B-raf激酶抑制剂的结晶盐
阅读说明：本技术 B-raf激酶抑制剂的结晶盐 (Crystalline salts of B-RAF kinase inhibitors ) 是由 U·韦特曼 G-M·迈尔 B·贝特泽梅尔 O·沙夫 于 2018-10-26 设计创作，主要内容包括：本发明涉及RAF激酶抑制剂N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺的结晶盐,其用于治疗癌症和其它疾病。(The present invention relates to crystalline salts of the RAF kinase inhibitor N- (3- (5- ((1-ethylpiperidin-4-yl) (methyl) amino) -3- (pyrimidin-5-yl) -1H-pyrrolo [3,2-b ] pyridin-1-yl) -2, 4-difluorophenyl) propane-1-sulfonamide for use in the treatment of cancer and other diseases.)
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年10月26日提交的美国临时申请号62/577,313的权益，其全部公开内容通过引用并于本申请。
技术领域
本申请是相关的盐形式，特别是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(BI 882370)，RAF激酶抑制剂的结晶盐，其可用于治疗癌症和其它疾病。
背景技术
化合物N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(BI 882370)，具有式I：
是RAF激酶抑制剂，可用于治疗各种疾病，包括癌症。式I化合物及其制备和用途已在WO/2012/104388中描述，其整体内容通过引用并入本申请。
RAS-RAF-MAPK(促***原活化蛋白激酶)信号通路在将细胞表面受体和细胞质信号元件产生的增殖信号传递至细胞核中起着关键作用。该途径的组成性激活涉及几种癌基因的恶性转化。RAS中的激活突变发生在约15％癌症中，最近数据表明B-RAF在约7％癌症中发生突变(Wellbrock等人，"The RAF proteins take centre stage",NatureRev.Mol.Cell Biol.,2004,5,875-885)，将其识别为该途径中另一个重要的癌基因。在哺乳动物中，丝氨酸/苏氨酸激酶的RAF家族包含三个成员：A-RAF、B-RAF和C-RAF。然而，迄今为止，仅在B-RAF中识别了激活突变，这突显这种同工型的重要性。据信B-RAF是使RAS与MEK偶联的主要同工型，而C-RAF和A-RAF向ERK发出信号仅是为了微调细胞反应(Wellbrock等人，Nature Rev.Mol.Cell Biol.,2004,5,875-885)。B-RAF中最常见的癌症突变导致蛋白质(V600E)600位上的谷氨酸发生缬氨酸交换，从而显著增强B-RAF活性，这可能是因为其负电荷模拟了激活环的磷酸化(Wan等人，"Mechanism of activation of the RAF-ERKsignaling pathway by oncogenic mutations of B-RAF",Cell,2004,116,855-867)。B-RAF V600突变发生率最高，其发生在恶性黑色素瘤(39％)、甲状腺癌(46％)、结肠直肠癌(10％)、胆道癌(10％)、***癌(4％)、卵巢癌(3％)和非小细胞肺癌(2％)，但它们在多种其它癌症中也以低频率发生(突变的频率依据COSMIC(Catalogue Of Somatic MutationsIn Cancer；Wellcome Trust Sanger Institute)的2011年5月15日第53卷的报道；http:// www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/)。文献支持以下假设，即B-RAFV600E突变的肿瘤细胞似乎在很大程度上依赖于该途径的持续激活，这种现象被称为“癌基因成瘾”，而正常的B-RAFwt细胞使用范围更广的信号。这提供了阿喀琉斯之踵(Achilles'heel)，其可以通过使用口服可得的B-RAF抑制剂治疗体细胞突变的B-RAFV600E患者来进行治疗。
B-RAFV600E在异常ERK信号传导和因此癌发生中的关键作用已在几种独立的实验方法中得以证实，例如体内外致癌/突变的B-RAF的过表达(Wan等人，Cell,2004,116,855-867；Wellbrock等人，Cancer Res.2004,64:2338-2342)，体外siRNA敲除(Karasarides等人，Oncogene,"V599EB-RAF is an oncogene in melanocytes",2004,23,6292-6298)，或在可诱导的短发夹RNA异种移植模型中，发现功能获得性B-RAF信号传导与体内致瘤性密切相关(Hoeflich等人，"Oncogenic BRAF is required for tumor growth andmaintenance in melanoma models",Cancer Res.,2006,66,999-1006)。
B-RAFV600E突变的黑色素瘤或结肠癌细胞的治疗诱导B-RAF抑制表型(例如降低磷酸化MEK和磷酸化ERK水平，降低细胞周期蛋白D表达和诱导p27表达)。因此，这些细胞被锁定在细胞周期的G1期，不会增殖。
已经建立了用B-RAF抑制剂(PLX-4032，维罗非尼，来自Plexxikon/Daiichi Sankyo/Roche)治疗的B-RAFV600E突变的黑色素瘤患者的癌症治疗机制的临床证据和概念验证(Bollag等人，"Clinical efficacy of a RAF inhibitor needs broadtarget blockade in BRAF-mutant melanoma",Nature,2010,467(7315),596-9.；Flaherty等人，New Engl.J.Med.,"Inhibition of Mutated,Activated BRAF inMetastatic Melanoma",2010,363,809-819；Chapman等人，"Improved Survival withVemurafenib in Melanoma with BRAF V600E Mutation",New Engl.J.Med,2011,364:2507-2516。在I期和III期临床试验两者中都观察到有利的反应率。据报道，携带B-RAFV600K突变的黑色素瘤患者也对治疗有反应(Rubinstein等人，"Incidence of the V600Kmutation among melanoma patients with BRAF mutations,and potentialtherapeutic response to the specific BRAF inhibitor PLX4032",J.Transl.Med.,2010,8,67)。
最频繁的B-RAF突变是从缬氨酸到谷氨酸的600位氨基酸交换，所有B-RAF突变的发生频率都超过90％(Wellbrock等人，Nature Rev.Mol.Cell Biol.,2004,5,875-885)，第二个最常见的突变是从缬氨酸到赖氨酸的突变，在该位置发现其它突变的频率较低(Wellbrock等人，Nature Rev.Mol.Cell Biol.,2004,5,875-885；突变的频率依据COSMIC(Catalogue Of Somatic Mutations In Cancer；Wellcome Trust Sanger Institute)的2011年5月15日第53卷的报道；http://www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/)。在例如富含甘氨酸的环上发现另外的突变(Wellbrock等人，Nature Rev.Mol.Cell Biol.,2004,5,875-885)。似乎并非所有这些相当罕见的突变都导致直接激活B-RAF(Wan等人，"Mechanism of activation of the RAF-ERK signaling pathway by oncogenicmutations of B-RAF",Cell,2004,116,855-867)。
式I化合物是高效且选择性的RAF抑制剂，其与DFG-out(无活性)构象的B-RAF激酶结合。化合物抑制人B-RAF突变的黑色素瘤细胞增殖的效力(1–10nmol/L)是维罗非尼的100倍，而野生型细胞在1,000nmol/L不受影响。口服的化合物溶液在B-RAF突变的黑色素瘤和结肠直肠癌的小鼠模型中是有效的，并且其与维罗非尼、达拉非尼或曲美替尼相比，每日两次给予25mg/kg的剂量显示出更高的疗效。化合物在对维罗非尼有抗性的A375黑色素瘤荷瘤小鼠中也有活性，特别是与曲美替尼组合给予剂量时。用化合物治疗的小鼠未显示任何体重减轻或不耐受的临床迹象，并且在研究的包括皮肤在内的几个主要器官中都未观察到病理变化。此外，在一项大鼠实验研究中(每天高达60mg/kg，持续2周)，该化合物在临床化学、血液学、病理学和毒理基因组学方面都缺乏毒性。这些结果描述于Waizenegger等人，Mol.Cancer Ther.,2016,15(3)；354–65中，其全部内容通过引用并于本申请。
对于药物的制造、纯化和制剂，采用具有例如通过该药物的一种或多种盐或结晶形式表现出的优异稳定性或其它所需制剂性质的药物形式可以是有利的。碱性或酸性药物的盐的形成有时可以提供具有有利性质的药物形式，所述性质例如溶解性、非吸湿性、结晶性和对配制药物有利的其它物理性质。另一方面，由于形成盐或结晶形式的变量众多，因此发现适于配制的适宜的盐或其它结晶形式是困难的。这些包括存在可能用作抗衡离子的众多可能的酸和碱，可能用于使给定的碱性或酸性药物与酸或碱抗衡离子组合的各种化学计量比，可能用于尝试形成盐或结晶形式的各种溶剂和溶剂体系(包括溶剂的组合)，以及可生成盐或结晶形式的各种条件(例如温度、加热或冷却条件)。所有这些变量都可能影响可能获得的盐或结晶形式的性质。盐或固体形式还可具有各种特性，使其不适于药物开发和配制，例如缺乏结晶性(无定形形式)，存在或形成多种结晶形式，这些形式可互变和/或具有不同特性(多晶型)，缺乏固体的水溶性、吸湿性或粘性。此外，盐和结晶形式的形成及其性质通常是非常难以预测的。
因此，本申请提供的式I化合物的结晶盐形式帮助满足开发用于治疗严重疾病的RAF激酶抑制剂的持续需求。
发明内容
本申请提供结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐和特定结晶形式的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐。
在一些实施方案中，结晶盐是基本上无水的。
在一些实施方案中，结晶盐是基本上非溶剂化的。
在一些实施方案中，结晶盐为形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计的以下峰中的至少一个峰的X射线粉末衍射图：15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；和21.8°±0.5°。在一些实施方案中，在15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；21.8°±0.5°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计的以下峰中的至少一个峰的X射线粉末衍射图：15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；和21.8°±0.2°。在一些实施方案中，在15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；或21.8°±0.2°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计在15.4°±0.5°处的至少一个峰的X射线粉末衍射图。在一些实施方案中，在15.4°±0.5°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计在15.4°±0.2°处的至少一个峰的X射线粉末衍射图。在一些实施方案中，在15.4°±0.2°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计的以下峰的X射线粉末衍射图：15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；和21.8°±0.5°。在一些实施方案中，在15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；21.8°±0.5°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计的以下峰的X射线粉末衍射图：15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；和21.8°±0.2°。在一些实施方案中，在15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；或21.8°±0.2°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有基本上如图10、图26或图38中所示的X射线粉末衍射图。
在一些实施方案中，结晶盐具有基本上如图11、图27或图39中所示的差示扫描量热谱图(DSC)。
在一些实施方案中，结晶盐具有基本上如图12、图28或图39中所示的热重分析(TGA)。
在一些实施方案中，结晶盐是基本上分离的。
本申请提供组合物(例如，药物组合物)，其包含结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种。组合物可以包括至少一种药学上可接受的载体。
本申请提供剂型，其包含结晶盐N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，或包含结晶盐的组合物，或其实施方案的任一种。剂型可以是片剂形式。
本申请提供用于制备结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的方法。所述方法包括使N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺与一当量的琥珀酸反应。所述方法可包括使盐从C1-4醇、含水C1-4醇或乙酸乙酯中结晶或重结晶。所述方法可以包括使盐从乙醇、异丙醇、含水乙醇或含水异丙醇或乙酸乙酯中结晶或重结晶。
本申请提供治疗患者的疾病的方法，其中所述疾病与RAF激酶的异常表达或活性有关，包括向所述患者给药治疗有效量的结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，或包含结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的组合物。本申请还提供结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，用于治疗与RAF激酶的异常表达或活性有关的疾病。还提供结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，在用于治疗与RAF激酶的异常表达或活性有关的疾病中的用途。还提供结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，在制备用于治疗与RAF激酶的异常表达或活性有关的疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，所述疾病与B-RAF激酶的异常表达或活性有关。在一些实施方案中，所述B-RAF激酶是突变的B-RAF激酶。在一些实施方案中，所述B-RAF激酶是V600E突变的B-RAF激酶。在一些实施方案中，所述疾病选自癌症、感染、炎症和自身免疫性疾病。
本申请进一步提供治疗癌症的方法，包括向所述患者给药治疗有效量的结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，或组合物包含结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐。本申请还提供结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，用于治疗癌症。还提供结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，在用于治疗癌症中的用途。还提供结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，或其实施方案的任一种，在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌、***癌、结肠癌、子宫内膜癌、脑癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌或血液学癌症。在一些实施方案中，所述癌症是恶性黑色素瘤、甲状腺癌、结肠直肠癌、胆道癌、***癌、卵巢癌或非小细胞肺癌。
