具体实施方式

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域中的技术人员通常理解的含义相同的含义。

如本文所用，单数形式“一(a)”、“一个(an)”和“该(the)”包括复数个指示物，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提及“样品”包括多个此类样品及本领域技术人员已知的其等效物。

本发明提供一种治疗过敏性疾病的方法，该方法包含投予有其需要的个体治疗有效量的一化合物，该化合物选自于由鱼针草内酯(ovatodiolide)、1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(1'-acetoxychavicol acetate)、花姜酮(zerumbone)及其组合组成的群组。

在本发明中，鱼针草内酯(ovatodiolide)，在本文中也称为“AR001DS1”，可以从鱼针草(Anisomeles indica)中分离和纯化出，具有以下结构

在本发明中，1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯，在本文中也称为“AR001DS2”，可从大高良姜(Alpinia galangal)中分离和纯化出，其具有以下结构

在本发明中，花姜酮(zerumbone)，在本文中也称为“AR001DS3”，从红球姜(Zingiber zerumbet)中分离和纯化出，其具有以下结构

本发明提供一种用于制备治疗过敏性疾病的药物的一化合物的用途，其中该化合物选自于由鱼针草内酯(ovatodiolide)、1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(1'-acetoxychavicolacetate)、花姜酮(zerumbone)及其组合组成的群组。

本发明亦提供一种用于治疗过敏性疾病的保健或医药组合物，其包含治疗有效量的化合物，该化合物选自于由鱼针草内酯(ovatodiolide)、1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(1'-acetoxychavicol acetate)、花姜酮(zerumbone)及其组合组成的群组。

由于化合物可以由植物或草药提供。例如，可由植物鱼针草(Anisomeles indica)提供鱼针草内酯(ovatodiolide)和/或花姜酮(zerumbone)；来自大高良姜(Alpiniagalangal)的1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯，以及来自红球姜(Zingiber zerumbet)的花姜酮(zerumbone)。因此，本发明提供一种草药组合物或医药组合物，该组合物包含药草萃取物，其选自于由鱼针草(Anisomeles indica)、大高良姜(Alpinia galangal)、红球姜(Zingiber zerumbet)及其组合组成的群组。

如本文所用，术语“过敏性疾病”是指由免疫系统对环境中通常无害的物质过度敏感引起的病症，尤其包括自体免疫疾病。在本发明的实施例中，过敏性疾病选自于由花粉热、食物过敏、异位性皮肤炎、气喘、干癣、过敏性干癣、异位性皮肤炎、接触性皮肤炎或湿疹、脂溢性皮肤炎、干癣关节炎、毒常春藤(poison ivy)过敏、类风湿性鼻炎、多发性硬化症、骨关节炎、过敏性鼻炎和心肌病组成的群组。症状可能包括红眼、发痒皮疹、打喷嚏、流鼻涕、呼吸急促或肿胀。在本发明实例中，该过敏性疾病为过敏性皮肤炎，尤其是异位性湿疹或干癣。

如本文所用，术语“自体免疫疾病”是指由对正常身体部位的异常免疫反应引起的病症。自体免疫疾病至少有80种。自体免疫疾病的实例包括但不限于自体免疫性肝炎、自体免疫性胰脏炎、乳糜泻、第1型糖尿病、薛格连氏症候群(Sjogren’syndrome)、溃疡性结肠炎、克罗恩氏症(Crohn’s disease)、反射性交感神经营养不良、心肌梗塞后症候群、格雷夫斯病(Graves'disease)、发炎症性肠病、多发性硬化症、干癣、类风湿性关节炎、心肌病和系统性红斑性狼疮。

根据本发明，鱼针草(Anisomeles indica)的萃取物可经由以下方法制备：用乙醇萃取鱼针草(Anisomeles indica)，以获得粗萃取物，将粗萃取物加载到二氧化硅填充的层析管柱中，并进行梯度冲提，冲提液：正己烷/乙酸乙酯、己烷/乙酸乙酯/甲醇，以及甲醇，以得到分液；用二氧化硅填充的层析管柱分离该分液，使用冲提液：二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇，以及甲醇进行梯度冲提，以得到浓缩物；用正己烷/乙酸乙酯再结晶浓缩物，得到结晶。鱼针草内酯(ovatodiolide)及/或花姜酮(zerumbone)可从植物鱼针草(Anisomelesindica)提供。

