阅读说明：本技术 使用法呢基二苯并二氮杂酮治疗Phelan McDermid综合征的方法 (Methods of treating Phelan McDermid syndrome using farnesyl dibenzodiazepinone ) 是由 迈克尔·斯内普 帕特里夏·科格拉姆 罗伯特·迪肯 于 2018-10-25 设计创作，主要内容包括：提供了通过给予法呢基二苯并二氮杂酮化合物来治疗患有Phelan McDermid综合征(PMS)的受试者或易患该疾病的受试者的Phelan McDermid综合征(PMS)的方法。还提供了法呢基二苯并二氮杂酮化合物在制备用于治疗患有PMS的受试者的药物中的用途。(Methods of treating Phelan McDermid Syndrome (PMS) in a subject suffering from, or susceptible to, Phelan McDermid Syndrome (PMS) by administering a farnesyl dibenzodiazepinone compound are provided. Also provided is the use of a farnesyl dibenzodiazepinone compound in the manufacture of a medicament for treating a subject suffering from PMS.)

使用法呢基二苯并二氮杂酮治疗Phelan McDermid综合征的 方法

背景技术

Phelan McDermid综合征(PMS)是一种神经发育障碍，其在Watt等(1985)的文献中首次提到，之后由Phelan等(2001)更详细地描述。

在人类中PMS的临床特征包括严重的新生儿肌张力减退(>97％的个体)、总体发育迟缓(＞98％)、正常至加速生长(95％)、丧失至严重的语言迟缓(＞98％)和轻微的畸形特征(Phelan2008)。在行为上，PhelanMcDermid个体通常存在对疼痛敏感度低、眼神交流差、行动刻板(stereotypicmovement)、社交功能下降、机能亢进(hyperactivity)、感觉运动功能改变和攻击性行为。行为表型可能随着年龄的增长而退化，表现出社交、运动或精神功能下降(Soorya等，2013)。在身体上，PMS可能伴有轻微的畸形特征和淋巴水肿。

PMS的关键并发症是癫痫(epilepsy)。多达41％的受影响的个体会出现癫痫发作(seizures)(发热和/或非发热)(Soorya等，2013)。Holder和Quach(2016)也描述了46％的PhelanMcDermid个体在其生命的某个时刻出现癫痫发作，并呈现出所有的癫痫发作类型。最常见的癫痫发作是非典型性失神发作(90％)，其他类型包括强直性(54％)、肌张力低下性(18％)、强直-阵挛性(9％)和肌阵挛性(9％)。由Holder和Quach表征的个体中有20％患有癫痫持续状态，而8％被诊断出患有Lennox Gastaut综合征。癫痫发作可能是药理学控制的或抗药性的。随着年龄的增长，癫痫发作的易感性有增加的趋势，并且癫痫发作与功能性技能的退化有关(Soorya等，2013)。已经使用了多种抗惊厥药，并且用于癫痫发作的多重用药(poly-pharmacy)是常见的。

在人类中该疾病的特征是在含有SHANK3/ProSAP2基因的22q13.3处染色体缺失(Bonaglia等，2001；Anderlid等，2002；Wilson等，2003)。共识意见认为PMS的体征和症状与SHANK3蛋白的单倍不足有关。

Shcheglovitov等(2013)研究表明，从PMS患者中提取的诱导性多能干(IPS)细胞系已经损害了突触后的AMPA和NMDA受体反应，所述反应反映出较少的兴奋性突触。这些缺陷与SHANK3蛋白的最长异构体水平的降低有关(Shcheglovitov等，(2013))，并通过给予***1(IGF-1)进行救治。作者提出，SHANK3在突触形成的早期阶段是必需的，而IGF-1通过触发SHANK3的缺失和PSD95蛋白的募集来促进突触的成熟。Bozdagi等(2013)也表明使用IGF-1救治了Shank3基因敲除小鼠的表型。Kolevzon等(2014)报道在安慰剂控制的条件下给予IGF-1，使得在12周的治疗过程中改善了Shank3基因敲除小鼠的社交、重复和异常行为。

尽管美国正在进行鼻内催产素在PMS中作用的研究，但是有关PMS药理干预的临床研究相对较少(ClinicalTrials.gov identifierNCT02710084)。没有批准的PMS治疗方法。因此，需要用于治疗PMS的方法；本文提出的发明即是针对这样的目的和其他重要目标的。

发明内容

本发明涉及用于治疗患有Phelan McDermid综合征(PMS)的受试者或易患该疾病的受试者的Phelan McDermid综合征(PMS)的方法。如下更全面的讨论，已经发现法呢基二苯并二氮杂酮(farnesyl dibenzodiazepinone)化合物可以减轻给予该化合物的PMS个体的疾病症状。

因此，在第一实施方案中，本发明涉及一种治疗患有PMS的受试者的方法，其中该方法包括给予患有PMS的受试者治疗有效量的(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂。

在第二实施方案中，本发明涉及一种抑制易患PMS的受试者的PMS发展的方法，其中该方法包括给予易患PMS的受试者治疗有效量的(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂。

在第三实施方案中，本发明涉及(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂在患有PMS的受试者的治疗或在治疗患有PMS的受试者的方法中的用途。

在第四实施方案中，本发明涉及(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂在易患PMS的受试者的PMS发展的抑制或在抑制易患PMS的受试者的PMS发展的方法中的用途。

在第五实施方案中，本发明涉及在患有PMS的受试者的治疗或治疗患有PMS的受试者的方法中使用的(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂的治疗有效量。

在第六实施方案中，本发明涉及在易患PMS的受试者的PMS发展的抑制或抑制易患PMS的受试者的PMS发展的方法中使用的(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂的治疗有效量。

在第七实施方案中，本发明涉及至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物用于制备治疗患有PMS的受试者的药物的用途。

在第八实施方案中，本发明涉及至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物用于制备抑制易患PMS的受试者的PMS发展的药物的用途。

在本发明的各实施方案和方面中，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮选自式I所涵盖的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，

W¹、W²和W³各自独立地为

或或者该三环的链可以在W³、W²或W¹处以W³、W²或W¹分别为–CH＝O或–CH₂OH终止；

A为–NH–、–NCH₂R¹–或–NC(O)R¹–，其中R¹为C_1-6烷基、C_2-6烯基(alkene)、芳基或杂芳基；

R²、R³和R⁴各自独立地为H、R⁵或–C(O)R⁶，其中每个R⁵独立地为C_1-6烷基、C_2-7亚烯基(alkalene)、芳基或杂芳基，并且其中每个R⁶独立地为H、C_1-6烷基、C_2-7亚烯基、芳基或杂芳基。