在一些实施方案中，所述癌症与RAF激酶的表达或活性有关。在一些实施方案中，所述癌症与B-RAF激酶的表达或活性有关。在一些实施方案中，所述B-RAF激酶是突变的B-RAF激酶。在一些实施方案中，所述B-RAF激酶是V600E突变的B-RAF激酶。在一些实施方案中，所述癌症是黑色素瘤。在一些实施方案中，所述癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是结肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是甲状腺癌。在一些实施方案中，所述癌症表达突变的B-RAF激酶。在一些实施方案中，所述癌症表达V600E突变的B-RAF激酶。
附图说明
图1是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺游离碱的XRPD。
图2A是显示用各种酸和溶剂制备并且在浆液实验中通过结晶制备的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺的盐的主平皿的图像。
图2B是对图2A的各个主平皿孔执行的XRPD扫描的图像集合，显示通过与各种酸和溶剂一起制浆制备的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺的盐的结晶度。
图3A是显示用各种酸和溶剂制备并且通过蒸发实验中的结晶制备的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺的盐的蒸发板的图像。
图3B是对图3A的各个主平皿孔执行的XRPD扫描的图像集合，显示通过用各种酸和溶剂蒸发制备的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺的盐的结晶度。
图4是对N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺的各种结晶盐样品执行的XRPD扫描的图像集合。
图5是与由放大合成得到的样品(上图)相比，来自孔E2的样品(下图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。
图6是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的DSC图。
图7是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的TGA图。
图8是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的吸附-解吸曲线，其显示当相对湿度在0-100％之间变化时重量的增加和减少。
图9是吸附-解吸实验之前(下图)和之后(上图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。
图10是与由放大合成得到的样品(上图)相比，来自孔F10的样品(下图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图。
图11是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的DSC图。
图12是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的TGA图。
图13是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的吸附-解吸曲线，其显示当相对湿度在0-100％之间变化时重量的增加和减少。
图14是吸附-解吸实验之前(下图)和之后(上图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图，这表明结构上没有发生显著变化。
图15是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。
图16是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的DSC图。样品表现出在约313℃开始吸热。通常，样品在对应于熔点的312-322℃范围内开始吸热。因此熔点测量为约317±5℃。一些样品在约250℃出现另外的吸热现象，这对应于溶剂损失。
图17是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的TGA图。样品在高至约250℃的温度下表现出约1.7-2.5％的干燥损失，这对应于水和溶剂的释放。水含量测量为约0.9％(卡尔·费歇尔法)。
图18是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的等温吸附-解吸图，其显示当相对湿度在0-90％之间变化时重量的增加和减少。
图19是吸附-解吸实验之前(下图)和之后(上图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图，这表明结构上没有发生显著变化。
图20是在摇摆式磨机中在30rps研磨10min之后的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。
图21是在2000N压制1秒成片剂(直径-5mm)之后的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。
图22是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)。
图23是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)的在脂肪族区域(δ-0.5-6.0)上的插图。
图24是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)的在芳香族区域(δ6.0-11.5)上的插图。
图25是显示N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐经0-60min在1.0至7.4的pH值的含水介质中的溶出率的图。
图26是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐)的XRPD图。
图27是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的DSC图。
图28是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的TGA图。
图29是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的等温吸附-解吸图，其显示当相对湿度在0-90％之间变化时重量的增加和减少。
图30是吸附-解吸实验之前(下图)和之后(上图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图，这表明结构上没有发生显著变化。
图31是在摇摆式磨机中在30rps研磨10min之后的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图。
图32是在2000N压制1秒成片剂(直径-5mm)之后的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图。
图33是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)。
图34是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)的在脂肪族区域(δ-0.5-6.0)上的插图。
图35是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)的在芳香族区域(δ6.0-10.0)上的插图。
图36是显示N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐经0-60min在1.0至7.4的pH值的含水介质中的溶出率的图。
图37是口服给药大鼠如下物质之后的血浆浓度值与时间的关系图：(A)在40mg/kg的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐；(B)在80mg/kg的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐；(C)在40mg/kg的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐；(D)在80mg/kg的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐。
图38是两个批次的形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图。
图39是形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的TGA和DSC分析的一对曲线图。
图40是形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR光谱(DMSO-d6)。
图41是形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR光谱(氘代甲醇)。
图42是加热至170℃并冷却至室温之前和之后的形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD的一对曲线图。
图43是加热至170℃并冷却至室温之前和之后的形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的TGA的一对曲线图。
图44是加热至170℃并冷却至室温之前和之后的形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的DSC的一对曲线图。
图45是加热至170℃并冷却至室温之前和之后的形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR的一对光谱(DMSO-d6)。
图46是显示形式为形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在平衡溶解度试验中不改变的一组XPRD图。
图47是显示形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在各种条件下储存之后的稳定性的一组XPRD图。
图48是显示形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的低吸湿性的一组DVS等温线图。
图49是显示形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在DVS试验之后不改变形式的一对XPRD图。
图50是形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的一对偏振光显微镜图像。
具体实施方式
I.定义
除非另有定义，否则本申请使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。
对于术语“例如”和“如”，以及其语法上等同的措词，除非另有明确指明，否则应该理解为后面跟随“并且不限于”。
如本申请所用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式的“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物。
本申请所用的术语“约”是指“大约”(例如，指示值的±约10％)。
在本说明书的各个地方，某些特征可以成组或以范围形式公开。具体意指这样的公开内容包括这样的组和范围成员的每个单独子组合。例如，术语“C1-4烷基”具体意指单独公开(但不限于)甲基、乙基、C3烷基和C4烷基。
互换使用的术语“个体”、“受试者”或“患者”是指任何动物，其包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿动物、兔子、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指以下中的一种或多种：(1)预防疾病；例如，预防可能易患疾病、病况或病症但尚未经历或未表现出疾病的病理或症状的个体中的疾病、病况或病症；(2)抑制疾病；例如，抑制经历或表现出疾病、病况或病症的病理或症状的个体中的疾病、病况或病症(即，阻止或减慢病理和/或症状的进一步发展)；和(3)改善疾病；例如，改善经历或表现出疾病、病况或病症的病理或症状的个体中的疾病、病况或病症(即逆转病理和/或症状)，例如降低疾病的严重程度。
措词“治疗有效量”是指引起研究人员，兽医、医学界医生或其它临床医生在组织、系统、动物、个体或人类中寻求的生物学或医学反应的活性盐或结晶形式或药剂的量。
为了清楚起见，在单独实施方案的上下文中描述的本发明某些特征也可以在单个实施方案中组合提供。相反，为简洁起见，在单个实施方案的上下文中描述的本发明各种特征也可以单独地或以任何适宜的子组合来提供。
缩写
本申请中可以使用以下缩写和符号：Ac(乙酰基)；aq.(含水)；Boc(叔丁氧基羰基)；Bu(丁基)；℃(摄氏度)；c(浓度)；conc.(浓缩)；d(天)；DCM(二氯甲烷)；DEA(二乙胺)；DIPEA(N-乙基-N,N-二异丙胺(许尼希氏碱))；DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；DMSO(二甲亚砜)；DSC(差示扫描量热法)；DVS(动态蒸汽吸附)；EDTA(乙二胺四乙酸)；EGTA(乙二醇四乙酸)；eq.(当量)；ESI(电喷雾电离)；Et(乙基)；Et2O(***)；EtOAc(乙酸乙酯)；EtOH(乙醇)；g(克)；h(小时)；HPLC(高效液相色谱)；HCl(盐酸)；i(异)；iPrOH(异丙醇)；L(升)；LC(液相色谱)；M(摩尔浓度)；mg(毫克)；Me(甲基)；MeCN(乙腈)；MeOH(甲醇)；min(分钟)；mL(毫升)；mM(毫摩尔浓度)；MPLC(中压液相色谱)；MS(质谱)；NP(正相)；Ph(苯基)；Pr(丙基)；Py(吡啶)；rac(消旋)；Rf(保留因子)；RH(相对湿度)；RP(反相)；rps(每秒转数)；rt(环境温度)；tBu(叔丁基)；TEA(三乙胺)；temp.(温度)；tert(叔)；Tf(三氟甲磺酸盐)；TFA(三氟乙酸)；TGA(热重分析)；THF(四氢呋喃)；TLC(薄层色谱法)；tRet.(保留时间(HPLC))；UV(紫外)，XRPD(X射线粉末衍射)。本申请中也可以使用其它常用缩写。
II.结晶盐
本申请特别涉及盐形式、特别是结晶盐形式的(N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(BI 882370)，其具有式I：
其可用于例如制备上述化合物的固体剂型以治疗各种疾病，包括癌症。
相同物质的不同盐和结晶形式可具有与例如吸湿性、溶解性、稳定性等有关的不同整体性质。具有高熔点的形式可以具有良好的热力学稳定性，这在延长保存期限的包含特定盐或结晶形式的药物制剂方面可是有利的。具有较低熔点的形式可在热力学上不太稳定，但是其优点在于它们具有增加的水溶性，转化为增加的药物生物利用度。吸湿性差的形式可是期望的，因为它们在长时间存储期间的对热和湿气具有稳定性及抗降解性。无水形式可是期望的，因为它们可以一致地制备而不必担心由于溶剂或水含量变化而引起重量或组成变化。另一方面，如果水合或溶剂化形式较少吸湿并且在储存条件下对湿度显示出改善的稳定性时可是有利的。
本申请所用的“结晶形式”是指结晶物质的某种晶格结构(其可以包括本申请所述的盐)。相同物质的不同结晶形式可具有不同的结晶晶格(例如晶胞)，这可归因于每种结晶形式的特征不同的物理性质。在一些情况下，不同的晶格结构具有不同的水或溶剂含量。可以通过固态表征方法(例如X射线粉末衍射(XRPD))来鉴定不同结晶晶格。诸如差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)、动态蒸汽吸附(DVS)、固态NMR等其它表征方法进一步有助于鉴定结晶形式并且帮助确定稳定性和溶剂/含水量。
物质的结晶形式可以包括溶剂化(例如水合)形式和非溶剂化(例如无水)形式。水合形式是结晶晶格中包括水的结晶形式。水合形式可以是化学计量的水合物，其中水以一定的水/分子比存在于晶格中，例如半水合物、一水合物、二水合物等。水合形式也可以是非化学计量形式，其中水含量是可变的并且取决于外部条件例如湿度。
