一种游离rna助沉剂
阅读说明：本技术 一种游离rna助沉剂 (Free RNA precipitation aid ) 是由 鹿亚超 于 2020-11-12 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种游离RNA助沉剂,每1ml助沉剂包括如下组分：5-10mg硫酸葡聚糖,0.01-0.02mg线性丙烯酰胺和0.1-0.2mmol醋酸盐。本发明所提供的游离RNA助沉剂,能加速cfRNA提取过程中的沉淀,提高最终的游离RNA的提取得率；另外,本发明所述助沉剂使用方便,只需添加到现有的RNA提取试剂盒,就可明显提高样本中游离RNA的提取率,对后续下游分子生物学应用无不利影响,如RT-PCR、qRT-PCR等,具有广泛的应用前景。(The invention relates to a free RNA (ribonucleic acid) settling aid, wherein each 1ml of the settling aid comprises the following components: 5-10mg dextran sulfate, 0.01-0.02mg linear acrylamide and 0.1-0.2mmol acetate. The free RNA precipitation aid provided by the invention can accelerate precipitation in the cfRNA extraction process and improve the final extraction yield of the free RNA; in addition, the settling agent is convenient to use, can obviously improve the extraction rate of free RNA in a sample only by adding the settling agent into the existing RNA extraction kit, has no adverse effect on subsequent downstream molecular biology applications, such as RT-PCR, qRT-PCR and the like, and has wide application prospects.)
技术领域
本发明属于游离RNA提取技术领域，特别涉及一种游离RNA助沉剂。
背景技术
RNA是相对不稳定的分子，容易被核糖核酸酶降解。cfRNA包括人体细胞程序性死亡过程释放在循环里的RNA，mRNA、miRNAs、tRNAs、YRNA、circRNAs、piRNAs、rRNA、snRNA。据报道，来自食物和人体微生物群的外源性细胞外RNA也可以进入循环，研究已证实cfRNA可以作为包括癌症在内的各种疾病的生物标志物。而绝大多数的患者cfRNA含量非常低，给后续的检测带来很大挑战。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种游离RNA助沉剂，用于加速cfRNA提取过程中的沉淀，提高最终的cfRNA的提取得率。
本发明提供了一种游离RNA助沉剂，每1ml助沉剂包括如下组分：5-10mg硫酸葡聚糖，0.01-0.02mg线性丙烯酰胺和0.1-0.2mmol醋酸盐。
所述醋酸盐为醋酸铵或醋酸钾。
所述助沉剂贮存于-10℃-20℃的试管中。
本发明还提供了一种游离RNA助沉剂的应用。
所述助沉剂用于体液样本游离RNA的提取。
所述体液包括血浆、血清、胸水、腹水、脑脊液或尿液。
所述助沉剂用于分子生物学下游试验的提取样本步骤，如RT-PCR或qRT-PCR等。
有益效果
与现有技术相比，使用本发明所提供的助沉剂，能够有效的加速体液样本游离RNA提取时游离RNA的沉淀，能够明显提高游离RNA的提取得率，进而可以提高样本中游离RNA相关疾病生物标志物的检出率；另外，本发明所述助沉剂使用方便，只需添加到现有的RNA提取试剂盒，就可明显提高样本中游离RNA的提取率，应用范围广泛。
附图说明
图1为实施例1的Ct值判断检测结果。
图2为实施例2的Ct值判断检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
本实施例提供的一种游离RNA助沉剂，由如下组分组成：5mg/ml硫酸葡聚糖，0.01mg/ml线性丙烯酰胺和0.1mg/ml醋酸盐。
正常人血清样本TRIzol试剂法cfRNA抽提，用一步法qRT-PCR法检测管家基因GAPDH CT值比较加入与不加入cfRNA助沉剂的效果。
1、核酸提取：
1)取0.5ml血清，加入1mlTRIzol试剂，混匀，室温放置5-10min。
2)加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15s，静置2min。
3)4℃离心，12000g×15min，取上清。
4)加入cfRNA助沉剂，加入量为100μl，加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。同时，在本步骤中不加入cfRNA助沉剂仅加入异丙醇，作为对比。
5)4℃离心，12000g×10min，弃上清。
6)加入1ml 75％乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。
7)晾干，加入30μl DEPC H2O溶解(65℃促溶10-15min)。
8)-70℃保存，或直接用于下一步实验。
2、检测：
将获得的cfRNA利用管家基因GAPDH进行荧光定量PCR验证，根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果。加入和不加入cfRNA助沉剂，CT值间存在差异，通过管家基因的qPCR验证，可以判断加入cfRNA助沉剂提高了cfRNA的抽提率。
结果如下表和图1所示：
实施例2
本实施例提供的一种游离RNA助沉剂，由如下组分组成：5mg/ml硫酸葡聚糖，0.01mg/ml线性丙烯酰胺和0.1mg/ml醋酸盐。
针对含病原菌血清样本TRIzol试剂法cfRNA抽提，用一步法qRT-PCR法检测内参16srRNA基因CT值比较加入与不加入cfRNA助沉剂的效果。
1、核酸提取：
1)取0.5ml血清，加入1mlTRIzol试剂，混匀，室温放置5-10min。
2)加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15s，静置2min。
3)4℃离心，12000g×15min，取上清。
4)加入cfRNA助沉剂，加入量为100μl，加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。同时，在本步骤中不加入cfRNA助沉剂仅加入异丙醇，作为对比。
5)4℃离心，12000g×10min，弃上清。
6)加入1ml 75％乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。
7)晾干，加入30μl DEPC H2O溶解(65℃促溶10-15min)。
8)-70℃保存，或直接用于下一步实验。
2、检测：
将获得的cfRNA利用内参基因16srRNA进行荧光定量PCR验证，根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果。加入和不加入cfRNA助沉剂，CT值间存在差异，通过管家基因的qPCR验证，可以判断加入cfRNA助沉剂提高了cfRNA的抽提率。
结果如下表和图2所示：