阅读说明：本技术 一种沙坦类药物合成中杂质的检测方法 (Method for detecting impurities in sartan drug synthesis ) 是由 汤伟彬 蔡强 刘杰 陆国琦 李达胜 兰柳琴 于 2021-01-21 设计创作，主要内容包括：本发明属于药物分析技术领域,具体涉及一种沙坦类药物合成中杂质的检测方法,该方法使用方便快捷的LCMS/MS,对叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑进行检测,可用于监测沙坦类药物的质量。本发明首次提出了叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑的检测方法,具有准确度高、精密度高、重现性好、稳定性好、专属性强等特点,同时本发明的测定方法操作简单,所用时间比较短,成本低,耗时短。(The invention belongs to the technical field of drug analysis, and particularly relates to a method for detecting impurities in sartan drug synthesis. The invention provides a method for detecting azides sartanbiphenyl or azides sartanbiphenyl tetrazole for the first time, and the method has the characteristics of high accuracy, high precision, good reproducibility, good stability, strong specificity and the like.)

一种沙坦类药物合成中杂质的检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种沙坦类药物合成中杂质的检测方法。

背景技术

沙坦类药物合成过程中，根据生产的工艺特性，可能会产生副产物：，其中，R为CN或中的任一种。

叠氮沙坦联苯，化学名称：4'-（叠氮甲基）-[1,1'-联苯]-2-腈，结构式为：

。

叠氮代沙坦联苯四氮唑，化学名称：5-（4’-（苄基叠氮）-[1,1’-联苯]-2-基）-1H-四唑，结构式：。在沙坦类药物合成中根据生产工艺的不同，可能会产生叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑。

目前，少有报道叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑的检测方法，作为医药行业，严格控制产品中的杂质含量是非常必要的，对物料杂质的研究有助于药物的合成工艺优化和质量控制，研究沙坦类药物中叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑的检验方法，为评价沙坦类药物的质量提供了较好的参考，也为优化沙坦类药物合成工艺提供技术依据，对确定沙坦类药物中叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑所引起的不良反应具有重大意义。

本发明为解决叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测沙坦类药物中叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑含量，从而有效控制沙坦类药物中叠氮沙坦联苯或叠氮代沙坦联苯四氮唑的含量，保障用药安全。

发明内容

本发明提供一种叠氮代沙坦联苯四氮唑的检测方法，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于沙坦类药物的质量控制。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种沙坦类药物合成中杂质的检测方法，所述杂质结构式为：，其中R为CN或中的任一种，所述检测方法包括以下步骤：

（1）配制溶液，分别配制稀释液、空白溶液、对照品溶液和供试品溶液，所述对照品溶液包括杂质储备液、对照品储备液。

（2）测定方法：采用LC-MS/MS测定杂质的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液，对照品溶液和供试品溶液，记录谱图；

Ⅰ：色谱条件如下:色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速0.5ml/min±0.1mL/min，柱温：30℃±5℃，进样量：10μl，流动相以甲酸：水体系为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱；

Ⅱ：MS条件：极性：正极，干燥气温度：320℃，干燥气流量：8L/min，雾化器压力： 40psi，毛细管电压：3500V，鞘气温度：350℃，鞘气流速：10 L/min，EMV：200V，开关阀的切换时间设置：

0min：to Waste；

4.0min：to MS；

8.5min：to Waste。

一种叠氮沙坦联苯的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

（1）配制溶液，分别配制空白溶液、对照品溶液、灵敏度溶液和供试品溶液，所述对照品溶液包括叠氮沙坦联苯储备液、对照品储备液。

（2）测定方法：采用LC-MS/MS测定叠氮沙坦联苯的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液，灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，记录谱图；

Ⅰ：色谱条件如下: 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速0.5ml/min±0.1mL/min，柱温：30℃±5℃，进样量：10μl，流动相以甲酸：水体系为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱；

Ⅱ：MS条件：极性：正极，干燥气温度：320℃，干燥气流量：8L/min，雾化器压力： 40psi，毛细管电压：3500V，鞘气温度：350℃，鞘气流速：10 L/min，EMV：200V，开关阀的切换时间设置：

0min：to Waste；

4.0min：to MS；

8.5min：to Waste。

所述空白溶液为乙腈：水=55：45（V/V）；

所述叠氮沙坦联苯储备液：取适量叠氮沙坦联苯对照品置于容量瓶中，加入适量空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；

所述对照品储备液：精密量取叠氮沙坦联苯储备液适量置于容量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀；

