阅读说明：本技术 包含托法替尼的局部调配物 (Topical formulations comprising tofacitinib ) 是由 陆光伟 陈志明 廖玲瑛 刘凡纶 廖诗芬 陈昭雄 高于涵 陈誉尹 于 2019-01-22 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种局部调配物,其包含(a)治疗有效量的托法替尼；(b)至少一种溶剂；和(c)任选地一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。还提供一种在施用所述局部调配物的个体中治疗和/或预防自身免疫疾病的方法。(The present invention provides a topical formulation comprising (a) a therapeutically effective amount of tofacitinib; (b) at least one solvent; and (c) optionally one or more other pharmaceutically acceptable excipients. Also provided is a method of treating and/or preventing an autoimmune disease in an individual administered the topical formulation.)

包含托法替尼的局部调配物

技术领域

本发明涉及包含托法替尼的局部调配物。本发明还涉及所述局部调配物的用途，所述局部调配物用于治疗自身免疫病症，并且确切地说，用于治疗白癜风和特应性皮炎。

背景技术

托法替尼(3-((3R,4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基)-3-氧代丙腈)具有化学式C₁₆H₂ON₆O和以下结构式(I)。

式(I)

托法替尼适用作JAK抑制剂或免疫抑制剂，用于器官移植、异种移植、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、I型糖尿病以及糖尿病并发症、癌症、哮喘、特应性皮炎、自身免疫甲状腺病症、溃疡性结肠炎、克罗恩病(Crohn's disease)、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、白血病和将需要免疫抑制的其它适应症。

目前，柠檬酸托法替尼已在美国以商标名

获批。

为含8mg柠檬酸托法替尼(相当于5mg托法替尼)的立即释放片剂形式，且一天施用两次。也可用作每日一次片剂(其称作

XR)。

XR以含17.77mg柠檬酸托法替尼(相当于11mg托法替尼)的缓释片剂形式获批。

和

XR片剂均可被提供用于口服施用，并且适用于治疗类风湿性关节炎。

在口服施用柠檬酸托法替尼之后已观察到一些不良副作用，如上呼吸道感染、头痛、腹泻和感冒症状。已提出托法替尼的局部剂型以用于局部治疗并且使这些副作用降到最低。美国专利第8,541,426号公开了一种用于治疗干眼病的局部托法替尼组合物。美国专利申请公开第20120258976号公开了一种用于治疗牛皮癣的局部软膏调配物，其包含托法替尼游离碱和油醇。

然而，US 8,541,426中的组合物是用于眼科施用的局部调配物，并且因此其对于皮肤施加的功效和安全性是未知的。US 20120258976提供在施用局部软膏调配物之后的体外经皮通量数据以生成累积渗透和通量概况，但很少提及托法替尼在皮肤中的保留率的信息。因此，无法知道托法替尼是否可在施用之后提供延长的局部治疗效果。此外，这些现有技术组合物主要用于治疗眼部病症或牛皮癣，并且因此其对其它皮肤病的治疗功效并不明确。

考虑到以上文献的局限性，本领域中需要具有所需保留率以及其它物理化学特性且适于自身免疫疾病的托法替尼的局部调配物。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种局部调配物，其包含(a)治疗有效量的托法替尼；(b)至少一种溶剂；和(c)任选地，一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。

本发明的另一个目的是提供一种局部调配物，其包含(a)治疗有效量的柠檬酸托法替尼；(b)二甲亚砜；(c)任选地，丙二醇；(d)任选地，增稠剂；(e)任选地，抗氧化剂；以及(f)任选地，一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。

本发明的再另一个目的是提供一种治疗和/或预防个体的自身免疫疾病的方法，其包含向所述个体施用本发明的局部调配物。

本领域的技术人员在随附附图的以下段落中描述针对本发明实施的详细技术和优选实施例，以很好地理解所主张的发明的特征。

附图说明

图1为显示在体外渗透/保留研究中使用的流通扩散池的示意图；

图2为显示托法替尼在皮肤和受体(receiver)中的归一化分配结果的统计条形图；

图3为显示在表皮和真皮中托法替尼浓度随时间推移的统计条形图；

图4为显示在受体中托法替尼浓度随时间推移的统计条形图；

图5显示使用本发明的托法替尼局部调配物治疗的自基线、8周和12周患有面部白癜风的男性个体的相片；和

图6显示使用本发明的托法替尼局部调配物治疗的自基线、8周和12周患有面部白癜风的女性个体的相片。

具体实施方式

定义

如本文所用，术语“托法替尼”是指呈游离碱、药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、异构体、类似物和其混合物形式的托法替尼。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指缓解或减少疾病的一种或多种症状的量。