根据本发明，大高良姜(Alpinia galangal)萃取物可经由以下方法制备：用环己烷萃取大高良姜(Alpinia galangal)，得到粗萃取物，将粗萃取物加载到二氧化硅填充的层析管柱中，并进行梯度冲提，冲提液：正己烷/乙酸乙酯，正己烷/乙酸乙酯/甲醇，以及甲醇，得到分离物；并使用正己烷/乙酸乙酯再结晶该分离物，以得到结晶。可以从大高良姜(Alpinia galangal)中萃取1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯。

本文使用的术语“个体”包括人或非人动物，例如伴生动物(例如狗、猫等)、农场动物(例如牛、羊、猪、马等)，或实验动物(例如大鼠、小鼠、天竺鼠等)。

本文使用的术语“治疗”是指将一或多种活性剂投予有其需要的个体，其具有过敏性疾病、过敏性疾病的症状或受到过敏性疾病影响。其目的是治愈、治疗、减轻、降低、改变、纠正、改善或影响疾病、疾病的症状或受到疾病的影响。

如本文所用的术语“治疗有效量”是指化合物或药剂的量，与未接受该量的相应个体相较，其导致治疗、愈合、预防的效果，或减轻疾病、病症或副作用，或降低疾病或病症的进展速度。该术语亦包括在该范围内可有效增强正常生理功能的量。

为了用于治疗，将治疗有效量的组合物配制成用于投药的医药组合物。因此，本发明提供一种医药组合物，其包含治疗有效量的(复数个)活性成分和一或多种医药上可接受的载体。

本文使用的术语“医药上可接受的载体”是指可接受的(复数个)载体、(复数个)稀释剂或(复数个)赋形剂，其与制剂中的其他成分兼容，且对于该医药组合物投予的个体无伤害性。根据医药制剂的要求，本领域中通常已知或使用的任何载体、稀释剂或赋形剂均可用于本发明。

根据本发明，该医药组合物的形式可为锭剂、丸剂、粉末、口含片、小包、药片、酏剂、悬浮液、软膏、乳液、溶液、糖浆、软和硬明胶胶囊、栓剂、灭菌注射液和包装粉末。在本发明的一具体实例中，医药组合物以软膏的形式配制。此类配方可经由药学领域中已知的任何方法制备。

根据本发明，医药组合物可以适于经由任何合适的途径投药，包括但不限于口服、直肠、鼻、局部、阴道或肠胃外途径。在本发明的一具体实例中，该医药组合物配制为用于局部投药。此类配方可经由药学领域中已知的任何方法制备。

根据本发明，本文所述的方法、用途或组合物可与至少一种额外的过敏药物组合投予个体。对应于此的示范性过敏药物包括但不限于，酮咯酸胺丁三醇(ketorolactromethamine)、吡嘧司特钾(pemirolast potassium)、酮替芬(ketotifen)、氯雷他定(loratadine)、新大霉素钠(neodocromil sodium)、非索非那定(fexofenadine)、氯替泼诺依托泊汀酯(loteprednol etabonate)、氮卓斯汀(azelastine)、异丙托溴铵(ipratropiumbromide)、肾上腺素、倍氯米松(beclomethasone)、苯海拉明(diphenhydramine)、地氯雷他定(desloratadine)、氯雷他定(loratadine)、地塞米松(loratadine)、依匹斯汀(epinastine)、氟替卡松(fluticasone)。

藉由以下实例进一步说明本发明，这些实例应仅被解释为说明性的，而不以任何方式限制本发明的其他部分。不需进一步说明，相信本领域技术人员将能够基于本文的描述最好地使用本发明。

