具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明进行详细说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚、明确。

目前的溶石剂中多以溶解胆固醇型胆结石为主，在溶解胆色素型胆结石和混合型胆结石中，溶解率低，并且现有的溶石剂对人体具有较大副作用，甚至损伤肝肾。需要开发出一种能够溶解混合型胆结石，尤其能够溶解胆色素型胆结石的溶石剂，同时能够降低溶石过程中和残留溶石剂进入人体后的副作用，减少溶石剂的残留，难度较大。

本发明中，所述溶石剂包含聚乙二醇丁醚。聚乙二醇丁醚主链为乙二醇链，端基带有丁醚基和羟基。其中，乙二醇链的代谢点主要是羟基，乙醇脱氢酶将醇基氧化成羧酸，损害性很小，也有可能被甲基化，此时代谢点被占用，不会产生有毒代谢物，同时丁醚基团在人体中的代谢产物毒性也很低。使用聚乙二醇丁醚作为溶石剂的主要溶石成分预计可以有效降低溶石剂对人体的毒副作用。

本发明中，通过大量实验证实，聚乙二醇丁醚可以有效溶解胆固醇型胆结石、混合型胆结石和胆色素型胆结石。并且聚乙二醇丁醚可与水配合使用，仍然具有良好的溶石效果，不但可以降低聚乙二醇丁醚的使用量，降低其浓度，还可以在溶石后将溶石剂通过水或水性溶剂，如生理盐水，将溶石剂清洗出去，减少溶石剂在体内的残留。

值得注意的是，所述溶石剂还包含水。当相对于1mL水而言，聚乙二醇丁醚加入量由1mL变化到10mL时，胆固醇型胆结石的溶解率均可达到100％。在体外溶石实验中，当聚乙二醇丁醚与水的体积比为1:1时仍能在100min内达到100％的溶石率，溶石后仅残留少量絮状物，在临床使用时，可随溶石剂清洗出去，当提高溶石剂浓度后，残留的细小颗粒消失。当聚乙二醇丁醚与水的体积比为1:1时，可以在100min内达到100％的溶解率，当聚乙二醇丁醚与水的体积比为10:1时，可以在10min内达到100％的溶解率。

相对于1mL水而言，聚乙二醇丁醚加入量为10mL时，溶解混合型胆结石，可在80min以内达到100％的溶解率；相对于1mL水而言，聚乙二醇丁醚加入量为2mL时，溶解混合型胆结石，可在90min以内达到100％的溶解率，可见，在溶解混合型胆结石的过程中降低聚乙二醇丁醚的浓度对溶解时间影响较小，因此，在实际使用过程中可降低浓度使用，减少高浓度溶石剂对人体器官的影响。

在聚乙二醇丁醚在溶解胆色素型胆结石时，相对于1mL水而言，聚乙二醇丁醚加入量为10mL的溶石剂可在100min以内达到25～30％的溶解率，延长溶石时间后可完全溶解胆色素型胆结石，无任何残留。但相对于1mL水而言，聚乙二醇丁醚加入量为2mL的溶石剂无法溶解黑色胆色素型胆结石。

因此，在临床使用过程中，可根据胆结石类型配置适当浓度的聚乙二醇丁醚溶石剂，进行应用。

所述聚乙二醇丁醚溶石剂溶解胆固醇型胆结石时，聚乙二醇丁醚与水的体积比为(1～50):1，优选为(1～15):1，更优选为(1～10):1。

所述聚乙二醇丁醚溶石剂溶解混合型胆结石时，聚乙二醇丁醚与水的体积比为(2～50):1，优选为(2～25):1，更优选为(2～15):1。

所述聚乙二醇丁醚溶石剂溶解胆色素型胆结石时，聚乙二醇丁醚与水的体积比为(5～50):1，优选为(5～25):1，更优选为(5～15):1。

在本发明中，聚乙二醇丁醚溶石剂对胆固醇型胆结石和混合型胆结石具有良好的溶石效果，可在短时间内完全溶解胆结石，在溶解胆色素型胆结石时，较胆固醇型胆结石和混合型胆结石溶石时间长，在临床使用时，可针对性调整，用于将胆结石溶解为细小颗粒，根据临床情况调整溶石时间，利于胆色素型胆结石的排出。