在本发明的各实施方案和方面中，至少一种法呢基二苯丙二氮杂酮化合物可为化合物AMO-01或其药学上可接受的盐。

在本发明的相关的实施方案或方面中，易患PMS的受试者为在22q13.3处具有染色体缺失的受试者。

在本发明的各实施方案和方面中，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂的治疗有效量为每受试者体重约0.1μg至约200mg每kg试剂。

在本发明的各实施方案和方面中，通过静脉内、皮下或其它可接受的方式将至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂给予受试者。

前面已相当广泛地概述了本发明的特征和技术优点，以便更好地理解以下本发明的详细描述。本发明的另外的特征和优点将在本文中描述，其形成本发明的权利要求的主题。本领域技术人员应理解，本文公开的任何构思和特定实施方案可容易地用作修改或设计用于实现本发明的相同目的的其它方法的基础。本领域技术人员也应当理解，这种等效的方法不脱离所附权利要求中阐述的本发明的精神和范围。当结合附图考虑时，将由以下描述更好地理解被认为是本发明的特征的新颖特征(关于其组织和操作方法)以及另外的目的和优点。然而，应明确理解，提供的任何描述、图、实施例等的目的仅仅是为了说明和描述，而绝非旨在限定本发明的范围。

附图说明

图1.在野生型(WT)小鼠和Shank3b^-/-基因敲除(KO)转基因小鼠中Ras-ERK途径的激活，由海马区和皮层中的pERK水平表示。“ns”是不显著；****是p<0.0001。

图2.在n＝10只小鼠的组测试前4小时，给予单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01或赋形剂(vehicle)后，在PMS的Shank3b基因敲除转基因模型中通过明暗箱(light-darkbox)测试评估焦虑情况。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝31.19，p＜0.0001)。赋形剂治疗的野生型(WT)小鼠和Shank3b^-/-基因敲除小鼠(KO)之间的差异显著(p＜0.001)。AMO-01在野生型小鼠中无显著效果。相反，AMO-01显著减少了Shank3b^-/-小鼠中表现的缺陷(p＜0.001)，但是这一逆转并不完全，因为AMO-01治疗的野生型小鼠和Shank3b^-/-小鼠之间仍然存在显著差异(p＜0.05)。“ns”是不显著；*是p<0.05；****是p<0.0001。

图3.单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，在PMS的Shank3b KO转基因模型中，由过度自我梳理(self-grooming)表示的自我伤害行为。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝29.14，p<0.0001)。赋形剂治疗的野生型(WT)小鼠和Shank3b^-/-基因敲除小鼠之间的差异显著(p＜0.001)。AMO-01在野生型小鼠中无显著作用。相反，AMO-01显著减少了Shank3b^-/-小鼠中表现的缺陷(p＜0.0001)。这一逆转是完全的，因为AMO-01治疗的野生型小鼠和治疗后的Shank3b^-/-小鼠之间没有明显差异。“ns”是不显著；****是p<0.0001。

图4.单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，在PMS的Shank3b KO转基因模型中，由与熟悉或新的小鼠互动所花费的时间来表示的对社交新奇性(socialnovelty)的反应。野生型动物(WT)与陌生的(以前未见过的)小鼠比与熟悉的小鼠(以前见过的)花费更多的时间进行亲密互动，并且这种差异不受AMO-01治疗的影响。未观察到用赋形剂治疗的Shank3b KO小鼠的这种差异，这表明社交新奇性的过程受到破坏。用AMO-01治疗可正常化Shank3b KO小鼠对社交新奇性的差异反应。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝52.75，p<0.0001)。“ns”是不显著；****是p<0.0001。

图5.单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，PMS的Shank3b KO转基因模型的平衡木行走行为(beam walkingbehavbior)。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝29.76，p<0.0001)。赋形剂治疗的野生型小鼠和Shank3b^-/-基因敲除小鼠之间的差异显著(p<0.001)。AMO-01对野生型小鼠无显著效果。相反，AMO-01显著减少了Shank3b^-/-小鼠中表现的缺陷。这一逆转是完全的，因为AMO-01治疗的野生型小鼠和治疗后的Shank3b^-/-小鼠之间无明显差异。“ns”是不显著；***是p<0.001。

图6.单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，在PMS的Shank3b KO转基因模型中的大理石埋藏行为(marble burying behavior)。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝42.15，p<0.0001)。赋形剂治疗的野生型小鼠和Shank3b^-/-基因敲除小鼠的差异显著(p＜0.001)。AMO-01对野生型小鼠无显著效果。相反，AMO-01显著减少了Shank3b^-/-小鼠表现的缺陷(p＜0.0001)。这一逆转是完全的，因为在AMO-01治疗的野生型小鼠和治疗后的Shank3b^-/-小鼠之间没有明显差异。“ns”是不显著；***是p<0.001；****是p<0.0001。

图7.单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，PMS的Shank3b KO转基因模型的音源性癫痫发作阈值(Audiogenic Seizure Threshold)。

图8.向PhelanMcDermid综合征受试者给予AMO-01的时间表。

图9.在6小时内注射总剂量为120mg/m²之前和之后，由具有基因证实的PhelanMcDermid综合征的23岁男性的视皮层记录的视觉诱发电位。

具体实施方式

I.定义

如本文中所用，“一(a)”或“一(an)”可表示一个(种)或多个(种)。如本文中所用，当与词语“包括(comprising)”结合使用时，词语“一(a)”或“一(an)”可表示一个(种)或多于一个(种)。如本文中所用，“另一”可表示至少第二个(种)或多个(种)。此外，除非上下文另外要求，否则单数术语包括复数，并且复数术语包括单数。

如本文中所用，“约”是指这样的数值，无论是否明确指出，包括例如整数、分数和百分数。术语“约”通常是指数值范围(例如所述值的+/-5-10％)，本领域普通技术人员将认为该数值范围等效于所述值(例如具有相同的功能或结果)。在一些情况下，术语“约”可包括四舍五入到最接近的有效数字的数值。

如本文中所用，“治疗”及其所有的形式和时态(包括例如治疗(treat、treating、treated和treatment))均是指治疗性治疗(therapeutic treatment)和预防性(prophylactic)或防止性(preventative)治疗。需要治疗的受试者包括那些已经确诊为PMS以及那些易患PMS但还未确诊患有PMS的受试者。

II.本发明

如上所述，本发明基于发明人的发现，即特定法呢基二苯并二氮杂酮化合物可减轻患有该疾病且给予该化合物的个体的Phelan McDermid综合征(PMS)的症状。因此，本发明涉及治疗患有该疾病的受试者或易患该疾病的受试者的PMS的方法。

