阅读说明：本技术 一种微生物凝胶琼脂培养基 (Microbial gel agar culture medium ) 是由 孙百莉 于 2020-07-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种微生物凝胶琼脂培养基。利用本发明制作的凝胶琼脂平板可吸收1mL样液,能直接用于样品检测,操作简便,检测效率高；整个接种过程均在常温条件下进行,不耐热菌和受损伤菌不会因为热激而死亡；有抑菌作用样品,高渗透压、高酸碱性样品可在培养基中扩散,有效稀释样品中的抑菌因素,检测结果与常规方法接近；接种后样品中的稀释液渗透到培养基中,样品中的微生物则留在平板表面,氧气充足,利于需氧和兼性厌氧菌的生长。(The invention discloses a microbial gel agar culture medium. The gel agar plate prepared by the invention can absorb 1mL of sample liquid, can be directly used for sample detection, and has simple and convenient operation and high detection efficiency; the whole inoculation process is carried out at normal temperature, and thermolabile bacteria and damaged bacteria can not die due to heat shock; the sample with the bacteriostatic action, the sample with high osmotic pressure and high acidity and alkalinity can be diffused in the culture medium, the bacteriostatic factors in the sample can be effectively diluted, and the detection result is close to that of the conventional method; after inoculation, the diluent in the sample permeates into the culture medium, and microorganisms in the sample are remained on the surface of the plate, so that sufficient oxygen is provided, and the growth of aerobic and facultative anaerobes is facilitated.)

一种微生物凝胶琼脂培养基

技术领域

本发明涉及一种培养基，具体涉及的是一种微生物凝胶琼脂培养基。

背景技术

目前微生物限度检测主要采用平板计数法，因琼脂凝固后无法完全吸收1mL样液，因此检测样品中卫生指标菌限度时采用混匀法，即吸取1mL样液加入到培养皿中，再倒入灭菌后冷却至45℃左右的琼脂培养基。琼脂培养基只能现用现配，无法商品化生产；检测者需要做大量的准备工作，包括刷洗，配制培养基，杀菌，处置废弃物等，检测效率低下；需要操作者对温度进行严格控制，温度过高不耐热微生物和受损伤微生物易死亡，造成检测值偏低，温度过低易造成琼脂凝固。致病菌的限度检测采用平板涂布法，即1mL样液涂布到3块分离平板上，检测效率低，且成本高。

快检产品因节省了操作者的准备时间，提高了检测效率，而受到检测者的青睐。目前市场上用于微生物限度检测的快检产品主要为快检纸片和凝胶测试片，这两种产品直接吸取1mL样液滴加到纸片和测试片上，没有对样液进行稀释，因此对有杀菌抑菌作用的样品，以及高渗透压，高酸碱性样品进行检测，检测值偏低。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种微生物凝胶琼脂培养基，该培养基中含有凝胶，利用本发明的凝胶琼脂培养基制作成的凝胶琼脂平板可吸收1mL样液，可直接用于样品检测，使用方便，检测结果准确。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

微生物凝胶琼脂培养基在琼脂培养基基础上，每升中添加10g-50g冷水可溶性凝胶，高压灭菌后，冷却至50℃左右倒平板。

所述冷水可溶性凝胶为黄原胶、海藻酸钠、瓜尔胶或刺槐豆胶中的一种。

所述的琼脂培养基为PCA培养基、VRBA培养基、VRBA-MUG培养基、XLD培养基、MAC培养基、HE培养基、PDA培养基、PALCAM培养基、CT-sMAC培养基、TCBS培养基、MYP培养基或VRBGA培养基。

在本发明的实施例中，采用的凝胶琼脂培养基为PCA凝胶琼脂培养基和Baird-Parker凝胶琼脂培养基。

上述的微生物凝胶琼脂培养基在微生物检测中的应用也是本发明保护的范围。

本发明提供一种微生物检测的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

1）制备凝胶琼脂平板

将凝胶琼脂培养基配制成溶液，高压灭菌后冷却至50℃左右倒平板，15mL-20mL/皿；

2）接种

制备好的样液选择2-3个适宜稀释度接种，吸取1mL样液滴加于凝胶琼脂平板表面，沿桌面混匀，静置30min使样液被培养基完全吸收，每个稀释度2个重复；

3）培养

接种后的平板，按照检测标准要求的温度和时间进行培养；

4）计数

培养结束后取出平板，按照检测标准要求进行计数。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

利用本发明制作的凝胶琼脂平板可吸收1mL样液，能直接用于样品检测；可利用灌装机进行批量灌装；使用者直接将1mL样液滴加于凝胶琼脂平板表面即可，操作简便，检测效率高；整个接种过程均在常温条件下进行，不耐热菌和受损伤菌不会因为热激而死亡；在致病菌微生物的限度检测中，一块平板即可吸收1mL样液，降低成本；平板中的培养基含量为15mL-20mL，有抑菌作用样品，高渗透压、高酸碱性样品可在培养基中扩散，有效稀释样品中的抑菌因素，检测结果与常规方法接近；接种后样品中的稀释液渗透到培养基中，样品中的微生物则留在平板表面，氧气充足，利于需氧和兼性厌氧菌的生长。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、PCA凝胶琼脂培养基的制备及应用