如本文所用，术语“降解产物”是指可在药品的制造、运输和储存期间产生且可影响医药产品功效的非所需化学物质或杂质。其可响应于光、温度、pH和湿度的变化或归因于活性成分的固有特征(例如其与赋形剂的反应或与包装接触)而形成。

另外，除非本文中另外说明，否则本说明书和权利要求书中所用的术语“一(a/an)”、“所述(the)”或类似者应理解为涵盖单数形式和复数形式两者。

如上文所描述，本发明提供一种具有改进的物理化学特性的局部调配物，其有益于治疗自身免疫疾病。

本发明的局部调配物包含(a)治疗有效量的托法替尼；(b)至少一种溶剂；以及(c)任选地，一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。

在一些实施例中，局部调配物可调配成不同剂型，例如溶液、悬浮液、乳膏、软膏、洗剂和凝胶。优选地，局部调配物为溶液或凝胶。更优选地，局部调配物为凝胶。

在一些实施例中，托法替尼呈药学上可接受的盐的形式。此类盐包括但不限于，柠檬酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、草酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、棕榈酸盐和酒石酸盐。优选地，药学上可接受的盐为柠檬酸盐。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，调配物中的托法替尼以约0.1％w/w到约5％w/w，优选约1％w/w到约4％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，溶剂可为例如二甲亚砜、丙二醇、甘油、聚乙二醇、异丙醇、甲醇、吡咯烷酮羧酸钠、2-羟丙基-γ-环糊精、丙酮、纯化水、乙醇、1-丙醇、丁二醇、2-(2-乙氧基乙氧基)乙醇(二乙二醇单***(transcutol))或其组合。优选地，托法替尼易溶于溶剂中。更优选地，溶剂为二甲亚砜。

在一个实施例中，溶剂为二甲亚砜与丙二醇、乙醇和水中的至少一者的组合。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，溶剂以约40％w/w到约99.9％w/w，优选约70％w/w到约99％w/w，更优选约90％w/w到约97％w/w的浓度存在。

本发明的局部调配物可包括一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。举例来说，药学上可接受的赋形剂可选自增稠剂、稳定剂、抗氧化剂、螯合剂、油性材料、乳化剂、渗透促进剂、pH调节剂、防腐剂、抗微生物剂、遮光剂、芳香剂、着色剂、胶凝剂、保湿剂、表面活性剂等。

本发明的调配物中所用的药学上可接受的赋形剂可以超过一种方式起作用。举例来说，增稠剂还可充当胶凝剂、渗透促进剂等，且溶剂还可充当稳定剂(例如，抑制托法替尼的总降解产物)。