患有PMS的受试者或易患PMS的受试者为在22q13.3处具有染色体缺失的受试者和/或其SHANK3蛋白表达降低的受试者和/或其产生功能失调的SHANK3蛋白的受试者。染色***点22q13.3包括编码SHANK3蛋白的SHANK3/ProSAP2基因。

SHANK3(“SH3和多个锚蛋白重复结构域3”；也称为富含脯氨酸的突触相关蛋白2(ProSAP2))是在树突中发现的支架蛋白。它是在涉及突触形成的突触后致密物中存在的支架蛋白家族中的一员，可能通过神经递质受体、离子通道和其他膜蛋白连接到肌动蛋白细胞骨架(actin cytoskeleton)和G蛋白偶联的信号通路(Boeckers等，2002)。SHANK3信息在心脏、大脑和脾脏中表达(Lim等，1999)。在大脑中，SHANK3主要在神经元中表达。

研究表明，不同的SHANK3缺失在SHANK3蛋白异构体的活性和特定受体的变化方面产生不同的(尽管相似)影响。已经开发了缩短Shank3基因的多种鼠类基因敲除小鼠。已经解决了该基因的不同外显子，与SHANK3蛋白异构体的表达相关的结果也不同。Bozdagi等(2010)创建了一种在外显子4和9之间(包括锚蛋白重复结构域)删除Shank3基因的小鼠。该修饰的杂合子表达显示shank3 mRNA水平降低50％。在幼年杂合子(3到4周龄)中，通过突触前和突触后机制减少了基础谷氨酸能AMPA介导的传递。与此相关的，减少了维持高频和θ爆发诱导的海马长时程增强(LTP；一种突触可塑性的形式)，但是却没有减少长时程抑制(LTD)。这些电生理学决定的变化与故障并行，以维持伴随LTP增加的突触体积，并减少AMPA受体通过。这些小鼠表现出社交互动缺陷。Bozdagi等(2013)示出了在该模型的缺陷由IGF-1逆转。

Krouser等(2013)报道了在研究的2到6月龄的小鼠中Shank3外显子21的纯合子缺失。该缺失减少了海马区中SHANK3蛋白的主要异构体，但是具有较短的异构体出现的复杂影响。除了代谢型谷氨酸受体的mGluR5亚型外，该小鼠的谷氨酸受体没有显示出重大变化。相应地，海马LTP不足，反映了NMDA/AMPA比例降低。在这些小鼠中，没有依赖mGluR的LTD缺陷。这些小鼠在树突棘密度和复杂性上没有差异。

Duffney等(2015)创建并报道了具有Shank3的c-端(外显子21)缺失的杂合子小鼠，表明SHANK3蛋白减少了50至70％。青少年显示出社交互动测试行为受损。在这些小鼠的前额皮层中的NMDA介导的EPSPs减少，而AMPA介导的反应是完整的。这一发现与膜NMDA受体亚基的减少相关。这些小鼠还表现出rac依赖性丝切蛋白(cofilin)信号减少，因此，突触肌动蛋白也减少了——然而，这些小鼠的树突棘密度没有变化，因此突触数量也没有变化。Bozdagi等(2010)描述的小鼠具有N-端缺失，这导致了最长异构体的损失，并且也具有丝切蛋白缺乏症。Uppal等(2015)研究了在5周龄和3月龄时杂合子N-端基因敲除，发现这两个年龄段的突触密度没有差异。但是，详细检查显示，在5周龄的穿孔性突触增加，而在3月龄的没有。在这两个年龄段下，脊柱、头部尺寸、PSD长度和PSD面积在任何年龄时都没有差异。Jaramillo等(2016)报道了研究时3到5月龄的小鼠的杂合子外显子4至9N-端缺失。该操作导致SHANK3蛋白异构体复杂模式的变化。这些小鼠表现出海马LTP降低，而依赖mGluR5的LTD完整。在海马区中，突触传递和NDMA/AMPA比例不受影响，但在纹状体中，由于NMDA受体功能下降，NMDA/AMPA比例下降。

Peca等(2011)制备了基因敲除小鼠，在该小鼠中，Shank3基因的外显子13-16被靶向，删除了PDZ结构域。该基因敲除导致SHANK3α(最长异构体)和SHANKβ异构体完全消除，并显著减少了推定的SHANK3γ异构体。此小鼠的纯合子形式显示纹状体中SAPAP3、Homer-1b/c和PSD93水平降低以及谷氨酸受体亚基GluR2、NR2A和NR2B降低。在树突状乔木的复杂性和纹状体中总树突长度增加的情况下，这伴随着树突棘密度的降低。在NMDA/AMPA比例没有变化的情况下，由于突触后AMPA反应降低，纹状体的种群峰值(population spike)降低了。这些小鼠的海马电生理学现象没有改变。

因此，在突触影响方面，模型间海马突触可塑性的损失很大，但是不同的Shank3缺失在SHANK3蛋白异构体和不同的特定受体变化方面产生不同的影响。

如Shcheglovitov等报道的，在小鼠中敲除Shank3基因的影响可与从PhelanMcDermid综合征患者中提取的IPS细胞系进行比较(2013)。这些作者报道了以下内容：在没有GABA能抑制差异的情况下，PhelanMcDermid综合征IPS细胞中突触后AMPA和NMDA反应显著受损。这些变化反映了较少的兴奋性突触，并且与SHANK3蛋白的最长异构体降低水平有关。

通过参考与控制神经元相比具有增加的输入阻力的IPCs研究，该研究可能与超极化激活的环核苷酸门控(HCN)通道的亚基表达降低有关，Holder和Quach(2016)引用了Shcheglovitov等(2013)的与PhelanMcDermid综合征中所见的癫痫敏感性增加有关的数据。Holder和Quach提出这“表明有增加兴奋性的趋势，这潜在地表明与普通人群相比，患有SHANK3基因突变的个体中癫痫患病率升高”。

PMS的关键分子畸变是Ras-ERK酶促途径的过度活化，其在突触可塑性和神经元存活中起重要作用(Grewal等，1999)。根据在不同实验模型中以及在使用Ras-ERK途径抑制剂中，该途径的一系列激活证据，Ras-ERK途径也与癫痫发作的发生有关。Ras-ERK途径激活由ERK的磷酸化形式(pERK)的水平表示。在以大脑兴奋性为基础的突触机制的各种适应过程中都可以看到这种激活。Davis等(2000)表明在大鼠中诱导海马LTP伴随着pERK的快速但短暂的增加。