制备例

1.接触性皮肤炎动物实验

接触性皮肤炎动物模式：

在BALB/c小鼠出生后7至8周后，进行背部剃刮，并且使用过敏药物1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)作为刺激剂来诱发接触性皮肤炎的症状，如异位性湿疹。如图1所示，在第1-3天，背部涂有100μl的0.5％DNCB；皮肤受到100μl的1％DNCB的刺激，第14天用20μl的1％DNCB刺激耳朵。涂抹也可在第17、21、24、28、31和35天进行。另一方面，从第14天起，测试软膏每周投药五次，持续三周。在第36天，牺牲小鼠。

小鼠分组：

将小鼠分成五组，每组有四只小鼠。名称、药物和药膏如表1所示：

表1

小鼠以加至药膏中的鱼针草内酯(ovatodiolide)(AR001DS1)和1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(AR001DS2)组合物处理，并将加至药膏中的鱼针草内酯(ovatodiolide)(AR001DS1)和花姜酮(zerumbone)(AR001DS3)组合物，分别称为为A100组和V2组，其中每种化合物的量为2.5％。

耳朵肿胀测量：

在实验后，测量并记录小鼠耳朵的厚度

苏木精和伊红(HE)染色：

从小鼠中取出皮肤和耳朵、固定在甲醛中并制成蜡片。切片后，用HE染色，观察嗜酸性球(嗜酸性颗粒细胞)浸润和皮肤肿胀结果。

皮肤甲苯胺蓝染色：

将小鼠的皮肤和耳朵固定并切片后，用甲苯胺蓝染色，观察肥大细胞的浸润情况。

经由实时聚合酶链反应(PCR)分析皮肤的基因表现：

取一片皮肤以萃取其mRNA，经由实时PCR分析IL-4和IL-5的基因表现。

2.干癣动物实验

干癣动物模式：

动物是来自实验动物中心的5-8周龄BALB/c小鼠。实验环境维持在25℃。光照和黑暗时期每12小时循环一次。小鼠可自由获取足够的食物和水。

在小鼠中藉由咪喹莫特(imiquimod，IMQ)诱发干癣。如图2所示，在实验前一天，用刮胡刀和脱毛膏将小鼠脱毛后，将小鼠分成两组。

用鱼针草内酯(ovatodiolide)(AR001DS1)和1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(AR001DS2)的组合物处理的组称为AR100；用鱼针草内酯(ovatodiolide)(AR001DS1)治疗的组称为AR111；用鱼针草内酯(ovatodiolide)(AR001DS1)和花姜酮(zerumbone)(AR001DS3)的组合物处理的组称为AR112。将小鼠分成6组，每组8只小鼠。名称、药物和药膏如表2所示：

表2

敏化组(S，IMQ/基底)小鼠于小鼠背部涂抹62.5mg IMQ。4小时后，用50mg的AR100(IMQ/AR100)、50mg AR111(IMQ/AR111)或50mg AR112(IMQ/AR112)处理小鼠。药物每天涂抹一次，持续6天。记录小鼠的体重，每天拍摄小鼠照片。观察皮肤的红肿和脱屑状况并进行评分。在实验的最后一天，牺牲小鼠，取其皮肤进行免疫组织染色和细胞因子表现分析。

3.自体免疫性肝炎的动物实验

试剂

伴刀豆球蛋白A(Con A)和地塞米松(dexamethasone，Dex)购自Sigma-Aldrich(USA)。ProcartaPlex^TM免疫测定套组购自Corning Inc.(USA)。GOP和GPT Fuji Dri-Chem载玻片购自Winning Medical Inc.(中国台湾)。

动物

雄性BALB/c小鼠(7-9周龄)购自BioLASCO Taiwan Co.，Ltd或实验动物中心(NLAC，中国台湾)。每笼饲养5只动物，在整个实验过程中随意提供食物和水。室温保持在23±2℃，交替12小时光-暗循环。使动物适应环境一周，以使实验前的压力效应最小化。涉及动物及其照护的所有实验方案均由ITRI中的机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准(ITRI-IACUC-2018-041和ITRI-IACUC-2018-050；由AAALAC认可)，并且根据中国台湾农业委员会的规定进行。

