治疗癌症的组合物和方法
阅读说明：本技术 治疗癌症的组合物和方法 (Compositions and methods for treating cancer ) 是由 赵启洪 J·法诺利 M·古鲁拉真 S·魏 于 2019-01-22 设计创作，主要内容包括：本发明涉及用包含CCR2/5双重拮抗剂,例如N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧基吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺；单克隆抗体,例如纳武单抗；和/或化学疗法的组合治疗受试者的癌症的方法。(The present invention relates to the use of dual antagonists comprising CCR2/5, such as N- ((1R,2S,5R) -5- (tert-butylamino) -2- ((S) -3- (7-tert-butylpyrazolo [1,5-a ] [1,3,5] triazin-4-ylamino) -2-oxopyrrolidin-1-yl) cyclohexyl) acetamide; monoclonal antibodies, such as nivolumab; and/or chemotherapy in a subject.)
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年1月22日提交的美国临时申请号62/620209的权益，其全部公开内容通过引用并于本申请。
技术领域
本发明涉及用CCR2/5双重拮抗剂、单克隆抗体和/或化学疗法的组合治疗受试者的癌症的方法。在一些实施方案中，肿瘤是实体瘤。在某些实施方案中，实体瘤是胰腺癌、结肠直肠癌或其组合。
背景技术
胰腺腺癌是美国第三大癌症死亡原因，预计到2020年会成为第二大癌症死亡原因。胰腺癌的5年生存期令人沮丧，只有8％从诊断开始生存5年。患有转移性疾病患者的结果令人沮丧，中位数生存期小于1年。患有转移性胰腺癌患者的治疗选择有限。与nab-紫杉醇组合的吉西他滨批准用于患有晚期胰腺癌患者的1L治疗。患有晚期胰腺癌的患者可在二线(2L)设置中用5-氟尿嘧啶(5-FU)/脂质体伊立替康治疗。然而，这些药物的疗效通常差，总反应率低，中位数PFS仅2个至3个月，中位数总生存期(OS)为6个至7个月。尽管化学疗法可以提高生存率，但仍有明显毒性作用，所有患者最终都患病而死。对于胰腺癌的新疗法的开发是尚未满足的领域。
世界范围内，结肠癌(包括直肠癌)是男性第三大常见癌症，女性第二大常见癌症。2013年，在美国(US)，诊断出估计142,820例新的结肠癌或直肠癌(CRC)病例，估计有50,830例死于CRC。最初诊断时，约25％患者患有转移性疾病和几乎50％患者会发生转移，这导致报告CRC患者的死亡率高。患有转移性结肠或直肠癌(mCRC)患者的治疗选择主要是包含5-氟尿嘧啶(5-FU)的方案，其与奥沙利铂或伊立替康(FOLFOX或FOLFIRI)与生物制剂例如贝伐珠单抗组合。如果KRAS状态未突变，则也可以选择EGFR抑制剂西妥昔单抗和帕尼单抗。在后来的疗法中，瑞戈非尼对先前接受过化学疗法治疗的患者的总生存期显示约6个月的提高。表明三氟胸苷/替普拉西酯的存活率结果类似。尽管有很多针对mCRC的初始治疗选择，但这些疗法的益处有限，而且很少出现完全放射线照相反应，这凸显了对较有效疗法的需求。
检查点抑制剂已经改变了癌症护理，但是将这些益处扩展到更多患者可能需要其它方法。半胱氨酸-半胱氨酸(C-C)趋化因子受体2(CCR2)和C-C趋化因子受体5(CCR5)为2个趋化因子受体，它们在肿瘤微环境(TME)中的髓样细胞和T细胞浸润物上表达，并且显示是包括肿瘤相关巨噬细胞(TAM)和髓系来源的抑制性细胞在内的髓系细胞向TME中迁移和积累的关键驱动因素(Mantovani,A.等人，Nat.Rev.Clin.Oncol.,2017Jan 24.doi:10.1038/nrclinonc.2016.217；Lesokhin,A.M.等人，Cancer Res 72(4):876-86(2012)；Schlecker,E.等人，J.Immunol.,189(12):5602-11(2012))。此外，两种受体在调节性T细胞(Treg)向TME的运输中已显示重要作用(Loyher,P.L.