Ccr6或cxcr2拮抗剂治疗泛发性脓疱型银屑病的方法
阅读说明：本技术 Ccr6或cxcr2拮抗剂治疗泛发性脓疱型银屑病的方法 (Methods of treating generalized pustular psoriasis with CCR6 or CXCR2 antagonists ) 是由 J·J·坎贝尔 K·埃伯斯华斯 A·卡拉辛斯基 V·R·马利 J·麦克马洪 R·辛格 杨 于 2019-01-07 设计创作，主要内容包括：本公开尤其提供了通过施用有效量的趋化因子受体6(CCR6)拮抗剂和/或C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)拮抗剂来治疗泛发性脓疱型银屑病(GPP)的方法。本文还提供了在有需要的受试者中调节失调的IL-36信号传导的方法和在有需要的受试者中减少嗜中性白细胞、炎性树突细胞(iDC)和/或CD4T细胞聚积的方法,所述方法包括施用有效量的趋化因子受体6(CCR6)拮抗剂和/或CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)拮抗剂。在一些实施方式中,CCR6和/或CXCR2拮抗剂具有下式：<Image he="384" wi="700" file="DDA0002667523180000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The disclosure particularly providesMethods of treating generalized psoriasis (GPP) by administering an effective amount of a chemokine receptor 6(CCR6) antagonist and/or a C-X-C motif chemokine receptor 2(CXCR2) antagonist are provided. Also provided herein are methods of modulating dysregulated IL-36 signaling in a subject in need thereof and methods of reducing neutrophil, Inflammatory Dendritic Cell (iDC), and/or CD4T cell accumulation in a subject in need thereof, comprising administering an effective amount of a chemokine receptor 6(CCR6) antagonist and/or a CXC motif chemokine receptor 2(CXCR2) antagonist. In some embodiments, the CCR6 and/or CXCR2 antagonist has the formula:)
相关申请的交叉引用
本申请根据35 USC§119(e)要求2018年1月8日提交的美国临时申请序列号62/614,927和2018年8月7日提交的美国临时申请序列号62/715,503的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。
联邦支持的研究与开发有关发明权的声明
不适用。
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不适用。
背景技术
泛发性脓疱性银屑病(GPP)是一种罕见疾病，缺乏临床研究，对其治疗和管理没有普遍接受的循证指南(Benjegerdes等.银屑病(Psoriasis)(Auckl)2016；6:131-44.)。在银屑病的更常见菌斑形式中有效的生物疗法在GPP中无效(Benjegerdes等.银屑病(Auckl)，2016年；6：131-44.Mansouri等.生物疗法专家评论(Expert Opin Biol Ther)2013；13(12):1715-30.)，以及直接针对GPP的急需的治疗方法尚未开发出来(Mahil等.免疫病理学研讨会2016；38(1):11-27.Navarini等.欧洲皮肤病学和性病学会杂志(J Eur AcadDermatol Venereol)，2017；31(11):1792-9.Robinson等.美国皮肤病学会期刊(J Am AcadDermatol)，2012；67(2):279-88。
本公开解决了针对有前景的靶向和改善GPP症状的疗法的需求，并且还提供了相关的优点
发明内容
本公开提供了治疗泛发性脓疱型银屑病(GPP)、掌跖银屑病(palmo-plantarpsoriasis)(PPP)、急性泛发性发疹性(acute generalized exanthematous pustulosis)(AGEP)、化脓性汗腺炎(HS)、疱疹样皮炎和/或寻常型天疱疮的方法，所述方法包括给予有效量的趋化因子受体6(CCR6)和/或CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)拮抗剂。
在另一方面，本文提供了在有需要的受试者中调节失调的IL-36信号传导的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的趋化因子受体6(CCR6)和/或CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)的拮抗剂。
在另一方面，本文提供了减少有需要的受试者中的中性粒细胞、炎性树突细胞(iDC)和/或CD4T细胞聚积的方法，包括向受试者施用有效量的趋化因子受体6(CCR6)和/或C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)拮抗剂。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂具有下式：
其中，各变量的说明如下。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂具有下式：
其中，各变量的说明如下。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为如图1所示的化合物。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为化合物1.129：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为化合物1.123：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为化合物1.136：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为化合物1.138：
或其药学上可接受的盐。
附图简要说明
图1A-1AJ提供本文所述化合物的特定结构。
图2A-D显示了门控方案，该门控方案用于鉴定从经IL-36处理的皮肤(在图3、图5和图5中所讨论的)中分离的iDC、嗜中性粒细胞和CD4+αβT细胞。首先细胞在活的CD45+细胞群上设门，然后由Thy-1与CD11b设门(图A)。在左下角圈出的细胞以Ly6C与Ly6G设门，以鉴定iDC和嗜中性粒细胞(图B)。然后将图A左上角圈出的细胞以TCRαβ与TCRγδ设门(图C)。将在图C中循环的细胞在CD8α和CD4上设门，以鉴定CD4+Tαβ细胞(图D)。
图3A-D显示在斑块状银屑病的咪喹莫特(Imiquimod)模型和GPP的IL-36模型中的明显不同的炎性细胞皮肤浸润。图A和B显示了四天(每天每次)使用IMQ(A，水平条纹的灰色条)或IL-36α(B，斜条纹的灰色条处理后的小鼠皮肤分离出的每克细胞数。黑色条表示从对照处理的皮肤(用于咪喹莫特实验的外用凡士林(VAS)(A)和用于IL-36实验的皮内PBS(B))分离的每克细胞数。图C显示了经IL-36处理和经咪喹莫特处理的皮肤内白细胞亚群的相对代表：各个实验之间的比较。计算5次咪喹莫特实验和7次IL-36实验(每个实验至少使用5只小鼠)的总活CD45+浸润T细胞、嗜中性粒细胞和iDC的百分比。显示了这些实验的平均值(和SEM)的平均值。图D显示了从在用咪喹莫特(水平条纹的灰色条)或IL-36α(斜条纹的灰色条)处理后小鼠皮肤中分离出来的表达所示免疫表型的T细胞百分比。每个条形表示单个实验的十只小鼠的平均值和SEM(代表至少5次重复)。显示的所有种群首先以活(AQUA活/死阴性)和CD45+设门。对于图a和b，将T细胞作为表达TCRβ或TCRγδ的Thy-1+/CD11b-细胞设门。Ly6G+和Ly6Chi/Ly6G-细胞在Thy-1-/Cd11b+种群范围内设门。对于图c，每个指示的种群均以表达TCRβ或TCRγδ的Thy-1+/CD11b-种群总数的百分比计算。
图4A-B显示了对CCL20和CXCL2蛋白的多重分析，分析证明进行4天每日皮内注射IL-36α后，两种蛋白均显著增加。图A中绘制了CCL20蛋白水平；图B中绘制了CXCL2蛋白水平。
图5A-C显示了响应皮内注射IL-36α而在皮肤中聚积的白细胞表达CCR6和CXCR2。汇集从20只小鼠的经IL-36处理的耳朵分离的细胞，并用未缀合的特异性MAb(如每列上方所示)或同型匹配对照染色，然后使用标准程序进行二级MAb染色。未结合的二级(secondstage)被正常的小鼠、大鼠和仓鼠血清封闭，随后被直接标记的单克隆抗体封闭。每行左边显示了每个细胞类型的门控：髓样细胞为图A；中性粒细胞为图B；CD4 T细胞为图C。如果比同型匹配对照更亮的细胞百分比大于5％，则在流式细胞仪图中指示。汇集的细胞染色代表4次重复实验。
图6A-B显示化合物1.136改善了注射IL-36α的耳朵的炎性肿胀。图A绘制了在IL-36α诱导的GPP模型期间，每天以指定剂量给药化合物1.136(或α-IL-17RA)的小鼠的耳厚。处理4天后，用卡尺测量耳厚。图B(A)中所示的实验的耳厚的时程，比较了90mg/kg剂量的化合物1.136与α-IL-17RA。每个数据点十只小鼠。来自惠特尼等级顺序测试的统计数据。注意：滴定实验显示α-IL-17RA的效果稳定在每只小鼠每天200μg，并且该实验中的小鼠以每天每只小鼠500μg给药(数据未显示)。n.s.，不显著p<.05*,p<.0005***,p<.0001****。