实验设计与肝炎诱发

将Con A以3mg/ml的浓度溶解在无致热原的生理食盐水中，并以15mg/kg或20mg/kg体重的剂量静脉内注射以诱发肝炎。在Con A处理之前30分钟以及Con A处理后4小时和8小时，口服投予AR100DS1和Dex。在Con A处理后24小时收集血液和肝脏组织。将血清储存在-80℃直至分析。

肝脏酵素分析

为了评估Con A处理后的肝细胞损伤位准，藉由Fuji Dri-Chem载玻片(Fuji，Japan)测量血清GPT和GOT位准。

血清细胞因子分析

汇集相同组的血清用于细胞因子测定。根据制造商的说明，经由ProcartaPlex^TM免疫试验套组测量细胞因子位准。

组织病理学

将肝组织固定在10％经磷酸盐缓冲的甲醛中，包埋在石蜡中，并以苏木精和伊红(H&E)染色以确认组织损伤。用BioLASCO Taiwan Co.,Ltd的兽医病理学显微镜检查组织损伤。所有显微镜观察的病变的严重性分级系统标准从0到4分如下：0＝无；1＝个体细胞坏死；2＝≤30％小叶坏死；3＝≤60％小叶坏死；4＝>60％小叶坏死。

统计分析

数据以平均值±SEM表示。在这项研究中，Student's t检验用于分析药物和载剂治疗组之间的差异。当p值小于0.05时，该差异视为统计学上显着。

4.肥大细胞和树突状细胞的免疫反应

β-己糖胺酶分泌测定

将RBL-2H3细胞接种在24孔盘中，然后在37℃、5％CO₂大气中以抗二硝基苯(DNP)-IgE进行敏化。洗涤后，将细胞用AR001DS1(12.5、25、50和100μg/ml)在37℃处理30分钟，然后用DNP-牛血清白蛋白(BSA)在37℃刺激30分钟，以诱发细胞去颗粒化。将上清液转移到96孔微孔盘中，并在0.1M柠檬酸盐缓冲液(pH4.5)中与等体积的5mM 4-硝基苯基N-乙酰基-β-胺基葡萄糖苷一起静置2小时。藉由加入200ml终止缓冲液(0.05M碳酸钠，pH 10)终止反应，并使用ELISA盘读取器测定405nm处的OD值。

用于TNF-α分泌的ELISA测定

从C57BL/6小鼠分离出DC，并在37℃下培养7天。然后将DC接种在24孔盘中，并在5％CO₂大气中于37℃培养过夜。用AR001DS1(12.5、25、50和100μg/ml)处理DC 1小时，然后用脂多醣(LPS)刺激4小时。收集上清液并使用ELISA测定法定量培养物上清液中的TNF-α分泌。

实施例1.用于诱发异位性皮肤炎的动物实验

(1)外观观察和分析

在实验结束时牺牲小鼠后，拍摄小鼠皮肤的外观。正常组(N)的小鼠皮肤完整；敏化组(S)的小鼠皮肤粗糙且发炎，耳朵肿胀。在DNCB刺激后约3-4周后发现皮肤重塑现象。在SV组中，皮肤的症状没有改善。然而，在A100和V2的每一组中发现对异位性湿疹的改善效果，其中皮肤红肿和皮肤肿胀有显着改善。另外，在破坏小鼠颈部的过程中，发现A100组和V2组没有皮肤裂纹现象，其中由异位性湿疹引起的脆弱皮肤得到改善。因此，可以得出结论，经由鱼针草内酯(ovatodiolide)和1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(A100)的组合物，以及鱼针草内酯(ovatodiolide)和花姜酮(zerumbone)(V2)的组合物治疗，可以改善由异位性湿疹引起的症状。

(2)耳厚度测量和分析

测量SV组的耳厚度为0.69±0.08mm，其显着厚于正常组(N，0.23±0.04mm)。如图3所示，组A100和V2的耳厚度分别测量为0.27±0.07mm(p<0.01)和0.31±0.10mm(p<0.001)。发现A100和V2组的耳肿胀得到显着改善。在A100和V2二组中，皮肤的外观和耳朵的肿胀皆得到改善。