在这种过度活化的基础上，并且如下所述，在PMS的C57BL/6^-/-基因敲除小鼠模型中评估了Ras-ERK途径的脑渗透抑制剂(在本文中称为AMO-01)。发现给予两个月大的试验动物单腹膜腔内注射剂量的AMO-01显著改善了与小鼠有关的所有异常神经行为特征，从而为本发明奠定了基础。

法呢基二苯并二氮杂酮

AMO-01(10-法呢基-4,6,8-三羟基-二苯并二氮杂-11-酮)(10-farnesyl-4,6,8-trihydroxy-dibenzodiazepin-11-one)是一种法呢基二苯并二氮杂酮，并且是一类含有法呢基基团的二苯并二氮杂酮化合物的成员。

AMO-01的结构如下：

本发明的各方法可通过给予患有PMS的受试者或易患PMS的受试者AMO-01或其药学上可接受的盐来实施。

法呢基二苯并二氮杂酮化合物通过小单孢菌属(Micromonospora)的菌株制备，该菌株为小单胞菌科的细菌属，其为革兰氏阳性的芽孢，通常好氧，并形成分支菌丝体。该属的成员通常也产生氨基糖苷类抗生素。

AMO-01由小单孢菌属菌株046-ECO11制备。菌株046-ECO11在2003年3月7日保藏在加拿大国际保藏单位(International Depositary Authority of Canada(IDAC),BureauofMicrobiology,Health Canada,1015Arlington Street,Winnipeg,Manitoba,CanadaR3E 3R2)，登记号为070303-01。关于菌株046-ECO11和制备AMO-01的方法的更多细节可在2004年8月5日公开的国际专利公布WO 2004/065591中找到，其内容通过引用并入本文。

除了AMO-01及其药学上可接受的盐以外，本发明的各方法均可通过给予患有PMS或易患PMS的受试者至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物来实施，该化合物选自式I涵盖的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，

W¹、W²和W³各自独立地为

或或者该三环的链可以在W³、W²或W¹处以W³、W²或W¹分别为–CH＝O或–CH₂OH终止；

A为–NH–、–NCH₂R¹–或–NC(O)R¹–，其中R¹为C_1-6烷基、C_2-6烯基、芳基或杂芳基；

R²、R³和R⁴各自独立地为H、R⁵或–C(O)R⁶，其中各R⁵独立地为C_1-6烷基、C_2-7亚烯基、芳基或杂芳基，并且其中各R⁶独立地为H、C_1-6烷基、C_2-7亚烯基、芳基或杂芳基。

在特定实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中A选自NH、NCH₂R¹和NC(O)R¹；其中R²为H；R³为H；且R⁴为H。在另一个实施方案中，R²、R³和R⁴各自为H；且所有其他基团如先前所定义的。在另一个实施方案中，R²、R³和R⁴各自为H；且W¹为-CH＝CH-，所有其他基团如先前所定义的。在另一个实施方案中，R²、R³和R⁴各自为H，且W²为–CH＝CH-，所有其他基团如先前所定义的。在另一个实施方案中，R²、R³和R⁴各自为H；且W³为–CH＝CH-；且所有其他基团如先前所定义的。在另一个实施方案中，A为NH；R²、R³和R⁴各自为H；且所有其他基团如先前所定义的。在另一个实施方案中，A为NH；W¹、W²和W³各自为–CH＝CH-；且所有其他基团如先前所定义的。本发明包括上述化合物的所有药学上可接受的盐。

以下是式I和本发明的法呢基二苯并二氮杂酮化合物的另外的示例性化合物：

如本文中所用，术语“烷基”是指直链或支链的烃基。烷基基团的实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、戊基、己基、庚基、环戊基、环己基、环己甲基(cyclohexymethyl)等。烷基可任选地被选自以下的取代基取代：酰基、氨基、酰氨基、酰氧基、碳烷氧基(carboalkoxy)、羧基、羧基氨基(carboxyamido)、氰基、卤素、羟基、硝基、硫基(thio)、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、羰基(oxo)、胍基和甲酰基。

术语“烯基”是指含有至少一个碳碳双键的直链、支链或环状烃基。烯基基团的实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯-2-基、1-丁烯-4-基、2-丁烯-4-基、l-戊烯-5-基等。烯基可任选地被选自以下的取代基取代：酰基、氨基、酰氨基、酰氧基、碳烷氧基、羧基、羧基氨基、氰基、卤素、羟基、硝基、硫基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、甲酰基、羰基和胍基。不饱和烃链的双键部分可为顺式或反式构型。

术语“环烷基”和“环烷基环”是指在具有三个至十五个环成员的单或稠合碳环体系中的饱和或部分不饱和的碳环。环烷基基团的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环己基和环庚基。环烷基可任选地被以下取代基取代：酰基、氨基、酰氨基、酰氧基、碳烷氧基、羧基、羧基氨基、氰基、卤素、羟基、硝基、硫基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、亚磺酰基、磺酰基和甲酰基。

术语“杂环基”和“杂环”是指在具有三个至十五个环成员的单环或稠环体系中含有一至四个杂原子或含有选自O、N、NH、NRx、PO₂、S、SO或SO的杂基的饱和或部分不饱和的环。杂环基或杂环环的实例包括但不限于吗啉基、哌啶基和吡咯烷基。杂环基、杂环或杂环基环可任选地被选自以下的取代基取代：酰基、氨基、酰氨基、酰氧基、羰基、硫代羰基(thiocarbonyl)、亚氨基、碳烷氧基、羧基、羧基氨基、氰基、卤素、羟基、硝基、硫基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、亚磺酰基、磺酰基和甲酰基。

术语“氨基酸”是指任意天然氨基酸；天然氨基酸是本领域的技术人员公知的。

术语“卤素”是指卤素原子，例如溴、氯、氟和碘。

术语“芳基”和“芳基环”是指具有五个至十五个环成员的单环或稠环体系中的芳香族基团(aromatic group)。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、联苯基、三联苯基。芳基可任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：酰基、氨基、酰氨基、酰氧基、叠氮基、烷硫基、碳烷氧基、羧基、羧基氨基、氰基、卤素、羟基、硝基、硫基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、亚磺酰基、磺酰基和甲酰基。