在一个实施例中，本发明的局部调配物不包括油醇。

在一些实施例中，局部调配物包含增稠剂。优选地，增稠剂可以是例如纤维素衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆聚合物、卡波姆衍生物、麦芽糊精、聚葡萄糖、葡萄糖结合剂(dextrate)、羧基聚亚甲基、聚乙烯醇、泊洛沙姆、聚乙二醇或其组合。更优选地，增稠剂为羟丙基纤维素。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，增稠剂以约0.05％w/w到约5％w/w，优选约0.1％w/w到约4％w/w，更优选约1％w/w到约3％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，局部调配物包含胶凝剂。优选地，胶凝剂可以是例如纤维素衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆聚合物、卡波姆衍生物、麦芽糊精、聚葡萄糖、葡萄糖结合剂、羧基聚亚甲基、聚乙烯醇、泊洛沙姆、聚乙二醇或其组合。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，胶凝剂以约0.05％w/w到约5％w/w，优选约0.1％w/w到约4％w/w，更优选约1％w/w到约3％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，局部调配物包含抗氧化剂。优选地，抗氧化剂可以是例如丁基羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、维生素C、维生素E、维生素A、叶黄素、番茄红素、棕榈酸视黄酯、偏亚硫酸氢钾、偏亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠五水合物、3,4-二羟基苯甲酸、没食子酸丙酯、α-硫辛酸、棕榈酸抗坏血酸酯、焦亚硫酸钠、泛醌、硒或其组合。更优选地，抗氧化剂为丁基羟基茴香醚。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，抗氧化剂以约0.05％w/w到约5％w/w，优选约0.1％w/w到约3％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，局部调配物包含螯合剂。优选地，螯合剂可以是例如乙二胺四乙酸(EDTA)、EDTA的盐、去铁胺B、去铁胺、二硫代氨基甲酸钠、青霉胺、喷替酸钙、喷替酸的钠盐、二巯琥珀酸、曲恩汀(trientine)、氮基三乙酸、反式-二氨基环己烷四乙酸(DCTA)、二亚乙基三胺五乙酸、双(氨基乙基)乙二醇醚-N,N,N',N'-四乙酸、亚氨基二乙酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸或其组合。更优选地，螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，螯合剂以约0.005％w/w到约0.5％w/w，优选约0.01％w/w到约0.1％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，局部调配物包含防腐剂。优选地，防腐剂可以是例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲醇、苯甲酸、苯酚或其组合。更优选地，防腐剂为对羟基苯甲酸甲酯。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，防腐剂以约0.005％w/w到约2％w/w，优选约0.05％w/w到约0.5％w/w的浓度存在。

为了治疗皮肤相关自身免疫病症，需要开发一种局部调配物，其提供托法替尼在皮肤中的渗透和保留的平衡。治疗剂易于通过角质层渗透到达目标部位(例如，皮肤病症可能发生的真皮或表皮)并且保留在目标皮肤层中以产生局部治疗效果。本发明的局部调配物实现渗透和保留的最优平衡，且展现皮肤中的高保留率。

在一些实施例中，当将本发明的局部调配物施加到个体的皮肤时，在施加后4小时、优选地8小时并且最优选地12小时，皮肤中所保留的托法替尼的量大于通过皮肤渗透到血液或体循环中的量。

在一个实施例中，当将局部调配物施加到个体的皮肤时，在施加后8小时，皮肤中所保留的托法替尼的量为通过皮肤渗透到血液或体循环中的量的至少约4.7倍，优选地至少约5倍，更优选地至少约10倍，并且最优选地至少约100倍。

本发明的局部调配物可归因于其固有特征或制造、运输和储存期间的光、温度、pH或湿度的变化而经历降解以形成降解产物。即使少量降解产物也可能影响药物安全性，由于可能对患者引起不良作用。因此，需要防止降解产物的形成，且延长托法替尼产物的存放期。

本发明的局部调配物可以使托法替尼稳定并且防止调配物中形成降解。

在优选实施例中，在调配物在室温(即，20℃到27℃)下储存至少1个月，优选地至少3个月，优选地至少4个月，优选地至少5个月，优选地至少6个月，并且更优选地至少8个月之后，托法替尼调配物的总降解产物小于最初存在的托法替尼的2％。

在一个实施例中，本发明的局部调配物包含(a)治疗有效量的柠檬酸托法替尼；(b)二甲亚砜；(c)任选地，丙二醇；(d)任选地，增稠剂；(e)任选地，抗氧化剂；以及(f)任选地，一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。在一些实施例中，局部调配物包含按局部调配物的总重量计，(a)约0.1％w/w到约5％w/w的柠檬酸托法替尼；(b)约1％w/w到约80％w/w的二甲亚砜；(c)任选地，约10％w/w到约60％w/w的丙二醇；(d)任选地，约0.05％w/w到约5％w/w的羟丙基纤维素；(e)任选地，约0.05％w/w到约5％w/w的丁基羟基茴香醚；以及(f)任选地，一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。

在一个实施例中，局部调配物是乳膏调配物。乳膏易于在皮肤的表面上扩散(即，易于施加)、与软膏相比较不油腻、易于水洗、易于擦掉、适合于敏感、干燥皮肤并且还适合于急性损害。