(3)耳朵和皮肤切片的观察和分析

将牺牲小鼠的耳朵和皮肤切片并进行HE染色。发现敏化组的皮肤和耳朵具有真皮层增厚的现象，许多嗜酸性颗粒细胞渗入皮肤组织。另一方面，在A100组和V2组中，皮肤和耳朵的肿胀减少，嗜酸性颗粒细胞的浸润减少。

具体地，嗜酸性颗粒细胞倾向于积聚在过敏部位，例如气喘的肺部和异位性皮肤炎的皮肤部分。聚集在过敏部位的这组嗜酸性颗粒细胞会释放更多的发炎物质，导致渗透部位出现更严重的发炎。因此，如果可以抑制嗜酸性颗粒细胞的浸润，则异位性皮肤炎的症状将有显着改善。可以得出结论，在A100和V2组中，嗜酸性颗粒细胞在皮肤和耳朵上的浸润得到显着改善。

亦使用甲苯胺蓝染色小鼠的皮肤和耳朵切片，观察肥大细胞。结果显示在图4和图5中。肥大细胞是诱发过敏反应的重要免疫细胞。当IgE、过敏原和肥大细胞形成交联时，肥大细胞将被激活并诱发释放组织胺和白三烯等，导致对组织的过敏反应。当大量活化的肥大细胞渗入皮肤炎的受影响区域时，会导致严重的过敏和瘙痒。在实验中，发现敏化组的皮肤或耳朵中有许多肥大细胞浸润现象(如图4和5所示)，表明肥大细胞数量与S组相较有下降趋势，对皮肤过敏症状有很大改善。尽管A100组的耳朵切片与V2组的耳朵和皮肤切片没有显着差异，但肥大细胞的浸润减少。

(4)血液中抗体的测量

如图6、7和8所示，A100和V2组中IgE的产生受到抑制，而A100组中IgE产生的抑制作用大于V2组(请见图8)。可以得出结论，鱼针草内酯(ovatodiolide)和1'-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(A100)的组合物，以及鱼针草内酯(ovatodiolide)和花姜酮(zerumbone)(V2)的组合物，可以抑制IgE的产生，显示出皮肤过敏的显着改善。

亦发现异位性皮肤炎和Th2细胞的过度活化彼此密切相关。如图7所示，A100组的IL-4、IL-5和TNF-α位准，在降低IL-4方面与对照组显着不同(p<0.05)。如图7所示，含有AR001DS1和AR001DS2的组合物对IL-5和TNF-α的位准有影响，但显示出下降趋势(请见图7)。在V2组中，AR001DS1和AR001DS3的组合物显示出降低IL-4、IL-5和TNF-α位准的作用，但不显着。

如图6所示，含有AR001DS1和AR001DS2(AR100组)的组合物具有抑制IgG1和促进IgG2a的趋势。与AR100组相较，V2组血液中IgG1和IgG2a的位准没有显着调节。

鉴于上述情况，AR001DS1和AR001DS2的组合物对IL-4和IgE的位准产生影响，间接显示A100可降低Th2细胞的活性。在A100和V2两组中，可以发现TNF-α(发炎标记物)的表现降低。

总结之，AR001DS1和AR001DS2的组合物以及AR001DS1和AR001DS3的组合物均提供改善小鼠异位性皮肤炎症状的效果。尽管对于减少Th2免疫细胞的作用不是特别好，但是发现在用AR001DS1和AR002DS2的组合物处理的AR100组中，其血液中IgE和IL-4的位准降低。在AR100及/或V2组中，发现嗜酸性颗粒细胞和肥大细胞在皮肤上的浸润减少，表现出皮肤肿胀和发炎的改善。

实施例2.干癣的动物实验

(1)外观观察和分析

观察小鼠皮肤的外观，发现在AR100和AR112组中，有效地降低受干癣影响区域的脱屑和红肿，其中AR0001DS1和AR0002DS3的组合物对减少干癣症状有显着影响。

