本发明提供了一种表达人源/非人源嵌合MHC 1多肽和/或人或人源化的β2微球蛋白多肽的基因修饰非人动物,以及包含该基因修饰的胚胎、细胞和组织。还提供了用于制备所述基因修饰动物的构建体以及制备该构建体的方法。本发明同时提供了使用所述基因修饰动物对人免疫系统的不同方面进行研究的方法。

一种碱性磷酸酶基因及其CHO稳定细胞株和ALP制备方法。本发明涉及一种编码碱性磷酸酶ALP的基因,核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。通过对碱性磷酸酶核苷酸序列的优化,构建到适宜的表达载体中,进一步在哺乳细胞中稳定表达,其结构更接近天然的碱性磷酸酶蛋白,具有良好生物学活性和碱性磷酸酶活性,可以提高检测灵敏度。本发明还通过将SEQ ID NO：1所示基因构建到在pCDNA3基础上,导入GS基因改造后的表达载体上,以稳定方式转染进真核细胞基因组,经MSX抑制剂筛选、批培养、分批补料式培养,每步培养中结合高通量酶活筛选鉴定,最后得到表达高活性碱性磷酸酶CHO稳定细胞株,保藏于中国典型培养物保藏中心,其生物保藏编号为CCTCC NO：C2021225。

本发明涉及一种日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子及其应用。本发明成功克隆了日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子序列,并成功构建了日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子pGL3-Cathelicidin2-pro荧光素酶报告质粒。实验证明日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子可被革兰氏阴性菌重要表面抗原LPS以及嗜水气单胞菌诱导激活。日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子的克隆及其强启动子活性的诱导表达分析,为研究日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因的表达调控机制、鱼类抵御病原菌感染的天然免疫应答机制、特别是重要的鱼类炎症相关NF-κB和MAPK信号通路网络调控机制的研究提供良好的实验系统,为利用该启动子构建表达载体高效表达外源基因或将该启动子应用于转基因鱼构建创造条件。

本发明公开了一种胞内编辑伪狂犬病毒关键基因的细胞株及其构建方法和应用,属于动物基因工程技术领域,其中所述sgRNA的核苷酸序列如序列表SEQID NO.1-2所示。本发明通过对sgRNA进行优选,构建相应载体,将其与包含cas9基因的载体一同转入PK-15细胞中,经筛选得到了可同时稳定表达cas9基因和如SEQ ID NO.1-2所示的sgRNA的阳性细胞即cas9-B2PK15细胞株,经测定该细胞株对伪狂犬病毒的基因具有显著敲除能力,因此可显著耐受伪狂犬病毒感染,这对动物生产过程中抗伪狂犬病毒感染具有重要意义；并且基于该细胞株可制备得到抗伪狂犬病毒感染的细胞或动物模型,在伪狂犬病毒的临床和实验室研究中具有广阔的应用价值。

用于将异源功能性结构域诸如转录激活物RNA引导靶向特定基因组基因座的方法和构建体。本发明涉及用于将基因和表观基因调控蛋白,例如转录及货物,组蛋白修饰酶,DNA甲基化修饰物,RNA引导靶向特定的基因座的方法和构建物。本发明至少部分基于融合蛋白的开发,包括融合到Cas9核酸酶的异源功能性结构域(例如,转录激活结构域),所述Cas9核酸酶通过突变具有其核酸酶活性失活(也称为“dCas9”)。

本发明涉及一种抗新型冠状病毒的双特异性抗体及其应用。本发明的双特异性抗体通过基因工程方法对新冠病毒单抗H4和B38进行改造获得,可以同时识别新型冠状病毒S蛋白RBD的不同位点,对新冠病毒假病毒的中和活性远高于母源单抗,对新冠病毒活病毒的抑制活性也高于母源单抗。本发明的双特异性抗体提高了母源单抗的选择性和中和活性,改善了单抗药物的安全性和有效性,可作为制备诊断、预防、治疗新型冠状病毒引起疾病的潜在药物,市场价值巨大,应用前景良好。

本发明公开了一种特异性抗百菌清抗体的可变区序列,重链可变区编码基因的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。本发明还公开了一种抗百菌清重组全长IgG抗体。本发明同时公开了一种重组抗体表达质粒。本发明的抗百菌清重组全长IgG抗体的重链可变区、轻链可变区序列来源于经多次免疫小鼠、细胞融合及筛选得到的一株分泌高亲和力、高特异性抗百菌清抗体的单克隆细胞株。将此序列基因分别连接到包含了小鼠IgG1重链恒定区基因和小鼠kappa轻链恒定区基因的表达载体,采用双质粒系统的哺乳动物细胞表达获得了重组全长IgG抗体,其识别活性与鼠源亲本抗体非常接近,并可实现抗百菌清抗体的大批量标准化生产,为百菌清残留快速检测的各种免疫分析方法提供可靠的核心原料。

本发明公开了一种人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体,本发明的中和抗体通过单个B细胞流式分选-抗体基因扩增配对表达技术筛选获得,具有独特的CDR区域,能特异性与SARS-COV-2结合并且可以有效中和目前多株国际流行病毒(wuhan株,英国突变株B.1.1.7,南非突变株B.1.351,巴西突变株P.1,印度突变株B.1.617.1和B.1.617.2),其IC50大部分在1μg/mL以下。本发明还涉及所述抗体制备新型冠状病毒病治疗或预防药物中的应用以及在制备新型冠状病毒检测试剂中的应用。所述抗体可以用于COVID-19紧急预防和/或治疗,具有全人源化,高表达,稳定性好的特点,适合产业化。

本发明公开了一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的中和纳米抗体及其应用,属于生物医药技术领域。所述中和纳米抗体的可变区具有3个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3；所述中和纳米抗体为(a1)-(a6)中的任意一种。本发明提供的抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的中和纳米抗体能够与RBD抗原有效结合,融合人IgGFc标签后能有效与人ACE2蛋白竞争结合RBD抗原,对SARS-CoV-2假型病毒中和活性高,对于新型冠状病毒SARS-CoV-2引起的疾病的预防、临床治疗和诊断试剂的研发均具有重要的科学意义和应用前景。

本发明公开了一种提高力学机械性能的单一多聚蛋白分子及其应用方法。本方法采用蜘蛛大壶状腺丝蛋白I分子4个串联蛋白序列type1～type4中的一种序列作为单一的多聚蛋白分子,构建这种单一多聚蛋白序列对应的外源基因载体,利用分子生物学技术将单一多聚蛋白序列整合到家蚕基因组内,最终获得能够稳定遗传的复合丝性能优异的新型家蚕品种,利用新型家蚕品种生产复合丝。本发明发现了一种单一多聚蛋白分子结构的构成方法及其新用途,开发了多种新型的高性能复合丝。