结晶形式可以通过X射线粉末衍射(XRPD)来表征。反射(峰)的XRD模式通常认为是特定结晶形式的指纹。众所周知，XRPD峰的相对强度可以广泛地变化，这特别取决于样品制备技术、晶体尺寸分布、过滤器、样品安装程序以及所用的特定仪器。在一些情况下，可观察到新的峰或现有的峰可消失，这取决于仪器类型或设置(例如，是否使用Ni过滤器)。本申请所用的术语“峰值”是指具有最大峰值高度/强度的至少约4％的相对高度/强度的反射。此外，仪器变化和其它因素可影响2θ值。因此，诸如在本申请报道的那些的峰归属可以在±0.2°(2θ)之间变化，并且在本申请的XRPD上下文中使用的术语“基本上”意在包括上述变化。
同样，与差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)或其它热实验相关的温度读数可在约±4℃变化，这取决于仪器、特定设置、样品制备等。例如，关于DSC，已知观察到的温度将取决于温度变化速率以及样品制备技术和所用的特定仪器。因此，如上所示，本申请报道的与DSC温谱图相关的值可以相差±4℃。因此，本申请报道的具有“基本上”如任何附图中所示的DSC温谱图的结晶形式理解为适应这种变化。
本申请所述的盐可以分离成各种结晶形式，这些结晶形式可以包括无水、水合、非溶剂化或溶剂化的结晶形式。水合物的实例包括半水合物、一水合物、二水合物等。在一些实施方案中，结晶形式是无水的和非溶剂化的。“无水”意指式I化合物的结晶形式在晶格结构中基本上不包含结合水，即化合物不形成结晶水合物。
在一些实施方案中，本发明的盐和结晶形式可以是基本上分离的。“基本上分离”意指化合物的特定盐或结晶形式从杂质中至少部分分离。例如，在一些实施方案中，本发明的盐或结晶形式包括小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约15％、小于约10％、小于约5％、小于约2.5％、小于约1％或小于约0.5％的杂质。杂质通常包括不是基本上分离的盐或结晶形式的任何物质，包括其它盐或其它结晶形式和其它物质。
在一些实施方案中，盐或结晶形式基本上不含其它结晶形式。措词“基本上不含其它结晶形式”意指特定结晶形式占大于约80重量％、大于约90重量％、大于约95重量％、大于约98重量％、大于约99重量％或大于约99.5重量％的特定结晶形式。
本申请提供结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐和特定结晶形式的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐。
术语“单琥珀酸盐”意指盐中存在的琥珀酸和N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺碱部分存在的酸:碱比率是约1:1，例如比率范围是约0.8:1至约1.2:1、约、约0.9:1至约1.1:1、约1:1.2至约1:0.8或约1:1.1至约1:0.9，例如比率是约0.8:1、约0.9:1、约1:1或约1.1:1或约1:0.8、约1:0.9、约1:1、约1:1.1或约1:1.2。
如以下进一步详述，与N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺的游离碱和其它盐形式相比，结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐具有预料不到的性质，例如改善的溶解度、改善的固有溶出率和改善的药代动力学特性。
在一些实施方案中，结晶盐是基本上无水的。“基本上无水”意指结晶盐包含少于化学计量当量的水，并且不包含作为盐的晶体结构部分的水。在一些实施方案中，如果存在，水的存在量是约5重量％或更少、约4重量％或更少、约3重量％或更少、约2重量％或更少、约1重量％或更少、约0.5重量％或更少、约0.2重量％或更少或约0.1重量％或更少的结晶盐。术语“基本上无水”的使用不排除存在痕量水。
在一些实施方案中，结晶盐是基本上非溶剂化的。“基本上非溶剂化”意指结晶盐包含少于化学计量当量的溶剂，并且不包含作为盐的晶体结构部分的溶剂分子。在一些实施方案中，如果存在，溶剂的存在量是约5重量％或更少、约4重量％或更少、约3重量％或更少、约2重量％或更少、约1重量％或更少、约0.5重量％或更少、约0.2重量％或更少或约0.1重量％或更少的结晶盐。术语“基本上非溶剂化”的使用不排除存在痕量溶剂。
在一些实施方案中，结晶盐基本上不含除水以外的溶剂。“基本上不含”是指该结晶盐包含少于化学计量当量的除水以外的溶剂，并且不包含作为盐的晶体结构部分的除水以外的溶剂分子。在一些实施方案中，如果存在，除水以外的溶剂的存在量是约5重量％或更少、约4重量％或更少、约3重量％或更少、约2重量％或更少、约1重量％或更少、约0.5重量％或更少、约0.2重量％或更少或约0.1重量％或更少的结晶盐。术语“基本上不含除水以外的溶剂”的使用不排除存在痕量的这种溶剂。
在一些实施方案中，结晶盐为形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(如以下进一步详述)。
盐的结晶形式通过关于例如X射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)和动态蒸汽吸附(DVS)的独特特征来鉴定。
在一些实施方案中，形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的特征在于基本上如图10、图26或图38中所示的XRPD图。
在一些实施方案中，形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的特征在于具有基本上如表9中所示的XRPD图。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计的以下峰中的至少一个峰的X射线粉末衍射图：15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；和21.8°±0.5°。在一些实施方案中，在15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；21.8°±0.5°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计的以下峰中的至少一个峰的X射线粉末衍射图：15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；和21.8°±0.2°。在一些实施方案中，在15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；或21.8°±0.2°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计在15.4°±0.5°处的至少一个峰的X射线粉末衍射图。在一些实施方案中，在15.4°±0.5°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计在15.4°±0.2°处的至少一个峰的X射线粉末衍射图。在一些实施方案中，在15.4°±0.2°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计的以下峰的X射线粉末衍射图：15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；和21.8°±0.5°。在一些实施方案中，在15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；或21.8°±0.5°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包括以2θ计的以下峰的X射线粉末衍射图：15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；和21.8°±0.2°。在一些实施方案中，在15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；或21.8°±0.2°处的峰是X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包含以2θ计的以下峰的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或全部的X射线粉末衍射图：15.4°±0.5°；16.1°±0.5°；17.2°±0.5°；19.1°±0.5°；19.8°±0.5°；20.0°±0.5°；20.2°±0.5°；20.5°±0.5°；21.5°±0.5°；和21.8°±0.5°。在一些实施方案中，X射线粉末衍射图包含在15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；或21.8°±0.5°处的峰作为X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，X射线粉末衍射图包含在15.4°±0.5°处的峰作为X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有包含以2θ计的以下峰的至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或全部的X射线粉末衍射图：15.4°±0.2°；16.1°±0.2°；17.2°±0.2°；19.1°±0.2°；19.8°±0.2°；20.0°±0.2°；20.2°±0.2°；20.5°±0.2°；21.5°±0.2°；和21.8°±0.2°。在一些实施方案中，X射线粉末衍射图包含在15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；或21.8°±0.2°处的峰作为X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。在一些实施方案中，X射线粉末衍射图包含在15.4°±0.2°处的峰作为X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，X射线粉末衍射图包含在15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；或21.8°±0.5°处的峰的至少两个作为X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，X射线粉末衍射图包含在15.4°±0.5°；20.0°±0.5°；或21.8°±0.5°处的峰的至少三个作为X射线粉末衍射图中最高相对强度的峰。
在一些实施方案中，X射线粉末衍射图包含在15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；或21.8°±0.2°处的峰的至少两个作为X射线粉末衍射图中最高相对强度的两个峰。
在一些实施方案中，X射线粉末衍射图包含在15.4°±0.2°；20.0°±0.2°；或21.8°±0.2°处的峰作为X射线粉末衍射图中最高相对强度的三个峰。
在一些实施方案中，结晶盐具有基本上如图11、图27或图39中所示的差示扫描量热谱图(DSC)。
在一些实施方案中，结晶盐具有基本上如图12、图28或图39中所示的热重分析(TGA)。
在一些实施方案中，结晶盐是基本上分离的。在一些实施方案中，结晶盐是至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐形式A。
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐可以通过如下制备：将N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺与适当量、通常约一当量的琥珀酸反应。
反应可以在适宜溶剂中进行。反应可通过如下进行：溶解N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，加入琥珀酸，也可以将其溶于酸中。如果需要，可以加热N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺和/或琥珀酸的溶液以溶解化合物。可以加热至高于如下的温度：室温，例如约30℃、约40℃、约50℃、约60℃、约70℃、约80℃、约90℃或约100℃。反应可以进行一段时间，例如约5min、约10min、约20min、约30min、约40min、约50min、约1h、约2h、约3h或约4h。加热之后，溶液可以冷却至例如室温或更低的温度，例如约25℃、约20℃、约15℃、约10℃、约5℃或约0℃。这样的冷却之后，反应混合物可以在较低温度保持另外一段时间，例如约5min、约10min、约20min、约30min、约40min、约50min、约1h、约2h、约3h、约4h、约8h、约16h或约24h。
在进行形成其盐或结晶形式的步骤的过程中，可以对进行反应的溶液或悬浮液进行搅动，例如搅拌。
用于形成N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐、包括形式A的盐的适宜溶剂包括C1-4醇、含水C1-4醇或乙酸乙酯。溶剂可包括甲醇、乙醇、异丙醇、含水甲醇、含水乙醇、含水异丙醇或乙酸乙酯。
结晶的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐、特别是形式A可以直接由如下得到：N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺与琥珀酸在适当条件下的反应。或者，结晶盐或其形式A可以通过在适宜溶剂中使盐结晶和/或使盐重结晶来制备。
使盐结晶或使盐重结晶的适宜方法包括盐在适宜溶剂中的溶液或悬浮液。可以加热至高于如下的温度：室温，例如约30℃、约40℃、约50℃、约60℃、约70℃、约80℃、约90℃或约100℃。加热可以进行一段时间，例如约5min、约10min、约20min、约30min、约40min、约50min、约1h、约2h、约3h或约4h。加热之后，溶液可以冷却至例如室温或更低的温度，例如约25℃、约20℃、约15℃、约10℃、约5℃或约0℃。这样的冷却之后，反应混合物可以在较低温度保持另外一段时间，例如约5min、约10min、约20min、约30min、约40min、约50min、约1h、约2h、约3h、约4h、约8h、约16h或约24h。在进行使盐或其结晶形式结晶或重结晶的步骤中，可以对进行反应的溶液或悬浮液进行搅动，例如搅拌。
III.使用方法
本申请中描述的盐和结晶形式是B-RAF激酶抑制剂，因此可用于治疗激活RAS-RAF-MAPK信号通路的病理性病症(疾病)、特别是细胞增殖性病症例如癌症。盐和结晶形式可以抑制细胞增殖，特别是通过抑制进入DNA合成阶段。经治疗的细胞停滞在细胞周期的G1期。因此，盐和结晶形式可用于治疗以过度或异常细胞增殖为特征的疾病。
可以用本申请中描述的盐和结晶形式治疗的病理性病症包括与RAF激酶异常表达或活性相关的疾病。可以通过向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本申请所述的结晶盐或其实施方案的任一种来治疗疾病。在一些实施方案中，疾病与B-RAF激酶的异常表达或活性有关。在一些实施方案中，疾病与突变的B-RAF激酶的异常表达或活性有关。在一些实施方案中，疾病与V600E突变的B-RAF激酶的异常表达或活性有关。在其它实施方案中，疾病可与选自以下突变体的突变B-RAF激酶的表达或活性有关：R461I、I462S、G463E、G463V、G465A、G465E、G465V、G468A、G468E、N580S、E585K、D593V、F594L、G595R,、L596V、T598I、V599D、V599E、V599K、V599R、V600K和A727V。
可以用本申请中所述的盐和结晶形式治疗的病理性病症包括癌症、感染、炎症和自身免疫性疾病。
可以用本申请中所述的盐和结晶形式治疗的病理性病症包括癌症。癌症可以包括肿瘤，还可以包括不形成肿瘤的癌症，例如血液学癌症。
在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、***癌、结肠癌、子宫内膜癌、脑癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌或血液学癌症。在一些实施方案中，血液学癌症是急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、活化的B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤或生发中心B细胞(GCB)弥散性大B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，非霍奇金淋巴瘤(NHL)选自复发性NHL、难治性NHL和复发性滤泡性NHL。
在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、***癌、结肠癌、子宫内膜癌、脑癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌或血液学癌症。
在一些实施方案中，癌症是恶性黑色素瘤、甲状腺癌、结肠直肠癌、胆道癌、***癌、卵巢癌或非小细胞肺癌。