乳膏为油相和水相的半固体乳液。其分成两种类型：水包油(O/W)形式，其由分散于连续水相中的油的小液滴构成，和油包水(W/O)形式，其由分散于连续油相中的水的小液滴构成。水包油乳膏更舒适且为美容上可接受的，因为其较不油腻且更容易用水洗掉。油包水乳膏更难以处置，但并入到乳膏中的许多药物为疏水性且相比从水包油乳膏更易于从油包水乳膏释放。油包水乳膏也更为保湿，因为其提供油性障壁，所述油性障壁减少角质层，即皮肤的最外层的水分损失。乳化剂用于乳膏中以将水与油混合。由于水和油并不混合而是保持分离，因此乳化剂为必需的，以形成将水和油保持在一起的均质混合物。

在一个实施例中，本发明的局部乳膏调配物包含(a)治疗有效量的托法替尼；(b)至少一种溶剂；(c)油性材料；(d)乳化剂；以及(e)任选地，一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。优选地，所述溶剂为二甲亚砜与水的组合(即，DMSO水溶液)。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，局部乳膏调配物中的托法替尼以约0.1％w/w到约5％w/w，优选约1％w/w到约4％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，局部乳膏调配物中的溶剂以约40％w/w到约99％w/w，优选约60％w/w到约95％w/w，更优选约75％w/w到约90％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，局部乳膏调配物包含油性材料。优选地，油性材料可以是例如植物油、矿物油、矿脂、中链甘油三酯(MCT)油、大豆油、芝麻籽油、花生油、葵花油、棉籽油、蓖麻油、橄榄油、动物油、脂肪酸、合成油、天然和合成甘油酯、固醇酯、脂肪醇、硅油或其组合。更优选地，油性材料为矿物油、中链甘油三酯(MCT)油或蓖麻油。最优选地，油性材料为蓖麻油。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，油性材料以约0.05％w/w到约60％w/w，优选约1％w/w到约55％w/w，更优选约10％w/w到约50％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，局部乳膏调配物包含乳化剂。优选地，乳化剂可以是例如鲸蜡硬脂醇、脱水山梨糖醇异硬脂酸酯、硬脂酸甘油酯、PEG-100硬脂酸酯、橄榄油酸钾、聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯、癸基葡糖苷、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物或其组合。更优选地，乳化剂是丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物。

在一些实施例中，按调配物的总重量计，乳化剂以约0.05％w/w到约20％w/w，优选约1％w/w到约15％w/w的浓度存在。

在一些实施例中，本发明的局部乳膏调配物包含(a)约0.1％w/w到约5％w/w的托法替尼；(b)约40％w/w到约99％w/w的溶剂；(c)约0.05％w/w到约60％w/w的油性材料；(d)约0.05％w/w到约20％w/w的乳化剂；以及(e)任选地，一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。优选地，所述溶剂为二甲亚砜与水的组合。

在一些实施例中，本发明的局部乳膏调配物包含(a)约1％w/w到约4％w/w的托法替尼；(b)约60％w/w到约95％w/w的溶剂；(c)约1％w/w到约55％w/w的油性材料；(d)约1％w/w到约15％w/w的乳化剂；以及(e)任选地，一种或多种其它药学上可接受的赋形剂。优选地，所述溶剂为二甲亚砜与水的组合。

考虑到本发明的局部调配物具有极佳的托法替尼的保留率和稳定性，其可为皮肤相关自身免疫疾病提供更有效的治疗。此外，其还可以是非皮肤相关自身免疫疾病的口服疗法的替代方案。

因此，本发明的局部调配物可以用于治疗和/或预防自身免疫疾病，其包括白癜风、特应性皮炎、牛皮癣、获得性大疱性表皮松解症、寻常型天疱疮、IgA介导的大疱性皮肤病、系统性红斑狼疮、斑秃、卟啉病、硬皮病、多发性硬化症、类风湿性关节炎和I型糖尿病的皮肤并发症。

白癜风是由于表皮中的黑素细胞的功能缺失和/或死亡引起皮肤色素脱失，在受影响的皮肤上产生乳白色斑点的病况。皮肤变浅的病变通常对日光、过早老化和可能的皮肤癌的破坏影响更为敏感。白癜风的治疗选择包括药物治疗、手术疗法、光疗法和辅助治疗。据报道，局部皮质类固醇疗法具有高达56％的成功率；然而，长期使用皮质类固醇可导致皮肤变薄、伸展纹和血管扩张。