术语“杂芳基”和“杂芳基环”是指在具有五个至十五个环成员的单环或稠环体系中且含有至少一个杂原子例如O、N、S、SO和SO₂的芳香族基团。杂芳基基团的实例包括但不限于吡啶基、噻唑基、噻二唑基(thiadiazoyl)、异喹啉基(isoquinolinyl)、吡唑基、噁唑基(oxazolyl)、噁二唑基(oxadiazoyl)、***基和吡咯基。杂芳基基团可以任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：酰基、氨基、酰氨基、酰氧基、碳烷氧基、羧基、羧基氨基、氰基、卤素、羟基、硝基、硫基、硫代羰基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、亚磺酰基、磺酰基和甲酰基。

术语“芳烷基”和“杂芳烷基”是指分别通过烷基(例如苄基)直接键合的芳基基团或杂芳基基团。芳烷基和杂芳烷基可任选地被取代为芳基和杂芳基基团。

类似地，术语“芳烯基(aralkenyl)”和“杂芳烯基(heteroaralkenyl)是指分别通过烯基(例如苄基)直接键合的芳基或杂芳基。芳烯基和杂芳烯基可以任选地被取代为芳基和杂芳基。

本发明的化合物可具有一个或多个不对称碳原子，并且可以以形成外消旋或非外消旋化合物的混合物的光学异构体的形式存在。本发明的化合物可用作单一异构体或立体化学异构体形式的混合物。非对映异构体，即不可重叠的立体化学异构体，可通过常规方法(例如色谱、蒸馏、结晶或升华)来分离。光学异构体可根据常规方法通过拆分外消旋混合物而获得。

如本文中所用，提到的患有PMS的受试者是被鉴定为在22q13.3处具有染色体缺失的受试者，其具有以下症状中的至少两种：肌张力减退(低肌张力(lowtone))、正常或加速的生长、缺乏或严重的语言迟缓以及整体发育迟缓。

如本文中所用，提到的易患PMS的受试者是被鉴定为在22q13.3处具有染色体缺失的受试者和/或具有以下症状中的至少两种的受试者：肌张力减退(低肌张力)、正常或加速的生长、缺乏或严重的语言迟缓以及整体发育迟缓。

显而易见地，患有PMS或易患PMS的受试者的染色体缺失的鉴别可在尺寸、数量和在位点中特定的位置上发生变化。此外，由于认为PMS与SHANK3的单倍体不足有关，因此在22q13.3处的染色体缺失可以在一个或两个等位基因中。当在两个等位基因中时，等位基因之间的缺失可以不同。

如本文中所用，相对于在22q13.3处无染色体缺失的受试者，在受试者中的SHANK3蛋白表达降低是至少30％的SHANK3蛋白表达的降低。相对于在22q13.3处无染色体缺失的受试者，SHANK3蛋白表达的降低可以为至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多。

如本文中所用，功能异常的SHANK3蛋白是不支持正常突触功能的SHANK3蛋白。

III.治疗方法

本发明涉及治疗患有PMS的受试者或易患PMS的受试者的方法。本发明的各方法包括给予受试者(例如患有PMS的受试者或易患PMS的受试者)治疗有效量的(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂。在特定实施方案中，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物为AMO-01。

本发明还涉及(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂在(a)治疗患有PMS的受试者、(b)治疗患有PMS的受试者的方法、(c)治疗易患PMS的受试者或(d)治疗易患PMS的受试者的方法中的用途。在特定实施方案中，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物为AMO-01。

本发明还涉及在(a)治疗患有PMS的受试者、(b)治疗患有PMS的受试者的方法、(c)治疗易患PMS的受试者或(d)治疗易患PMS的受试者的方法中使用的(i)至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物或(ii)包含至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂的治疗有效量。在特定实施方案中，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物为AMO-01。

本发明还涉及至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物用于制备治疗患有PMS的受试者的药物的用途，以及至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物用于制备抑制易患PMS的受试者的PMS发展的药物的用途。在特定实施方案中，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物为AMO-01。

如本文中所用，术语“治疗(treat、treating和treatment)”具有普通和常规的含义，并且包括以下的一种或多种：减轻患有PMS的受试者或易患PMS的受试者的PMS症状；阻止这样的受试者的PMS症状；阻止或减轻这样的受试者的PMS症状复发；降低这样的受试者的PMS症状的严重性和/或频率；阻止这样的受试者的PMS症状的发展；以及治愈或解决这样的受试者的PMS症状。治疗是指相对于未接受治疗的受试者减轻程度等为约1％到约100％。优选地，相对于未接受治疗的受试者，减轻程度等为约100％、约99％、约98％、约97％、约96％、约95％、约90％、约80％、约70％、约60％、约50％、约40％或约30％。治疗可以在该疾病的临床症状发作之前、同时或之后开始。因此，受试者可正在表现出PMS症状或仅确诊为易患PMS但目前未出现该疾病的症状。该治疗的结果可为永久的或可持续数天(例如1、2、3、4、5或7天)、数周(例如1、2、3或4周)或数月(例如1、2、3、4、5、6或更多个月)。

当实施本发明的方法时，给予受试者的至少一种法呢基二苯并二氮杂酮的量将因诸如受试者的年龄和体重，以及病症症状的特征(identity)和严重性等因素而变化。但是，给予受试者的量将是治疗有效量，即足以进行治疗的量。作为一个实例，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮的治疗有效量为每kg受试者的体重约0.1μg至200mg。治疗有效量的另外的范围包括但不限于约10μg/kg至200mg/kg、约100μg/kg至200mg/kg、约1mg/kg至200mg/kg、约10mg/kg至200mg/kg、约10μg/kg至100mg/kg、约100μg/kg至100mg/kg、约1mg/kg至100mg/kg、约10mg/kg至100mg/kg、约0.1μg/kg至50mg/kg、约1μg/kg至50mg/kg、约10μg/kg至50mg/kg、约100μg/kg至50mg/kg、约1mg/kg至50mg/kg、约1mg/kg至40mg/kg、约1mg/kg至30mg/kg、约1mg/kg至20mg/kg、约1mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5mg/kg、约0.1mg/kg至10mg/kg、约0.1mg/kg至5mg/kg、约10mg/kg至50mg/kg和约20μg/kg至40mg/kg受试者的体重。治疗有效量的具体实例包括但不限于约0.1、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和60mg/kg受试者的体重。换句话说，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮的治疗有效量为约1mg/m²至约1000mg/m²。治疗有效量的另外的范围包括但不限于：约1mg/m²至约1000mg/m²、约1mg/m²至约500mg/m²、约1mg/m²至约400mg/m²、约1mg/m²至约300mg/m²、约1mg/m²至约250mg/m²、约1mg/m²至约200mg/m²、约1mg/m²至约150mg/m²、约1mg/m²至约100mg/m²、约50mg/m²至约1000mg/m²、约50mg/m²至约500mg/m²、约50mg/m²至约400mg/m²、约50mg/m²至约300mg/m²、约50mg/m²至约200mg/m²、约50mg/m²至约150mg/m²、约50mg/m²至约100mg/m²、约100mg/m²至约1000mg/m²、约100mg/m²至约500mg/m²、约100mg/m²至约400mg/m²、约100mg/m²至约300mg/m²、约100mg/m²至约200mg/m²、约100mg/m²至约150mg/m²。治疗有效量的具体实例包括但不限于约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200mg/m²，或更多。