一、PCA凝胶琼脂培养基的制备

1、配制培养基

胰蛋白胨5.0g/L、酵母浸膏2.5g/L、葡萄糖1.0g/L、琼脂15.0g/L、黄原胶40.0g/L，水1000mL。

2、灭菌

121℃灭菌15min。

3、分装

冷却至50℃，倒平板，15mL-20mL/皿。

二、PCA凝胶琼脂培养基在微生物限度检测中的应用

1、接种

分别取10份样品，每份样品按无菌操作取25g于无菌均质袋中，加入225mL无菌生理盐水，以拍击式均质器均质1min，制成10^-1样液，再吸取1mL加入到9mL无菌生理盐水中，制成10^-2样液，以此做10倍梯度稀释，选2-3个适宜稀释度接种。吸取1mL样液滴加于凝胶琼脂平板表面，沿桌面混匀，静置30min待样液被平板完全吸收，每个稀释度2个重复。同时以常规法检测作为对照，按照GB 4789.2-2016标准进行操作。

2、培养

36℃±1℃培养48h±2h。

3、计数

培养结束后按照GB 4789.2-2016标准进行计数。

4、统计

以凝胶琼脂培养基和常规法测得的各样品菌落总数做t-检验，以P＜0.05存在显著差异。

表1为PCA凝胶琼脂培养基与常规法检测10份样品菌落总数结果

（单位：cfu/g）

注：1：火腿肠；2：酱油；3：醋；4：牛奶；5：蜜饯；6：鱿鱼丝；7：冷冻水饺；8：挂面；9：辣椒酱；10：调味蒜泥

实验证明PCA凝胶琼脂培养基与常规法检测10份样品菌落总数结果无显著差异（P=0.295＞0.05），PCA凝胶琼脂培养基可代替常规方法检测样品菌落总数。

实施例2、Baird-Parker凝胶琼脂培养基的制备及应用

一、Baird-Parker凝胶琼脂培养基的制备

1、配制培养基

胰蛋白胨10.0g/L、牛肉膏5.0g/L、酵母膏1.0g/L、丙酮酸钠10.0g/L、甘氨酸12.0g/L、氯化锂（6H₂O）5.0g/L、琼脂20.0g/L、黄原胶40.0g/L，水1000mL。

2、灭菌

121℃灭菌15min，冷却至50℃，每95mL培养基中添加5mL亚碲酸钾卵黄増菌液，混匀。

3、分装

倒平板，15mL-20mL/皿。

二、Baird-Parker凝胶琼脂培养基在金黄色葡萄球菌限度检测中的应用

1、接种

金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 6538接种至BHI培养基中，36℃±1℃ 200rpm培养24h备用。分别取10份样品，每份样品按无菌操作取25g于无菌均质袋中，加入225mL无菌生理盐水，以拍击式均质器均质1min，制成10^-1样液，取1接种环活化的金黄色葡萄球菌菌液，接种至10^-1样液中，再吸取1mL加入到9mL无菌生理盐水中，制成10^-2样液，以此做10倍梯度稀释，选择2-3个适宜稀释度接种。吸取1mL样液滴加于Baird-Parker凝胶琼脂平板表面，沿桌面混匀，静置30min待样液被平板完全吸收。同时以常规检测作为对照，按照GB 4789.10-2016标准第二法进行。

2、培养

36℃±1℃培养48h±2h。

3、计数

培养结束后计数黑色有透明环菌落，按照GB 4789.10-2016标准第二法进行计数。

4、统计

以凝胶琼脂培养基和常规法测得的各样品金黄色葡萄球菌数做t-检验，以P＜0.05存在显著差异。

表2为Baird-Parker凝胶琼脂培养基与常规法检测10份样品金黄色葡萄球菌结果

（单位：cfu/g）

注：1：紫菜；2：饼干；3：蜜饯；4：果汁；5：酱油；6：奶粉；7：速冻饺子；8：雪糕；9：火腿肠；10：薯片

实验证明Baird-Parker凝胶琼脂培养基与常规法检测10份样品金黄色葡萄球菌结果无显著差异（P=0.436＞0.05），Baird-Parker凝胶琼脂培养基可代替常规方法检测样品中金黄色葡萄球菌。