图7A-B示出了耳厚数据。图A显示了化合物1.136的滴定时程(如图6A所示)。图B显示抗IL-17RA处理的IL-36α发炎的皮肤的同型匹配对照。如本文所述，通过每天皮内注射PBS或活化的IL-36α使每组五只小鼠的耳朵发炎。一些组还每天接受腹膜内注射500μg/小鼠的抗IL-17RA或500μ克/小鼠的抗IgG-17a MAb的大鼠IgG2a同型匹配阴性对照。曼-惠特尼等级评定试验确立了在第3、4和5天抗IL-17RA Mab及其同型匹配对照之间具有显著意义。*p<0.05，**p<0.01。尽管抗IL17RA的效果在200μg/小鼠/天的剂量下达到饱和(与图3中的500μg/小鼠/天相比)，但将抗IL-17RA与其同型匹配对照在500mg/kg/天的剂量进行了比较，以证明即使在这些非常高的浓度下，其效果也不是同型的非特异性效果。
图8A-D显示化合物1.136实质上改善了注射IL-36α的耳朵的组织学。在90mg/kgIL-36α或PBS处理4天后，从处死的小鼠中获取耳朵(图A为PBS+溶媒；图B为IL-36+溶媒)。在治疗期间，每天向小鼠给药1％HPMC(化合物1.136的溶媒；图A&B)，和溶媒中的化合物1.136(图C)或和抗IL17RA(图D)。使用标准FFPE技术固定并包埋耳朵，切片，使用苏木精和曙红(H&E)染色技术进行染色。所示切片代表来自五个不同耳朵的至少五个不同切片。
图9A-B显示化合物1.136实质上减少了注射了活化的IL-36α的耳朵表皮厚度。图A，第一行显示了注射4天IL-36α后耳朵的整个宽度的切片。图A，第二行显示了聚焦于上方图像病变区域的更高放大倍数图像。图A，第3行和第4行显示了化合物1.136处理的IL-36α处理的小鼠耳朵和注射了代替IL-36α的PBS的小鼠耳朵的病变区域。黑色条表示图B中绘制的所有切片的每7个单独的表皮厚度测量值的位置。图B，来自每个处理组的8只小鼠的耳厚测量值。每个点代表1只小鼠耳朵7个表皮厚度测量的平均值。进行4天的活化的IL-36α(或PBS)处理后，从处死的小鼠身上获取耳朵。在处理过程中，每天向小鼠皮下注射1％HPMC(溶媒)，和90mg/kg/天化合物1.136(溶媒中)s.c，或和IP200μg/小鼠/天的抗IL17RA(在PBS中)。使用标准FFPE技术固定并包埋耳朵，切片，并使用苏木精和曙红(H&E)染色技术对进行染色。所示切片表示来自八个不同耳朵的至少五个不同切片。来自曼-惠特尼等级测试的统计数据p<.05*。
图10A-C表明化合物1.136显著减少了经IL-36处理的皮肤内CD4T细胞(图A)、嗜中性粒细胞(图B)和炎性树突细胞(图C)的聚积。进行4天IL-36α(或PBS对照)处理后，从处死的小鼠中获取耳朵。注射IL-36α的小鼠仅给药溶媒、化合物1.136(背部s.c.90mg/kg/天)或α-IL-17RA(腹膜中200μg/小鼠/天)。通过曼-惠特尼等级测试进行统计分析。每组实验10只小鼠并代表3个重复。n.s.不显著，p<.005**，p<.0001****。
图11A-E显示了皮内注射IL-36α后的皮肤中聚积的Ly6Chi髓样细胞的特征。注射4天IL-36α后，从20只耳朵中分离细胞，然后合并，并用未结合的特异性MAb(如各图所示，浅灰色曲线)或同型匹配对照(深灰色曲线)染色，然后使用标准步骤使用抗Ig二级(secondstage)多克隆Ab染色。未结合的二级被正常小鼠、大鼠和仓鼠血清封闭，随后被直接偶联的MAb抗体封闭。图A使用CD103特异性的MAb；图B使用Flt3特异性的MAb；图C使用CD205特异性的MAb；图D使用CD11c特异性的MAb；图E使用F4/80特异性的MAb。髓样细胞设门如图5A所示。所示的合并细胞染色代表3个重复实验。
具体实施方式
通用
泛发性脓疱型银屑病(GPP)是一种罕见的炎症性皮肤病，其病因与更常见的斑块状银屑病不同。GPP患者通常对常用于斑块状银屑病的治疗剂无反应。先前已显示包括本文公开的化合物在内的CCR6和/或CXCR2的拮抗剂在斑块状银屑病模型中可减轻炎症。令人惊讶地，本发明公开证明了CCR6和/或CXCR2的拮抗剂可用于有效治疗泛发性脓疱型银屑病(GPP)。除了治疗GPP外，还可以使用本文所述的方法治疗相关疾病，例如掌跖银屑病(PPP)、急性泛发性发疹性脓疱病(PNP)、化脓性汗腺炎(HS)、疱疹样皮炎和寻常型天疱疮。
趋化因子定向疗法旨在阻止炎症性白细胞从外周血迁移到组织中，从而防止它们参与并放大任何现有的自身免疫病变，以消散炎症性细胞因子环境。遗传研究表明，GPP与IL-36细胞因子轴功能异常密切相关，并且可以通过皮内注射预先激活的IL-36α细胞因子在小鼠中重建GPP的许多方面。本发明公开内容证明，浸润注射IL-36α的小鼠皮肤的免疫细胞与浸润咪喹莫特(IMQ-)处理的皮肤(Balb/c小鼠斑块状银屑病的公认模型)的免疫细胞具有显著不同的组成。本文公开的发现表明，CCR6和CXCR2拮抗剂可构成机制独特的用于治疗GPP以及相关的PPP、AGEP、HS、疱疹样皮炎和寻常型天疱疮疾病的治疗方法的新型靶标类别。
缩写和定义
除非另有说明，否则下列术语旨在具有以下所述的含义。其他术语在整个说明书的其他地方被定义。
除非另有说明，术语“烷基”，本身或作为另一个取代基的一部分，是指具有指定碳原子数(即C1-8是指1至8个碳)的直链或支链烃基。烷基的例子包括甲基、乙基、n-丙基、异丙基、n-丁基、t-丁基、异丁基、仲-丁基、n-戊基、n-己基、n-庚基、n-辛基，以及类似基团。
术语“环烷基”是指具有指定数量的环原子(例如，C3-6环烷基)并且完全饱和或环顶点之间具有不超过一个双键的烃环。“环烷基”也可指代双环烃环和多环烃环，例如，双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷等。
术语“环杂烷基(cycloheteroalkyl)”是指具有指定数目的环顶点(或成员)且具有替换一至五个碳顶点的一至五个选自N、O和S的杂原子的环烷基环，以及其中，氮和硫原子任选地被氧化，和氮原子任选地被季铵化。所述环杂烷基可以是单环、双环或多环体系。环杂烷基的非限制性示例包括：吡咯烷、咪唑烷，吡唑烷，丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑啉酮(imidazolidinone)、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二氧六环、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环，以及类似基团。环杂烷基可通过环碳或杂原子连接至分子的其余部分。
如本文所用，与本文所描述的任何化学结构中的单键、双键或三键相交的波浪线
术语”烷氧基”、”烷氨基”和”烷硫基”(或硫代烷氧基)采用它们的传统意义，是指分别通过氧原子、氨基团或硫原子与分子其他部分连接的那些烷基。另外，对于二烷氨基，烷基部分可以相同或不同，且可通过与各自连接的氮原子与3-7元环连接。因此，用二烷基氨基或NRaRb表示的基团包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、氮杂啶(azetidinyl)以及类似的基团
除非另外说明，术语”卤代”或”卤素”它们本身或作为另一取代基的一部分，是指氟、氯、溴或碘原子。外，诸如“卤代烷基”的术语意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“C1-4卤代烷基”是指包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另有说明，术语”芳基”是指多不饱和通常为芳香性的烃基，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(最多三环)。芳基的非限制性例子包括：苯基、萘基和联苯基。
术语“杂芳基”是指包含一至五个选自N、O和S的杂原子的芳基(或环)，其中，氮和硫原子任选地被氧化，和氮原子任选被季铵化。杂芳基可通过杂原子与分子的其他部分连接。杂芳基的非限制性例子包括：吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基(quinoxalinyl)、喹唑啉基、噌啉基(cinnolinyl)、酞嗪基(phthalazinyl)、苯并三嗪基(benzotriazinyl)、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并***基、苯并异恶唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲哚嗪(indolizinyl)、苯并三嗪基(benzotriazinyl)、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、苯并噻唑基(benzothiaxolyl)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、***基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基，以及类似基团。杂芳基环的取代基可以选自下面描述的可接受的取代基。
在一些实施方式中，上述术语(如，“烷基”、“芳基”和“杂芳基”)可被任选地取代。下面提供各种类型的基团的选择的取代基。
烷基(包括通常被称为亚烷基、烯基、炔基和环烷基的那些基团)的可选择的取代基的选自下面的各种基团：卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-CN和-NO2；，以零至(2m’+1)的数目，其中、m’是在该基团中碳原子的总数。R'、R”和R”'各自独立地指氢、未取代的C1-8烷基、未取代的芳基、被1-3个卤素取代的芳基、未取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基或未取代芳基-C1-4烷基基团。当R’和R”与相同的氮原子连接时，它们可与氮原子结合形成3、4、5、6或7元环。例如，-NR’R”是指包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