值得注意的是，本发明中聚乙二醇丁醚溶石剂相对与现有溶石剂，可以大幅降低毒副作用，在体内的代谢产物预计伤害小。有望用于肝内胆管结石的溶解，大幅减轻治疗痛苦，保留患者肝组织。也可用于胆囊结石和肝外胆管结石的体内溶解，避免切除患者胆囊，损伤胆管等。

传统溶石剂甲基叔丁醚(MTBE)毒性较大(LD50大鼠口服4g/kg，数据来源：美国国家职业安全卫生研究所NIOSH)，沸点低为55℃，在相关动物实验和人体代谢观察中，MTBE在大鼠和人体内表现出相似的整体代谢，MTBE在酶的作用下氧化去甲基化生成甲醛和叔丁醇(TBA)，甲醛快速代谢形成甲酸盐和CO₂，而TBA进一步代谢主要生成α-羟基异丁酸，其中甲醛对人体损伤较大。有资料显示，人体内催化MTBE生物转化形成甲醛和TBA的酶只在肝脏中大量存在，可推测人体对MTBE的代谢主要发生在肝脏，代谢产物对肝肾损伤较大。并且甲基叔丁醚对胆色素型胆结石的溶解效果很差，很难溶解胆色素型胆结石。

所述聚乙二醇丁醚的数均分子量为5～500，优选为150～280，更优选为200～210。

在本发明的一种优选方式中，所述溶石剂还包含表面活性剂、蛋白溶解剂、络合剂或抗炎剂。

在溶石剂中添加表面活性剂不但可以增溶，还具有乳化、润湿、去污、杀菌等作用。所述表面活性剂选自新洁尔灭、卵磷脂、氨基酸型、甜菜碱型、聚乙二醇、聚山梨醇酯、泊洛沙姆，优选选自卵磷脂、聚乙二醇、聚山梨醇酯、泊洛沙姆，更优选为卵磷脂或泊洛沙姆。

卵磷脂可以调节血清脂质水平，能够降低胆固醇水平，保护肝脏，加强免疫力以及抗脂肪肝的活力。将卵磷脂加入到溶石剂中，可以提供一定的肝脏保护能力，降低溶石剂对肝脏的损伤。

泊洛沙姆是聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段共聚物，其中聚氧乙烯链具有相对亲水性，聚氧丙烯链具有相对亲油性。本发明中加入泊洛沙姆，一方面可以使其与水形成均一稳定的溶石剂，另一方面由于加入泊洛沙姆可以减少多烷烃醇丁醚的使用量，减少溶石剂对人体的副作用。

所述表面活性剂在溶石剂中的浓度为0.01～3.0g/mL，优选为0.05～1.5g/mL，更优选为0.08～1g/mL。

目前，胆固醇型胆结石中，70％以上为胆固醇，还会含有少量胆红素、胆酸、磷脂、蛋白、游离脂肪酸以及钙盐、镁盐等；混合型胆结石中，30％～70％为胆固醇，还含有胆色素和钙盐等；胆色素型胆结石的主要成分有游离胆色素、胆色素多聚体、各种钙盐和黏液糖蛋白、钙盐、细菌、虫卵等。因此，为了促进胆结石的溶石效果，本发明中，优选加入蛋白溶解剂。为了提高肝胆道、胆囊对溶石剂的抵抗能力，优选加入抗炎剂

所述蛋白溶解剂选自盐酸胍、尿素、硫脲、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)、二硫苏糖醇(DTT)，优选为盐酸胍、尿素、硫脲或CHAPS，更优选为盐酸胍、尿素或硫脲中的一种或多种。

硫脲能够破坏蛋白质分子间形成的氢键，防止由氢键引起的蛋白质聚集以及蛋白迁移过程中二级结构的形成。在使用过程中需要配合尿素进行使用。

CHAPS是两性表面活性剂，分子结构中具有一个胆酸和硫代甜菜碱，可以保护蛋白质的天然状态，溶解膜蛋白，从而解除蛋白与蛋白间的相互作用。

DTT可以还原蛋白质中二硫键，阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。其中，第一步反应所形成的中间态很不稳定，因为DTT上的第二个巯基趋向于与被氧化的硫原子连接，使中间态很快被转化为DTT的环状氧化结构，从而完成对二硫键的还原。DTT的还原力受pH值的影响，只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子才具有反应活性，硫醇则没有，并且该物质长期依赖进口，成本昂贵。