在一些实施方案中，癌症与RAF激酶的表达或活性有关。
在一些实施方案中，癌症与B-RAF激酶的表达或活性有关。
在一些实施方案中，癌症与突变的B-RAF激酶的表达或活性有关。
在一些实施方案中，癌症与V600E突变的B-RAF激酶的表达或活性相关。
在一些实施方案中，癌症与选自以下突变体的突变B-RAF激酶的表达或活性相关：R461I、I462S、G463E、G463V、G465A、G465E、G465V、G468A、G468E、N580S、E585K、D593V、F594L、G595R、L596V、T598I、V599D、V599E、V599K、V599R、V600K和A727V。
在一些实施方案中，癌症是黑色素瘤。
在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌。
在一些实施方案中，癌症是结肠癌。
在一些实施方案中，癌症是甲状腺癌。
在一些实施方案中，癌症表达突变的B-RAF激酶。在一些实施方案中，癌症表达V600E突变的B-RAF激酶。在一些实施方案中，癌症表达以下B-RAF激酶突变体中的一种或多种：R461I、I462S、G463E、G463V、G465A、G465E、G465V、G468A、G468E、N580S、E585K、D593V、F594L、G595R、L596V、T598I、V599D、V599E、V599K、V599R、V600K和A727V。
可以用根据本发明的化合物治疗以下癌症，但不限于此：脑肿瘤例如听神经瘤，星形细胞瘤例如毛细胞星形细胞瘤，纤维状星形细胞瘤，原浆型星形细胞瘤，肥胖细胞型星形细胞瘤，间变性星形细胞瘤和胶质母细胞瘤，脑淋巴瘤，脑转移瘤，垂体肿瘤例如催乳素瘤，产生HGH(人类生长激素)的肿瘤和产生ACTH(促肾上腺皮质激素)的肿瘤，颅咽管瘤，髓母细胞瘤，脑膜瘤和少突神经胶质细胞瘤；神经肿瘤(肿瘤)，例如植物神经系统肿瘤，例如交感神经母细胞瘤、神经节神经瘤、副神经节瘤(嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)、嗜铬细胞瘤(chromaffinoma))和颈动脉体(glomus-caroticum)肿瘤，周围神经系统的肿瘤例如截肢神经瘤、神经纤维瘤、神经鞘瘤(neurinoma)(神经鞘瘤(neurilemmoma)、神经鞘瘤(Schwannoma))和恶性神经鞘瘤，以及中枢神经系统的肿瘤例如脑瘤和骨髓瘤；肠癌例如直肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、***癌、大肠癌、小肠和十二指肠肿瘤；眼睑肿瘤例如基底细胞瘤或基底细胞癌；胰腺癌(pancreatic cancer)或胰腺癌(carcinoma of the pancreas)；膀胱癌(bladder cancer)或膀胱癌(carcinoma of the bladder)；肺癌(支气管癌)例如小细胞支气管癌(燕麦细胞癌)，和非小细胞支气管癌(NSCLC)例如板状上皮癌、腺癌和大细胞支气管癌；乳腺癌(breast cancer)，例如乳腺癌(mammary carcinoma)，如浸润性导管癌、胶样癌、小叶浸润性癌、腺管状腺癌(tubular carcinoma)、腺囊性癌和***状癌；非霍奇金淋巴瘤(NHL)例如伯基特氏淋巴瘤、低恶性非霍奇金淋巴瘤(NHL)和蕈样真菌病；子宫癌或子宫内膜癌或子宫体癌；CUP综合症(原发灶不明癌症)；卵巢癌(ovarian cancer)或卵巢癌(ovarian carcinoma)，例如粘液、子宫内膜或浆液性癌；胆囊癌；胆管癌例如克拉茨金瘤；睾丸癌例如***瘤和非***瘤；淋巴瘤(淋巴肉瘤)例如恶性淋巴瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤(NHL)例如慢性淋巴白血病、白血病性网状内皮组织增生症、免疫细胞瘤、浆细胞瘤(多发性骨髓瘤)、免疫母细胞瘤、伯基特氏淋巴瘤、T区蕈样肉芽肿、大细胞间变性淋巴母细胞瘤和淋巴母细胞瘤；喉癌例如声带肿瘤、声门上、声门和声门下喉肿瘤；骨癌例如骨软骨瘤、软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨瘤、骨样骨瘤、成骨细胞瘤、嗜酸性肉芽肿、巨细胞瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、尤因肉瘤、网状细胞肉瘤、浆细胞瘤、纤维异常增生、少年骨囊肿和动脉瘤样骨囊肿；头和颈部肿瘤例如嘴唇、舌头、口底、口腔、牙龈、上颚、唾液腺、喉、鼻腔、鼻旁窦、喉和中耳的肿瘤；肝癌例如肝细胞癌(liver cell carcinoma)或肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)(HCC)；白血病例如急性白血病如急性淋巴/淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)；慢性白血病例如慢性淋巴白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)；胃癌(stomach cancer)或胃癌(gastric carcinoma)例如***状、管状和粘液性腺癌、印戒细胞癌、腺鳞癌、小细胞癌和未分化癌；黑色素瘤例如表浅蔓延型、结节型、恶性雀斑样痣和肢端型恶性黑色素瘤；肾癌例如肾细胞癌或肾上腺样瘤或格腊维茨瘤；食道癌(oesophageal cancer)或食道癌(carcinoma of the oesophagus)；***癌；***癌；喉癌或咽癌例如鼻咽癌、口咽癌和下咽癌；视网膜母细胞瘤，***癌(vaginal cancer)或***癌(vaginal carcinoma)；扁平上皮癌，腺癌，原位癌，恶性黑色素瘤和肉瘤；甲状腺癌例如***状、滤泡状和甲状腺髓样癌及间变性癌；皮肤的棘细胞癌(spinalioma)、表皮样癌和扁平上皮癌；胸腺瘤，尿道癌和外阴癌。
新的盐和结晶形式可用于预防、短期或长期治疗上述疾病，其任选地还可以与放射疗法或其它“最先进的”化合物例如细胞生长抑制或细胞毒性物质、细胞增殖抑制剂、抗血管生成物质、类固醇或抗体进行组合。
本申请所述的盐和结晶形式还可用于治疗非癌性增生性病症。可以治疗的增生性疾病的实例包括但不限于，良性软组织肿瘤、骨肿瘤、脑和脊柱肿瘤、眼睑和眼眶肿瘤、肉芽肿、脂肪瘤、脑膜瘤、多发性内分泌肿瘤、鼻息肉、垂体瘤、催乳素瘤、假瘤脑、脂溢性角化病、胃息肉、甲状腺结节、胰腺囊性肿瘤、血管瘤、声带小结、息肉和囊肿、卡斯特曼病、慢性绒毛病、皮肤纤维瘤、毛发囊肿、化脓性肉芽肿和青少年息肉病综合征。
可以治疗的其它疾病包括病毒感染(例如，爱泼斯坦-巴尔病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、疱疹病毒、人免疫缺陷病毒、人***瘤病毒、卡波济肉瘤、腺病毒、痘病毒和其它基于附加体的DNA病毒)。因此，盐和结晶形式可用于治疗疾病和病况，例如单纯疱疹感染和再活化、唇疱疹、带状疱疹感染和再活化、水痘、带状疱疹、人***瘤病毒、***、腺病毒感染、包括急性呼吸道疾病以及诸如牛痘和天花等痘病毒感染和非洲猪瘟病毒。在一个特定的实施方案中，盐和结晶形式指定用于治疗人***瘤病毒感染的皮肤或宫颈上皮。
可以治疗的其它疾病包括炎症和自身免疫性疾病。可以治疗的自身免疫和炎性病况的实例包括，移植器官的急性、超急性或慢性排斥反应，急性痛风，急性炎症反应(例如急性呼吸窘迫综合征和局部缺血/再灌注损伤)，阿狄森氏病，丙种球蛋白缺乏症，过敏性鼻炎，过敏，脱发，阿尔茨海默氏病，阑尾炎，动脉粥样硬化，哮喘，骨关节炎，幼年型关节炎，银屑病性关节炎，类风湿性关节炎，特发性皮炎，自身免疫性脱发，自身免疫性溶血和血小板减少症，自身免疫性垂体功能减退，自身免疫性多腺体疾病，***，大疱性皮肤病，胆囊炎，慢性特发性血小板减少性紫癜，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，肝硬化，退行性关节疾病，抑郁症，皮炎，皮肌炎，湿疹，肠炎，脑炎，胃炎肾小球肾炎，巨细胞动脉炎，古德帕斯综合征，格林巴利综合征，牙龈炎，格雷夫斯病，桥本氏甲状腺炎，肝炎，垂体炎，炎性肠病(克罗恩病和溃疡性结肠炎)，***，肠易激综合症，川崎病，LPS诱发的内毒素性休克，脑膜炎，多发性硬化症，心肌炎，重症肌无力，蕈样肉芽肿，肌炎，肾炎，骨髓炎，胰腺炎，帕金森氏病，心包炎，恶性贫血，肺炎，原发性胆汁性硬化性胆管炎，结节性多动脉炎，银屑病，视网膜炎，巩膜炎，巩膜瘤(scleracierma)，硬皮病，鼻窦炎，斯耶格伦氏病，脓毒症，脓毒性休克，晒伤，系统性红斑狼疮，组织移植排斥反应，甲状腺炎，I型糖尿病，大动脉炎，尿道炎，葡萄膜炎，血管炎，包括巨细胞动脉炎的血管炎，血管炎伴器官受累如肾小球肾炎，白癜风，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症和韦格纳肉芽肿。
其它疾病包括细菌、真菌和/或寄生虫感染；皮肤疾病(例如银屑病)；基于增生的疾病，其特征在于细胞(例如，成纤维细胞、肝细胞、骨骼和骨髓细胞、软骨或平滑肌细胞或上皮细胞)数量增加(例如，子宫内膜增生)；骨疾病和心血管疾病(例如，再狭窄和肥大)。
本申请所述的盐和结晶形式也适于保护增殖细胞(例如，毛发、肠、血液和祖细胞)免受由辐射、UV处理和/或细胞抑制治疗引起的DNA损伤。
组合疗法
本申请所述的盐和结晶形式可单独使用或与根据本发明的其它活性物质组合使用，任选地还与其它药理活性物质例如其它化学治疗剂组合使用。
为了治疗癌症和其它增生性疾病，本发明的化合物可以与化学治疗剂或其它抗增殖剂组合使用。可以与本申请所述的盐和结晶形式组合给药用于治疗癌症或其它增生性疾病的化学治疗剂包括但不限于，激素、激素类似物和抗激素药(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、氟维司群、醋酸甲地孕酮、氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、氨鲁米特、醋酸环丙孕酮、非那雄胺、醋酸布舍瑞林、氟氢可的松、氟***、甲羟孕酮、奥曲肽)、芳香化酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、利阿唑、伏氯唑、依西美坦、阿他美坦)、LHRH激动剂和拮抗剂(例如醋酸戈舍瑞林、亮丙瑞林(luprolide))、生长因子抑制剂(生长因子，例如“血小板衍生生长因子(PDGF)”、“成纤维细胞生长因子(FGF)”、“血管内皮生长因子(VEGF)”、“表皮生长因子(EGF)”、“***(IGF)”、“人表皮生长因子(HER，例如HER2、HER3、HER4)”和“肝细胞生长因子(HGF)”)，抑制剂是例如“生长因子”抗体、“生长因子受体”抗体和酪氨酸激酶抑制剂例如西妥昔单抗、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼和曲妥珠单抗)；抗代谢物(例如抗叶酸药如甲氨蝶呤、雷替曲塞，嘧啶类似物如5-氟尿嘧啶、卡培他滨和吉西他滨，嘌呤和腺苷类似物如巯嘌呤、硫鸟嘌呤、克拉屈滨和喷司他丁、阿糖胞苷、氟达拉滨)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环素如阿霉素、柔红霉素、表柔比星和伊达比星、丝裂霉素C、博来霉素、放线菌素、普卡霉素、链佐星)；铂衍生物(例如顺铂、奥沙利铂、卡铂)；烷基化剂(例如雌莫司汀、氮芥(meclorethamine)、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、氮烯咪胺、环磷酰胺、异环磷酰胺、替莫唑胺，亚硝基脲如卡莫司汀和洛莫司汀、噻替派)；抗有丝***剂(例如长春花生物碱，如长春碱、长春地辛、长春瑞滨和长春新碱；紫杉烷类例如紫杉醇、多西紫杉醇)；微管蛋白抑制剂；PARP抑制剂、拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素如依托泊苷和凡毕复、替尼泊苷、安吖啶(amsacrin)、托泊替康、伊立替康、米托蒽醌)、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如PDK 1抑制剂、B-Raf抑制剂、mTOR抑制剂、mTORC1抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR/PI3K双重抑制剂、STK 33抑制剂、AKT抑制剂、PLK 1抑制剂、CDK抑制剂、Aurora激酶抑制剂)、酪氨酸激酶抑制剂(例如PTK2/FAK抑制剂)、蛋白蛋白质相互作用抑制剂(例如IAP、Mcl-1、MDM2/MDMX)、MEK抑制剂、ERK抑制剂、IGF-1R抑制剂、ErbB受体抑制剂、雷帕霉素类似物(例如依维莫司、替西罗莫司、地磷莫司、西罗莫司)和各种化学治疗剂，例如氨磷汀、阿那格雷、氯膦酸盐、非尔司亭、干扰素、α-干扰素、亚叶酸钙、利妥昔单抗、丙卡巴肼、左旋咪唑、美司钠、米托坦、帕米膦酸盐和卟吩姆钠。
可以与本申请所述的盐和结晶形式组合施用的其它试剂包括，2-氯脱氧腺苷、2-氟脱氧胞苷、2-甲氧基***、2C4、3-丙氨酸、131-I-TM-601、3CPA、7-乙基-10-羟基喜树碱、16-氮杂-埃博霉素B、A 105972、A 204197、阿巴瑞克、阿比特龙、阿地白介素、阿伦单抗、阿利维A酸、别嘌醇、allovectin-7、六甲蜜胺、夫拉平度(alvocidib)、氨萘非特、阿那曲唑、蒽吡唑、AG-2037、AP-5280、apaziquone、apomine、aranose、阿格拉宾、三氧化二砷、阿佐昔芬、门冬酰胺酶、阿他美坦、阿曲生坦、auristatin PE、AVLB、AZ10992、ABX-EGF、AMG-479(盖尼塔单抗(ganitumab))、ARRY 162、ARRY 438162、ARRY-300、ARRY-142886/AZD-6244(司美替尼)、ARRY-704/AZD-8330、AR-12、AR-42、AS-703988、AXL-1717、AZD-8055、AZD-5363、AZD-6244、ARQ-736、ARQ 680、AS-703026(普利色替(primasertib))、阿瓦斯汀、AZD-2014、氮杂胞苷、氮杂埃坡霉素B、azonafide、BAY-43-9006、BAY 80-6946、BBR-3464、BBR-3576、贝伐单抗、贝沙罗汀、BEZ-235、二柠檬酸比立考达、BCX-1777、BKM-120、博莱霉素、BLP-25、BMS-184476、BMS-247550、BMS-188797、BMS-275291、BMS-663513、BMS-754807、BNP-1350、BNP-7787、BIBW 2992(阿法替尼、阿法替尼(tomtovok))、BIBF 1120(尼达尼布(vargatef))、BI836845、BI 2536、BI 6727、BI 836845、BI 847325、BI 853520、BIIB-022、博莱霉素酸、博莱霉素A、博莱霉素B、布立尼布、苔藓抑素-1、硼替佐米、溴他利星、白消安、BYL-719、CA-4前药、CA-4、CapCell、钙三醇、卡鲁睾酮、卡奈替尼、坎氟胺(canfosfamide)、卡培他滨、卡铂、羧基邻苯二甲酸合铂(carboxyphthalatoplatin)、卡莫司汀、CCI-779、CC-115、CC-223、CEP-701、CEP-751、CBT-1头孢克肟、高三尖杉酯碱、头孢曲松、塞来考昔、西莫白介素、西马多丁、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、CH4987655/RO-4987655、氯烯雌醚、西仑吉肽、顺铂、CDA-II、CDC-394、CKD-602、CKI-27、克拉屈滨、氯法拉滨、秋水仙碱、考布他汀A4、COT抑制剂、CHS-828、CH-5132799、CLL-Thera、CMT-3念珠藻素52、CTP-37、CTLA-4单克隆抗体、CP-461、CV-247、氰基吗啉代多柔比星、环磷酰胺、环孢霉素、阿糖胞苷、D24851、达卡巴嗪、放线菌素D、达肝素钠、达沙替尼、柔红霉素、地西他滨、地尼白介素、地尼白介素-白喉毒素连接物、阿霉素、deoxyrubicin、脱氧柯福霉素、缩酚酸肽、脱氧埃博霉素B、***、右丙亚胺、右雷佐生、己烯雌酚、二氟替康、3,4-二羟荃苯并氧肟酸(didox)、DMDC、多拉司他汀10、多烯紫杉醇、多拉达唑、多柔比星、屈他雄酮丙酸酯、DS-7423、E7010、E-6201、依库丽单抗、依达曲沙、依多曲肽、乙丙昔罗、依氟鸟氨酸、EGFR抑制剂、EKB-569、EKB-509、恩扎妥林、依沙芦星、表柔比星、埃博霉素B、依帕珠单抗、ER-86526、埃罗替尼、雌莫司汀、ET-18-0CH3、乙炔基胞苷、乙炔基***、磷酸依托泊苷、依托泊苷、依沙替康、甲磺酸依沙替康、依西美坦、依昔舒林、枸橼酸芬太尼、芬维A胺、figitumumab、非格司亭、氟尿苷、氟达拉滨、叶酸、氟尿嘧啶、FOLFOX、FOLFOX4、FOLFIRI、福美坦、福莫司汀、氟维司群、加柔比星、麦芽酚镓、吉非替尼、吉西他滨、吉姆单抗、吉妥珠单抗奥佐米星、吉马替康、葡磷酰胺、GCS-100、GDC-0623、GDC-0941(皮克特昔布(pictrelisib))、GDC-0980、GDC-0032、GDC-0068、GDC-0349、GDC-0879、G17DT免疫原、GMK、GPX-100、gp100-肽疫苗、GSK-5126766、GSK-690693、GSK-1120212(曲美替尼)、GSK-2118436(达拉非尼)、GSK-2126458、GSK-2132231A、GSK-2334470、GSK-2110183、GSK-2141795、GW2016、醋酸戈舍瑞林、格拉司琼、赫赛汀、六甲蜜胺、组胺、醋酸组氨瑞林、高三尖杉酯碱、透明质酸、羟基脲、己酸羟孕酮、伊班膦酸盐、替伊莫单抗(ibritumomab)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、伊达比星、idatrexate、己二烯雌酚(idenestrol)、IDN-5109、异环磷酰胺、IGF-1R抑制剂、IMC-1C11、IMC-A12(西妥木单抗)、甲磺酸伊马替尼、immunol、indisulam、干扰素α-2a、干扰素α-2b、聚乙二醇干扰素α-2b、白介素-2、INK-1117、INK-128、INSM-18、洛那法尼(ionafarnib)、伊匹单抗、异丙铂、伊立替康、伊罗夫文、异同源软海绵素-B、异黄酮、异维A酸、伊沙匹隆、JRX-2、JSF-154、J-107088、妊马雌酮、kahalid