相似地，芳基和杂芳基可选择的取代基是变化的且通常选自：-卤素、-OR’、-OC(O)R’、-NR’R”、-SR’、-R’、-CN、-NO2、-CO2R’、-CONR’R”、-C(O)R’、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR”C(O)2R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-N3、全氟(C1-C4)烷氧基和全氟(C1-C4)烷基，以从零至芳环系统上开放化合价的总数范围的数量；且其中，R’、R”和R”’独立地选自：氢、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C3-6环烷基、C2-8烯基和C2-8炔基。其他合适的取代基包括通过1-4个碳原子的亚烷基连接到环原子的上述各芳基取代基。
芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的二个可以任选地被式-T-C(O)-(CH2)q-U-取代基所替换，其中，T和U独立地为-NH-、-O-、-CH2-或单键，并且q是0至2的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被式-A-(CH2)r-B-的取代基取代，其中，A和B独立地为-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR’或单键，且r为1至3的整数。如此形成的新环的单键之一可以任选地被双键取代。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的二个可以任选地被式-(CH2)s-X-(CH2)t-取代基所替换，其中，s和t独立地为0至3的整数，和X为-O-、-NR’-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NR’-。在NR’-和-S(O)2NR’-中的取代基R’选自氢或未取代的C1-6烷基。
如本申请所用，术语“杂原子”意在包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
当可变基团(例如，R1或Ra)在任何化合物或取代基中出现不止一次时，其在每次出现时的定义独立于在每个其他出现的定义。另外，仅当取代基和/或可变基团的组合产生稳定的化合物时，这些组合才是被允许的。
术语“药学上可接受的盐”意指包括用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐，这取决于本文所述化合物上存在的特定取代基。当本发明化合物含有相对较酸性的官能团时，碱加成盐可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需碱无溶剂或在合适的惰性溶剂中接触而获得。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、三价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括取代的胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙基胺、氨丁三醇以及类似基团。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需酸(无溶剂的或在合适的惰性溶剂中)接触而获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些、以及衍生自如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等相对无毒的有机酸的盐。还包括氨基酸，例如精氨酸等的盐，以及有机酸，例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见，例如，Berge,S.M.等，“药用盐(Pharmaceutical Salts)”,药物科学杂志(Journal of Pharmaceutical Science),1977,66,1-19)。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，使得化合物可以转化为碱或酸加成盐。
化合物的中性形式可通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物而再生。化合物的母体形式在某些物理性质上不同于其各种盐形式，例如在极性溶剂中的溶解性，但是出于本发明目的在其他方面盐等同于化合物的母体形式。
除了盐形式外，本发明提供了以前药形式存在的化合物。本文所述化合物的前药是在生理条件下易于发生化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可以在离体环境中通过化学或生物化学方法转化为本发明的化合物。例如，当将前药置于具有合适的酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前药会缓慢地转化成本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合形式。通常，溶剂化形式相当于非溶剂化形式，并且意图包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。通常，所有物理形式对于本发明所设想的用途是等同的，并且意图在本发明的范围内。
本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体，非对映异构体，几何异构体，区域异构体和单个异构体(例如单独的对映异构体)均旨在包括在本发明的范围内。当显示了立体化学描述时，其是指存在其中一种异构体且基本上不含另一种异构体的化合物。“基本上不含”另一种异构体表示两种异构体的至少80/20比例，更优选90/10或95/5或更多。在一些实施方式中，其中一种异构体的含量至少为99％。
本发明的化合物还可以在构成这些化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。同位素的非自然比例可以定义为从自然界中发现的量到100％由所讨论的原子构成的量。例如，所述化合物可以掺入放射性同位素(例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C))或非放射性同位素(如氘(2H)或碳-13(13C))。这种同位素变体可以为本申请中其它地方描述的那些提供额外的效用。例如，本发明化合物的同位素变体可以发现其他用途，包括但不限于作为诊断和/或成像试剂，或作为细胞毒性/放射性毒性治疗剂。另外，本发明化合物的同位素变体可以具有改变的药代动力学和药效学特征，其可以有助于提高治疗期间的安全性、耐受性或功效。本发明化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，均旨在被包括在本发明的范围内。
术语“患者”或“受试者”可以互换使用，指人或非人动物(例如，哺乳动物)。
当用于，例如，受试者、细胞、组织、器官或生物液，术语“施用”、“给药”等是指将例如CCR6和/或CXCR2拮抗剂，包含其的药物组合物或诊断试剂与受试者、细胞、组织、器官或生物液接触。在细胞的情况下，施用包括将试剂与细胞接触(例如体外或离体)，以及试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。
术语“治疗”，“治疗的”，“疗法”等是指在疾病、病症或病况或其症状被诊断、观察到等后开始一系列过程(例如施用CCR6和/或CXCR2拮抗剂或包含其的药物组合物)，以暂时或永久地消除、减轻、阻止、缓和或改善至少一种折磨对象的疾病、病症、病状的潜在原因，或者至少一种与折磨对象的疾病、病症、病状相关的症状。因此，治疗包括抑制(例如，阻止疾病、病症或病状或与其相关的临床症状的发展或进一步发展)活动性疾病。
如本申请所用，术语“需要治疗”是指医师或其他护理人员做出的受试者需要或将从治疗中受益的判断。该判断是基于医师或护理人员专业知识范围内的多种因素做出的。
术语“预防”、“预防的”、“预防法”等是指以某种方式(例如在疾病、病症或病状，或其症状发作之前)开始的一系列过程(诸如施用CCR6和/或CXCR2拮抗剂或包含其的药物组合物)，以暂时或永久地预防、阻止、抑制或减轻受试者发展疾病、病症或病状等的风险(如通过缺乏临床症状所确定的)或延迟其发作，通常是指受试者倾向于患某种疾病、病症或病状的情况。在某些情况下，该术语还指减缓疾病、病症或病状的进展或抑制其发展成有害或其他不期望的状况。
如本申请所用，术语“需要预防”是指医师或其他护理者做出的受试者需要或将从中受益的判断。该判断是基于医师或护理人员的专业知识范围内的多种因素做出的。
短语“治疗有效量”是指将药剂单独或作为药物组合物的一部分并且以单次剂量或作为一系列剂量的一部分施用于对象，当对对象施用时，施用量能够对疾病、病症或病况的任何症状、方面或特征具有任何可检测的积极作用。通过测量相关的生理效应可以确定治疗有效量，并且可以根据对象病况的给药方案和诊断分析等来调整治疗有效量。举例来说，在给药后的特定时间测量CCR6和/或CXCR2拮抗剂(或例如其代谢产物)的血清水平可以指示是否已使用治疗有效量。
短语“以足以实现改变的量”意指在施用特定疗法之前(例如，基线水平)和之后测量的指标水平之间存在可检测的差异。指标包括任何客观参数(例如血清浓度)或主观参数(例如，受试者的幸福感)。
术语“小分子”是指具有小于约10kDa，小于约2kDa或小于约1kDa的分子量的化合物。小分子包括但不限于无机分子，有机分子，含有无机组成部分的有机分子，含有放射性原子的分子和合成分子。治疗上，小分子可能更易渗透细胞，不易受降解影响，而且较大分子不易引发免疫反应。
术语“抑制剂”和“拮抗剂”，或“激活剂”和“激动剂”分别指抑制性或活化性分子，例如，用于活化例如配体、受体、辅因子、基因、细胞、组织或器官。抑制剂是减少、阻断、阻止、延迟活化、使失活、脱敏或下调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。激活剂是增加、活化、促进、增强活化、敏化或上调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。抑制剂也可以定义为减少、阻断或灭活固有活性(constitutive activity)的分子。“激动剂”是与靶标相互作用以引起或促进靶标活性增加的分子。“拮抗剂”是一种对抗激动剂作用的分子。拮抗剂阻止、降低、抑制或中和激动剂的活性，并且拮抗剂还可以阻止、抑制或降低靶标例如靶标受体的固有活性，即使在没有确定的激动剂的情况下。
