阅读说明：本技术 木犀草素促进头孢噻呋渗透性的应用 (Application of luteolin in promoting ceftiofur permeability ) 是由 刘明春 王如霞 康芷若 田春莲 张徳显 于 2020-08-21 设计创作，主要内容包括：本发明属于医药技术领域,具体涉及木犀草素促进头孢噻呋渗透性的应用。以4周龄健康雏鸭的一段空肠,建立离体外翻肠囊模型,制备外翻肠囊,检测其肠活性；建立头孢噻呋和木犀草素的HPLC检测方法,通过HPLC法检测木犀草素和头孢噻呋浓度,计算两者的表观渗透系数、吸收率和吸收速率参数,由此验证木犀草素能够促进头孢噻呋在生物体内的渗透性,提高其生物利用度。本发明为深入探究天然药物与化药联合应用时两者之间的相互作用奠定了理论基础。(The invention belongs to the technical field of medicines, and particularly relates to application of luteolin in promoting ceftiofur permeability. Establishing an in-vitro intestine turning capsule model by using a section of jejunum of a healthy duckling at the age of 4 weeks, preparing an intestine turning capsule, and detecting the intestinal activity of the intestine turning capsule; establishing an HPLC detection method for ceftiofur and luteolin, detecting the concentrations of the luteolin and the ceftiofur by an HPLC method, and calculating the apparent permeability coefficient, the absorption rate and the absorption rate parameters of the luteolin and the ceftiofur, thereby verifying that the luteolin can promote the permeability of the ceftiofur in the living body and improving the bioavailability of the ceftiofur. The invention lays a theoretical foundation for deeply exploring the interaction between the natural medicine and the chemical medicine when the natural medicine and the chemical medicine are applied in a combined way.)

木犀草素促进头孢噻呋渗透性的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及木犀草素对于头孢噻呋在鸭空肠渗透性的影响。

背景技术

头孢噻呋具有较强的杀菌力、较广的抗菌谱、较小的毒性作用、较少的过敏反应等优点，在兽医临床广泛应用于肉牛、奶牛、猪、羊、禽等细菌性疾病的防治。口服头孢噻呋后，主要在肠道进行吸收。相关研究表明，头孢噻呋在鸭体内的生物利用度<90％，属于低渗透性药物，头孢噻呋的生物利用度低可能与肠黏膜上的外排转运蛋白有关，尤其是P-糖蛋白。

木犀草素是许多植物体内含有的一种天然化合物，特别是人们平时食用的果蔬中就含有大量的木犀草素。由于它具有抑菌、抗病毒、免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等药理作用，可以对疾病进行预防和治疗。故人们可以通过改变饮食，来决定摄入木犀草素的量，达到减少疾病的发生。目前为止，尚未见有关木犀草素等黄酮类化合物对头孢噻呋在鸭肠道吸收影响的相关报道。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了木犀草素的新的应用，即木犀草素在促进头孢噻呋渗透性的应用。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

木犀草素促进头孢噻呋渗透性的应用。

上述技术方案中，进一步地，所述应用为木犀草素促进头孢噻呋在禽类肠道的吸收。

上述技术方案中，进一步地，所述禽类为鸭。

本发明的有益效果：本发明首次提出了将木犀草素应用于生物体内，促进头孢噻呋在生物体内的渗透性，使得头孢噻呋吸收增多，生物利用度提高，更好地发挥药效，为深入探究天然药物与化药联合应用时两者之间的相互作用奠定了理论基础。

附图说明

图1浆膜液终体积随培养时间的变化趋势示意图。

图2不同组别头孢噻呋在鸭空肠的表观渗透系数比较图。

图3不同组别的头孢噻呋在鸭空肠吸收率(％)随时间变化趋势。

图4不同组别头孢噻呋在鸭空肠吸收速率随时间变化趋势图。

具体实施方式

为使得本发明的发明目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而非全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

下述实施例中采用雏鸭的离体外翻肠囊法进行探究，以4周龄健康雏鸭的一段空肠，建立离体外翻肠囊模型，制备外翻肠囊，检测其肠活性；建立头孢噻呋和木犀草素的HPLC检测方法，通过HPLC法检测木犀草素和头孢噻呋浓度，计算两者的表观渗透系数、吸收率和吸收速率参数，由此验证木犀草素能够促进头孢噻呋在生物体内的渗透性。该方法试验条件可控性强，试验周期短，简单易行，试验数据具有良好的体内相关性。

下述实施例中使用的盐酸头孢噻呋，纯度92.1％，购自于齐鲁动物保健品有限公司；去呋喃甲酰基头孢噻呋(DFC)标准品，纯度98.0％，购自于sigma公司；木犀草素标准品，纯度为98％，购自于上海普瑞通生物科技有限公司；二硫赤鲜醇(DTE)，纯度99.0％，生工生物工程(上海)股份有限公司。

实施例1

本实施例采用了建立鸭离体的外翻肠囊模型，考察口服头孢噻呋与木犀草素在肠道吸收情况。

具体步骤如下：

(1)配制Krebs液。精密称取氯化钠8.050g、氯化镁和氯化钙各0.101g、氯化钾0.203g于100mL烧杯中，用灭菌的三蒸水使其充分溶解，作为A液；精密称取磷酸二氢钾0.203g、磷酸氢二钠1.338g于100mL烧杯中，用灭菌后的三蒸水使其充分溶解，作为B液，将A液和B液充分混合后，用灭菌的三蒸水定容至1L，配制Krebs液，备用。