所述对照品溶液：量取适量对照品储备液，置于容量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀；

所述供试品溶液：取供试品适量置于容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；

所述流动相为：

流动相A：甲酸：水=1:1000（V/V）；

流动相B：乙腈；

所述甲酸为HPLC级；

所述乙腈为HPLC级；

所述水为超纯水；

所述色谱柱为Thermo Acclaim^TM RSLC120 C18，2.1×100mm，2.2 μm。

进一步的，所述流动相梯度过程如下：

。

一种叠氮代沙坦联苯四氮唑的检测方法，包括以下步骤：

（1）配制溶液，分别配制稀释液、空白溶液、对照品溶液和供试品溶液，所述对照品溶液包括叠氮代沙坦联苯四氮唑储备液、对照品储备液。

（2）测定方法：采用LC-MS/MS测定叠氮代沙坦联苯四氮唑的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液，对照品溶液和供试品溶液，记录谱图；

Ⅰ：色谱条件如下: 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速0.5ml/min±0.1mL/min，柱温：30℃±5℃，进样量：10μl，流动相以甲酸：水体系为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱；

Ⅱ：MS条件：极性：正极，干燥气温度：320℃，干燥气流量：8L/min，雾化器压力： 40psi，毛细管电压：3500V，鞘气温度：350℃，鞘气流速：10 L/min，EMV：200V，开关阀的切换时间设置：

0min：to Waste；

4.0min：to MS；

8.5min：to Waste。

所述稀释液为乙腈：水=20：80（V/V）；

所述空白溶液的配制步骤为：取适量甲醇于容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；

所述叠氮代沙坦联苯四氮唑储备液：取适量叠氮代沙坦联苯四氮唑对照品置于容量瓶中，加入适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；

所述对照品储备液：精密量取叠氮代沙坦联苯四氮唑储备液适量置于容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；

所述对照品溶液：量取适量对照品储备液，置于容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；

所述供试品溶液：取供试品适量置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液适量置于容量瓶中，加入稀释液稀释至刻度，摇匀；

所述流动相为：

流动相A：甲酸：水=1:1000（V/V）；

流动相B：乙腈；

所述甲酸为HPLC级；

所述甲醇为HPLC级；

所述乙腈为HPLC级；

所述水为超纯水；

所述色谱柱为Thermo Acclaim^TM RSLC120 C18，2.1×100mm，2.2 μm。

进一步的，所述流动相梯度过程如下：

。

沙坦类药物合成中杂质的检测方法用于厄贝沙坦、坎地沙坦酯或奥美沙坦酯的检测。

本发明首次提出了一种沙坦类药物合成中杂质的检测方法，所述杂质结构式为：，其中R为CN或中的任一种，具有准确度高、精密度高、重现性好、稳定性好、专属性强等特点，同时本发明采用常用试剂，测定方法操作简单，所用时间比较短，成本低，耗时短。

附图说明

图1为实施例2空白溶液图谱

图2为实施例2灵敏度溶液图谱

图3为实施例2对照品溶液（a）图谱

图4为实施例2对照品溶液图谱

图5为实施例3供试品溶液图谱

图6为实施例3选择性溶液图谱

图7为实施例4 LOD溶液图谱

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1：奥美沙坦酯中叠氮代沙坦联苯四氮唑的检测

（1）配制溶液：

稀释液：乙腈：水=20：80（V/V）；

空白溶液：精密量取甲醇500µl，置50ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀（可根据实际使用情况按同等比例体积增大或缩小进行配制）。

叠氮代沙坦联苯四氮唑储备液：取叠氮代沙坦联苯四氮唑对照品约21mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液500µl，置20ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；（浓度：5.25µg/ml）

对照品储备液：精密量取叠氮代沙坦联苯四氮唑储备液500µl，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。（浓度：52.5ng/ml）

对照品溶液：精密量取对照品储备液500µl，置50ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮代沙坦联苯四氮唑0.525ng/ml）

对照品溶液（a）：精密量取对照品溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮代沙坦联苯四氮唑0.0525ng/ml）

灵敏度溶液：精密量取对照品溶液200µl，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮代沙坦联苯四氮唑0.0105ng/ml）

供试品溶液：取供试品约70mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液500µl置50ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：奥美沙坦酯 0.014mg/ml）

选择性溶液：取供试品约70mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入叠氮代沙坦联苯四氮唑储备液500µl，加甲醇适量，超声使溶解，并甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取供试品溶液500µl置50ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：奥美沙坦酯0.014mg/ml；叠氮代沙坦联苯四氮唑浓度：0.525ng/ml）

LOD溶液：精密量取对照品溶液200µl，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮代沙坦联苯四氮唑0.0105ng/ml）

备注：以上溶液均在室温使用棕色容量瓶避光配制。

（2）测定方法：待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，对照品溶液（a）1针，对照品溶液6针，空白溶液1针，供试品溶液1针，并记录谱图。

实施例2：系统适用性

系统适用性是通过评估灵敏度溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑的信噪比（S/N）和6针对照品溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑峰面积的RSD实现的，要求灵敏度溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑的S/N值应不小于3；6针对照品溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑峰面积的RSD应不大于10.0%。为确认序列运行过程中的系统适用性，待对照品溶液完成进样后，每隔约8小时或序列的最后，进对照品溶液1针，要求后连续6针对照品溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑的RSD应不大于10.0%；如超出该范围，应做评估调查。