术语“调节”，“调节法”等是指分子(例如活化剂或抑制剂)直接或间接增加或降低CCR6和/或CXCR2的功能或活性的能力。调节剂可以单独起作用，或者可以使用辅因子，例如蛋白质、金属离子或小分子。
分子的“活性”可以描述或指该分子与受体的结合；催化活性；刺激基因表达或细胞信号转导、分化或成熟的能力；抗原活性；调节其他分子的活性；等等。
如本文所用，“可比较的”，“可比较的活性”，“与…可比的活性”，“可比效果”，“与…可比的效果”等是可以定量和/或定性观察的相对术语。术语的含义通常取决于它们的使用环境。举例来说，出于定性的观点，均激活受体的两种药物可被视为具有相当的效果，但如果按照在本领域接受的分析(例如，剂量-反应分析)中或在本领域接受的动物模型中确定的一个药物的活性仅能够达到另一个药物活性的20％，则从定量观点看，可将两种药物视为缺乏相当的效果。当比较一个结果与另一个结果(例如，一个结果与参考标准比较)时，“可比较”经常(尽管不总是)意味着一个结果与参考标准偏离小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于7％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％，或小于1％。在特定的实施方案中，如果一个结果与参照标准的偏差小于15％，小于10％或小于5％，那么其结果与参比标准可比较。作为示例而非限制，活性或效果可以指效力、稳定性、溶解度或免疫原性。
“基本上纯的”表示组分占组合物总含量的大于约50％，并且通常大于组合物总含量的约60％。更典型地，“基本上纯的”是指组合物中全部组分的至少75％，至少85％，至少90％或更多是关注的组分。在某些情况下，关注的组分将占组合物总含量的大于约90％，或大于约95％。
具体实施方式
使用方法
本文提供了使用趋化因子受体6(CCR6)和/或C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)的拮抗剂来预防、降低或维持白细胞聚积(例如嗜中性粒细胞、炎性树突细胞(iDC)和/或CD4T细胞聚积)的方法，管理和调节与IL-36失调有关的疾病，以及治疗诸如泛发性脓疱型银屑病(GPP)、掌跖银屑病(PPP)、急性泛发性发疹性脓疱病(AGEP)、化脓性汗腺炎(HS)、疱疹样皮炎和寻常型天疱疮。如本文所述，本发明公开证明了趋化因子受体6(CCR6)和/或C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)的拮抗剂有效地调节了通常在遭受IL-36失调的受试者中观察到的白细胞迁移。趋化因子受体6(CCR6)和/或C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)的施用可有效改善这些受试者的炎症。
因此，一方面，本发明公开提供了治疗选自：泛发性脓疱型银屑病(GPP)、掌跖银屑病(PPP)、急性泛发性发疹性脓疱病(AGEP)、化脓性汗腺炎(HS)、疱疹样皮炎和/或寻常型天疱疮的疾病或病状的方法，所述方法包括给予有效量的趋化因子受体6(CCR6)和/或C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)的拮抗剂。
在一些实施方式中，所述疾病或病状为泛发性脓疱型银屑病(GPP)。在一些实施方式中，所述疾病或病状为掌跖银屑病(PPP)。在一些实施方式中，所述疾病或病状为急性泛发性发疹性脓疱病(AGEP)。在一些实施方式中，所述疾病或病状为化脓性汗腺炎(HS)。在一些实施方式中，所述疾病或病状为疱疹样皮炎。在一些实施方式中，所述疾病或病状为寻常型天疱疮。
在另一方面，本文提供了在有需要的受试者中调节失调的IL-36信号传导的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的趋化因子受体6(CCR6)和/或CXC基序趋化因子受体2(CXCR2)的拮抗剂。
在另一方面，本文提供了减少有需要的受试者中的嗜中性粒细胞、炎性树突细胞(iDC)和/或CD4T细胞聚积的方法，包括向受试者施用有效量的趋化因子受体6拮抗剂(CCR6)和/或C-X-C基序趋化因子受体2(CXCR2)。
CCR6和/或CXCR2的拮抗剂
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂具有下式：
其中
B选自下组：呋喃基、噻吩基、恶唑基、苯基、吡啶基、嘧啶基和吡嗪基，它们各自任选地被R1a、R1b和R2取代，R1a、R1b和R2独立地选自下组：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷基；
R3为选自下组的成员：H和D；
R4为选自下组的成员：H、C1-8烷基、OH、-NRaRb、-C1-4烷氧基和Y；其中，C1-8烷基任选地被卤素、-CN、-CO2Ra、-CONRaRb、-C(O)Ra、OC(O)NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)2Rc、-NRaC(O)NRaRb、-NRaRb、-ORa、-S(O)2NRaRb、-NRa S(O)2Rb和Y取代，其中，Y为4至8元环杂烷基或3至8元环烷基或5或6元芳基或杂芳基，其中任何一个任选地被1至四个选自卤素、氧代基、-CN、-C1-6烷基、-C1-6烷氧基、-C1-6羟烷基、-C1-6卤代烷基、O-C1-6卤代烷基、-C1-4烷基-O-C1-4烷基、-C1-6烷基-NRaRb、-C1-6烷基-CO2H、-C1-6烷基-CO2Ra、-C1-6烷基-CONRaRb、-C1-6烷基-C(O)Ra、-C1-6烷基-OC(O)NRaRb、-C1-6烷基-NRaC(O)Rb、-C1-6烷基-NRaC(O)2Rc、-C1-6烷基-NRaC(O)NRaRb、-C1-6烷基-ORa、-C1-6烷基-S(O)2NRaRb、-C1-6烷基-NRaS(O)2Rb、-CO2Ra、-CONRaRb、-C(O)Ra、-OC(O)NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)2Rc、-NRaC(O)NRaRb、-NRaRb、-ORa、-S(O)2NRaRb、-NRaS(O)2Rb、-CH2CO2Ra；各Ra和Rb独立地选自：氢、C1-4烷基、C1-4羟烷基和C1-4卤代烷基，并且Rc选自：C1-4烷基、C1-4羟烷基和C1-4卤代烷基；其中，4至8元环杂烷基基团和3至8元环烷基可以另外任选地被氧代基取代；
R5a和R5b各自独立地为选自下组的成员：H、卤素、C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、O-C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、CO2H和CN；
R6a和R6b各自独立地为选自下组的成员：H、C1-4烷基、C1-4羟基烷基和C1-4卤代烷基；或者任选地，R6a和R6b一起形成氧代基(＝O)或4至6元环杂烷基基团或3至6元环烷基基团；
R7为选自下组的成员：甲基、乙基和C1-2卤代烷基；和
下标n为1或2；
或其任何药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、N-氧化物、互变异构体或旋转异构体。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂具有下式：
或其任何盐、溶剂化物、水合物、N-氧化物、互变异构体或旋转异构体，其中
B选自下组：呋喃基、恶唑基、苯基、吡啶基、嘧啶基和吡嗪基，它们各自任选地被R1a、R1b和R2取代，R1a、R1b和R2独立地选自下组：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷基；
R3为选自以下的成员：H和D；
R4为选自以下的成员：H、C1-8烷基和Y；其中，C1-8烷基任选地被卤素、-CN、-CO2Ra、-CONRaRb、-C(O)Ra、OC(O)NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)2Rc、-NRaC(O)NRaRb、-NRaRb、-ORa、-S(O)2NRaRb、-NRaS(O)2Rb和Y，其中，各Ra和Rb独立地选自：氢、C1-4烷基、C1-4羟烷基和C1-4卤代烷基，Rc选自：C1-4烷基、C1-4羟烷基和C1-4卤代烷基，和Y为5或6元芳基或杂芳基，所述芳基或杂芳基任选地被一至四个选自卤素、-CN、-C1-4烷基、-C1-4烷氧基、-C1-4羟烷基、-C1-4卤代烷基、OCF3、-CO2Ra、-CONRaRb、-C(O)Ra、-OC(O)NRaRb、-NRaC(O)Rb、-CH2CO2Ra的取代基取代；
R5a和R5b各自独立地为选自以下的成员：H、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、CO2H和CN；
R6a和R6b各自独立地为选自以下的成员：H、C1-4烷基、C1-4羟烷基和C1-4卤代烷基；或任选地R6a和R6b结合在一起形成氧代基(＝O)；和
下标n为1或2。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂具有下式：
其中，R1a选自：CH3和Cl；R1b为H或为CH3；R3为H或D；R4为H或Y；R5a和R5b各自独立地选自：H、F、Cl、Br和CH3；R6a和R6b各自独立地选自：H和CH3；R7为甲基或乙基；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
在一些实施方式中，R1a为CH3；R1b为不存在或为CH3；R3为H或D；R4为H；R5a为H、F、Me或Cl或Br；R5b为H或F；R6a和R6b各自为H；R7为甲基或乙基；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