F、酮康唑、KW-2170、KW-2450、二甲苯磺酸拉帕替尼、来氟米特、来那度胺、来格司亭、来曲唑、醛氢叶酸、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林、亮丙瑞林(leuporelin)、左旋咪唑、来昔帕泛、LGD-1550、利奈唑胺、洛铂、得克萨菲啉镥(lutetium texaphyrin)、洛美曲索、洛莫司汀、洛索蒽醌、LU 223651、勒托替康、LY-S6AKT1、LY-2780301、马磷酰胺、马马司他、双(氯乙基)甲胺(mechloroethamine)、醋酸甲地孕酮、MEK抑制剂、MEK-162、美法仑、巯嘌呤、甲氨蝶呤、甲氧沙林、***、甲泼尼龙、MEDI-573、MEN-10755、MDX-H210、MDX-447、MDX-1379、MGV、米哚妥林、米诺膦酸、丝裂霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托葸醌、米伏布林、MK-2206、MK-0646(达洛妥珠单抗(dalotuzumab))、MLN518、莫特沙芬钆、MS-209、MS-275、MX6、苯丙酸诺龙、奈拉滨、奈立膦酸盐、来那替尼、索拉非尼(Nexavar)、新伐司他、尼洛替尼、尼美舒利、***、诺非单抗、诺拉曲塞、norelin、N-乙酰基半胱氨酸、06-苄基鸟嘌呤、奥利默森、奥美拉唑、癌噬菌体、oncoVEXGM-CSF、奥米拉汀(ormiplatin)、欧塔他赛(ortataxel)、奥沙利铂、OX44抗体、OSI-027、OSI-906(linsitinib)、4-1BB抗体、吡咯蒽醌、***、紫杉醇、帕米膦酸盐、帕尼单抗、帕土匹龙、非格司亭、PCK-3145、培门冬酶、培非格司亭、PBI-1402、PBI-05204、PDO325901、PD-1抗体、PEG-紫杉醇、白蛋白稳定型紫杉醇、PEP-005、PF-05197281、PF-05212384、PF-04691502、PHT-427、P-04、PKC412、P54、PI-88、培利替尼、培美曲塞、培美曲塞二钠、喷司他丁、pentrix、哌立福辛、紫苏子醇、帕妥珠单抗、PI3K抑制剂、PI3K/mTOR抑制剂、PG-TXL、PG2、PLX-4032/RO-5185426(维罗非尼)、PLX-3603/RO-5212054、PT-100、PWT-33597、PX-866、甲啶铂、哌泊溴烷、特戊酰氧基甲基丁酸盐、匹杉琼、脱氢雌马酚O、PKI166、普来曲塞、普卡霉素、高溴酸、泊非霉素、***、***龙、丙卡巴肼、奎纳克林、qui名称d、喹奴普丁、R115777、RAF-265、雷莫司琼、豹蛙酶、拉布立酶、RDEA-119/BAY 869766、RDEA-436、蝴蝶霉素类似物、受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂、revimid、RG-7167、RG-7304、RG-7421、RG-7321、RG 7440、根霉素、rhu-MAb、林菲培、利塞膦酸盐,利妥昔单抗、罗妥木单抗、罗非考昔、RO-31-7453、RO-5126766、RO-5068760、RPR 109881A、苯甲酰腙柔红霉素、卢比替康、R-氟比洛芬、RX-0201、S-9788、sabarubicin、SAHA、沙莫司亭、沙铂、SB 408075、Se-015/Ve-015、SU5416、SU6668、SDX-101、司莫司汀、西奥骨化醇、SM-11355、SN-38、SN-4071、SR-27897、SR-31747、SR-13668、SRL-172、索拉非尼、螺铂、角鲨胺、链佐星、环庚烷异羟肟酸(suberanilohydroxamic acid)、舒尼替尼、马来酸舒尼替尼、索坦、T 900607、T 138067、TAK-733、TAS-103、泰克地那林、他拉泊芬、他莫昔芬、特罗凯、tariquitar、他斯索兰、泰索帝、taxoprexin、他佐罗汀、替加氟、替莫唑胺、替尼泊苷、替米利芬、睾酮、丙酸睾酮、替米利芬、睾内酯、四铂、河豚毒素、替扎他滨、沙利度胺、theralux、四氢吡喃阿霉素、硫鸟嘌呤、塞替派、胸腺法新、thymectacin、噻唑呋林、替吡法尼、替拉扎明、托拉地新、雷替曲塞、拓扑替康、托瑞米芬、toremofin、托西莫单抗、曲贝替定、TransMID-107、反式视黄酸、traszutumab、替西木单抗、维A酸、三乙酰尿苷、triapine、曲西立滨、三甲曲沙、TLK-286TXD258、泰克泊/拉帕替尼(tyverb)、urocidin、尿嘧啶氮芥、戊柔比星、瓦他拉尼、长春花碱、长春新碱、长春氟宁、长春瑞滨、维鲁利秦、WX-UK1、WX-554、维克替比、伏瑞斯特、希罗达、XELOX、XL-147、XL-228、XL-281、XL-518/R-7420/GDC-0973、XL-765、YM-511、YM-598、ZD-4190、ZD-6474、ZD-4054、ZD-0473、ZD-6126、ZD-9331、ZD1839、ZSTK-474、唑来膦酸盐和唑喹达(zosuquidar)。
本发明的化合物还可以与医学治疗例如外科手术或放射治疗(例如，γ射线、中子束放射治疗、电子束放射治疗、质子治疗、近距离放射治疗和全身放射性同位素)组合使用。
为了治疗自身免疫或炎性病况，本发明的化合物可以与皮质类固醇例如曲安西龙、***、氟轻松、可的松、***龙或氟米龙组合使用。
为了治疗自身免疫或炎性病况，本发明的化合物可以与免疫抑制剂例如醋酸氟轻松利美索龙(AL-2178、Vexol、Alcon)或环孢菌素组合给药。
为了治疗自身免疫或炎性病况，本发明的化合物可以与一种或多种选自以下的其它试剂组合给药：DehydrexTM(Holles Labs)、珠卡赛辛(Opko)、透明质酸钠(Vismed,Lantibio/TRB Chemedia)、环孢菌素(ST-603,SirionTherapeutics)、ARG101(T)(睾酮，Argentis)、AGR1012(P)(Argentis)、依卡倍特钠(Senju-Ista)、吉法酯(Santen)、15-(s)-羟廿碳四烯酸(15(S)-HETE)、西维美林、多西环素(ALTY-0501,Alacrity)、米诺环素、iDestrinTM(NP50301,Nascent Pharmaceuticals)、环孢素A(Nova22007,Novagali)、土霉素(Duramycin,MOLI1901,Lantibio)、CF101(2S,3S,4R,5R)-3,4-二羟基-5-[6-[(3-碘苯基)甲基氨基]嘌呤-9-基]-N-甲基-氧杂环戊烷-2-氨甲酰基，Can-Fite Biopharma)、voclosporin(LX212或LX214，Lux Biosciences)、ARG103(Agentis)、RX-10045(合成resolvin类似物，Resolvyx)、DYN15(Dyanmis Therapeutics)、利格列酮(DE011,DaiichiSanko)、TB4(RegeneRx)、OPH-01(Ophtalmis Monaco)、PCS101(Pericor Science)、REV1-31(Evolutec)、Lacritin(Senju)、瑞巴派特(Otsuka-Novartis)、OT-551(Othera)、PAI-2(University of Pennsylvania和Temple University)、匹鲁卡品、他克莫司、吡美莫司(AMS981,Novartis)、氯替泼诺、利妥昔单抗、地夸磷索四钠(INS365,Inspire)、KLS-0611(Kissei Pharmaceuticals)、去氢表雄酮、阿那白滞素、依法利珠单抗、霉酚酸钠、依那西普
在一些实施方案中，本发明的化合物可以与一种或多种选自如下的试剂组合给药：抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、麻醉剂、抗炎药(包括甾体和非甾体抗炎药)和抗过敏剂。适宜药物的实例包括氨基糖苷类，例如阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、链霉素、奈替米星和卡那霉素；氟喹诺酮类，例如环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星、洛美沙星、左氧氟沙星和依诺沙星；萘啶；磺酰胺；多粘菌素；氯霉素；新霉素；巴龙霉素；粘菌素甲磺酸；杆菌肽；万古霉素；四环素；利福平及其衍生物(“立复霉素”)；环丝氨酸；β-内酰胺类；头孢菌素；两性霉素；氟康唑；氟胞嘧啶；纳他霉素；咪康唑；酮康唑；皮质激素；双氯芬酸；氟比洛芬；酮咯酸；舒洛芬；色甘酸；洛度沙胺；左卡巴斯汀；萘甲唑啉；安他唑啉；非尼拉敏；或氮杂内酯类抗生素。
可以同时或顺序地将一种或多种另外的试剂给药至患者。
IV.制剂、剂型和给药
当用作药物时，本申请所述的盐和结晶形式可以药物组合物的形式给药。这些组合物可以按照药学领域众所周知的方式制备，并且可以通过多种途径给药，这取决于是否需要局部或全身治疗以及待治疗的区域。给药可以是局部给药(包括透皮、表皮、眼科和粘膜给药，包括鼻内、***和直肠给药)、肺部给药(例如通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括通过雾化器；气管内或鼻内给药)、口服或肠胃外给药。肠胃外给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内肌内注射或输注；或颅内给药，例如鞘内或脑室内给药。肠胃外给药可以是单次推注剂量的形式，也可以例如通过连续灌注泵给药。用于局部给药的药物组合物和制剂可以包括透皮贴剂、软膏剂、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉剂。常规药物载体，含水、粉末或油性基质，增稠剂等可以是必需的或期望的。药物活性化合物的含量应为组合物整体的0.1重量％-90重量％、优选0.5重量％-50重量％，即足以达到以下指定剂量范围的量。
本发明还包括药物组合物，其含有作为活性成分的本申请所述的盐和结晶形式以及一种或多种药学上可接受的载体(赋形剂)的组合。在一些实施方案中，组合物适于局部给药。在制备本发明的组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合、用赋形剂稀释或封装在例如胶囊、香囊、纸或其它容器的形式的这种载体内。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体材料，它们充当活性成分的媒介物、载体或介质。因此，组合物的形式可以为片剂、丸剂、粉剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、含有例如高达10重量％的活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉剂。
在制备制剂时，可以将本申请所述形式为盐或结晶形式的活性化合物研磨以提供适当粒度，然后与其它成分组合。如果盐或结晶形式是基本上不溶的，则可以将其研磨成小于200筛目的粒度。如果盐或结晶形式是基本上水溶的，则可以通过研磨以在制剂中提供基本上均匀的分布来调节粒度，例如约40筛目。
本申请所述的盐和结晶形式可以使用已知研磨程序例如湿磨进行研磨以得到适于片剂形成和其它制剂类型的粒度。本申请所述的盐和结晶形式的细分(例如，纳米颗粒)制剂可以通过本领域已知方法来制备，例如参见国际申请号WO 2002/000196。
适宜赋形剂的实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、***胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂可以另外包括：润滑剂例如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂例如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。通过使用本领域已知的方法，可以将本申请所述的盐和结晶形式配制成在给药至患者之后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。
适宜片剂可以例如通过将一种或多种活性物质与已知的赋形剂混合来得到，所述赋形剂例如，惰性稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或乳糖，崩解剂例如玉米淀粉或藻酸，粘合剂例如淀粉或明胶，润滑剂例如硬脂酸镁或滑石和/或延迟释放的试剂例如羧甲基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素或聚乙酸乙烯酯。片剂也可以包含几层。
可以将组合物配制成单位剂型，每个剂量包含约5至约1,000mg(1g)、更通常约100mg至约500mg的活性成分。术语“单位剂型”是指物理上离散的单位，其适宜作为人受试者和其它哺乳动物的单位剂量，每个单位包含预定量的活性物质，该活性物质经计算与适宜的药物赋形剂结合产生所需的治疗效果。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含约5mg至约50mg的活性成分。本领域技术人员将会理解，这体现为化合物或组合物，其包含约5mg至约10mg、约10mg至约15mg、约15mg至约20mg、约20mg至约25mg、约25mg至约30mg、约30mg至约35mg、约35mg至约40mg、约40mg至约45mg或约45mg至约50mg的活性成分。描述的剂量可以是特定盐或结晶形式的指定量，或是提供指定剂量游离碱化合物(即N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺)的特定盐或结晶形式的量。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含约50mg至约500mg的活性成分。本领域技术人员将会理解，这体现为化合物或组合物，其包含约50mg至约100mg、约100mg至约150mg、约150mg至约200mg、约200mg至约250mg、约250mg至约300mg、约350mg至约400mg或约450mg至约500mg的活性成分。描述的剂量可以是特定盐或结晶形式的指定量，或是提供指定剂量游离碱化合物(即N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺)的特定盐或结晶形式的量。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含约500mg至约1,000mg的活性成分。本领域技术人员将会理解，这体现为化合物或组合物，其包含约500mg至约550mg、约550mg至约600mg、约600mg至约650mg、约650mg至约700mg、约700mg至约750mg、约750mg至约800mg、约800mg至约850mg、约850mg至约900mg、约900mg至约950mg或约950mg至约1,000mg的活性成分。描述的剂量可以是特定盐或结晶形式的指定量，或是提供指定剂量游离碱化合物(即N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺)的特定盐或结晶形式的量。
指定的剂量可以每天一次给予，或如果需要，一天数次例如一天两次、三次或四次给予。
活性化合物可以在宽的剂量范围内有效，并且通常以药物有效量给药。然而，将会理解，实际给药的剂量通常将由医生根据相关情况来确定，包括待治疗的病况、选择的给药途径、实际给药的化合物、年龄、体重和个体患者的反应、患者症状的严重程度等。
为了制备固体组合物例如片剂，将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成固体预制剂组合物，所述固体预制剂组合物包含本申请所述的盐或结晶形式的均质混合物。当将这些预制剂组合物称为均相时，通常将活性成分均匀地分散在整个组合物中，从而可以容易地将组合物细分为等效单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将该固体预制剂细分为上述类型的单位剂型，其包含例如约0.1至约1000mg的活性成分。