在一个实施例中，本发明的局部调配物用于治疗和/或预防白癜风，作为局部皮质类固醇疗法的替代方案。

特应性皮炎(AD)由角质层的缺损引起，所述角质层是位于皮肤的最外部分中的保护壁。AD为慢性/复发性发炎皮肤病，其特征在于强烈的瘙痒(例如严重发痒)以及脱皮和干性湿疹性病变。类固醇剂可充当消炎剂和免疫抑制剂，且在治疗特应性皮炎方面具有积极作用，但如果长时间使用，那么可产生副作用，如皮肤功能减弱、全身性激素的症状和毒性。

在一个实施例中，本发明的局部调配物用于治疗和/或预防特应性皮炎，作为类固醇疗法的替代方案。

在一些实施例中，局部调配物为每日一次或每日两次调配物。也就是说，将调配物一天一次或一天两次施加到个体的皮肤。

在一些实施例中，托法替尼为调配物中的唯一活性成分。这些实施例可包括可在现有技术调配物中用作活性成分的成分，只要出于本申请中所提供的调配物的目的，所提供的调配物中的这些成分的量处于亚治疗水平即可。本发明还提供其中托法替尼不是唯一活性成分且可与其它活性成分组合的实施例。

在一些实施例中，以约0.5mg/cm²到约60mg/cm²的每日治疗有效剂量向皮肤施用托法替尼。

本发明还提供一种用于治疗和/或预防个体自身免疫疾病的方法，其包含向所述个体施用本发明的局部调配物。

优选地，自身免疫疾病是白癜风或特应性皮炎。

在下文中，将参考以下实例进一步说明本发明。然而，这些实例仅出于说明性目的而提供，但不以任何方式限制本发明的范围。

[实例1]柠檬酸托法替尼的溶解度

在调配物开发过程中进行溶解度研究。将过量柠檬酸托法替尼添加到表1中列出的各种溶剂中。将悬浮液搅拌过夜，并且通过0.22μm过滤器过滤。将滤液稀释到适合的浓度。通过HPLC方法测定每一溶剂中柠檬酸托法替尼的浓度。柠檬酸托法替尼在各种溶剂中的溶解度结果汇总在表1中。

表1.柠檬酸托法替尼的溶解度

结果显示柠檬酸托法替尼易溶于二甲亚砜(DMSO)中，微溶于水和丙二醇(PG)中，且极微溶于乙醇中。为了制备所需浓度的托法替尼局部调配物(32mg/mL)，选择DMSO作为溶剂。其还显示柠檬酸托法替尼的溶解度为pH依赖性的。柠檬酸托法替尼的水性溶解度随着pH从1增加到3而降低，在pH 4.5时略微增加，且在高于pH 6.8时保持相对低。

[实例2]柠檬酸托法替尼的相容性研究

在调配物开发早期，为了理解柠檬酸托法替尼与赋形剂之间的潜在不相容性，进行若干相容性测试。具体来说，在60℃的条件下在腔室中将含有溶解的柠檬酸托法替尼与赋形剂的混合物(如下表2中所指定)的带橡胶塞的小瓶培育七天。通过HPLC进一步分析混合物中的总降解产物。

表2.柠檬酸托法替尼的相容性研究

相容性研究结果显示于表2中。尽管柠檬酸托法替尼在DMSO中展现良好溶解性，但柠檬酸托法替尼在DMSO中的相容性可能是一个问题。观察到DMSO诱导柠檬酸托法替尼的降解，产生4.17％的总降解产物。出人意料地，通过添加丙二醇、乙醇或异丙醇(IPA)来解决相容性问题。发现在丙二醇、乙醇或异丙醇存在下，显著抑制了柠檬酸托法替尼在DMSO中的总降解产物。因此，DMSO与其它溶剂/赋形剂(如PG、乙醇或IPA)的组合可用于调配物中以溶解柠檬酸托法替尼，并且同时减少柠檬酸托法替尼在DMSO中的总降解产物。