在一些实施方式中，所述化合物为在带有R3的碳原子上基本不含其他异构体。
在一些实施方式中，R4为Y。
在一些实施方式中，提供了式(A2)化合物：
其中，R1a选自：CH3和Cl；R1b为H或CH3；R3为H或D；R4a和R4b独立地选自：卤素、-CN、-C1-4烷基、-C1-4烷氧基、-C1-4羟烷基、-C1-4卤代烷基、OCF3、-CO2Ra、-CONRaRb、-C(O)Ra、-OC(O)NRaRb、-NRaC(O)Rb、-CH2CO2Ra，并且Ra和Rb独立地选自：氢、C1-4烷基、C1-4羟烷基和C1-4卤代烷基；R5a和R5b各自独立地选自：H、F、Cl、Br和CH3；R6a和R6b各自独立地选自：H和CH3；R7选自下组：甲基、乙基和C1-2卤代烷基；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
在一些实施方式中，提供选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
在一些实施方式中，提供选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
在一些实施方式中，提供选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
在一些选定的实施方式中，提供了选自图1中的那些化合物的式(I)化合物。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为化合物1.129：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为化合物1.123：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为化合物1.136：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂为化合物1.138：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，CCR6和/或CXCR2拮抗剂选自美国专利号9,834,545中公开的化合物或药物组合物，源于2016年11月17日由ChemoCentryx提交的申请号为15/353,889，其内容并入本文用于所有目的。
药物组合物
除上述化合物外，用于调节人和动物中CCR6和/或CXCR2活性的组合物通常将包含药物载体或稀释剂。
如本文所用，术语“组合物”旨在涵盖包含特定量的特定成分的产品，以及直接或间接地由特定量的特定成分的组合产生的任何产品。“药学上可接受的”是指必须与制剂的其它成分相容并且对其接受者无害的载体，稀释剂或赋形剂。
用于施用本发明化合物的药物组合物可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过药学和药物递送领域中已知的任何方法来制备。所有方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。一般而言，药物组合物通过使活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合来制备，然后，如果需要，将产品成型为所需的制剂。在药物组合物中，活性目标化合物以足以对疾病的过程或情况产生期望的效果的量被包含。
包含活性成分的药物组合物可以是适合口服使用的形式，例如，片剂、锭剂(troches)、锭剂(lozenges)、水性或油性混悬剂、可分散粉末或颗粒剂、乳剂和自乳化剂(如美国专利号6,451,339中所述)，硬或软胶囊、糖浆、酏剂、溶液剂、口腔贴片、口服凝胶、咀嚼胶、咀嚼片、泡腾粉和泡腾片。用于口服使用的组合物可以根据本领域已知用于制备药物组合物的任何方法来制备，并且这样的组合物可以包含一种或多种选自下组的试剂：甜味剂、调味剂、着色剂、抗氧化剂和防腐剂得到药学上讲究和可口的制剂。片剂含有与适于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以是，例如惰性稀释剂，如纤维素、二氧化硅、氧化铝、碳酸钙、碳酸钠、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如，玉米淀粉，或者海藻酸；结合剂，例如PVP、纤维素、PEG、淀粉、明胶或***胶，和润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石粉。片剂可以是未包衣的或它们可以是包衣的，肠溶或以其他方式，通过已知的技术来延缓在胃肠道中的崩解和吸收从而提供较长时期的持续作用。例如，可以采用延时材料如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。它们也可以用描述于美国专利号4,256,108；4,166,452；和4,265,874已知的技术包衣以形成用于控释的渗透治疗片剂。
用于口服使用的制剂也可以为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者为软明胶胶囊，其中，活性成分与水或油介质，例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。另外，乳剂可以用非水混溶性成分(如油)并且制备并且用表面活性剂(如单甘油二酯、PEG酯等)来稳定。
水悬浮液含有与适合制造水悬浮液的赋形剂混合的活性物质。这类赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和***树胶；分散或湿润剂，可以是天然存在的磷脂(例如卵磷脂)或环氧烷(alkylene oxide)与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇(例如十七乙烯氧基鲸蜡醇)或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或乙烯氧化物与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚乙烯基脱水山梨醇单油酸酯)。水悬浮剂还可含有一种或多种防腐剂(例如乙基、或正丙基、对羟基苯甲酸酯)、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂，和一种或多种甜味剂(如蔗糖或糖精)。
油性悬浮液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油悬浮液可以含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或十六烷醇。可以添加诸如上述的甜味剂和调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂(如抗坏血酸)来保存。
适用于通过加水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供了与分散或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散或润湿剂和悬浮剂的例子如上所述。另外的可以有例如甜味剂、调味剂和着色剂的赋形剂。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如***树胶或黄蓍胶，天然存在的磷脂例如大豆、卵磷脂、以及衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯和，例如山梨醇单油酸酯，所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。乳液剂还可以包含甜味剂和调味剂。
糖浆剂和酏剂可以与甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖)一起配制。这种制剂还可以包含缓和剂、防腐剂、调味剂和/或着色剂。口服溶液剂可以通过与例如，环糊精、PEG和表面活性剂组合制备。
药物组合物可以是无菌可注射的水溶液或油状悬浮液的形式。该悬浮液可以根据已知的技术用那些合适的分散或润湿剂和上述悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。其中，可以使用的可接受的溶媒和溶剂为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的非挥发性油包括合成的甘油一酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸可用于制备注射剂。
本发明的化合物也可以用于直肠给药栓剂的形式给药。这些组合物可以通过将药物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，该赋形剂在常温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中融化以释放药物。这种材料包括可可脂和聚乙二醇。此外，所述化合物可以通过溶液或软膏经眼给药。更进一步，对象化合物的透皮递送可以借助于离子电渗疗法贴剂等来完成。对于局部使用，可以使用含有本发明的化合物的乳膏、软膏、凝胶、溶液剂或悬浮剂等。如本文所用，局部应用还指包括漱口水和漱口剂的使用。
本发明的化合物可以配制用于沉积到医疗器械中，所述医疗器械可以包括多种常规移植物、支架，包括覆膜支架(stent grafts)、导管、球囊、筐(baskets)或其他可配置或永久植入体腔内的器械。如一个特定的实施例，希望具有能够递送本发明化合物至已经经介入治疗的身体部位的器械或方法。
示例性的实施方式中，本发明的抑制剂可放置于医疗器械中，例如支架，并且递送至身体某部位的治疗位点用于治疗。