可以将包含本申请所述的盐或结晶形式的片剂或丸剂包衣或以其它方式配混以提供具有延长作用的优点的剂型。包衣片剂可以通过如下制备：将片剂类似制备的芯用通常用于片剂包衣的物质例如可力酮(collidone)或虫胶、***胶、滑石、二氧化钛或糖进行包衣。为了实现延迟释放或防止不相容性，芯也可以由许多层构成。类似地，片剂包衣可以由许多层构成以实现延迟释放，可能使用上述片剂的赋形剂来实现。
例如，片剂或丸剂可包含内部剂量和外部剂量成分，后者的形式是前者的包膜。两种成分可以由肠溶层分开，所述肠溶层用于抵抗胃中的崩解并且允许内部成分完整地进入十二指肠或延迟释放。多种物质可用于这种肠溶层或包衣，这种物质包括多种聚合酸以及聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素等物质的混合物。
可以并入本发明的盐、结晶形式和组合物以口服或通过注射给药的液体形式包括水溶液剂、适当调味的糖浆剂、水或油混悬剂以及与食用油(例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)的调味乳剂以及酏剂和类似的药物载体。尽管其中溶解盐的液体制剂通常将不包含结晶形式的盐，但是本申请所述的盐和结晶形式仍可用于制备液体制剂，例如通过在适宜介质中溶解其盐或结晶形式来制备。
用于注射和输注的溶液可以常见方式制备，例如加入等渗剂、防腐剂(例如对羟基苯甲酸酯)或稳定剂(例如乙二胺四乙酸的碱金属盐)，任选地使用乳化剂和/或分散剂，同时如果使用水作为稀释剂，则例如有机溶剂可以任选地用作溶解剂或溶解助剂并且转移到注射瓶或安瓿瓶或输液瓶中。
包含一种或多种活性物质或活性物质组合的胶囊可例如通过将活性物质与惰性载体如乳糖或山梨醇混合并将它们包装进入明胶胶囊中来制备。
用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的含水或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液以及粉末。液体或固体组合物可包含上述适宜的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，通过口服或鼻呼吸途径给药组合物以产生局部或全身作用。可以通过使用惰性气体雾化其中的组合物。雾化溶液可以直接从雾化装置中呼吸，或者可以将雾化装置连接到面罩、帐篷或间歇性正压呼吸机上。溶液、悬浮液或粉末组合物可以从以适当方式递送制剂的装置经口或经鼻给药。
局部制剂可包含一种或多种常规载体。在一些实施方案中，软膏剂可以包含水和一种或多种疏水性载体，所述疏水性载体选自例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白色凡士林等。乳膏的载体组合物可以基于水与甘油和一种或多种其它组分例如单硬脂酸甘油酯、PEG-单硬脂酸甘油酯和十六烷基硬脂醇的组合。凝胶可以使用异丙醇和水，适宜地与其它组分例如甘油、羟乙基纤维素等组合来配制。在一些实施方案中，局部制剂包含至少约0.1wt％、至少约0.25wt％、至少约0.5wt％、至少约1wt％、至少约2wt％或至少约5wt％的本发明化合物。局部制剂可以适宜地包装在例如100g的管中，其任选地结合用于治疗选择适应症例如银屑病或其它皮肤状况的说明书。
给药至患者的其盐或结晶形式或组合物的量将取决于给药内容、给药目的(例如预防或治疗)、患者状况、给药方式等而变化。在治疗应用中，可以以足以治愈或至少部分阻止疾病及其并发症症状的量向已患有疾病的患者给药组合物。有效剂量将取决于治疗的疾病状况以及主治医生根据诸如疾病的严重程度，患者的年龄、体重和一般状况等因素作出的判断。
本发明化合物的治疗剂量可以根据例如进行治疗的特定用途、化合物的给药方式、患者的健康和状况以及处方医生的判断而变化。本发明化合物在药物组合物中的比例或浓度可以根据许多因素而变化，所述因素包括剂量、化学特性(例如疏水性)和给药途径。例如，本发明化合物可以在包含约0.1％至约10％w/v的化合物的生理缓冲水溶液中用于肠胃外给药。一些典型的剂量范围是每天约1μg/kg至约1g/kg体重。在一些实施方案中，剂量范围是每天约0.01mg/kg至约100mg/kg体重。剂量可能取决于诸如如下变量：疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的总体健康状况、所选化合物的相对生物学功效、辅料配方及其给药途径。有效剂量可以从体外或动物模型测试系统得出的剂量反应曲线进行外推。
预期对人给药的适宜剂量范围将为约50mg至约2000mg，例如约100mg至约2000mg、约200mg至约2000mg、约400mg至约2000mg、约600mg至约2000mg、约800mg至约2000mg、约1000mg至约2000mg、约1200mg至约2000mg、约1400mg至约2000mg、约1500mg至约2000mg、约1600mg至约2000mg、约1800mg至约2000mg、约50mg至约1500mg、约100mg至约1500mg、约200mg至约1500mg、约400mg至约1500mg、约600mg至约1500mg、约800mg至约1500mg、约1000mg至约1500mg、约1200mg至约1500mg、约1250mg至约1500mg、约50mg至约1000mg、约100mg至约1000mg、约200mg至约1000mg、约400mg至约1000mg、约600mg至约1000mg、约800mg至约1000mg、约50mg至约500mg、约100mg至约500mg、约200mg至约500mg、约400mg至约500mg，或剂量是约50mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约600mg、约700mg,、约750mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1200mg、约1400mg、约1500mg、约1600mg、约1800mg或约2000mg。指定的适宜剂量可以是盐本身的剂量，或提供指定量的游离碱化合物(即N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺)的盐的剂量。
本发明的组合物可以进一步包括一种或多种另外试剂，例如化学治疗剂、类固醇、抗炎化合物或免疫抑制剂，其实例在上文中列出。
以下制剂实施例说明了本发明，但不限制其范围：
药物制剂的实例
将细碎的活性物质、乳糖和一些玉米淀粉混合在一起。将混合物进行筛分，然后用聚乙烯吡咯烷酮水溶液润湿，捏合，湿法制粒，干燥。将颗粒、剩余的玉米淀粉和硬脂酸镁进行筛分并且混合在一起。将混合物压制成适宜形状和大小的片剂。
将细磨的活性物质、一些玉米淀粉、乳糖、微晶纤维素和聚乙烯吡咯烷酮混合在一起，将混合物进行筛分，然后与剩余的玉米淀粉和水一起加工成颗粒，将其干燥和筛分。加入氟甲基淀粉钠和硬脂酸镁并且混合，然后将混合物压制成适宜大小的片剂。
V.试剂盒
本发明还包括用于例如治疗或预防与B-RAF相关的疾病或病症例如癌症的药物试剂盒，所述药物试剂盒包括一个或多个容器，所述容器容纳药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的本申请所述盐或结晶形式。如果需要，这样的试剂盒可以进一步包括各种常规药物试剂盒部件中的一种或多种，例如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、另外容器等，这对于本领域技术人员来说是明显的。试剂盒中还可以包括说明书(作为***物或标签)，指示待给药成分的量、给药指南和/或用于混合成分的指南。
将通过具体实施例更详细地描述本发明。提供以下实施例用于说明性目的，并不旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易地认识到可以改变或修改以取得基本上相同结果的各种非关键参数。
实施例
一般方法
在以下实施例中，除另有说明外，X射线粉末衍射分析是在配备有位置敏感探测器(PSD)和作为单色CuKα1辐射的X射线源的Cu阳极的透射型STOE STADI粉末衍射仪上进行的。(40kV,40mA)。一般测量条件是：
●起始角–3°
●停止角–40°
●取样–0.02度。
●扫描速度–10s/步。
差示扫描量热法(DSC)在TA仪器差示扫描量热仪(型号Q2000)上使用8-10mg的进样量进行。一般实验条件是：25-350℃，以10℃/min进行
热重分析(TGA)在TA一起热重分析仪(型号Q5000)在以下条件下进行：以10℃/min升温至350℃。
动态蒸汽吸附(DVS)在来自Hiden Isochema的IGAsorp水吸附分析仪中进行。在25℃下以10％RH的步长间隔(从0％相对湿度到90％相对湿度)进行吸附和解吸等温线。
对于HPLC-质谱/UV-光谱，使用HPLC-MS设备(具有质量检测器的高效液相色谱)制备用于表征根据本发明的实例化合物的保留时间/MS-ESI+。给出在进样峰处洗脱的化合物的保留时间t保留＝0.00。以下实施例中描述的方法如下。
HPLC-MS方法A
HPLC-MS方法B
HPLC-MS方法C
平衡溶解度测量
通过在每个孔中加入适当体积的所选含水介质(通常在0.25-1.5mL范围内)，孔中含有已知量的固体药物物质(通常在0.5-5.0mg范围内)，制备饱和溶液。将孔摇晃或搅拌一段预定的时间(通常在2-24h范围内)，然后使用适当滤膜(通常是0.45μm孔径的PTFE过滤器)过滤。通过丢弃前几滴滤液来避免过滤器吸收。溶解的药物物质的量通过UV光谱法确定。另外，使用玻璃电极pH计测量饱和水溶液的pH。
固有溶出率测量
3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺盐的固有溶出率在覆盖pH范围1.1–7.4的含水介质中使用保持恒定表面积的旋转圆盘法来确定。
将药物物质(5mg)在356.1牛顿压制60s以形成圆片。将这些圆片固定到样品架上，所述样品架安装在小型溶出度测试设备中。将溶出介质以200rpm在37℃的温度进行搅拌。每隔两分钟自动从溶出容器中取出样品，通过紫外分光光度法进行测定。
制备N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(BI 882370)
步骤1.4-(6-甲基-5-硝基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3)
DIPEA(62.82mL,0.435mol)加入到6-氯-3-硝基-2-甲基吡啶(1)(50g,290mmol)和N-Boc-哌嗪(2)(53.95g,290mmol)在干燥的MeCN(200mL)中的溶液中，在50℃搅拌4h。反应完成之后，将反应混合物用MeCN和水稀释，搅拌30min。将沉淀的产物通过过滤收集，用水洗涤并且将固体在真空中干燥。
步骤2.4-[6-((E)-2-二甲基氨基-乙烯基)-5-硝基-吡啶-2-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4)
向4-(6-甲基-5-硝基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3)(13g,40.3mmol)在DMF(35mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(14.47g,121mmol)，在氩气气氛下在90℃搅拌36h。加入另外1.5当量N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛，在90℃搅拌12h。将反应混合物倒入水中，用DCM萃取。合并的有机层用水洗涤，经无水Na2SO4干燥，在真空中浓缩。残留物无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤3.4-(1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5)
4-[6-((E)-2-二甲基氨基-乙烯基)-5-硝基-吡啶-2-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(36.4g,96mmol)溶于MeOH中，加入Pd/C(0.56g,10％)，将混合物在高压釜中在60psi氢化16h。将反应混合物过滤并且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法通过NP MPLC纯化。合并包含化合物(5)级分的产物(HPLC-MS方法B：t保留＝1.55min；MS(M+H)+＝303)，在真空中蒸发。
步骤4.N-(3-氨基-2,6-二氟苯基)乙酰胺(7)
化合物(6)(55.0g,254mmol)溶于MeOH(1.0L)中。加入Pd/C(10.0g,10％)，将混合物在高压釜中在200psi氢化3h。将反应混合物过滤并且在减压下浓缩。将残留物通过NP-MPLC在硅胶上使用DCM/MeOH(96:4)作为洗脱液进行纯化。合并包含苯胺中间体级分的产物(HPLC-MS方法B：t保留＝0.25min；MS(M-H)-＝185)，蒸发。
步骤5.N-(2,6-二氟-3-(丙基磺酰胺基)苯基)乙酰胺(9)
向在DCM(100mL)中的苯胺中间体(35.0g,188mmol)中，加入吡啶(6.6mL,75mmol)和正丙烷磺酰氯(8)(29.5mL,263mmol)，在室温将混合物搅拌16h。将反应混合物用EtOAc(200mL)稀释，用H2O和HCl(aq.,1N)洗涤，分层，经MgSO4干燥，蒸发，取得磺酰胺(9)，其无需进一步纯化即可使用。
步骤6.N-(3-氨基-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(10)
将磺酰化苯胺(9)(38.0g,130mmol)溶于EtOH(250mL)、H2O(200mL)和浓盐酸(200mL)中，将其加热至80℃持续2h。将反应混合物在减压下浓缩，加入含水NaOH(4N)直至达到pH＝6，将混合物用DCM萃取2次。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发，取得去酰化苯胺(10)(HPLC-MS方法B：t保留＝0.22min；MS(M-H)-＝249)为盐酸盐，其无需进一步纯化即可使用。
步骤7.N-(2,4-二氟-3-碘苯基)丙烷-1-磺酰胺(11)
将化合物(10)的盐酸盐溶于DCM中，用NaHCO3溶液萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤，蒸发。向在0℃在TFA(80mL)中的游离碱(10)(3.55g,14.21mmol)中小批次地加入NaNO2(1.96g,28.4mmol)，混合物搅拌30min，加入KI(23.83g,142mmol)，继续搅拌另外15min。将反应混合物用Et2O稀释，搅拌1h。加入Na2S2O3溶液(半浓缩)，将混合物用Et2O萃取3次。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，在真空中浓缩。残留物通过柱色谱法通过NP-MPLC纯化。合并包含化合物(11)级分的产物(HPLC-MS方法A：t保留＝1.58min；MS(M-H)-＝360)，在真空中蒸发。
步骤8.4-((1-(2,6-二氟-3-(丙基磺酰胺基)苯基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)(甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(12)
1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(5)(10.0g,30.27mmol)、磺酰胺(11)(16.4g,45.4mmol)、CuI(576mg,3.03mmol)、反式-(1R,2R)-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(1.91mL,12.1mmol)和Cs2CO3(29.6g,90.85mmol)溶于干燥的甲苯(3mL)中，将所得混合物用氩气吹扫，在20℃搅拌16h。加入另外CuI(576mg,3.03mmol)、反式-(1R,2R)-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(1.91mL,12.1mmol)和Cs2CO3(20.0g,60.0mmol)之后，将反应混合物搅拌另外24h。在真空中除去溶剂，残留物溶于DCM中，用NaHCO3溶液(半浓缩萃取)。有机层经MgSO4干燥，过滤，在真空中除去溶剂，残留物通过NP-MPLC纯化。合并包含(12)级分的产物(HPLC-MS方法C：t保留＝1.62min；MS(M+H)+＝564)，在真空中除去溶剂。
步骤9.4-((1-(2,6-二氟-3-(丙基磺酰胺基)苯基)-3-碘-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)(甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(13)