在一个疗程中，可给予受试者至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物一次或两次、三次、四次、五次、六次或更多次。给药方案中各剂量之间的时间间隔可以为数天、数周、数月或数年，包括每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多周给予一次。在给药方案的每个剂量中给予相同量的至少一种法呢基二苯并二氮杂酮，或者每个剂量中的量可以变化。可以通过本领域普通技术人员众所周知的技术容易地确定适当的剂量和给药方案，而无需过度的实验。这种确定方式将部分基于特定剂量的耐受性和功效。

给予频率包括每天4、3、2或1次，每隔一天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周一次、每八天、每九天、每十天、每两周、每个月和每两个月。治疗的持续时间将基于特定受试者的疾病的症状和严重程度，并且将由主治医生确定。但是，治疗的持续时间预计持续数天、数周、数月或数年。实际上，在某些情况下，治疗可以在受试者的整个生命中持续进行。

取决于给予方式，剂量可以一次全部给予，例如以胶囊或液体形式的口服制剂，或在一段时间内缓慢给予，例如肌内或静脉内给药。当在一段时间内给予时，给予过程可以为例如10、20、30、40、50或60min，或0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10h，或更长。在本发明的一个实施方案中，6小时内递送给受试者的剂量为120mg/m²。

如本文中所用，“受试者”包括但不限于人、非人灵长类、鸟、马、牛、山羊、绵羊、伴侣动物(例如狗、猫或啮齿动物)或其他哺乳动物。

IV.制剂和剂量

在本发明的各治疗方法中，至少一种法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药物制剂以药学上可接受的形式和基本上无毒的量给予。

本发明的药物制剂将包含至少一种如本文所述的法呢基二苯并二氮杂酮化合物。药物制剂还将包含一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂。

载体和稀释剂的合适的实例是本领域技术人员公知的，包括水、注射用水、盐水、缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇、丙二醇、聚山梨酯80(Tween-80^TM)、聚乙二醇300和400(PEG300和400)聚乙二醇化蓖麻油(例如CremophorEL)、泊洛沙姆(poloxamer)407和188、亲水和疏水载体，及其组合。疏水性载体包括例如脂肪乳剂、脂质、聚乙二醇化的磷脂、聚合物基质、生物相容性聚合物、脂质球、囊泡、颗粒和脂质体。该术语明确地排除了细胞培养基。制剂可另外包括稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和防腐剂、张度剂(tonicityagent)、填充剂(bulking agent)、乳化剂、悬浮剂或粘度剂、惰性稀释剂、填料(filler)及其组合。

载体和稀释剂的特性将取决于使用药物制剂的方式和向受试者给予药物制剂的方式。例如，可以制备用于肌内注射的制剂形式的药物制剂，其中载体是注射用水、0.9％盐水或5％葡萄糖溶液。

此外，药物制剂可以以液体形式给予。液体可为口服剂、滴眼剂或滴鼻剂，或用作灌肠剂或冲洗液。当药物制剂配制为液体时，液体可以是药物制剂的溶液或悬浮液。根据其预期用途，对于本领域技术人员而言公知的药物制剂的溶液或悬浮液存在多种合适的制剂。在水或其他水性赋形剂中制备的用于口服给予的液体制剂可含有多种悬浮剂，例如甲基纤维素、藻酸盐、西黄蓍胶(tragacanth)、果胶、海藻酸钠、卡拉胶、***胶、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙烯醇。液体制剂也可包括溶液、乳液、糖浆和酏剂，这些液体制剂同时包含活性化合物、润湿剂、甜味剂以及着色和调味剂。

法呢基二苯并二氮杂酮化合物和药物制剂可通过任何已知的常规方法配制和给予，包括但不限于口服、舌下、鼻内、眼内、直肠、透皮、粘膜、肺、局部或肠外给药。肠外给药方式包括但不限于皮内、皮下(s.c.，s.q.，sub-Q，Hypo)、肌内(i.m.)、静脉内(i.v.)、腹膜腔内(i.p.)、动脉内、髓内(intramedulary)、心内、关节内(关节)、滑膜内(关节液区域)、颅内、脊柱内和鞘内(脊液)。可用于肠外注射或输注的药物制剂的任何已知装置均可用于进行这种给药。

V.实施例1

小鼠

最初从Jackson实验室获得的外显子13-16缺失的Shank3b^-/-纯合小鼠，和在C57BL/6J背景下产生的野生型(WT)同窝幼仔，并反复回交到C57BL/6J背景上超过八代。将得到的Shank3基因敲除(KO)小鼠以相同基因型为组放置在温度和湿度受控的房间中，并进行12小时的明暗循环(上午7点至下午7点点亮)。在保存室中连续记录室温和湿度。在光照阶段进行了测试。食物和水可以随意获得。对Shank3基因敲除小鼠及其野生型同窝仔进行了测试，每个治疗组N＝10只小鼠，在行为实验中在两月龄时进行了测试。小鼠被放置在商业塑料笼中，并根据1986年《英国动物(科学程序)法》(UK Animals(ScientificProcedures)Act)的要求进行实验。所有实验均对不了解基因型和药物治疗的实验者进行。在进行任何实验之前，让动物至少适应一周。仅使用健康的动物。在适应期期间不进行预防性或治疗性治疗。