支架已经用作治疗剂(即药物)的递送载体。通常，血管内支架通常永久性植入冠状动脉或外周血管中。支架设计包括美国专利号4,733,655(Palmaz)、4,800,882(Gianturco)、或4,886,062(Wiktor)中的那些。这种设计包括金属和聚合物支架，以及自扩张和球囊扩张支架。所述支架也可用于在与血管接触的部位递送药物，如在美国专利5,102,417(Palmaz)以及国际专利申请WO91/12779(美敦力公司(Medtronic,Inc.))和WO90/13332(雪松西奈医学中心(Cedars-SanaiMedicalCenter))、美国专利5,419,760(Narciso,Jr.)和美国专利5,429,634(Narciso,Jr.)中所公开的。所述支架也用于递送病毒至内腔壁用于基因传递，如美国专利5,833,651(Donovan等)中所公布的。
在一个实施方式中，可以在用于医疗器械(例如支架)的生物相容性涂层的形成过程中，将抑制剂与聚合物组合物结合。通常，这些组分生成的涂层是均质的，可用于涂覆许多用于植入的装置的设计。
根据所需的释放速率或所需的聚合物稳定性，聚合物可以是生物稳定的或生物可吸收的聚合物，但是对于该实施方式，生物吸收的聚合物是优选的，因为与生物稳定的聚合物不同，其在植入后不会存在很长时间，引起任何不利的，慢性的局部反应。可使用的生物可吸收聚合物包括但不限于：聚(L-乳酸)、聚己内酯、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLLA/PGA)、聚(羟基丁酸酯)、聚(羟基丁酸酯-共-戊酸酯)、聚二噁烷酮、聚原酸酯、聚酐、聚(乙醇酸)、聚(D-乳酸)、聚(L-乳酸)、聚(D,L-乳酸)、聚(D,L-丙交酯)(PLA)、聚(L-丙交酯)(PLLA)、聚(乙醇酸-共-三亚甲基碳酸酯)(PGA/PTMC)、聚环氧乙烷(PEO)、聚二噁烷酮(PDS)、聚磷酸酯、聚磷酸酯氨基甲酸乙酯、聚(氨基酸)、氰基丙烯酸酯、聚(三亚甲基碳酸酯)、聚(亚氨基碳酸酯)、共聚(醚-酯)(例如,PEO/PLA)、聚亚烷基草酸酯、聚磷腈和生物分子(例如纤维蛋白、纤维蛋白原、纤维素、淀粉、胶原和透明质酸)、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物，以及本领域中已知的其它合适的生物可吸收聚合物。此外，可以使用具有相对低的慢性组织反应的非降解性聚合物，例如聚氨酯、硅树脂以及聚酯；也可以使用其他聚合物，如果这些聚合物可以在医疗器械上溶解、固化或聚合，例如聚烯烃、聚异丁烯和乙烯-α烯烃共聚物；丙烯酸聚合物和共聚物、卤代乙烯基聚合物和共聚物，如聚氯乙烯；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯醚，如聚乙烯基甲醚；聚偏二卤乙烯，如聚偏二氟乙烯和聚偏二氯乙烯；聚丙烯腈、聚乙烯酮；聚乙烯基芳烃，例如聚苯乙烯、聚乙烯酯，例如聚醋酸乙烯酯；乙烯基单体与烯烃彼此间的共聚物，例如乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、丙烯腈-苯乙烯共聚物、ABS树脂和乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；吡喃共聚物；聚羟基丙基甲基丙烯酰胺-苯酚；聚羟基乙基-天冬酰胺-苯酚；棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸；聚酰胺，例如尼龙66和聚己内酰胺；醇酸树脂、聚碳酸酯；聚甲醛；聚酰亚胺；聚醚；环氧树脂、聚氨酯；人造纤维；人造纤维-三醋酸酯；纤维素、醋酸纤维素、丁酸纤维素；乙酸丁酸纤维素；玻璃纸；硝酸纤维素；丙酸纤维素；纤维素醚；和羧甲基纤维素。
聚合物和半渗透性聚合物基质可形成为成形制品，例如瓣膜、支架、导管、假体等。
在本发明的一个实施方式中，本发明的抑制剂与形成为支架或支架-移植物装置的聚合物或半透性聚合物基质偶联。
通常，通过旋涂、浸涂或喷涂将聚合物施用于可植入装置的表面。为此目的，也可以使用本领域已知的其他方法。喷涂方法包括传统方法以及采用喷墨式分配器的微沉积技术。另外，可以使用图片图形化法将聚合物沉积在可植入装置上，使得聚合物仅位于装置的特定部分上。装置的这种涂层在装置周围提供了均匀层，其使得通过装置涂层改善各种分析物的扩散。
在本发明的优选实施方式中，所述抑制剂的配制是为了从聚合物涂层释放到所述医疗装置所处的环境中。优选地，通过使用几种公知的涉及聚合物载体或涂层以控制洗脱的技术中的至少一种技术，使所述抑制剂以受控的方式在延长的时间范围(如，月)内释放。一些此类技术此前在美国专利申请20040243225A1中被描述。
此外，如美国专利6,770,729中所描述，聚合物组合物的试剂和反应条件可控，以便控制来自聚合物涂层的抑制剂的释放。例如，可以调节一种或多种聚合物涂层的扩散系数，以控制抑制剂从聚合物涂层的释放。在该主题的变化中，可以控制一个或多个聚合物涂层的扩散系数以调节存在于医疗器械所放置的环境中的分析物(例如，促进一部分聚合物的分解或水解的分析物)得到聚合物组成中的一种或多种组分的能力(例如，从而调节抑制剂从聚合物涂层的释放)。本发明的又一个实施方式包括一种具有多个聚合物涂层的装置，每个涂层具有多个扩散系数。在本发明的这样的实施方式中，抑制剂从聚合物涂层的释放可以通过多个聚合物涂层来调节。
在本发明的又一个实施方式中，通过调节聚合物组合物的一种或多种特性，例如一种或多种内源性或外源性化合物的存在，或者，聚合物组合物的pH。例如，可以将某些聚合物组合物设计为响应聚合物组合物的pH降低而释放抑制剂。或者，可以将某些聚合物组合物设计为响应过氧化氢的存在而释放抑制剂。
在一些实施方式中，提供了包含本发明公开的化合物的药物组合物。在一些实施方式中，药物组合物还包含一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方式中，一种或多种另外的治疗剂选自下组：细胞毒性化学疗法、抗癌或抗肿瘤疫苗、抗免疫细胞因子疗法、免疫细胞因子疗法、嵌合抗原受体(CAR)T细胞受体、基因转移疗法、检查点抑制剂、皮质类固醇、类视黄醇类试剂、抗肿瘤药和干扰素类似物。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂选自下组：TNFα配体抑制剂、TNF结合剂、IL-1配体抑制剂、IL-6配体抑制剂、IL-8配体抑制剂；IL-17拮抗剂、钙调磷酸酶(calcineurin)抑制剂、TNF拮抗剂、视黄酸受体γ拮抗剂、IL-17A配体抑制剂；IL-17F配体抑制剂、RIP-1激酶抑制剂、鞘氨醇-1-磷酸受体-1拮抗剂、鞘氨醇-1-磷酸受体-1调节剂、Rho相关蛋白激酶2抑制剂、IL-12拮抗剂；IL-23拮抗剂、II型TNF受体调节剂、IL-23A抑制剂、PDE4抑制剂、JAK酪氨酸激酶抑制剂、Jak1酪氨酸激酶抑制剂；Jak3酪氨酸激酶抑制剂、组胺H1受体拮抗剂、视黄酸受体激动剂、膜铜胺氧化酶抑制剂、PI3K调节剂、磷酸肌醇-3激酶δ抑制剂、线粒体10kDa热休克蛋白刺激剂、腺苷A3受体激动剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、F1F0ATP合酶调节剂、GM-CSF配体抑制剂、维生素D3受体激动剂、糖皮质激素激动剂、组胺H4受体拮抗剂、CCR3趋化因子拮抗剂、嗜酸细胞活化趋化因子配体抑制剂、鞘氨醇-1-磷酸受体-1调节剂、磷脂酶A2抑制剂、PDE4抑制剂、白蛋白调节剂、TLR-7拮抗剂、TLR-8拮抗剂、TLR-9拮抗剂、CD40配体受体拮抗剂、Src酪氨酸激酶抑制剂、微管蛋白结合剂、白介素-1α配体抑制剂、组蛋白脱乙酰酶-1抑制剂、组蛋白脱乙酰酶-2抑制剂、组蛋白脱乙酰酶-3抑制剂、组蛋白脱乙酰酶-6抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂、核因子κB抑制剂、STAT-3抑制剂、甲状旁腺激素配体抑制剂；维生素D3受体激动剂、T细胞表面糖蛋白CD28刺激剂、组胺H4受体拮抗剂、TGFβ激动剂、P-选择素糖蛋白配体-1刺激剂、DHFR抑制剂、视黄酸受体γ调节剂、胞质磷脂酶A2抑制剂、类视色素X受体调节剂、β-连环蛋白抑制剂、CREB结合蛋白抑制剂、TrkA受体拮抗剂、T细胞分化抗原CD6抑制剂、ADP核糖基环化酶-1抑制剂、白介素-1β配体调节剂；胰岛素受体底物-1抑制剂、DHFR抑制剂、IL-8拮抗剂、阻断CTLA-4(CD152)、PD-1(CD279)、PDL-1(CD274)、TIM-3、LAG-3(CD223)、VISTA、KIR、NKG2A、BTLA、PD-1H、TIGIT、CD96、4-1BB(CD137)、4-1BBL(CD137L)、GARP、CSF-1R、A2AR、CD73、CD47、色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)或吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)活性的药物、以及OX40、GITR、4-1BB、ICOS、STING或CD40的激动剂。
给药方法
通常，本文提供的治疗方法包括向患者施用有效量的一种或多种本文提供的化合物。优选实施例中，本发明化合物优选地口服或局部向患者(例如人)施用。治疗方案可以根据所使用的化合物而变化。通常，每天2次的剂量方案是更优选的，每天一次的剂量是特别优选的。然而，应该理解，对于任何特定患者的特定剂量水平和治疗方案将取决于各种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、***速率、药物组合(即给予患者的其它药物)和正在进行治疗的特定疾病的严重程度，以及处方医师的判断。通常，优选使用足以提供有效治疗的最小剂量。通常可以使用适合于正在治疗或预防的病症的医学或兽医标准来监测患者的治疗有效性。
本发明所述化合物和组合物可以通过口服、肠胃外(例如，肌内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输注、皮下注射或植入)、吸入、鼻腔、***、直肠、舌下给予，或者局部给药途径，以及可以单独或一起被配制成适合于每种途径给药的合适的剂量单位制剂，其含有常规无毒的药学上可接受的载体，佐剂和赋形剂。本发明还考虑了本发明的化合物和组合物在长效制剂中给药。