(2)红肿现象的评分

根据每日观察和记录小鼠对红肿程度进行评分。皮肤脱屑程度如图8A所示，红肿如图8B所示。图8A和8B中的数据基于干癣面积和严重程度指数(PASI)而定，干癣皮肤脱屑比例、红肿和脱屑的程度评分为0分(无)、1分(轻度)、2分(中等)、3分(严重)和4分(非常严重)，并且在实验过程中每天记录。结果显示，AR100组、AR111组和AR112组均能有效减轻干癣皮肤脱屑和红肿的症状，其中AR112组疗效最佳。

(3)血液中抗体的测量

Th1细胞(IFN-γ)、Th2细胞(IL-4)、Th17细胞(IL-17A、IL-17F、IL-22)、Th17细胞(IL-17A、IL-17F、IL-22)和发炎细胞因子(TNF-α、IL-6)经实时PCR分析，以比较IMQ/基底、IMQ/AR100、IMQ/AR111和IMQ/AR112对减少干癣的影响。如图9所示，在IMQ/AR100、IMQ/AR111和IMQ/AR112组中，TNF-α、IL-6、IL-17和IL-22的mRNA表现降低。可以得出结论，在IMQ/AR112组中，含有AR001DS1和AR001DS3的组合物可以改善干癣。

(4)脾肿大的测量

在IMQ诱发的干癣动物中，诱发脾肿大、淋巴器官肿胀或淋巴组织肿胀。脾脏的大小和重量被认为是实验中的发炎指标。如图10所示，在IMQ诱发的干癣动物中发炎减轻的功效，根据小鼠脾脏大小和脾脏重量作为发炎指数而定。在IMQ/AR100、IMQ/AR111和IMQ/AR112组中，IMQ诱发模式中的脾肿大程度显着降低。

(5)淋巴细胞中细胞因子表现的测量

经流式细胞术分析IMQ/AR100、IMQ/AR111和IMQ/AR112组的淋巴细胞中，Th1细胞(IFN-γ)、Th2细胞(IL-1)的细胞因子的表现。如图11所示，可以发现在IMQ/AR100、IMQ/AR111和IMQ/AR112组中，Th17细胞的表现降低，其中含有AR001DS1和AR001DS2的组合物，和含有AR001DS1和AR001DS3的组合物的作用，提供统计学上显着的影响。

实施例3.自体免疫性肝炎动物实验

自体免疫性肝炎(AIH)是一种复杂疾病，其特征在于肝细胞发炎、坏死和肝硬化倾向。BALB/c小鼠中植物凝集素伴刀豆球蛋白A(Con A)-诱发的急性肝炎是AIH的常见动物模型，我们进行该模型以评估AR001DS1的抗肝炎作用。地塞米松(Dexamethasone，Dex)，一种基于类固醇的AIH标准治疗，作为阳性对照组。

为了在小鼠中建立Con A诱发的急性肝炎，我们使用15和20mg/kg Con A刺激小鼠。与假对照组相较，15mg/kg Con A处理组血清GOT和GPT位准显着增加(GOT：1450±433对140±23U/L；GPT：1437±398对76±7U/L)。对于20mg/kg Con A治疗组，血清GOT位准显着升高(2249±549对140±23U/L)，血清GPT位准升高但不显着(2030±833对76±7U/L)。在假性和原始小鼠之间没有观察到差异(GOT：140±23对135±20U/L；GPT：76±7对83±2U/L)。Dex在本研究中作为阳性对照组。结果显示Dex降低Con A诱发的GOT升高(15mg/kgCon A：809±339对1450±433U/L；20mg/kg Con A：1261±282对2249±549U/L)。然而，Dex仅减轻了15mg/kg Con A诱发的GPT位准(898±515对1437±398U/L)，而20mg/kg Con A组则无(1940±403对1437±398U/L)。此外，以Con A处理的所有小鼠的体重都降低了。