等人，Cancer Res.,76(22):6483-94(2016)；Tan M.C.等人，J.Immunol.,182(3):1746-55(2009))。除了在驱动免疫细胞向TME迁移中起主要作用外，最近还显示CCR5抑制作用使TAM从免疫抑制M2表型复极化为免疫激活M1表型(Halama,N.等人，Cancer Cell,29(4):587-601(2016))。每种受体已单独证明是多种癌症模型的重要参与者，所述癌症包括胰腺癌(Sanford,D.E.等人，Clin.Cancer Res.,19(13):3404-15(2013)；Tan M.C.等人，J.Immunol.,182(3):1746-55(2009))、结肠癌(Afik,R.等人，J.Exp.Med.,213(11):2315-31(2016)；Tanabe,Y.等人，7(30):48335-45(2016))、肝癌(Li,X.等人，Gut,66(1):157-67(2017)；Barashi,N.等人，Hepatology,58(3):1021-30(2013))和肺癌(Schmall,A.等人，Am.J.Respir.Crit.Care Med.,191(4):437-47(2015)；Lee,N.J.等人，Carcinogenesis,33(12):2520-8(2012))。CCR2选择性拮抗剂和CCR5选择性拮抗剂与化学疗法组合，显示分别对患者的胰腺癌和结肠直肠癌的机制和临床反应的直接证据(Nywening,T.M.等人，Lancet Oncol.,17(5):651-62(2016)；Halama,N.等人，CancerCell 29(4):587-601(2016))。
尚未报道将双重CCR2/5拮抗剂与抗PD-1抗体和/或化学疗法组合使用，其代表新方法，具有将免疫肿瘤学益处扩展到现有疗法未充分有效的患者的潜力。另外，调节免疫应答的多个非冗余分子途径的靶向疗法可以增强抗肿瘤免疫疗法。与单一疗法和其它免疫疗法组合相比，仍然需要具有可接受的安全性和高效力的组合疗法，其增强抗肿瘤免疫反应。
发明内容
本发明涉及治疗受试者的癌症的方法，其包括向所述受试者给药如下的组合：CCR2/5双重拮抗剂、单克隆抗体和/或化学疗法，等。
在一些实施方案中，癌症为实体瘤。在某些实施方案中，癌症为结肠直肠癌、胰腺癌、肝癌和肺癌，或其组合。在某些实施方案中，癌症为结肠直肠癌。在某些实施方案中，癌症为胰腺癌。
在一些实施方案中，单克隆抗体为抗PD-1抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体与纳武单抗交叉竞争以结合人PD-1。在一些实施方案中，抗PD-1抗体与纳武单抗结合相同的表位。在某些实施方案中，抗PD-1抗体为纳武单抗。
在一些实施方案中，CCR2/5双重拮抗剂为CCR2和CCR5的等效双重拮抗剂。在某些实施方案中，CCR2/5双重拮抗剂为式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其组合，
N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧基吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺。
在一些实施方案中，化疗剂选自nab-紫杉醇、吉西他滨、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸和伊立替康。
附图说明
图1说明化合物A和抗体B抵抗小鼠结肠肿瘤(MC38)进展的协同组合。
图2说明化合物A和抗体B抵抗小鼠结肠肿瘤(MC38)进展的协同组合。
图3说明化合物A和抗体B抵抗小鼠结肠肿瘤(CT26)进展的协同组合。
具体实施方式
通过参考以下详述并且结合附图和实施例，可以更容易地理解本申请，所述附图和实施例构成本申请的一部分。应当理解，本发明不限于本申请所述和/或所示的特定装置、方法、应用、条件或参数，并且本申请中使用的术语仅出于举例描述特定实施方案的目的，并不意在限制要求保护的发明。此外，如在包括所附权利要求的说明书中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数，并且除非上下文明确指出，否则对特定数值的引用至少包括所述特定值。