待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，对照品溶液（a）1针，对照品溶液6针，记录谱图。

实施例3：专属性

专属性是通过测定空白溶液对检测有无干扰，选择性溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑峰与相邻杂质峰间的分离度及选择性溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑的回收率而实现的，要求空白溶液对检测应无干扰，选择性溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑峰与相邻杂质峰间的分离度应不小于1.5，选择性溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑的回收率应在80.0%~120.0%之间。

待系统稳定后，进空白溶液、供试品溶液、对照品溶液各1针，选择性溶液3针，记录谱图。

实施例4：检测限

检测限是通过检测其响应信号与噪声之比不小于3：1而得到。要求所得的谱图中，LOD_{叠氮代沙坦联苯四氮唑}应不大于3.75ppm，LOD溶液中叠氮代沙坦联苯四氮唑的S/N值应不小于3。

待系统稳定后，进空白溶液、LOD溶液各1针，记录谱图。

实施例5：耐用性

考察对照品溶液、供试品溶液和选择性溶液在室温下避光放置一段时间后进样，检测结果随时间变化的规律，为检测时对照品溶液和供试品溶液的放置时间提供参考。

要求：与对照品溶液0hr相比较，对照品溶液在室温避光考察期间，叠氮代沙坦联苯四氮唑的回收率在80.0%～120.0%之间，且无明显变化趋势，则对照品溶液在室温避光考察期间稳定；

若供试品溶液0hr有检出叠氮代沙坦联苯四氮唑，供试品溶液在室温避光放置一段时间内，测定结果变化值在叠氮代沙坦联苯四氮唑限度的20%以内，且无明显变化趋势，则供试品溶液在室温避光考察期间稳定；若供试品溶液0hr未检出叠氮代沙坦联苯四氮唑，供试品溶液在室温避光放置一段时间内，仍无叠氮代沙坦联苯四氮唑检出，则供试品溶液在室温避光考察期间稳定；

选择性溶液在室温避光放置一段时间内，叠氮代沙坦联苯四氮唑的回收率在80.0%～120.0%之间，且无明显变化趋势，则选择性溶液在室温避光考察期间稳定。

待系统稳定后，在0hr、间隔一定时间后进空白溶液、供试品溶液、对照品溶液和选择性溶液各1针，记录谱图。

实施例6：坎地沙坦酯中叠氮代沙坦联苯四氮唑的检测

（1）溶液配制

稀释液：乙腈：水=20：80（V/V）；

空白溶液：精密量取甲醇500µl，置50ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀（可根据实际使用情况按同等比例体积增大或缩小进行配制）。

叠氮代沙坦联苯四氮唑储备液：取叠氮代沙坦联苯四氮唑对照品约47mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液200µl，置20ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；（浓度：4.7µg/ml）

对照品储备液：精密量取叠氮代沙坦联苯四氮唑储备液500µl，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。（浓度：47ng/ml）

对照品溶液：精密量取对照品储备液500µl，置50ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮代沙坦联苯四氮唑0.47ng/ml）

对照品溶液（a）：精密量取对照品溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮代沙坦联苯四氮唑0.047ng/ml）

灵敏度溶液：精密量取对照品溶液500µl，置20ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮代沙坦联苯四氮唑0.01175ng/ml）

供试品溶液：取供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液500µl置50ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：坎地沙坦酯 0.01mg/ml）

备注：以上溶液均在室温使用棕色容量瓶避光配制。

（2）测定方法：

待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，对照品溶液（a）1针，对照品溶液6针，空白溶液1针，供试品溶液1针，并记录谱图。

对坎地沙坦酯中叠氮代沙坦联苯四氮唑检测，对系统适应性、专属性、检测限、耐用性进行验证，验证结果如下：

实施例7：厄贝沙坦中叠氮沙坦联苯的检测

空白溶液：乙腈：水=55：45（V/V）；

叠氮沙坦联苯储备液：取叠氮沙坦联苯对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度：500µg/ml）

对照品储备液：精密量取叠氮沙坦联苯储备液500µl，置20ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：125ng/ml）

对照品溶液：精密量取对照品储备液1.0ml，置50ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮沙坦联苯2.5ng/ml）

灵敏度溶液：精密量取对照品溶液4.0ml，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：叠氮沙坦联苯1ng/ml）

供试品溶液：取供试品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加空白溶液适量，涡旋使样品溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度：厄贝沙坦 0.5mg/ml）

待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，对照品溶液6针，空白溶液1针，供试品溶液1针，并记录谱图。

结果（ppm）=(RU/RS) ×(CS/CU)

其中：RU：供试品溶液图谱中叠氮沙坦联苯的峰面积；

RS：6针对照品溶液图谱中叠氮沙坦联苯的平均峰面积；

CS：对照品溶液中叠氮沙坦联苯的浓度(ng/ml)；

CU：供试品溶液中的厄贝沙坦浓度(mg/ml)