大约0.1mg至大约100mg每天每千克体重的剂量水平可用于治疗或预防涉及致病性CCR6和/或CXCR2活性的病症(每人每天约0.5mg至约7g)。优选地，剂量水平为每天约0.01至约25mg/kg；更优选每天约0.05至约10mg/kg。合适的剂量水平可以是每天约0.01至25mg/kg，每天约0.05至10mg/kg，或每天约0.1至5mg/kg。在这个范围内剂量可以是每天0.005到0.05、0.05到0.5、0.5到5.0或5.0到50mg/kg。对于口服给药，所述组合物优选以片剂的形式提供，片剂含有1.0至1000毫克活性成分，特别地，1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分，为了对症调节给予待治疗患者的剂量。所述化合物可以以每天1至4次的方案给予，优选地每天一次或两次的。
可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量可根据所治疗的宿主和特定的给药方式而变化。单位剂型通常含有约1mg至约500mg之间的活性成分。对于口服、透皮、静脉或皮下给药的化合物，优选地，施用足够量的化合物以达到5ng(纳克)/mL-10μg(微克)/mL血清的血清浓度，更优选地，应该施用足够的化合物得到20ng-1μg/ml血清的血清浓度，最优选地，应施用足够的化合物以达到为50ng/ml-200ng/ml血清的血清浓度。
然而，应当理解，用于任何特定患者的剂量的具体剂量水平和频率可以改变并将取决于多种因素包括所用具体化合物的活性、代谢稳定性和化合物的作用时间、年龄、体重、遗传特征、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、***速率、药物组合、特定疾病状态的严重程度，以及接受治疗的宿主。
实施例
实施例1：IL36介导的皮肤炎症需要通过趋化因子受体CCR6发出信号
泛发性脓疱型银屑病(GPP)是一种罕见的炎症性皮肤病，其病因与更常见的斑块状银屑病不同。GPP患者通常对常用的斑块状银屑病的治疗剂无反应。遗传证据表明，GPP起源于IL36/IL36Ra/IL36R信号轴的功能障碍，并且可以通过在小鼠中经皮内(ID)注射预激活的IL36来重建GPP的许多方面。我们已经使用这种ID-IL36模型来研究GPP皮肤中聚积的白细胞群。在先前的研究中，我们报道了小分子CCR6拮抗剂化合物1.129可改善局部咪喹莫特(imiquimod)诱导的斑块状银屑病模型中的炎症。该模型中，CCR6拮抗作用阻止了分泌IL17γδT(γδT17)的聚积，这似乎是化合物1.129减轻疾病的机制。在本研究中，我们发现γδT17细胞不会在IL36发炎的皮肤中聚积。相反地，传统的CD4+αβT细胞群在该模型中聚积。化合物1.129减少了IL36诱导的炎症，同时防止了该CD4+αβT细胞群的聚积。因此，尽管不同的T细胞群与各自的模型相关，但是通过CCR6拮抗作用和CXCR2拮抗作用两者中炎症均减轻了。这些发现表明，CCR6可能构成用于GPP治疗的机制上截然不同的新靶标。
实施例2：抑制趋化因子受体和配体相互作用可逆转IL-36诱导的炎症
材料和方法
为了体外测定趋化因子受体抑制剂的活性，将化合物1.136溶解在DMSO中，以产生10mM的储备液浓度，将其在趋化性迁移缓冲液(HBSS，1％BSA，1％HEPES)中进一步稀释以产生范围为100nM–0.01nM的10-点抑制剂的梯度。然后使用ChemoTx板(神经探针(Neuroprobe)，盖瑟斯堡(Gaithersburg)MD)在100％小鼠血清中进行迁移测定，响应rmCCL20的CCR6活性或rmCXCL1的CXCR2活性，并通过CyQuant(赛默飞世尔(ThermoFisher))对迁移的细胞进行荧光染色来评估。
Balb/c小鼠购自Jackson实验室(缅因州巴港)，并根据美国国家研究委员会的《实验动物指南和使用》中所述的指导方法安置在ChemoCentryx动物设施中。所有研究均已获得ChemoCentryx机构动物护理和使用委员会的批准。
对于体内给药，除非另有说明，否则从研究的第0天开始，每天一次以90mg/kg的剂量皮下给药小鼠化合物1.136(s.c.q.d.，在1％HPMC中)。基于体外效力和小鼠中对单剂量的药代动力学反应来预测体内剂量。可以完全覆盖梯度感应趋化剂受体的最小拮抗剂浓度(谷值)已被确定与IC90浓度相对应(Schall，T.J.和A.E.Proudfoot.2011.克服开发靶向趋化因子受体的成功药物的障碍(Overcoming hurdles in developing successful drugstargeting chemokine receptors).自然评论免疫学(Nat Rev Immunol)11:355-363)。在100％血清中，化合物1.136抑制CCR6的IC90为45ng/ml，抑制CXCR2的IC90为145ng/ml。30、60和90mg/kg化合物1.136在体内达到的实际谷值浓度如表1所示。
表1:平均值±s.d.在1％HPM中，给药90、60、30mg/kg化合物1.136的动物在谷值下(即最终给药(第5天)后24小时)测量的血浆浓度
化合物1.136剂量(mg/kg)
90mg/kg
60mg/kg
30mg/kg
化合物1.136谷值(ng/ml)
973±19
323±20
267±18
IL-36诱导的耳朵增厚的小鼠模型。8周大的Balb/c小鼠的右耳每天接受皮内注射重组鼠IL-36α(每只小鼠150μg配制于PBS中；百进生技(BioLegend))，持续5天。左耳皮内注射PBS作为对照。在研究开始之前和整个研究过程中的每一天使用数字千分尺测量耳厚。银屑病形皮炎的咪喹莫特模型的构造如前所述(Campbell J等.免疫学杂志(J Immunol).2017；199(9):3129-36.van der Fits等.免疫学杂志(J Immunol))2009；182(9):5836-45).简而言之，每天将5％的咪喹莫特
白细胞的流式细胞仪检测。在37℃搅拌30分钟，在胶原酶A和1U/ml DNAse I中消化耳朵或切除的皮肤样品。然后将细胞从皮肤上移出，通过70μM筛网过滤、洗涤并重新悬浮在FACS缓冲液(含10％FBS的PBS)中以进行分析。
直接偶联的单克隆抗体来自R&D系统(明尼苏达州明尼阿波利斯)，百进生技(加利福尼亚州圣地亚哥)或eBioscience/赛默飞世尔(加利福尼亚州圣地亚哥)。CD45.2(104)于AlexaFluor488中，Ly6C(HK1.4)于PE中，CD90.2(30-H12)于Per CP-Cy5.5中，TCRV4γ(UC3-10A6)于PE-Cy7中，TCRβ(H57-597)于APC中，CD4(GK1.5)于APC-eFluor-780中，TCRγδ(GL3)于BV-421中，LIVE/DEAD可固定的Aqua染料(分子探针-Molecular Probes，尤金，俄勒冈州)、CD11c(N418)于BV650中，Ly6G(1A4)于BV711中和CD11b(M1/70)于BV785中。流式细胞术数据使用Fortessa(BD生物科学(Biosciences))流式细胞仪采集，并使用FlowJo v10.2进行分析
从发炎的皮肤中提取的白细胞的流式细胞术如图5和图11所示，涉及一组未结合的单克隆抗体(或它们同型匹配对照)，然后是合适的APC结合的多克隆(FAB)2(杰克逊免疫研究(Jackson ImmunoResearch)，西格罗夫，宾夕法尼亚州，美国)。这些未结合的试剂包括购自R&D Systems(明尼阿波利斯，明尼苏达州)的抗CCR6(140706)和百进生技(加利福尼亚州，圣地亚哥)的抗CXCR2(SA044G4)，均为大鼠IgG2as。对抗谱系标记CD103、CD11c、FLT3、CD205和F4/80的未结合MAb均购自百进生技。用未结合的单克隆和APC多克隆染色后，在用直接结合物染色之前，先用10％小鼠，10％仓鼠和10％大鼠血清(杰克逊免疫研究)封闭细胞。
将小鼠抗IL-17RA.(R&D Systems)，作为阳性对照，以200-500μg每只小鼠的剂量(i.p.,q.d.)给药。发现每天每只小鼠200μg/ml的剂量很好地处于该治疗的最大活性的平台内(图6A)。
皮肤趋化因子蛋白质浓度的多重分析。收集皮内IL-36α处理4天后的耳组织，在含有蛋白酶抑制剂(罗氏(Roche))的冷PBS中将其匀浆，然后离心去除碎屑。根据制造商的说明(R&D系统)，使用多重测定试剂盒测定可溶级分，并在MagPix(路明克斯(Luminex))分析仪上读数。使用标准的Bradford分析法，针对每个样品测得的总蛋白质水平，将组织趋化因子的浓度标准化。
对于苏木精和曙红(H&E)染色，最初将耳朵组织固定在低聚甲醛中以进行石蜡包埋。通过标准程序处理样品。表皮厚度的测量是使用Photoshop CS4软件沿着H&E染色的耳朵部分长度中心三分之一(包含病变的区域)进行的7次测量的平均值。
通过使用GraphPad Prism 6.0软件的曼惠特尼计算，确定统计显著性。
结果与讨论
比较了从两种鼠类银屑病模型获得的发炎皮肤内的炎症细胞群。对于斑块状银屑病，使用了已完善的咪喹莫特(IMQ)模型(van der Fits等.免疫学杂志(J Immunol)2009；182(9)：5836-45)，其中，每天将TLR 7/8激动剂IMQ应用于脱毛的皮肤表面。对于GPP，采用了每天将经激活的小鼠IL-36α皮内注射到耳朵。
处理4天后，流式细胞术显示了自皮肤分离的炎性细胞浸润(设门如图图2所示)两种模型之间有明显的差异。IMQ处理产生了大量的嗜中性粒细胞(图3A&图3C)，而活化的IL-36α产生几乎相等数量的T细胞、嗜中性粒细胞和Ly6Chi/Ly6G-髓样细胞(图3B&图3C)。来自每个模型的T细胞群也高度分化图3D)；经IMQ处理的皮肤(带有水平条纹的灰色条)具有显著的γδT17(Vγ4+)群(如先前评论(Cai等.免疫2011；35(4)：596-610.Campbell J等.免疫学杂志(J Immunol).2017；199(9)：3129-36.))，并且来自注射IL-36α的皮肤的T细胞(带有斜条纹的灰条)几乎完全由CD4+“常规”αβT细胞组成。
IL-36诱导髓样皮肤群表达髓样和树突状细胞特征性标志物的组合(图11)。这些细胞表达CD103、CD11c和F4/80。它们不表达诊断经典树突状细胞(cDC)的标志物Flt3，也不表达CD205(DEC205)(图11)。基于这种免疫表型，以及这些细胞在炎症性皮肤中的位置，我们认为这些细胞是单核细胞衍生的炎性树突状细胞(iDC)(Merad等.免疫学年鉴(Annu RevImmunol)2013；31：563-604.)，在这一点上参照他们。