本申请中使用的术语“和/或”应视为具体公开两个指定特征或部件中的每一个与另一个一起或不与另一个一起。因此，本申请中的短语例如“A和/或B”中使用的术语“和/或”意在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样，短语例如“A、B和/或C”中使用的术语“和/或”意在涵盖以下各个方面：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
如说明书和权利要求书中所使用的，术语“包括”可以包括实施方案“由……组成”和“基本上由……组成”。本申请所使用的术语“包括”、“包含”、“具有”、“有”、“可以”、“含有”及其变体意在是开放式的过渡短语、术语或词语，其要求存在指定成分/步骤并且允许存在其它成分/步骤。然而，这样的描述应该解释为也将组合物或方法描述为“由所列举的化合物组成”和“基本上由所列举的化合物组成”，其允许仅存在命名的化合物连同任何药学上的载体并且排除其它化合物。
除非另有定义，否则本申请中使用的所有技术和科学术语具有与本申请相关领域的普通技术人员通常理解的相同含义。例如，《生物医学和分子生物学简明词典》，Juo，Pei-Show，第二版，2002，CRC出版社；《细胞和分子生物学词典》，第三版，1999年，学术出版社；以及《牛津生物化学和分子生物学词典》，修订版，2000年，牛津大学出版社，它们为本申请中使用的许多术语提供了通用词典。
单位、前缀和符号以其国际单位制(SI)接受的形式表示。数值范围包括定义范围的数值。本申请提供的标题不是对本申请各个方面的限制，可以通过参考整个说明书来得到本申请的各方面。相应地，通过参考整个说明书来更完整地定义以下直接定义的术语。
本申请公开的所有范围都包括所述端点并且可独立地进行组合(例如，“200mg至600mg”的范围包括端点200mg和600mg以及所有中间值)。本申请公开的范围的端点和任何值不限于精确的范围或值；其不够精确，包括了近似这些范围和/或值的值。
如本申请所使用的，近似语言可以应用于修改任何定量表示，所述定量表示可以变化而不导致与之相关的基本功能发生改变。因此，在一些情况下，术语“约”和“基本上”所修饰的值可能不限于所指定的精确值。在至少一些情况下，近似语言可以对应于用于测量所述值的仪器的精度。修饰语“约”也应视为公开了两个端点的绝对值所定义的范围。例如，表述“约100至约200”也公开了范围“100至200”。术语“约”可以是指所示数值的±10％。例如，“约10％”可表示9％至11％的范围，“约1”可表示0.9至1.1。从上下文中可以看出“约”的其它含义，例如四舍五入，因此，例如“约1”也可以表示0.5到1.4。
CCR2/5双重拮抗剂是指与CCR2和CCR5受体有效结合并且对体外受体介导的功能产生有效双重抑制的小分子拮抗剂，所述体外受体介导的功能例如CCR2-和CCR5介导的功能，例如响应于它们各自同源配体的钙通量和趋化性。具有CCR2/5双重抑制活性的化合物报道于例如美国专利号8,383,812号和美国专利号7,163,937。
美国专利号7,163,937(在此通过引用并入)公开CCR2/5双重拮抗剂，其包括(S)-1-((1S,2R,4R)-4-(异丙基(甲基)氨基)-2-丙基环己基)-3-((6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基)氨基)吡咯烷-2-酮(下文中称为化合物A)。化合物A的结构为
美国专利号8,383,812(在此通过引用并入)公开CCR2/5双重拮抗剂，其包括式(I)的化合物：
N-((1R,2S,5R)-5-(叔丁基氨基)-2-((S)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧基吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(下文中称为化合物C)。
如所示的，例如，化合物A有效地阻断CCL2(也称为MCP-1)(CCR2的配体)与表达小鼠CCR2的细胞的结合；有效地阻断小鼠CCL4(也称为MIP-1β)(CCR5的配体)与表达小鼠CCR5的细胞；有效地抑制小鼠CCL2和小鼠CCL4诱导的功能(钙通量，整联蛋白CD11b上调)；并且在药理上与化合物C有关(表1)。
表1.化合物A的小鼠CCR2/5效价与化合物C的人效价
用于抑制配体与表达CCR2的细胞和表达CCR5的细胞结合的测定