(2)配制含有木犀草素的200μg/mL盐酸头孢噻呋溶液。精密称取0.1086g盐酸头孢噻呋，用Krebs液溶解，超声片刻使盐酸头孢噻呋完全溶解后，定容至500mL，取洁净的50mL量瓶备用，精密称取适量木犀草素于50mL量瓶中，利用200μg/mL盐酸头孢噻呋溶液进行溶解，使得木犀草素的终浓度分别为1MIC(78μg/mL)、1/2MIC(39μg/mL)。

(3)配制酚红溶液。精密称取0.0080g的酚红，用Krebs液溶解，超声片刻待其完全溶解后，将其定容至100mL，使得酚红溶液终浓度为80μg/mL。

(4)将预先配制好的含木犀草素的头孢溶液作为试验组，将不含木犀草素的同浓度的盐酸头孢噻呋溶液作为空白对照组，将其分别倒入广口三角瓶中，放入42±0.5℃水浴恒温振荡器中预热并持续通入95％O₂+5％CO₂混合气体。

(5)将生理盐水放入42±0.5℃数显恒温水浴锅中预热。

(6)将三个盛有适量Krebs液的玻璃培养皿(直径15cm)和酚红溶液放在42±0.5℃加热板上预热。

(7)试验前将鸭禁食12h，自由饮水。

(8)取一只健康活泼的4周龄金定雏鸭，心脏注射空气致死，迅速用手术剪将腹腔打开一个小口。找到空肠，用手术剪截取长度为10cm的肠段，动作轻柔地去除肠系膜及脂肪，用生理盐水淋洗干净，将内容物挤出，利用灭菌的细玻璃棒将肠段外翻，整个过程动作要轻要快，保证肠系膜的完整性与活性。

(9)用细绳将肠段一侧扎紧，形成一个一端开口的肠腔，注射器抽取适量预热的酚红溶液注入肠腔，记录酚红溶液体积，将肠段另一端扎紧，即制成了外翻肠囊，肠囊称重，记录肠段重量。

(10)将制好的外翻肠囊放于“步骤(4)”的广口三角瓶中，将转速设置为100转/min，进行培养。

(11)于培养时间为20min、40min、60min、80min、100min、120min时取200μL肠囊内液于1.5mL离心管中，同时补充200μL事先预热好的Krebs液。

(12)培养结束后，取出肠段，抽取肠内溶液，用手术剪剪开肠段，记录其长和宽。

如图1所示，从图中趋势来看，含木犀草素的头孢噻呋试验组及不含木犀草素的头孢噻呋对照组在培养期间，肠囊浆膜液终体积随时间的延长而逐渐增加，证明肠囊在培养过程中活性良好。

实施例2

由于头孢噻呋进入肠道内能够快速转化为去呋喃甲酰基头孢噻呋(DFC)，因此本实施例采用了HPLC法检测DFC的浓度，并计算了其表观渗透系数，吸收率和吸收速率。

DFC检测方法的色谱条件：(1)固定相：依利特ODS-C18(4.6mm×200mm，5μm)；(2)流动相：甲醇:0.01M醋酸铵溶液＝20:80；(3)检测波长266nm；(4)进样量20μL；(5)流速1mL/min；(6)柱温25℃。

样品的前处理：准确吸取100μL鸭外翻肠囊样品于2mL的离心管中，加入200μL的色谱乙腈，涡旋混合3min，13000rpm/min离心10min，将上清液转移2mL离心管中，向上清液中加入DTE-硼酸溶液100μL，50℃水浴15min，期间每间隔3min涡旋混匀10s，50℃氮气吹干，残渣用流动相(甲醇:0.01M醋酸铵溶液＝20:80)溶解，涡旋混5min，13000rpm/min离心10min，取上清液，经0.22μm的亲水PTFE针式滤器过滤，取滤液于样品瓶中，按照前述DFC的色谱条件进行分析。

从图2中可以看出，试验组与对照组相比，0.5MIC木犀草素试验组P_app差异显著，1MIC木犀草素试验组差异极显著；与0.5MIC木犀草素试验组比，1MIC木犀草素试验组P_app差异不显著，P_app在不同组间有明显不同，可推测出木犀草素对于盐酸头孢噻呋在空肠的渗透性有促进作用，且木犀草素浓度越大，影响效果越明显。

从图3中可以看出，试验组与对照组的盐酸头孢噻呋在肠囊培养期间，吸收率随培养时间的延长而逐渐增加，可见肠囊在培养120min之内仍具有良好的生物活性；且随着木犀草素的浓度增大，头孢噻呋在鸭空肠吸收率逐渐增大，可以推测出木犀草素可促进头孢噻呋在鸭空肠的吸收率。

从图4中可以看出，在培养100min时，肠囊对药物吸收速率最大，可见此时肠囊对盐酸头孢噻呋吸收效果最佳。

如图2～4可知，木犀草素能够促进头孢噻呋在鸭空肠的表观渗透系数、吸收率和吸收速率，证明了木犀草素能够促进头孢噻呋在鸭空肠的吸收，且随着木犀草素浓度的增加，其促进作用增强。

对于任何熟悉本领域的技术人员而言，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应仍属于本发明技术方案保护的范围内。