接下来，进行肝组织的组织病理学分析。与假对照组相较，15和20mg/kg Con A二组均可诱发显着肝坏死(评分：15mg/kg Con A，2.2±0.2对0±0；20mg/kg Con A，2.2±0.7对0±0，p<0.05)。在15mg/kg Con A诱发后，Dex表现出轻微的组织损伤缓解(评分1.6±0.6对2.2±0.2)，但在20mg/kg Con A刺激组中引起更严重的病变(评分2.6±0.2对2.2±0.2))。基于这些结果，我们选择15mg/kg Con A进行进一步研究。

最后，50mg/kg的AR100DS1显着降低由于Con A增加的GPT位准(109±25对368±107U/L，p<0.05)和略微改善的GOT升高(261±45对410±56U/L)(图12)。此外，组织病理学分析显示AR100DS1可改善肝坏死(评分0.2±0.2对1.4±0.2，p<0.05)(图13)。

实施例4.AR-100对发炎信号的拮抗作用

因为AR001DS1对痛风性关节炎动物模型显示出治疗效果，其中巨噬细胞释放的IL-1β起着关键的发炎作用，测试AR001DS1在佛波醇-12-肉荳蔻酸-13-乙酸酯(phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA)诱发-激活THP-1细胞中的IL-1β诱发作用。由于AR100由AR001DS1和AR001DS2组成，因此THP-1细胞用两种成分独立预处理，然后进行PMA活化。Q-PCR和免疫印迹显示用AR001DS1或AR001DS2预处理THP-1细胞，会阻断IL-1β的表现(图14A)。有趣的是，用PMA活化THP-1细胞之后用AR100DS1处理THP-1细胞，仍会减弱IL-1β的表现，而AR001DS2不会抑制PMA诱发的IL-1β(图14B)。这些数据显示，AR001DS1和AR001DS2均能抑制巨噬细胞发炎信号的启动；此外，AR001DS1能够阻断活化巨噬细胞中的发炎信号。

实施例5.发炎细胞因子的作用

除IL-1β外，有数种细胞因子参与发炎反应。为了辨识出受AR001DS1影响的细胞因子网络，我们进行了Bio-plex分析，以监测AR001DS1处理对PMA处理的THP-1细胞中，人类27细胞因子表现的影响。观察到PMA诱发IL-1β，而AR001DS1处理会减弱其表现。此外，细胞因子如巨噬细胞发炎蛋白(MIP)-α和-β在PMA诱发的巨噬细胞分化过程中会有高度表现，而AR001DS1处理会阻断它们的表现。如图15所示，AR001DS1处理也抑制发炎细胞因子如IL-8、TNF-α和RANTES的诱发。这些数据支持AR001DS1可阻断巨噬细胞中发炎细胞因子的表现。

实施例6.

相当多的证据支持树突细胞(DC)在过敏性疾病的发病机制中的作用。与DC一同作用，肥大细胞是与过敏原和其他环境衍生物质相互作用的首批免疫细胞之一。因此，在本研究中，我们藉由利用RBL-2H3(RBL)细胞(肥大细胞株)和来自小鼠的DC，来解决AR001DS1是否抑制肥大细胞和树突细胞的免疫反应的问题。

如图16所示，抗原[DNP-牛血清白蛋白(BSA)]刺激会引起经抗-二硝基苯基(DNP)IgE敏化的RBL细胞显着释放β-己糖胺酶。相反地，经AR001DS1处理的细胞中，β-己糖胺酶的分泌以剂量依赖性方式被显着抑制。

已观察到AR001DS1可抑制β-己糖胺酶的分泌，我们开始确定AR001DS1是否抑制DC中其他分泌颗粒物质(例如TNF-α)的调节性胞吐作用。如图17所示，脂多醣(LPS)刺激会诱发TNF-α的显着分泌，而槲皮素(quercetin)是具有抗氧化、抗增殖和抗发炎特性的最著名的植物化学物质之一，可有效地减少在LPS刺激的DC中TNF-α的分泌。令人惊讶的是，AR001DS1对经LPS刺激的DC中TNF-α分泌的抑制作用，优于槲皮素。

尽管已经由较佳实施例揭示本发明，但并非意图限制本发明。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，本领域一般技术人员可允许进行修改和装饰。因此，本发明的保护范围应由随后所附的申请专利范围所限定。