向磺酰胺(12)(1.078g,1.9mmol)在DMF(4mL)/THF(100μL)中的溶液中，加入NIS(474mg,2.1mmol)，在室温将混合物搅拌1h。将反应混合物用30mL DCM稀释，用NaHCO3溶液(半浓缩)萃取。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩。残留物通过柱色谱法通过RP HPLC纯化。将包含(13)级分的产物(HPLC-MS方法B：t保留＝2.035min；MS(M+H)+＝688)进行冷冻干燥。
步骤10.4-((1-(2,6-二氟-3-(丙基磺酰胺基)苯基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)(甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(15)
将磺酰胺(13)(770mg,1.12mmol)、嘧啶-5-基-硼酸(14)(194mg,1.57mmol)、Pd(dppf)Cl2(82mg,0.11mmol)、LiCl(142mg,3.35mmol)和Na2CO3(294mg,2.8mmol)溶于二噁烷/H2O(2:1混合物，12mL)，将所得混合物用氩气吹扫，在100℃搅拌1h。将反应混合物用DCM稀释，用NaHCO3溶液(半浓缩)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤，加入在真空中除去溶剂，残留物通过RP HPLC纯化。将包含(15)级分的产物(HPLC-MS方法C：tRet.＝2.149min；MS(M+H)+＝642)进行冷冻干燥。
步骤11.N-(2,4-二氟-3-(5-(甲基(哌啶-4-基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)苯基)丙烷-1-磺酰胺
向实例化合物(15)(154mg,0.24mmol)在DCM/MeOH(1:1,4mL)中的溶液中加入HCl(在二噁烷中，4N，2mL)，在室温将混合物搅拌3h。在真空中除去溶剂。无需进一步纯化即可使用得到的化合物(16)(HPLC-MS方法B：t保留＝1.02min；MS(M+H)+＝542)。
步骤12.N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(I)
化合物I由化合物(16)通过在1.5当量在iPrOH中的乙酰氧基硼氢化钠存在下与乙醛(40％，在iPrOH中)进行还原烷基化得到。粗制产物由乙醇重结晶，得到标题化合物，84％收率。
放大合成N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(BI 882370)
步骤1.N-(2,4-二氟-3-(5-(甲基(哌啶-4-基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)苯基)丙烷-1-磺酰胺
将异丙醇(8.83kg)和化合物(15)(1.80kg,2.8mol)加入反应器中，搅拌混合物，将其加热至55～60℃。在60-65℃将浓盐酸(2.76kg,28mol)经多于20min滴入反应器中。然后，将反应物质加热至60-70℃，保持1h。通过HPLC监测转化率，约1h之后达到约99.5％。
将反应物质冷却，在不大于50℃在减压下蒸馏除去异丙醇。得到棕色油，溶解在水(6.75kg)中，在20-30℃通过用乙酸乙酯(2.02kg)萃取洗涤。水相冷却至15-20℃。在20-30℃用10％NaOH水溶液(约8.0kg)调节pH至8.0-8.5。在20-30℃将混合物搅拌3-4h，其中每隔半小时通过加入10％NaOH溶液将pH调节至8.0-8.5。过滤分离产物，滤饼用水(3.6kg)洗涤。将固体在45～50的真空下干燥直至水含量不大于5.5％。这提供约1.64kg的粗制化合物(16)(理论收率的108％；检测到包含水和NaCl的粗制产物)。直接使用粗制产物)。
步骤12.N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(I)
方法：
将二氯甲烷(19.88kg)和化合物(16)(1.5kg,2.77mol)加入反应器中，搅拌混合物，在氮气气氛下冷却至0-10℃。在0-10℃将三乙酰氧基硼氢化钠(95％,0.93kg,4.16mol)加入混合物中。在0-10℃将混合物搅拌20-30min。在0-10℃将在DCM中的乙醛(40％,1.07kg,9.71mol)经2h缓慢加入混合物中。在氮气气氛下在0～10℃将反应混合物搅拌0.5-1h。通过HPLC监测转化率，约0.5-1h之后达到约99.5％。
在低于15℃的温度将水(15kg)加入反应物质中。在15-30℃搅拌混合物20～30min。将氨水(25％,1.13kg,16.61mol)加入混合物中，然后将混合物搅拌0.5h。分离有机相，然后在20-25℃通过用水(15kg)萃取。将活性炭(0.15kg)加入有机相中。混合物搅拌1h，然后过滤。在不大于40℃在减压下浓缩滤液，得到化合物(I)(1.58kg,100％收率)为泡沫状固体。
研究N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺游离碱的结晶度
研究从乙醇水溶液中重结晶得到的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺游离碱的结晶度，将其用作研究盐形成的起始物质，表明该化合物具有低的结晶度，如图1所示。
研究N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺的盐形式
将化合物N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺在各种溶剂体系中与各种酸组合。
通过给予浓度为约40mg/mL的在MeOH中的化合物(储备溶液)来填充96孔主平皿。将该皿置于真空烘箱中以除去液体，从而在每个孔中得到相同量的固体材料。随后将不同的溶剂/溶剂混合物和酸添加到每个孔中的固体物质中(约500μL)，搅拌的同时将整个皿加热至50℃持续2小时(使用小搅拌棒加入到每个孔中)。
使用的酸如表1所示。使用的溶剂如表2所示。通过浆液实验或蒸发结晶得到盐的结晶度。
为了通过浆液实验研究晶体形成，使皿冷却，通过XRPD研究所得盐的结晶度。图2A中示出显示盐的主平皿的图像，图2B中示出对来自每个主平皿孔的盐进行的XRPD图像，其示出形成的盐的结晶度。
为了通过蒸发实验研究晶体的形成，在加热一段时间后，使用预热的滤板在相同温度(50℃)过滤溶液，以确保不会将未溶解的物质转移到其它结晶板上。将滤液分配到蒸发板(约200μL)中。使溶剂蒸发，并且通过XRPD研究所得盐的结晶度。图3A中示出显示盐的主平皿的图像，图3B中示出对来自每个蒸发板孔的盐进行的XRPD图像，其示出形成的盐的结晶度。
表1.用于盐形式研究的盐
条目
酸(请确认使用的酸)
代码
1
游离碱(不加酸)
BS
2
盐酸
CL
3
柠檬酸
CI
4
酒石酸
TA
5
富马酸
FU
6
水杨酸
SA
7
R-扁桃酸
MY
8
硫酸
SU
9
磷酸
PH
10
琥珀酸
SC
11
苯甲酸
BZ
12
马来酸
ML
表2.用于盐形式研究的溶剂
在初步筛选的基础上，形成六种结晶盐，即氯化物(CL)、富马酸盐(FU)、磷酸盐(PH)、琥珀酸盐(SC)、硫酸盐(SU)和酒石酸盐(TA)，如表3所汇总的。
表3.初步盐形式的研究结果
对表3中汇总的每种盐形式的样品执行的XRPD图像如图4所示。
放大合成盐形式的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺
根据初步盐形式鉴定结果，重新合成约50mg规模的氯化物(CL)、富马酸盐(FU)、磷酸盐(PH)、琥珀酸盐(SC)、硫酸盐(SU)和酒石酸盐(TA)。除磷酸盐外，可以得到氯化物(CL)、富马酸盐(FU)、琥珀酸盐(SC)、硫酸盐(SU)和酒石酸盐(TA)盐各自的结晶形式，如表4中所汇总的。
表4.初步盐形式的研究结果
通过放大得到的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的数据示于图5-9中。
图5是与由放大合成得到的样品(上图)相比，来自孔E2的样品(下图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。
图6是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的DSC图。样品显示在约321℃吸热。
图7是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的TGA图。
图8是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的吸附-解吸曲线，其显示当相对湿度在0-100％之间变化时重量的增加和减少。样品显示在10-90％的相对湿度范围内约2.4％的重量增加。
图9是吸附-解吸实验之前(下图)和之后(上图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图，其表明结构上没有发生显著变化。
通过放大得到的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的数据示于图10-14中。
图10是与由放大合成得到的样品(上图)相比，来自孔F10的样品(下图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图。
图11是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的DSC图。样品显示在约182℃吸热。
图12是的N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐TGA图。
图13是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的吸附-解吸曲线，其显示当相对湿度在0-100％之间变化时重量的增加和减少。样品显示在10-90％的相对湿度范围内约1.2％的重量增加。
图14是吸附-解吸实验之前(下图)和之后(上图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图，其表明结构上没有发生显著变化。
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的合成与性质
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐在各种溶剂系统中通过如下制备：将N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(100mg,176μmol)溶解在各种溶剂(10-20mL)中，在50℃加入HCl(10M在乙醇中的溶液；1当量)。然后将所得溶液在搅拌下在约溶剂沸点的温度加热约1h，然后使得冷却至室温，搅拌3h或更长时间(例如过夜)。然后将盐通过过滤收集，在50℃干燥。
表5提供进行的实验的概要。
表5.合成N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐
#按1g规模合成
制备规模合成N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐
在搅拌下在60℃加热在异丙醇(8mL)中的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(1.0g,1.76mmol)，形成棕色溶液。加入HCl(10M在乙醇中的溶液；1.84mmol,1.05当量)。在搅拌下在60℃加热所得悬浮液1h，然后在80℃加热1h，然后在50℃加热1h，然后使其冷却至室温，搅拌过夜(约16h)。然后将盐通过过滤收集，在50℃在减压下干燥过夜(约16h)。这得到N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐(1.023g，96％收率)为灰白色固体。N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的数据示于图15-24中。
图15是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。
表6是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD的代表性的XRPD峰、d值和相对强度的列表。
表6.N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD峰、d值和相对强度
图16是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的DSC图。样品显示在约313℃开始吸热。通常，样品在对应于熔点的312-322℃范围内开始吸热。因此熔点测量为约317±5℃。一些样品在约250℃出现另外的吸热现象，这对应于溶剂损失。
图17是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的TGA图。样品表现出高达约250℃的干燥损失为约1.7-2.5％，其对应于水和溶剂的释放。水含量测量为约0.9％(卡尔·费歇尔法)。
图18是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的等温吸附-解吸图，其显示当相对湿度在0-90％之间变化时重量的增加和减少。样品显示在0-90％相对湿度范围内约4％的可逆重量增加，和在0-80％相对湿度范围内显示出约2.5％的可逆重量增加。看来吸收和解吸的量取决于样品中存在的有机溶剂的量。
图19是吸附-解吸实验之前(下图)和之后(上图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图，其表明结构上没有发生显著变化。
图20是在摇摆式磨机中在30rps研磨10min之后的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。样品显示结晶度显著降低，但是多晶型形式没有变化
图21是在2000N压制1s成片(直径5mm)之后的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的XRPD图。样品显示结晶度稍微下降，但是多晶型形式没有变化。
图22是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)。
图23是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)的在脂肪族区域(δ-0.5-6.0)上的插图。
图24是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)的在芳香族区域(δ6.0-11.5)上的插图。
确定N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐在各种介质中的平衡溶解度。结果汇总于表7中。
表7.N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐在各种介质中的溶解度
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐在各种介质中的固有溶出率在各种pH值的介质中测量。结果汇总于表8中。
表8.N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐在pH为1.0-7.4的含水介质中的固有溶出率
介质的pH
固有溶出率(μg/cm<sup>2</sup>/min)
1.0
4
2.2
121
3.0
80
4.5
38
6.8
15
7.4
3
图25是显示N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐经0-60min在1.0至7.4的pH值的含水介质中的溶出率的图。
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的合成与性质
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在各种溶剂系统中通过如下制备：加热下将N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(100mg,176μmol)溶解在各种溶剂(每mg药物是约8-10mL)中，加入琥珀酸(1当量)。所得溶液在搅拌下在约60-80℃加热约1h，然后使得冷却至室温，搅拌3h或更多(例如，过夜)。然后将盐通过过滤收集，在50℃干燥。
表8中提供进行的实验的概要。
表8.合成N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐
溶剂
盐收率
NMR纯度
结晶度
形式
EtOH(abs).