Ras-ERK活性

在最初的实验中，测定了相对于未处理动物，Ras-ERK途径在大脑和淋巴细胞中的活性。比较N＝10只小鼠的组。为了确定大脑生物标志物的水平，使用了以下方法和试剂。在8-16％的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳凝胶(Bio-Rad，161-1222)上，由自各样品分离出20微克蛋白裂解液(lysate)，然后转移到硝酸纤维素膜上(Bio-Rad，162-0115)。在具有(ERK)1/2(1/2000)(Cell Signaling)的ECL免疫印迹底物(Pierce，32106)之后处理膜。通过具有抗磷酸(antiphospho)-ERK抗体(1/2000)(Cell Signaling)的印迹膜来评估总ERK1/2蛋白含量(磷酸化)。ERK磷酸化被标准化为同一样品中的蛋白质含量，并表示为相对于基础条件的变化％，将基础水平视为100％。通过具有b-肌动蛋白抗体(1/1000)(SigmaChemical Co.)的剥离和再印迹膜来评估蛋白质负载量。磷酸化-ERK1/2(Thr-202/Tyr-204)(Cell Signaling#4370)总ERK，p44/42MAPK(Erk1/2)抗体#9102(CellSignaling)。对于负载的对照样品，剥离膜并用抗微管蛋白的抗体(Sigma，A3853)重新探测。对于淋巴细胞生物标志物的测定，使用FACStarplus(BectonDickinson)，其中激发激光在488nm调谐，并通过515-545nm带通滤光片收集来自FITC(GST)的绿色荧光。计算相对于参照细胞的荧光的平均FITC荧光强度。平均细胞荧光强度(MFI)与每个细胞结合的Ab分子的平均数目成正比。

行为测试

将来自AMOPharma Ltd的AMO-01按照如下方法给予小鼠：

A.在乙醇、PEG400和聚山梨酯80和5％右旋糖的赋形剂中以30mg/kg的单剂量腹膜腔内注射AMO-01

B.腹膜腔内注射赋形剂的剂量为15mL/kg

在测试的第一天，在测试前4h治疗N＝10只小鼠的各组。在第一天单次腹膜内给予后，进行了5天的测试。

研究了以下组：

1.Shank3b^-/-基因敲除小鼠+赋形剂，N＝10

2.Shank3b^-/-基因敲除小鼠+AMO-0130mg/kg腹膜腔内注射，N＝10

3.野生型同窝仔+赋形剂，N＝10

4.野生型同窝仔+AMO-0130mg/kg腹膜腔内注射，N＝10

进行了以下测试。

第1天：在明暗箱实验中增加的焦虑。测试在两腔测试仪(Med Associates，St.Albans，VT)中进行，一侧“暗腔”始终保持在黑暗中，测试过程中照亮的另一个腔为“亮腔”。当将小鼠放入暗腔时，亮腔照亮，并将两个腔之间的门打开。允许小鼠自由探索装置5min。从暗腔进入亮腔的等待时间和在亮腔中花费的时间百分比被用作焦虑样行为的指标。

第2天：过度梳理导致皮肤损伤。Shank3b^-/-基因敲除小鼠在一般的保存群体中出现不同程度的明显的皮肤损伤。在该测试期间，在评分过程中，由对基因型不了解的观察者对在所有序列上的以下梳理所花费的时间进行了评分：面部擦拭、头和耳朵的梳理(scratching)/摩擦(rubbing)以及全身梳理。

第3天：社会认可异常和社交新奇反应。该测试由三阶段组成，这三个阶段在两侧腔室中分别放置各种刺激。第1阶段包括两个相同的非社会刺激(NS1&NS1)，第2阶段包括一种非社会刺激(NS1)和一种社会刺激(Soc1)，以及第3阶段包括一种已知的社会刺激(Soc1)和一种新的社会刺激(Soc2)。比较每个阶段中一种刺激相对于另一种刺激的偏好指数。

第4天：感官运动功能通过平衡木行走测试进行评估。使用了标准范式来评估平衡木行走性能(跌落延迟)。

第5天：通过大理石埋藏评估日常生活活动/物种典型行为。使用标准范式评估大理石埋藏行为。

在每组N＝10的单独队列中通过音源性癫痫发作评估发作阈值。使用60s的持续刺激(124db)诱导癫痫发作。不知情的观察者根据分类对听觉刺激后的运动反应率和发作严重程度评分：狂奔、发作和呼吸停止。

Ras-ERK途径功能测试的结果示于图1，其中野生型(WT)小鼠和Shank3基因敲除(KO)小鼠的Ras-ERK途径的激活由所示的海马区和皮层中pERK的水平表示。在海马区中未观察到变化，这与Peca等(2011)的研究中使用电生理学在该区域中观察到的效应缺乏相类似。相反，在皮层中的pERK中观察到几乎增加了三倍(Peca等2011年报道了该小鼠的纹状皮质的变化)。在外周循环淋巴细胞中也观察到显著增加(数据未示出)。

图2提供了明暗箱测试的结果，该结果显示了由AMO-01对Shank3b KO小鼠的明暗箱焦虑介导行为的救治。在N＝10只小鼠的组中，单剂量30mg/kg腹膜腔注射AMO-01后或测试前4h给予赋形剂，在PMS的Shank3b KO转基因模型中通过明暗箱测试评估焦虑。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝31.19，p<0.0001)。赋形剂治疗的野生型小鼠和Shank3b^-/-基因敲除(KO)小鼠之间的差异显著(p＜0.001)。AMO-01对野生型小鼠没有明显影响。AMO-01显著减少了在Shank3b^-/-小鼠中显示的缺陷，但是这种逆转并不完全，因为在AMO-01治疗的野生型小鼠和Shank3b^-/-KO小鼠之间的差异显著(P＜0.05)。

图3提供了梳理测试的结果，该结果示出了在Shank3b KO小鼠中通过AMO-01对过度梳理行为的救治。在单剂量30mg/kg腹膜腔注射AMO-01后，PMS的Shank3b KO转基因模型中过度自我梳理所指示的自我伤害行为。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝29.14，p＜0.0001)。赋形剂治疗的野生型小鼠和Shank3b^-/-基因敲除小鼠之间的差异显著(p＜0.001)。AMO-01对野生型小鼠没有明显影响。AMO-01显著减少了Shank3b^-/-小鼠中显示的缺陷(p＜0.0001)。这种逆转是完全的，因为在AMO-01治疗的野生型小鼠和治疗后的Shank3b^-/-KO小鼠之间没有明显差异。

图4提供了社会认可和对社会新奇反应测试的结果，该结果示出了在Shank3b KO小鼠中通过AMO-01对社会新奇反应的救治。在单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，通过与熟悉或新的小鼠在PMS的Shank3b KO转基因模型中互动所花费的时间来表示社交新奇的反应。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝52.75，p＜0.0001)。

图5提供了平衡木行走测试的结果，该结果示出了在Shank3b KO小鼠中AMO-01对平衡木行走行为的救治。在单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，PMS的Shank3b KO转基因模型的平衡木行走行为。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝29.76，p＜0.0001)。赋形剂治疗的野生型小鼠和Shank3b^-/-基因敲除小鼠之间的差异显著(p＜0.001)。AMO-01对野生型小鼠没有明显影响。AMO-01显著减少了Shank3b^-/-小鼠显示的缺陷(p＜0.0001)。这种逆转是完全的，因为AMO-01治疗的野生型小鼠和治疗的Shank3b^-/-KO小鼠之间没有明显差异。

