本发明公开了一种与孤独症病程相关的报告基因TMP21,孤独症患者体内TMP21低表达,通过给药萝卜硫素(Sulforaphane,SFN),能够有效缓解孤独症症状,并且提高TMP21表达量,从而为孤独症严重程度和用药治疗提供了客观指标。

本发明提供了信号肽相关序列及其在蛋白质合成中的应用,具体地,本发明提供了具有提高蛋白表达效果的信号肽及其编码序列,将信号肽编码序列与外源蛋白的编码序列可操作的相连形成的核酸构建物,可显著提高外源蛋白合成的效率,并简化目标外源蛋白的表达与纯化过程。同时,本发明提供与其相应的载体或载体组合、基因工程细胞、试剂盒,从而能够应用于蛋白质合成中。

本发明提供了信号肽相关序列及其在蛋白质合成中的应用,具体地,本发明提供了具有提高蛋白表达效果的信号肽及其编码序列,将信号肽编码序列与外源蛋白的编码序列可操作的相连形成的核酸构建物,可显著提高外源蛋白合成的效率,并简化目标外源蛋白的表达与纯化过程。同时,本发明提供与其相应的载体或载体组合、基因工程细胞、试剂盒,从而能够应用于蛋白质合成中。

本发明公开了一种含有HDAC1基因启动子和报告基因的重组质粒及其构建方法与应用,本发明通过克隆组蛋白去乙酰化酶1基因的启动子特异性序列并重组到萤火虫荧光素酶报告基因载体上,从而构建HDAC1报告基因的重组质粒载体；将构建的载体与海肾荧光素酶报告基因载体共转染到人前列腺癌细胞PC3中,通过同时检测萤火虫和海肾荧光素酶的活性反应HDAC1基因启动子的转录活性,从而建立靶向筛选抑制肿瘤药物的方法,该方法在筛选抑制肿瘤药物、评价待测药物对肿瘤可能产生的影响以及研究该类药物作用机理等方面有着极佳的应用前景。

本发明公开了一种小鼠早衰模型及其构建方法与应用,所述小鼠早衰模型是通过敲除小鼠骨髓来源细胞中的乙肝病毒X蛋白结合蛋白而获得的。该早衰小鼠在4-8个月龄时出现脱毛、衰老相关基因表达显著上调、血清中衰老相关的分泌表型因子上调、组织器官衰老等典型的早衰表型。本发明通过操控骨髓来源的免疫细胞条件性敲除HBXIP,诱导小鼠早衰具有显著的创新性和良好的应用前景,可用于建立延缓衰老的个性化药物/食材/技术方法等的筛选平台,同时,可用于研究衰老相关疾病,如神经退行性疾病、代谢性疾病、自身免疫及炎症性疾病等发病机制研究,以及相关疾病的预防、诊断和治疗等技术和产品研发。

本发明公开了hACE2人源化转基因猪的构建方法及应用。采用CRISPR-Cas9基因编辑技术,用hACE2cDNA替换猪自身的ACE2基因,避免了人源ACE2表达的同时猪内源ACE2也表达,由此造成猪模型无法很好地再现人类疾病特征的问题。本发明构建的hACE2人源化猪模型是能够模拟人类COVID-19临床症状和治疗反应的理想大动物猪模型,可用于SARS-CoV-2感染和发病机制的研究,特别适合于由SARS-CoV-2感染所致的多器官病症、重症、慢性疾病以及后遗症的研究,并可供诊断技术、抗病毒疗法和疫苗的开发与测试,候选药物疗效和安全性的评价,该模型有助于解决当前缺乏有效新冠肺炎动物模型的困境。

本发明涉及一种以突变体细胞迁移功能评估基因变异致病性的方法及应用,属于动物模型构建技术领域。该方法包括以下步骤：构建中性粒细胞特异性表达人类ELMO1基因变异位点的表达体系：将携带待评估的基因变异位点序列的质粒克隆至ELMO1基因缺失斑马鱼突变体模型中,在中性粒细胞中特异性表达所述待评估的ELMO1基因变异位点；延时活体成像：通过延时活体成像,对所述斑马鱼基因缺失突变体模型中携带ELMO1基因变异位点的中性粒细胞进行可视化追踪,评估该基因变异位点对中性粒细胞迁移功能的影响,从而评估该基因变异位点的致病性。采用该方法可基于动物模型来鉴定基因变异的功能变化,不依赖于病人的样本,具有方便数据采集与保存,实验重复性和准确性高的优势。

本发明公开了一种利用isPLA高通量筛选单域抗体的方法,步骤如下：构建一个含21个随机氨基酸序列的CDR3区域的sdAb文库,序列的C端融合一个3×Flag标签；共转染细胞,固定细胞进行isPLA；随后分选、扩增、重组,经过多轮筛选和测序后,构建依次包含谷胱甘肽S-转移酶GST、烟草花叶病毒TEV蛋白酶切位点,识别SQSTM1的sdAb序列、假单胞菌外毒素ETA的易位结构域和3×Flag标签的重组蛋白,在大肠杆菌中表达,随后经过纯化和酶切,即得。本方法能够从构建的高容量sdAb文库中筛选到特异性识别不同抗原决定簇的sdAbs,并且成本低、效率高。不涉及动物样本或杂交瘤的制备。

本发明公开了蛋鸭环状RNA circ-2136及其检测试剂、方法与应用,属于基因工程技术领域,其中所述蛋鸭环状RNA circ-2136对应的cDNA的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。本发明克隆得到了蛋鸭环状RNA circ-2136的全长序列,并设计了相应的特异性引物用于鉴定环状RNA是否正确成环,并分析检测所述蛋鸭环状RNA circ-2136在待测样品中是否表达及其相对表达量；同时本发明通过构建蛋鸭环状RNA circ-2136的过表达载体,使其稳定表达circ-2136,经转染蛋鸭小肠上皮细胞,首次发现了所述环状RNA circ-2136可以促进肠上皮细胞增殖,进而调控肠道屏障功能,这为环状RNA调控蛋鸭肠屏障功能障碍的分子机制带来了更深层次的认知以及新的思路。

本发明提供了一种分离艾美尔球虫小配子的方法和应用,涉及球虫分离和纯化技术领域。本发明首次采用基因组编辑技术将外源的荧光蛋白的基因序列与特异性基因进行融合,并将融合基因敲入艾美尔球虫基因组使其融合表达,随后根据荧光蛋白的发光情况来判定整合成功,获得具有荧光球虫。随后将荧光球虫感染鸡,收集富含配子的盲肠,通过进一步消化、过滤等获得混合物,随后根据荧光将大小配子进行分离。本发明还可以应用免疫荧光技术和现代成像分析技术,通过荧光观察球虫大小配子阶段的行为学变化,为球虫病的治疗提供有效的化学筛选模型,也为研究针对球虫小配子的药物和基于小配子的疫苗的研发奠定了基础。