我们观察到，通过用IL-36α处理，CCL20和CXCR2的趋化因子配体在皮肤中显著增加(图4)，并与先前的工作一致。(Campbell，J.J.，K.Ebsworth，L.S.Ertl，J.P.McMahon，D.Newland，Y.Wang，S.F.Charo，R.Singh，和T.J.Schall.2017.IL-17分泌的γδT细胞完全依赖CCR6诱导发炎的皮肤(IL-17-Secreting gammadelta T Cells Are CompletelyDependent upon CCR6 for Homing to Inflamed Skin).31293129免疫学杂志(JImmunol)199:31293129-3136&van der Fits，L.，S.Mourits，J.S.Voerman，M.Kant，L.Boon，J.D.Laman，F.Cornelissen，A.M.Mus，E.Florencia，E.P.2009.咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症是通过IL-23/IL-17轴介导的.免疫学杂志(J Immunol)182:5836-5845.)我们使用流式细胞术检查了三种白细胞亚型中的每一种的CCR6和CXCR2表达，这些白细胞亚型包含大多数对IL-36应答而聚积的CD45+浸润(图5)。在这三种中，只有嗜中性粒细胞表达的CXCR2水平高于同型对照染色(图5B，左栏)。少数iDC和大多数CD4 T细胞表达CCR6(图5A，右栏)。
CCR6和CXCR2配体在发炎的皮肤中的显著性，再加上IL-36α诱导的亚群表达这两种受体，促使我们评估CCR6/CXCR2拮抗剂在防止这些细胞在皮肤中聚积(从而改善IL-36α诱导的皮肤炎症)的功效。化合物1.136是分子量～440的小分子，对小鼠CCR6的IC50为10nM，对小鼠CXCR2的IC50为20nM，通过100％血清中体外抑制趋化作用进行评估。下表提供了有关化合物1.136体外抑制的更多信息。
表2:化合物1.136的体外活性
a血清中，mCCR6转染的BaF3细胞向mCCL20的趋化作用的IC50。
b血浆中，小鼠骨髓细胞向mCXCL1的趋化作用的IC50。
c血清中，小鼠WEHI-274.1细胞向mCCL3的趋化作用的IC50。
d血清中，小鼠骨髓细胞向mCCL2的趋化作用的IC50。
e血清中，mCCR4转染的BaF3细胞向mCCL22的趋化作用的A2。
f血清中，mCCR5转染的BaF3细胞向mCCL5的趋化作用的IC50。
g血清中，小鼠脾细胞向mCCL19的趋化作用的IC50。
h血清中，小鼠胸腺细胞向mCCL25的趋化作用的IC50。
i血清中，小鼠BaF3-WT向mCXCL12的趋化作用的IC50。
我们测量4天单独皮内注射PBS(阴性对照)或在PBS中活化的IL-36α的耳厚(图6)。PBS处理过的耳朵的平均厚度为～2.5mm，是IL-36α处理过的耳朵的平均厚度(～5.0mm，图6A)的一半。每天皮下给药化合物1.136一次(在小鼠的背部，在经过IL-36处理的耳朵的远端)，并在IL-36诱导的耳朵增厚中实现了剂量依赖性的降低(图6A)。时程显示，在处理的第二天后，化合物1.136的作用是明显的(图6B和图7A)。
接下来，我们比较了化合物1.136的有效性和α-IL-17RA单克隆抗体(每只小鼠每天一次IP，剂量为200或500μg)的有效性。抗IL-17RA处理可有效减少IL-36引起的耳肿胀(图6A)，但效果明显不如90mg/kg剂量的化合物1.136。在处理的第二天后，饱和剂量的抗IL-17RA MAb与90mg/kg化合物1.136之间的效力分离变得明显(图6B(还可参见将剂量为500μg/小鼠/天的抗IL-17RA MAb处理与该MAb的同型匹配对照处理与进行直接比较的图7B))。
接下来，我们检查了在用PBS(对照)或活化的IL-36α进行4天处理后所采集的小鼠耳朵的切片，以测量表皮厚度(图8A、图8B&图9)。与直接测量的耳肿胀(如图6所示)一致，IL-36α处理的耳朵相比PBS处理的耳朵表皮增厚很明显(图9A)。化合物1.136或抗IL-17RA的施用显著降低了IL-36α介导的表皮厚度(图9B)。
化合物1.136的施用降低了IL-36α诱导的皮肤、表皮和总皮肤厚度(图8C)。此外，角质层保持完整，白细胞浸润减少。用抗IL-17RA给药也对经IL-36处理的皮肤具有有益的作用(图8D)。
接下来，我们通过流式细胞术评估了化合物1.136对在IL-36处理的皮肤内聚积的炎性细胞亚群的作用(图10)。在4天耳朵注射IL-36α并用化合物1.136或α-IL-17RA MAb处理后，从皮肤中分离出免疫细胞。我们发现化合物1.136显著减少了CD4+T细胞、嗜中性粒细胞和炎性iDC的聚积。相反，α-IL-17RA不会减少CD4+T细胞的聚积，但对嗜中性粒细胞和iDC具有类似于化合物1.136的作用。
泛发性脓疱型银屑病是一种罕见的皮肤病，包括几种亚型，包括全身性和局部性两种(Benjegerdes等.银屑病(Auckl)，2016年；6:131-44.Mahil等.免疫病理学研讨会(Semin Immunopathol)2016；38(1):11-27.Navarini等.欧洲皮肤病学和性病学会杂志(JEur Acad Dermatol Venereol)，2017年；31(11):1792-9.)。泛发性型(GPP)与高发病率有关，在某些情况下，与死亡率有关(Borges-Costa等.美国临床皮肤病学杂志(Am J ClinDermatol)2011；12(4):271-6.)。在GPP患者中，IL-36RN基因的功能丧失突变是常见的，尤其是那些没有伴有斑块状银屑病症状的患者(Marrakchi等.新英格兰医学杂志(N Engl JMed)2011；365(7):620-8.)。IL-36RN基因编码一种称为IL-36受体拮抗剂(IL-36RA)的蛋白质。在健康个体中，IL-36RA与活化的IL36α，β和/或γ细胞因子竞争结合IL36受体(IL-36R)，从而赋予该蛋白抗炎特性，这有助于维持体内稳态。IL-36RA的异常结构和功能导致炎性细胞因子和趋化因子的分泌失调(Marrakchi等.新英格兰医学杂志(N Engl J Med)2011；365(7):620-8.)。这里我们报道CCR6/CXCR2的小分子拮抗剂相比抗IL-17疗法更有效地减少了活化IL-36α直接皮内注射入小鼠皮肤后的皮肤厚度和白细胞浸润。
GPP的特征是脓疱和红斑的大范围爆发。在急性变异中，患者通常会出现全身性疾病，因为脓疱的突然爆发会伴有疼痛和发烧。在急性变异中也可能发生威胁生命的白细胞增多、电解质异常、低白蛋白血症和肝酶升高(Benjegerdes等.银屑病(Psoriasis)(Auckl)，2016年；6:131-44)。目前还没有针对GPP的批准的治疗方法。由于这种疾病罕见发生，因此没有评估治疗反应的标准化方法。有关治疗结果的数据主要包括回顾性研究，病例报告和专家意见(Benjegerdes等.银屑病(Psoriasis)，2016年；6:131-44.Robinson等.美国皮肤病学会杂志(J Am Acad Dermatol)，2012；67(2):279-88.)。
GPP的当前治疗包括为那些全身性疾病的患者提供支持治疗，然后是控制皮肤疾病的药物治疗(Robinson等.美国皮肤病学会杂志(J Am Acad Dermatol)，2012；67(2):279-88.)。通常，慢性、缓慢进展疾病通过口服类维生素A或甲氨蝶呤治疗。急性疾病可用环孢菌素或抗TNFα生物制剂中的一种治疗。这些疗法都不是非常有效，而且都有副作用(Robinson等人，美国皮肤病学会杂志(J Am Acad Dermatol)，2012；67(2):279-88.)。因此，对于GPP治疗的新疗法和新临床靶标的临床需求尚未得到满足。
除了在经过IL-36处理的皮肤中聚积的T细胞和嗜中性粒细胞外，该模型还产生大量我们认为是iDC的髓样细胞。后一个细胞群表达DC和巨噬细胞的标志物。由于这些细胞不表达FLT3/CD135，因此，我们认为它们源自单核细胞而不是经典DC。先前已经证明人血中单核细胞衍生的DC表达高水平的IL-36R(Foster等.免疫学杂志(Immunol)2014；192(12):6053-61.)。如果来自小鼠皮肤的iDC被证明与人血单核细胞衍生的DC具有相似的特性，那么这些细胞可能是本研究模型中IL-36诱导的炎症的重要调节剂。
我们使用IL36α模型比较了化合物1.136和α-IL-17RA MAb的有效性。在临床上，针对IL-17轴的生物制剂常被用作GPP的二线治疗(Imafuku等.皮肤病学杂志(J Dermatol)2016；43(9):1011-7.)。我们发现90mg/kg剂量的化合物1.136在减轻耳部肿胀方面比α-IL-17RA(500mg/小鼠/天)显著更加有效(图8)。尽管α-IL-17RA处理显著减少了皮肤中嗜中性粒细胞和iDC的聚积，但CD4+αβT细胞计数并未受到影响。因此，在α-IL-17RA之上的化合物1.136的附加抗炎作用与CD4+αβT细胞的减少密切相关。
总而言之，我们已经证明，由激活的IL-36α皮肤注射引起的炎症涉及嗜中性粒细胞、iDC和CD4 T细胞聚积，类似于在GPP患者中看到的情况。化合物1.136对CCR6和CXCR2的选择性抑制减少了所有这三种炎性细胞类型，并减轻了皮肤炎症。IL-17轴的阻滞逆转了嗜中性粒细胞和iDC，但没有逆转皮肤中CD4 T细胞的聚积。在该IL-36α诱导的银屑病模型中评估，与α-IL-17RA单克隆抗体的饱和浓度相比，化合物1.136是更有效的治疗剂。这些发现表明，CCR6/CXCR2拮抗作用可能构成新的靶标类别，并且通过特异性地作用于可能介导该疾病的炎症细胞，形成一种机制独特的治疗方法来治疗IL-36细胞因子轴失调(如GPP中)。
尽管为了清楚理解的目的已经通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是本领域技术人员将理解，可以在所附权利要求的范围内实施某些改变和修改。另外，本文提供的每篇参考文献通过引用整体并入，其程度如同每篇参考文献通过引用单独并入。在本申请与本文提供的参考文献之间存在冲突的情况下，以本申请为准。
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