[实例3]制备托法替尼局部调配物

基于相容性研究结果，如下设计柠檬酸托法替尼的预备调配物(表3)。DMSO或DMSO与PG、乙醇和/或水的组合用作溶剂以溶解活性成分柠檬酸托法替尼。所有柠檬酸托法替尼都应完全溶解为澄清溶液。调配物可利用一种或多种药学上可接受的赋形剂来改变其特征或改变其剂型。本文中，使用氢氧化钠作为pH调节剂。适当地添加足量(q.s.)的0.5N氢氧化钠溶液以达到所需的pH。丁基羟基茴香醚用作抗氧化剂以抑制调配物的氧化。羟丙基纤维素用作增稠剂以控制流变特性以调配溶液或凝胶形式。油相和水相是半固体剂型的关键组分。其分成两种类型：水包油(O/W)形式，其由分散于连续水相中的油的小液滴构成，和油包水(W/O)形式，其由分散于连续油相中的水的小液滴构成。乳化剂为通常具有极性或亲水性(即，水溶性)部分和非极性(即，疏水性或亲脂性)部分的化合物。乳化剂为通过增加其动力学稳定性使乳液稳定的物质。

表3.托法替尼局部调配物的成分

成分	功能
		柠檬酸托法替尼	有效成分
DMSO	溶剂
		丙二醇	溶剂
乙醇	溶剂
		0.5N NaOH	pH调节剂
羟丙基纤维素	增稠剂
		丁基羟基茴香醚	抗氧化剂
蓖麻油	油性材料(油相)
		水	水相/溶剂
丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物	乳化剂

表4显示二十种基于DMSO的托法替尼局部调配物(P1到P20)和作为比较实例的软膏调配物(C1)。C1软膏公开于US 20120258976中，其含有托法替尼的游离碱。

表4.托法替尼局部调配物

表4.(续)托法替尼局部调配物

表4.(续)托法替尼局部调配物

表4.(续)托法替尼局部调配物

通过以下步骤制备基于DMSO的调配物：

1.制备API/DMSO溶液：将活性剂(托法替尼游离碱或柠檬酸盐)溶解于DMSO中；

2.制备增稠/胶凝溶液：视需要将增稠剂或胶凝剂溶解于溶剂(例如，丙二醇和/或乙醇)中，

3.制备螯合溶液：视需要将螯合剂溶解于氢氧化钠溶液中；

4.制备API/DMSO混合溶液：视需要将抗氧化剂、螯合溶液、防腐剂、油性材料、乳化剂、或其它药学上可接受的赋形剂添加到API/DMSO溶液中；

5.视需要将API/DMSO混合溶液添加到水中；以及

6.视需要将API/DMSO混合溶液添加到增稠/胶凝溶液中；以及

7.保持搅拌直到所有组合物均质为止。

[实例4]托法替尼局部调配物的稳定性研究

将九种调配物(P1到P6、P8、P9和C1)在25℃/60％相对湿度(RH)和40℃/75％相对湿度下经历稳定性研究至少1个月。九种调配物的一个月稳定性结果汇总在表5中。还评估物理和化学稳定性。延长时段的调配物(P8)的稳定性数据收集于表6中。

表5.九种调配物的稳定性

表5.(续)九种调配物的稳定性

C1软膏调配物显示较差稳定性，且总降解产物的重量百分比为6.14％。当与C1软膏调配物相比时，其它调配物，P1-P6、P8和P9显示更好的稳定性。总之，基于DMSO的调配物(P1到P6、P8和P9)展现比软膏调配物(C1)高的稳定性，无论托法替尼呈游离碱还是柠檬酸盐形式。此外，调配物P8的稳定性结果揭露在超过1个月时的很好稳定性。总降解产物的重量百分比在25℃/60％相对湿度(RH)下持续8个月仅为0.77％。

然而，在P1、P2和P6中观察到结晶沉淀。P3归因于其自由流动的特性而较不优选。当调配物倾向于自由流动时在病变部位上施加是不方便的。因此，P4、P5、P8和P9为优选的调配物候选物。