盐酸胍和尿素对疏水氨基酸残基的增溶作用，因为盐酸胍和尿素具有形成氢键的能力，盐酸胍和尿素在高浓度(4～8mol/L)水溶液时能断裂氢键，结果盐酸胍和尿素就成为非极性残基的较好溶剂，使之蛋白质分子内部的疏水残基伸展和溶解性增加，从而使蛋白质发生不同程度的变性。

在室温下，3～4mol/L盐酸胍可使球状蛋白质从天然状态转变至变性状态的中点，通常增加变性剂浓度可提高变性程度，约6mol/L盐酸胍可以使蛋白质完全转变为变性状态。盐酸胍由于具有离子特性，在8mol/L盐酸胍溶液中，它们一般以无规卷曲构象的完全变性状态存在。

尿素溶解能力较盐酸胍慢且弱，蛋白溶解度为70％～90％，尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐，对重组蛋白质的氨基进行共价修饰，但其具有不电离、中性、成本低等优点。

盐酸胍溶解能力和变性能力相对尿素较强，不会造成重组蛋白质的共价修饰，但有成本高、在酸性条件下易产生沉淀；尿素溶解能力相对较弱，但具有不电离、呈中性、成本低、蛋白质复性后不会造成大量蛋白质沉淀等优点。在实际应用中，根据溶石剂使用环境进行选择使用。

所述溶石剂中盐酸胍的浓度为0.1～8mol/L，优选为1～7mol/L，更优选为2～6mol/L。

所述溶石剂中尿素的浓度为0.1～8mol/L，优选为1～7mol/L，更优选为2～6mol/L。

所述络合剂选自乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)或氨基三乙酸(NTA)，优选为乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)或乙二胺四乙酸(EDTA)，更优选为乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)。

EDTA、EDTA-2Na和EGTA是胆色素型胆结石的良好溶剂，因其胆色素型胆结石中胆色素和钙含量很高，能有效地溶解其中的钙质，可以在镁离子存在下与钙离子络合。在溶石剂中加入钙离子络合剂，可以破解胆结石，尤其是胆色素型胆结石，使其中的钙离子从胆结石中溶解出来，进而层层破坏胆结石表面，实现逐步溶解。

另外，在增溶剂的作用下，可使极性弱的溶石剂和极性强的EDTA-2Na分子间具有相互增溶的作用，发挥各组分间的协同作用。所述络合剂的浓度为0.005～0.1g/mL，优选为0.008～0.08g/mL，更优选为0.01～0.05g/mL。

所述抗炎剂选自牛磺胆酸、牛黄脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、熊脱氧胆酸，优选选自牛磺胆酸、牛黄脱氧胆酸，更优选为牛磺胆酸。牛磺胆酸能够降低炎症组织毛细血管的通透性，抑制炎症性肿胀，抑制一氧化氮、前列腺素E2、组胺等炎症介质的产生。

所述的溶石剂的给药方式，包括经皮经肝胆穿刺窦道插管或经十二指肠镜逆行插入鼻-胆导管等途径，注入溶石剂，使其直接和胆结石接触。

在临床治疗中，在治疗器具中需要经常使用乳胶管，传统溶石剂对乳胶管有一定的溶胀作用，容易将乳胶管中的有害成分溶解，随溶石剂一起进入人体内，增加溶石剂对人体的毒害作用。

本发明中的聚乙二醇丁醚溶石剂对乳胶管的溶胀作用非常小，严重的溶胀显现会给胆结石溶解手术带来很大的负面影响，进一步保证了溶石剂的可靠性和安全性。

本发明中的聚乙二醇丁醚溶石剂，能够溶解在肝内胆管中形成的胆色素型胆结石和混合型胆结石，有望解决肝内胆管结石治疗难度大的问题。聚乙二醇丁醚为聚合物，毒性小，代谢副作用小。加入表面活性剂、蛋白溶解剂、络合剂或抗炎剂可以促进溶石效果，保护人体组织，有望达到良好临床使用效果。

实施例

实施例1

将聚乙二醇丁醚与水按照10mL:1mL、8mL:4mL、5mL:5mL的体积比进行混合，磁力搅拌2min，得到均匀稳定的溶石剂1-1、溶石剂1-2、溶石剂1-3。

