅读说明：本技术 一种快速筛查药品及中间体中多种仲胺的lc-ms法 (LC-MS method for rapidly screening various secondary amines in medicines and intermediates ) 是由 顾凯 朱子丰 卢彦 嵇慧卿 于 2020-12-11 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种快速筛查药品及中间体中多种仲胺的LC-MS法,具体涉及药物的样品前处理技术领域,S1、取十二种仲胺对照品适量,以乙腈-水(90：10)为稀释剂,配制适当浓度的仲胺混合溶液,作为混合对照品溶液；S2、配制系列仲胺对照品溶液,经LC-MS法检测,分别获得对照品溶液中十二种仲胺的峰面积,并与溶液浓度进行标准曲线拟合。本发明样品前处理过程简单,易操作,采用HILIC模式色谱柱,获得良好的保留及分离,分析时间短,灵敏度高,极大提高了分析效率,适用于大量样品中多种仲胺的筛查,通过控制样品中仲胺含量,评估产生亚硝胺与亚硝酰胺杂质的风险,为生产工艺提供指导。(The invention provides an LC-MS method for rapidly screening various secondary amines in medicines and intermediates, and particularly relates to the technical field of sample pretreatment of medicines, S1, taking a proper amount of twelve secondary amine reference substances, taking acetonitrile-water (90: 10) as a diluent, and preparing a secondary amine mixed solution with a proper concentration as a mixed reference substance solution; s2, preparing a series of secondary amine reference substance solutions, detecting by an LC-MS method, respectively obtaining peak areas of twelve secondary amines in the reference substance solutions, and performing standard curve fitting with the solution concentrations. The method has the advantages of simple sample pretreatment process, easy operation, good retention and separation by adopting the HILIC mode chromatographic column, short analysis time, high sensitivity, greatly improved analysis efficiency, suitability for screening of various secondary amines in a large number of samples, evaluation of the risk of generating nitrosamine and nitrosamide impurities by controlling the content of the secondary amines in the samples and guidance for the production process.)

一种快速筛查药品及中间体中多种仲胺的LC-MS法

技术领域

本发明属于药物的样品前处理技术领域，具体涉及一种快速筛查药品及中间体中多种仲胺的LC-MS法。

背景技术

N-亚硝胺类化合物是强致癌物，国际癌症研究署(IARC)把亚硝胺列为2A类致癌物，即动物致癌明确，但对人体作用尚不明确。在ICHM7指南中明确提出亚硝胺类化合物属于具有较高致癌性的物质，因此该类化合物应在药品中予以严格控制。亚硝胺类化合物属亚硝基化合物,包括亚硝胺与亚硝酰胺两类,是亚硝酸盐与胺类特别是仲胺合成的一大类化学物质。根据缬沙坦中第31条审查确定的亚硝胺的形成和污染的一些根本原因的描述可以作为评估药品中亚硝胺类化合物评估的很好借鉴。文章中核心的观点是在仲胺或者叔胺的存在下，与亚硝酸盐接触是亚硝胺形成的潜在原因。因此风险评估的逻辑就从起始物料、试剂、中间体、原料药、辅料等药品生产制造过程中去排查这两类化合物是否有存在或者接触的风险。目前对于亚硝胺类化合物，FDA、EMA等机构先后发布了相关测试方法，但对于其来源之一仲胺类化合物测定报道较少，多采用柱前衍生化-高效液相色谱法或气相色谱法、离子色谱法等进行测定。

对于亚硝胺类化合物，FDA、EMA等机构先后发布了相关测试方法，限度要求严格，方法检测要求较高，亚硝胺与亚硝酰胺两类是亚硝酸盐与胺类特别是仲胺合成的一大类化学物质，现有技术的缺陷和不足：1.现有方法中柱前衍生化法样品处理过程复杂，方法重现性差，不适于大量样品筛查；2.离子色谱法应用范围较窄，平衡时间长，耗材损耗快，成本高，同样不适用于大量样品的筛查。

发明内容

本发明提供了一种快速筛查药品及中间体中十二种仲胺的LC-MS法，样品前处理过程简单，易操作，采用HILIC模式色谱柱，获得良好的保留及分离，分析时间短，灵敏度高，极大提高了分析效率，适用于大量样品中多种仲胺的筛查，通过控制样品中仲胺含量，评估产生亚硝胺与亚硝酰胺杂质的风险，为生产工艺提供指导。

本发明提供了如下的技术方案：

一种快速筛查药品及中间体中多种仲胺的LC-MS法，步骤如下：

S1、取十二种仲胺对照品适量，以乙腈-水(90：10)为稀释剂，配制适当浓度的仲胺混合溶液，作为混合对照品溶液；

S2、配制系列仲胺对照品溶液，经LC-MS法检测，分别获得对照品溶液中十二种仲胺的峰面积，并与溶液浓度进行标准曲线拟合；

优选的，LC-MS法的色谱条件为：采用HILIC模式色谱柱，柱温为35℃，进样量10μl；检测器为质谱检测器，离子源为ESI，正离子模式；以10mM乙酸铵为流动相A，乙腈为流动相B，流速为0.3ml/min；等度洗脱。

本发明的有益效果：

本发明样品前处理过程简单，易操作，采用HILIC模式色谱柱，获得良好的保留及分离，分析时间短，灵敏度高，极大提高了分析效率，适用于大量样品中多种仲胺的筛查，通过控制样品中仲胺含量，评估产生亚硝胺与亚硝酰胺杂质的风险，为生产工艺提供指导。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1二甲胺标准曲线；图2甲乙胺标准曲线；图3吡咯烷标准曲线；图4二乙胺标准曲线；图5哌啶标准曲线；图6N-乙基异丙胺标准曲线；图7吗啉标准曲线；图8二乙醇胺标准曲线；图9二丁基胺标准曲线；图10N-硝基二正丙胺标准曲线；图11a二异丙胺与二正丙胺EIC图；图11bEIC图；图12二苄胺EIC图(分子量197.28)；图13二丁基胺EIC图(分子量129.24)；图14二异丙胺和二正丙胺EIC图(分子量101.19)；图15N乙基异丙胺和吗啉EIC图；图16二乙胺EIC图(分子量73.14)；图17哌啶EIC图(分子量85.15)；图18甲乙胺EIC提取图(分子量59.11)；图19吡咯烷EIC提取图(分子量71.12)；图20二乙醇胺EIC提取图(分子量105.14)；图21二甲胺EIC提取图(分子量45.08)。

具体实施方式

一种快速筛查药品及中间体中十二种仲胺的LC-MS法，具体如下，取十二种仲胺对照品适量，以乙腈-水(90：10)为稀释剂，配制适当浓度的仲胺混合溶液，作为混合对照品溶液；配制系列仲胺对照品溶液，经LC-MS法检测，分别获得对照品溶液中十二种仲胺的峰面积，并与溶液浓度进行标准曲线拟合；LC-MS法的色谱条件为：采用HILIC模式色谱柱，柱温为35℃，进样量10μl；检测器为质谱检测器，离子源为ESI，正离子模式；以10mM乙酸铵为流动相A，乙腈为流动相B，流速为0.3ml/min；等度洗脱。测试结果参见附图；

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。