[实例5]托法替尼局部调配物的体外渗透/保留研究

使多种含有托法替尼游离碱或柠檬酸盐的调配物经历体外渗透/保留研究。一般来说，无毛发天竺鼠和猪均为用于预测人类皮肤吸收率的公认模型。相比之下，使用具有毛发的实验动物(如大鼠、兔和天竺鼠)的其它模型通常导致高估人类皮肤吸收率。获自台湾畜牧公司(Taiwan Livestock Company)中的七个月大的猪(长白猪(Landrace pig)和杜洛克猪(Duroc pig)杂交品种)的侧皮用作渗透膜。垂直扩散池(USP/NF<725>，图1)应用于渗透/保留测试。具体来说，在取750μm厚度的皮之前剪去皮肤上的毛发。确认皮肤的电阻以确保皮肤完整性。将皮肤放在与受体(receptor)相接触的扩散池的顶部上，所述扩散池填充有含20％聚乙二醇300(PEG 300)(在37℃下)的磷酸盐缓冲盐水(PBS)(pH 7.4)。将约280mg托法替尼调配物添加到供体隔室中的皮肤表面上。在8小时之后，去除皮肤表面上的残余调配物并且再次小心地清洁皮肤表面。去除角质层并且对皮肤进行称重和切碎，并且通过剧烈振荡用乙腈/甲醇/水萃取溶液萃取1小时。将皮肤萃取物离心并且通过高效液相色谱(HPLC)分析。

皮肤萃取物(μg)/受体(μg)的相对托法替尼量显示在表7中。数据显示P1到P6和P9都高于C1。其指示P1到P6和P9基于DMSO的调配物倾向于保持皮肤中的托法替尼大于渗透通过皮肤的托法替尼。

表7.P1到P6、P9和C1的皮肤萃取物/受体的相对量

图2显示在8小时处理之后皮肤和受体中的分配。比较基于DMSO的调配物(P1到P6和P9)与C1，结果显示，托法替尼软膏(C1)在受体中具有最高分配且在皮肤中具有最低分配，指示在所有调配物中这一调配物促进通过皮肤渗透到血液或体循环中的托法替尼大于保留在皮肤中的托法替尼。此结果表明基于DMSO的调配物不仅改进产物的稳定性，而且增加皮肤中所保留的托法替尼的量。

在所有基于DMSO的调配物中，调配物P1和P2在受体中具有最高分配。这可归因于调配物中的乙醇，所述乙醇促进托法替尼渗透到受体中并且相应地减少皮肤中的部分。因此，不含乙醇的基于DMSO的调配物比添加有乙醇的调配物更优选。

比较P4(无0.5N NaOH)和P5(有0.5N NaOH)，添加氢氧化钠以改变调配物的pH对于托法替尼的渗透/保留没有显著影响。总之，调配物P4、P5和P6展现保留在皮肤中的托法替尼的量比通过皮肤渗透到血液或体循环中的量高。

[实例6]更多赋形剂对表皮、真皮和受体中的托法替尼的分配的影响

进行个别研究以了解抗氧化剂、丁基羟基茴香醚(BHA)对表皮、真皮和受体中的托法替尼的分配的影响。在体外渗透/保留研究中使用获自PigModel动物技术有限公司的四个月大的猪(长白猪和杜洛克猪杂交品种)侧皮。调配物P8为与P5调配物相比通过添加0.1％BHA的经改性调配物(表4)。将约280mg P5或P8添加到供体隔室中的皮肤表面上。在8小时之后，去除皮肤表面上的残余调配物并且小心地清洁。去除角质层且接着将皮肤热分离成表皮和真皮。对分离的表皮和真皮进行称重和萃取。与受体样品一起，对表皮和真皮萃取物两者进行HPLC分析以测定柠檬酸托法替尼的浓度。结果显示于下表8。

结果显示BHA在皮肤萃取物和受体中没有显著影响，这指示抗氧化剂BHA对皮肤中的托法替尼的分配并不关键。

表8.在8小时施加局部调配物P5和P8之后，在表皮、真皮和受体中柠檬酸托法替尼的水平

[实例7]溶剂/托法替尼的比随时间推移对表皮、真皮、受体中的托法替尼的分配的影响

进行体外渗透/保留研究以比较随时间推移皮肤中所保留以及进入到受体中的托法替尼的累积量。这一实验旨在研究溶剂/托法替尼对渗透/保留的比的影响，以便确保基于DMSO的调配物在高达12小时的整个时间过程中优先选择在皮肤中保留托法替尼。