分别称三颗约0.12g完整的胆固醇型胆结石(胆结石来源于病人，女，44岁)分别放入上述溶石剂中，用超声波清洗机(超声波功率240W)破碎溶解胆结石，每10min记录一次实验现象。10min时，溶石剂1-1中胆结石完全溶解，胆固醇型胆结石完全溶解后，溶石剂的颜色由无色透明变为深黄色透明；30min时，溶石剂1-2中胆结石完全溶解，溶石剂的颜色由无色透明变为黄色透明；90min时，溶石剂1-3中胆结石完全溶解，溶石剂的颜色由无色透明变为浅黄色非透明溶液，溶解效果如图1所示。使用针头直径为0.7毫米的注射器，将溶石剂吸出，仅溶石剂1-3对应的杯底有少量絮状杂质。

分别称三颗约0.15g完整的混合型胆结石(胆结石来源于病人，女，33岁)分别放入溶石剂1-1、溶石剂1-2中，用超声波清洗机(超声波功率240W)破碎溶解胆结石，每10min记录一次实验现象。溶石剂1-1、溶石剂1-2分别在80min内和90min内完全溶解混合型胆结石，溶石过程中溶石剂1-1颜色由无色透明变为深黄色透明溶液，溶石剂1-2由无色透明溶液变为黄绿色透明溶液，而后变为棕黄色透明溶液，溶石效果如图2所示。分别使用针头直径为0.7毫米的注射器，将溶石剂1-1、溶石剂1-2吸出，烧杯底部无残留物质。

分别称三颗约0.1g完整的胆色素胆结石(胆结石来源于病人，男，67岁)分别放入溶石剂1-1、溶石剂1-2中，用超声波清洗机(超声波功率240W)破碎溶解胆结石，每10min记录一次实验现象。溶石剂1-1在500min内完全溶解胆色素型胆结石，溶石过程中由原来的，溶石过程中，溶石剂1-1由无色透明溶液先是变为褐色，后逐渐变为黑褐色，胆结石由完整块状逐渐破碎溶解，使用针头直径为0.7毫米的注射器，将溶石剂吸出，杯底无残留物质，溶石剂效果如图3所示。溶石剂1-2中的胆结石在500min时仍未完全溶解，溶石剂1-2由原来的无色透明溶液先是变为黄绿色，后变为棕黄色，最后变为黑褐色，说明胆色素胆结石在溶石剂1-2中发生了部分溶解，如图3所示，使用针头直径为0.7毫米的注射器，将溶石剂1-2吸出，杯底残留部分未溶解的黑色胆色素型胆结石。

说明聚乙二醇丁醚可以很好的溶解胆固醇型胆结石、混合型胆结石和胆色素型胆结石，即使降低到中等浓度也能够完全溶解胆固醇型胆结石和混合型胆结石。

实施例2

溶石剂对胆结石溶解手术中所使用的乳胶管的溶胀作用。不同的溶剂导致乳胶管的溶胀程度不同，严重的溶胀显现会给胆结石溶解手术带来很大的负面影响。

研究以下溶石剂对乳胶管的溶胀程度的影响：

溶石剂1-1：聚乙二醇丁醚:水＝10mL:1mL。

取乳胶管，完全浸泡在上述溶石剂中24小时后，比较乳胶管浸泡前后的质量、体积、长度的变化。采用去离子水作为阴性对照组，采用传统溶石剂乙酸异戊酯和甲基叔丁基醚作为阳性对照组。

浸泡前，称取乳胶管质量，并用钢板尺测量乳胶管长度。量筒中加入定量去离子水，在将乳胶管放入量筒中浸没，读取前后差值计为乳胶管体积。

将乳胶管在室温下自然干燥1小时后，置于上述四种溶石剂中，并将对比乳胶管置于足量的去离子水、乙酸异戊酯和甲基叔丁基醚中浸泡24h。浸泡结束后，在室温下自然干燥1小时后，以上述同样的方法测量乳胶管的质量、长度和体积，结果如表1所示。

表1乳胶管浸泡前后变化比值

从乳胶管浸泡前后数据变化可以看出，现有的溶石剂乙酸异戊酯和甲基叔丁基醚会明显造成乳胶管的溶胀，而本发明中提供的溶石剂对乳胶管的溶胀作用较小。其中，溶石剂1-1中浸泡的乳胶管长度略有减少，但质量稍有增加，说明长度变化为变形导致的。但溶石剂1-1中的乳胶管变形溶胀较乙酸异戊酯和甲基叔丁基醚中乳胶管的溶胀变化大幅减小。

以上结合具体实施方式和/或范例性实例以及附图对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。本发明的保护范围以所附权利要求为准。