图6提供了大理石埋藏试验的结果，该结果示出了在Shank3b KO小鼠中AMO-01对大理石埋藏行为的救治。在单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，在PMS的Shank3b KO转基因模型中的大理石埋藏行为。用于分析该实验的总体方差分析显著(F＝42.15，p＜0.0001)。在赋形剂治疗的野生型小鼠和Shank3b^-/-基因敲除小鼠之间的差异显著(p＜0.001)。AMO-01对野生型小鼠没有明显影响。AMO-01显著减少了Shank3b^-/-KO小鼠显示的缺陷。这种逆转是完全的，因为AMO-01治疗的野生型小鼠和治疗后的Shank3b^-/-KO小鼠之间没有明显差异。

图7提供了癫痫发作阈值测试的结果，该结果示出了在Shank3b KO小鼠中通过AMO-01对降低的音源性癫痫发作阈值的救治。在单剂量30mg/kg腹膜腔内注射AMO-01后，在PMS的Shank3b KO转基因模型中的音源性癫痫发作阈值。

因此，可以看出，本文提供的实验表明，在PhelanMcDermid综合征的Shank3b^-/-纯合基因敲除小鼠模型中，Ras-ERK途径在皮层中(以显著的倍数)被激活，而在海马区则没有变化。这些数据与Peca等(2011)报道的一致，Peca等示出了在这种模型中，在没有海马区变化的情况下，纹状皮质途径的可塑性改变。Ras-ERK途径激活的增加与Nateri等(2007)中在皮层的癫痫发作阈值的降低一致。

给予30mg/kg腹膜腔注射AMO-01对野生型小鼠的焦虑、梳理行为、社交能力、感官运动功能或物种典型行为或认知没有影响。这些数据与先前使用该化合物的野生型小鼠的行为测试结果一致。相反，该剂量逆转了Phelan McDermid综合征的Shank3基因敲除转基因小鼠模型中所有这些区域的缺陷。该逆转表示在焦虑和音源性癫痫发作区域中的功能显著正常化，并且，在梳理、社交、感觉运动和物种典型行为中的功能完全正常化。单剂量的AMO-01后，即可广泛救治PhelanMcDermid综合征的表型，并持续至少5天。

VI.实施例2

向遗传学上确诊为PhelanMcDermid综合征的23岁男性给予AMO-01。

所研究的药物由无菌散装制剂制备，该无菌散装制剂含有32.8mg/mL(3.15％w/w)的活性药物物质，该活性药物物质溶解于无菌0.9％盐水溶液中，制成等渗的最终给药制剂。每个药品瓶在2.134mL制剂(加2％过量)中含有70mgAMO-01药物物质。这对应于每2.176mL制剂中71.4mg的活性药物物质的总药物含量。AMO-01在6小时内通过静脉输注以单剂量给予，总给予的剂量为120mg/m²。

与临床测试一起评估发作频率和视觉诱发电位(VEPs)。VEPs提供了一种非侵入技术，其通过视神经/光辐射评估从视网膜到视觉皮层的大脑视觉途径的功能完整性。VEP是在视觉皮层上从头部表面记录下来的，并通过信号平均从正在进行的EEG中提取。VEP反映了发生在顶端树突上的兴奋性和抑制性突触后电位的总和(Zemon等，1986)，其调节锥体细胞接收的兴奋性和抑制性信号。VEP波形中的主要正负峰和谷反映了不同的细胞事件。在这项研究中使用的反差棋盘刺激(contrast-reversing checkerboard stimulus)在约60ms(P0或P60)产生一个正峰，反映了来自外侧膝状核的主要视觉皮层的激活。在约75ms(N0或N75)的负峰反映了扩散到初级视觉皮层的浅层的去极化和谷氨酸能突触后活性，而在约100ms(P1或P100)的正峰反映了表面超极化和GABA能活性(Zemon等，1980)。VEPs已用于临床试验；例如，抗癫痫药物(加巴喷丁(gabapentin)，Conte等，2009)和婴儿配方食品(O’Connor等，2009)。两者均获得FDA批准，部分基于VEP研究的阳性结果。在Mount Sinai正在进行的临床试验的数据为VEPs作为治疗反应的量度提供了支持。根据图8的示意图，在治疗前、治疗后6小时以及治疗后一周、两周和四周进行临床反应评估。

结果

受试者有充分的混合性癫痫发作病史，其自19岁起，一周(每周)“像发条一样(like clockwork)”发生3到4次，持续了4年。他的癫痫发作包括强直-阵挛性抽搐，伴有氧饱和度降低，以及***性血压变化。这些癫痫发作具有严重、重症性质，并且可能危及生命。

该受试者在输注研究药物前一个小时左右的时间内将要出现这些严重癫痫发作之一——由于伴有经典的性格和行为变化，因此可检测到他的癫痫发作前的发作期。根据研究的临床医生，输注的研究药物似乎完全中止了即将发生的癫痫发作。值得注意的是，癫痫发作在接下来的两周内完全停止了(且根据研究的临床医生，这是两周内没有癫痫发作的第一轮，因为该受试者在至少五年前处于中青年时期。在这个无癫痫发作的时期中，这个年轻人在几个不同的水平上“觉醒(awakened)”，他变得更加社交、更加专注(例如，更好的眼神交流)、更加合作、更少躁动，并且他的运动技能也得到了改善。在研究药物输注后大约三周，“小事件”开始复发，可能代表轻微的复杂部分性癫痫发作，但是没有伴有惊厥——这些罕见/偶发的癫痫发作被研究临床医生描述为“更短的(briefer)，涉及的运动较少”。

在输注AMO-01之前和之后6小时记录了VEPs。图9示出了如何通过治疗减轻该受试者的VEPs。

这些数据共同证实，向患有SHANK3基因功能丧失的人类受试者给予AMO-01可产生超过暴露于该化合物的在PhelanMcDermid综合征的多种特征上的临床获益，如在该疾病的Shank3b基因敲除小鼠模型中的体内所观察到的。

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虽然已经参考本发明的某些特定实施方案描述了本发明，但是本领域技术人员将理解，可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下进行各种修改。所附权利要求的范围不限于所描述的特定实施方案。

参考文献

本说明书中提及的所有专利和出版物指示了本发明所属领域的技术人员的技术水平。每个引用的专利和出版物在本文中均通过引用整体并入本文中。在本申请中已引用了以下所有参考文献：

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