调配物P5和P7显示于表4中，P7的DMSO/托法替尼比要比P5高。将约280mg托法替尼调配物添加到供体隔室中的皮肤表面(1cm²)上。每一皮肤部分的真皮侧与受体介质接触。通过使水循环通过单元套，在受体腔室内实现37℃的均一温度。在施用4、8和12小时之后，收集受体溶液并且分离和萃取表皮和真皮。通过HPLC分析皮肤萃取物和受体溶液中的托法替尼浓度。

在图3和图4中所显示，P5和P7在三个时间点在表皮和真皮中以及在受体溶液中具有相当的托法替尼水平，这指示较高的DMSO/API比可实现类似的渗透/保留效果。

根据以上研究，本发明的局部托法替尼调配物倾向于在施用后至多12小时的时段期间保留在皮肤中并且在受体中具有相对低的浓度。因此，与口服剂型和C1软膏相比，本发明的调配物可以具有更低的托法替尼的全身暴露，并且因此可以减少全身副作用。

[实例8]托法替尼局部调配物治疗特应性皮炎的临床试验

设计随机、双盲、安慰剂对照的研究，并且6名可评估患者以1:2的比接受安慰剂或本发明的托法替尼局部调配物。此研究的目的是评估与安慰剂(媒剂)相比，本发明的托法替尼局部调配物在患有特应性皮炎的患者中每日两次(BID)的功效。将托法替尼局部调配物或安慰剂持续8个连续周每日两次(BID)施加到目标皮肤(其对应于16到100cm²面积)上。

特应性皮炎严重程度指数(ADSI)用于评定皮炎的严重程度。这一指数(范围0-15)由瘙痒、红斑、分泌物、表皮脱落和苔藓样变的评分的总和组成，所有评分都在4点(范围0-3)尺度。在第0周(基线)、第2周、第4周和第8周，对ADSI进行评分。功效指标包括在ADSI中在第2周、第4周和第8周自第0周(基线)(基线减去访视评分)的总清除(ADSI＝0)、部分清除(0<ADSI≤2)和≥4点的改进。

表8显示在第0周、第2周、第4周和第8周的ADSI的临床研究结果。比较第2周和第0周(基线)，接受本发明的托法替尼局部调配物的所有个体中的ADSI的总和评分显著降低。并且，其实现在第8周ADSI为清除(ADSI＝0)或部分清除(0<ADSI≤2)的功效指标。在表9中计算平均ADSI评分和ADSI评分改进。接受本发明的托法替尼局部调配物的个体的平均ADSI评分改进在第2周显著增加到3.75。随后，其在第4周稍微增加到4.75且在第8周最终增加到5。与使用托法替尼的个体进行比较，使用安慰剂的个体在第2周仅展现1.5，然后在第4周下降到1，并且在第8周最终增加到3.5。

根据以上研究，接受本发明的托法替尼局部调配物的个体的特应性皮炎的病况在2周时显著改良，且在8周时实现功效。因此，与接受安慰剂的个体相比，接受本发明的托法替尼局部调配物的个体在至少8周展现出更好的改善。

表8.在第2周、第4周和第8周的ADSI的临床研究结果

表9在第2周、第4周和第8周的平均ADSI评分和ADSI评分改进

[实例9]托法替尼局部调配物治疗白癜风的临床试验

进行随机、双盲、安慰剂对照、个体内对照、概念验证研究以表征本发明的托法替尼局部调配物在患有白癜风的个体中局部BID(每日两次)施用至多12周的功效。

总共10名个体入选并随机分组。定位于符合条件的个体的面部/颈部/手臂/腿部/躯干的每一目标色素脱失区域接受托法替尼局部调配物或安慰剂。在约3mg/cm²的施加覆盖范围下局部BID施加治疗持续至多12周。在基线和每月间隔对所有患者进行临床改善(复色水平)和相片评估。

图5显示使用本发明的托法替尼局部调配物治疗的自基线、8周和12周患有面部白癜风的男性个体的相片。从基线到12周观测到前额(改善百分比)和下巴(改善百分比)的显著复色。

图6显示使用本发明的托法替尼局部调配物治疗的自基线、8周和12周患有面部白癜风的女性个体的相片。从基线到12周几乎完成前额的显著复色(改善百分比

)。

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