分别使用人外周血单核细胞(hPBMC)和人T细胞使用125I-人MCP-1和125I-人MIP-1β作为示踪配体建立人CCR2和CCR5结合测定，使用标准方案从人的白细胞单采术样本分离出hPBMC和人T细胞。洗涤分离的细胞(用于CCR2结合的hPBMC和用于CCR5结合的人T细胞)，并且在结合缓冲液(RPMI-1640，0.1％BSA，20mM Hepes，pH 7.4)中稀释至1x107/ml。在结合缓冲液中将125I-MCP-1和125I–MIP-1β(NEN/Perk Elmer)稀释至0.45nM。将化合物C在结合缓冲液中稀释至结合测定所用最终浓度的3倍。使用96孔滤板(Millipore)进行结合测定。评估125I-MCP-1和-MIP-1β的总结合如下：每个反应(150μl)包含5x105个细胞、0.15nM125I-MCP-1或125I-MIP-1β以及化合物C，使得最终浓度范围为0nM至100nM。将板在室温孵育30分钟，然后用RPMI-1640,0.1％BSA,0.4M NaCl,20mM Hepes,pH 7.4使用真空歧管过滤(Millipore)洗涤3次。洗涤后，将板在室温风干60分钟，然后向每个孔中加入25μlMicroscint 20。将板密封并且在Trilux闪烁计数器上计数1分钟。在300nM冷MCP-1和MIP-1β(PeproTech Inc.)的存在下确定非特异性结合。计算125I-MCP-1和125I-MIP-1β的特异性结合作为总结合与非特异性结合之间的差异。所有条件都一式两份进行测试。IC 50定义为将特异性结合降低50％所需的竞争性化合物C的浓度。
以与人测定类似的方式建立抑制小鼠配体与小鼠CCR2和CCR5结合的测定，不同之处在于，将WEHI-274.1小鼠单核细胞系和稳定表达小鼠CCR5的L1.2细胞分别用作表达小鼠CCR2和小鼠CCR5的细胞的来源，小鼠MCP-1和小鼠MIP-1β分别用作小鼠CCR2和CCR5的示踪配体。
用于抑制细胞中CCR2和CCR5介导的钙通量的测定
MCP-1与CCR2的结合，或MIP-1β与CCR5的结合，导致G蛋白偶联信号转导途径的级联。其中之一是钙的动员，这对于下游细胞功能、例如整联蛋白(CD11b)的上调和激活是重要的。可以在荧光成像板读数器(FLIPR)中测量细胞内钙动员，因为当预加载有荧光团的细胞被MCP-1刺激时，钙结合荧光团(例如fluo-3)发出的荧光增加。
用人单核细胞系THP-1建立人CCR2介导的细胞内钙通量测定。THP-1细胞首先通过将其重悬于葡萄糖和HEPES缓冲的PBS(pH 7.4)(含有4μM fluo-3(分子探针)和1.25mM丙磺舒)中而加载有荧光团，然后在37℃孵育60分钟。洗涤一次以除去过量的fluo-3后，将细胞重悬于具有1.25mM丙磺舒的洗涤缓冲液(含有无酚红的RPMI)中，并且以2x105/孔接种到96孔板中。将浓度范围为0到100nM的化合物C稀释液或单独的缓冲液添加到每个孔中，离心并且孵育10分钟。将板放置在FLIPR-1TM(Molecular Devices)中，所述装置使用氩离子激光激发细胞，并且自动添加人MCP-1同时监测荧光变化。然后添加重组人MCP-1(PeproTechInc.)至终浓度为10nM。监测荧光位移并且自动计算基峰间的偏移。所有样品都一式两份进行测试。计算化合物的分级浓度所获得的抑制作用，以无化合物的MCP-1对照的百分数表示。除了MIP-1β(50nM)是配体并且细胞系是HT1080/CCR5，其中内源CCR5通过基因表达(RAGE)技术的随机激活而上调之外，采用与上述类似的程序。
除了使用WEHI-274.1小鼠单核细胞系和稳定表达小鼠CCR5的L1.2细胞分别作为表达小鼠CCR2和CCR5的细胞的来源以及使用小鼠MCP-1和小鼠MIP-1β分别作为小鼠CCR2和CCR5的配体之外，以与人测定类似的方式建立用于抑制响应其各自配体的小鼠CCR2和CCR5介导的钙通量的测定。
用于抑制全血中CCR2和CCR5介导的CD11b整联蛋白上调的测定