77％
>95％
高
A
iPrOH
85％
>95％
高
A
丙酮
85％
>95％
高
F<sup>*</sup>
乙酸乙酯
84％
>95％
高
A
MIBK
0％(无结晶)
EtOH(abs).
89％
>95％
高
A
EtOH(96％)
70％
约95％
高
A
EtOH(96％)
75％
>95％
高
A
EtOH(96％)
75％
>95％
高
A
EtOH(98％)。
92％
>95％
高
A
EtOH(abs)
94％
>95％
高
A
EtOH(98％)
95％
高
A
EtOH(97％)
92％
>95％
高
A
*丙酮溶剂合物。
对于N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐，从许多溶剂中结晶得到与由上述实验得到的相同的结晶形式(形式A)，但是通过从丙酮中结晶得到不同的结晶形式(形式B)(丙酮溶剂合物)。
制备规模合成N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(形式A)
将在乙醇(8mL)中的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(800mg,1.40mol)在搅拌下在60℃加热，形成淡黄色溶液。加入琥珀酸(166mg,1.40mmol,1.0当量)。所得溶液在搅拌下在60℃加热10min，然后在45℃加热10min，直至搅拌形成沉淀物。将悬浮液在搅拌下在55℃加热1h，然后使其冷却至室温，搅拌过夜(约16h)。然后将盐通过过滤收集，在50℃在减压下干燥3天。这得到N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(726mg,75％收率)为灰白色固体。得到的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(形式A)的数据示于图26-35中。
图26是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(形式A)的XRPD图。
表9是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(形式A)的XRPD的代表性的XRPD峰、d值和相对强度的列表。
表9.N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(形式A)的XRPD峰、d值和相对强度
图27是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的DSC图。样品显示在约180℃开始吸热。通常，样品在对应于熔点的179-182℃范围内开始吸热。因此熔点测量为约180±3℃。一些样品在约160-165℃具有另外的吸热现象，这对应于溶剂损失。
图28是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的TGA图。样品表现出高达约250℃的干燥损失为约1.4-3.7％，这对应于水和溶剂释放。水含量测量为约0.03％(卡尔·费歇尔法)。盐倾向于在晶体中包含可变量的溶剂，所述溶剂在大于约160℃的温度释放。
图29是N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的等温吸附-解吸图，其显示当相对湿度在0-90％之间变化时重量的增加和减少。样品显示在0-90％相对湿度范围内约4％的可逆重量增加，和在0-80％相对湿度范围内显示出约2.5％的可逆重量增加。看来吸收和解吸的量取决于样品中存在的有机溶剂的量。吸附和解吸是完全可逆的，而结晶度或多晶形式没有变化。
图30是吸附-解吸实验之前(下图)和之后(上图)的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图，其表明结构上没有发生显著变化。
图31是在摇摆式磨机中在30rps研磨10min之后的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图。样品显示结晶度稍微下降，但是多晶型形式没有变化。
图32是在2000N压制1秒成片剂(直径-5mm)之后的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD图。样品显示结晶度没有显著降低或多晶形式没有变化。
图33是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)。
图34是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)在脂肪族区域(δ-0.5-6.0)上的插图。
图35是N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的1H NMR光谱(400MHz,DMSO-d6)在芳香族区域(δ6.0-10.0)上的插图。
确定N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在各种介质中的溶解度。结果汇总于表10中。
表10.N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在各种介质中的溶解度
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在各种介质中的固有溶出率在各种pH值的介质中测量。结果汇总于表11中。
表11.N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在pH为1.0-7.4的含水介质中的固有溶出率
介质的pH
固有溶出率(μg/cm<sup>2</sup>/min)
1.0(0.1M HCl)
201
2.2
6844
3.0
6605
4.5
2457
6.8
2533
7.4
<1
图36是显示N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐经0-60min在1.0至7.4的pH值的含水介质中的溶出率的图。
出乎意料地，与N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的溶解度相比，N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的溶解度在测试的许多介质中显著地高。与N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐的固有溶出率相比，N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的固有溶出率也显著地高。
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐和N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐在大鼠中的药代动力学
向HsdHan:WIST挪威大鼠在40mg和80mg(剂量以游离碱计)口服给药之后，测量N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺盐酸盐和N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺盐酸盐的的药代动力学。将每种盐给药至3只动物。结果示于表12中。
表12.向挪威大鼠口服给药N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐或N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐之后的平均血浆浓度(N＝3±标准偏差的平均值)
数据表明，单琥珀酸盐的曝光值比单盐酸盐的曝光值高得多。此外，与单琥珀酸盐的50％相比，单盐酸盐在40mg/kg剂量的口服生物利用度仅是1％。
图37是口服给药大鼠如下物质之后的血浆浓度值与时间的关系图：(A)在40mg/kg的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐；(B)在80mg/kg的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单盐酸盐；(C)在40mg/kg的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐；(D)在80mg/kg的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐。
放大制备N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(形式A)
将甲醇(11.26kg)和化合物(I)(1.58kg,2.63mol)加入反应器中，搅拌所得混合物，将其加热至60-70℃直至固体溶解。将琥珀酸(393g,3.16mol)加入混合物中。在60-70℃继续搅拌0.5-1h，然后将溶液冷却至10～25℃。将形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(3g)的晶种加入混合物中，继续搅拌另外1h以使产物完全结晶。然后使混合物冷却至0-10℃，保持3-4h。通过过滤分离沉淀的产物，用冷却的甲醇洗涤。将固体在真空下在45-50℃干燥，得到形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐(1.53kg，收率80.2％)。
N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的进一步盐形式的表征
进行进一步的实验以表征形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐。表征过程中，鉴定了几种其它形式。
另外的一般方法
对于下述研究，除非另有说明，否则使用的仪器和方法如下所述。
X射线粉末衍射
使用PANalytical Empyrean进行XRPD分析，并且使用利用表13中列出的参数的X'Pert3X射线粉末衍射仪。
表13.XPRD参数
热重分析和差示扫描量热法
TGA数据使用来自TA Instruments的TA Q500/Q5000/5500TGA进行采集。DSC使用来自TA Instruments的TA Q200/Q2000/2500DSC进行。使用的详细参数列于表14中。
表14.XPRD参数
参数
TGA
DSC
方法
Ramp
Ramp
样品盘
铝，敞开
铝，卷曲
温度
室温-350℃
25-250℃
加热速率
10℃/min
10℃/min
吹扫气体
氮气
氮气
动态蒸汽吸附
DVS通过SMS(Surface Measurement Systems)DVS Intrinsic测量。针对LiCl、Mg(NO3)2和KCl的潮解点校准在25℃的相对湿度。DVS测试的参数列于表15中。
表15.DVS参数
核磁共振
1H解析NMR使用Bruker 400MHz NMR光谱仪使用DMSO-d6或氘代甲醇作为溶剂来进行。
偏光显微镜
在室温使用具有CT3相机的Axio Lab.A1正置显微镜来捕获PLM图像。
HPLC
使用Agilent 1260HPLC进行HPLC分析。色谱条件列于表16和表17中。
表16.用于纯度测试的HPLC参数
表17.用于溶解度测试的HPLC参数
使用反溶剂添加、逆反溶剂添加、固体蒸气扩散、溶液蒸气扩散、浆液、缓慢蒸发、缓慢冷却和聚合物诱导的结晶技术进行多晶型物筛选实验。除形式A外，还鉴定四个新的琥珀酸盐形式，其归属为琥珀酸盐形式C、D、E和F。所有晶形通过X射线粉末衍射(XRPD)、热重分析(TGA)、差示扫描量热(DSC)、质子核磁共振(1H NMR)和HPLC来表征。两种另外形式是无水物，一种是溶剂合物，另一种由于样品数量有限和重新制备困难而无法表征。就稳定性和其它性质来说，琥珀酸盐的形式C、D、E和F的性质都比形式A差。
形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的进一步表征
进一步表征形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的样品。
两个批次的形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的XRPD结果示于图38中。
TGA和DSC分析结果示于图39中。在琥珀酸盐形式A的TGA曲线中，其上观察到高达140℃的重量损失为1.9％。在DSC曲线上，观察到在159.5℃(开始)处有阶跃吸热信号，然后在181.3℃(开始)处出现明显吸热。
1H NMR光谱示于图40(DMSO-d6作为溶剂)和图41(氘化MeOH作为溶剂)中，确定琥珀酸/游离碱的摩尔比为0.9:1。使用在2.38ppm处(积分3.58，琥珀酸盐的氢原子，4H)和在1.78ppm处(积分6.00，游离碱的氢原子，6H)的峰积分来计算A型琥珀酸盐中酸/游离碱的摩尔比。
HPLC分析确认样品琥珀酸盐形式A(810023-01-A)的纯度为99.5％(面积)。
在琥珀酸盐形式A加热至170℃并且然后冷却至室温之后，进行进一步的XRPD、TGA、DSC和1H NMR分析。结果示于图42至图45中。
加热之后，XRPD(图42)确认结晶的形式仍为A型琥珀酸盐。
在TGA曲线(图43)中，观察到高达140℃的重量损失为2.6％，这很可能是由于加热样品在进一步的TGA试验之前暴露于空气中时表面吸附的湿气引起的。加热实验之后，TGA分析进行约4.5h。加热样品的重量损失(2.6％)比最初观察到的重量损失(1.9％)高，表明A型琥珀酸盐的吸湿性在热处理后可稍微增加。
在DSC曲线(图44)中，仅观察到在182.7℃(开始)的一处吸热。
在NMR分析(图45)中，仍然观察到琥珀酸/游离碱的摩尔比为0.9:1。
根据上述结果，A型琥珀酸盐鉴定为无水物。
平衡溶解度
在室温测量形式A在水中的平衡溶解度。在室温将固体悬浮进入H2O(约800rpm)中。24h之后，将悬浮液离心(10000rpm,5min)，然后过滤(0.45μm PTFE膜)。通过HPLC分析上清液(丢弃前几滴)并且测量pH。通过XRPD分析残留固体。测量的形式A的溶解度分别为14.3mg/mL。
XRPD分析显示溶出实验期间形式A没有形式变化(图46)。
固态稳定性
形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐样品在80℃储存一天，在25℃在60％RH下和在40℃在75％RH下储存一周。然后使用XRPD和HPLC对所有样品进行表征，结果汇总于表18中。
在任何条件下，都未观察到形式A的形式变化或HPLC纯度降低，表明形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐具有良好的固态稳定性。XRPD分析结果示于图47中。
表18.形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的固体稳定性评价总结
吸湿性
为了研究固体形式稳定性与湿度的关系，在25℃在0％RH和95％RH之间采集形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的DVS等温线图。
示于图48的形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的DVS图表明，在25℃/80％RH为0.14％的吸水率，表明形式A不吸湿。
图49中所示的XRPD分析显示，DVS分析没有导致形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的任何形式变化。
偏光显微镜
记录PLM图像以研究形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐的形态。如图50所示，形式A由棒状晶体构成。
结论
根据以上所有结果，发现形式A的N-(3-(5-((1-乙基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-3-(嘧啶-5-基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺单琥珀酸盐是稳定、非吸湿性的结晶形式，其适于药物用途。
除本申请所述的内容外，还根据前述描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员来说是明显的。这样的修改也意在落入所附权利要求的范围内。本申请中引用的每篇参考文献，包括所有专利、专利申请和出版物，通过整体引用并入本申请。