用人全血建立CCR2依赖性CD11b上调测定。将全血(100μl)用浓度范围为C的化合物在37℃预孵育10分钟。然后将人重组MCP-1(10μl，100nM)添加到各个反应中至终浓度为10nM，除了未经刺激的对照反应之外。将反应在37℃孵育30分钟。孵育后，添加1ml冰冷FACS(含10％FBS的PBS)缓冲液，并且将样品以1500rpm离心5分钟，然后重悬于50μl FACS缓冲液中。然后将细胞用20μl抗CD14-FITC/抗CD11b-PE溶液在黑暗中于冰上孵育20分钟，然后向各个反应中添加1ml 1x FACS裂解液(Becton Dickinson)。然后将样品在黑暗中于冰上孵育30分钟。固定和红细胞裂解后，将细胞离心并重悬于200μl FACS裂解液中。使用FACSCaliburTM流式细胞仪在染色后1小时内通过流式细胞术分析样品。使用CellQuestProTM软件进行数据采集和分析。顺序门控策略用于分析CD14high CD11b+单核细胞群。为了分析，将CD11b以中位数荧光强度(MFI)进行测量。除了将MIP-1β(50nM)用作配体之外，对小鼠CCR5采用类似程序。
使用C57BL/6小鼠全血建立小鼠CCR2依赖性CD11b上调测定。将全血(100ul)用一定浓度范围的化合物C在37℃预孵育30分钟。然后将小鼠重组MCP-1添加到各个反应中至终浓度为10nM，除了未经刺激的对照反应之外。将反应液在37℃孵育15分钟。孵育后，添加1ml冰冷FACS(含10％FBS的PBS)缓冲液，并且将样品以1500rpm离心5分钟和重悬于50μl FACS缓冲液中。然后将细胞用20μl抗F4/80-PE/抗小鼠CD11b-APC溶液在黑暗中于冰上孵育20分钟，然后向各个反应中添加1ml 1x FACS裂解液(Becton Dickinson)。然后将样品在黑暗中于冰上孵育20分钟。固定和红细胞裂解后，将细胞离心并且重悬于200μl FACS裂解液中。使用FACSCaliburTM流式细胞仪染色后1小时内分析样品。使用Flowjo软件进行数据采集和分析。顺序门控策略用于分析F4/80+CD11b+单核细胞群。为了分析，将CD11b以中位数荧光强度(MFI)进行测量。除了配体为小鼠MIP-1β(50nM)之外，对小鼠CCR5采用与对小鼠CCR2所述类似的程序。
由于化合物C具有差的小鼠PK和小鼠CCR2效价，因此化合物A用作CCR2/5双重拮抗剂的小鼠替代物，以在肿瘤小鼠模型中以单一疗法和与抗PD1抗体组合评估。
一些实施方案涉及治疗受试者的癌症的方法，包括向受试者给药如下的组合：单克隆抗体、CCR2/5双重拮抗剂和/或化学疗法。
一些实施方案涉及治疗受试者的癌症的方法，包括向受试者给药如下的组合：单克隆抗体和CCR2/5双重拮抗剂。
一些实施方案涉及单克隆抗体、CCR2/5双重拮抗剂和/或化学疗法的组合，其用于治疗癌症。
一些实施方案涉及单克隆抗体和CCR2/5双重拮抗剂的组合，其用于治疗癌症。
在一些实施方案中，本申请所述的组合可包括给药多于一种单克隆抗体。
在一些实施方案中，CCR2/5双重拮抗剂为式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其组合，其以单一日剂量给药受试者，或每日总剂量可以每天分两次、三次或四次的剂量给药。在某些实施方案中，每日总剂量以每天一次剂量或每天两次给药。式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的量可以为约100mg/天至约1200mg/天。例如，给药至受试者的式(I)的化合物的量可以为约10mg/天、25mg/天、50mg/天、100mg/天、200mg/天、300mg/天、400mg/天、500mg/天、600mg/天、700mg/天、800mg/天、900mg/天、1000mg/天、1100mg/天和1200mg/天。在某些实施方案中，给药至受试者的式(I)的化合物的量可以为约10mg/天至约1200mg/天；约25mg/天至约1200mg/天；约50mg/天至约1200mg/天；约100mg/天至约1200mg/天；约200mg/天至约1200mg/天；约300mg/天至约1200mg/天；约300mg/天至约1200mg/天；约400mg/天至约1200mg/天；约500mg/天至约1200mg/天；约600mg/天至约1200mg/天。在某些实施方案中，给药至受试者的式(I)的化合物的量可以为约10mg/天至约600mg/天；约25mg/天至约600mg/天；约50mg/天至约600mg/天；约100mg/天至约600mg/天；约200mg/天至约600mg/天；约300mg/天至约600mg/天。在某些实施方案中，给药至受试者的式(I)的化合物的量可以为约10mg/天至约300mg/天；约25mg/天至约300mg/天；约50mg/天至约300mg/天；约100mg/天至约300mg/天；约200mg/天至约400mg/天。在某些实施方案中，式(I)的化合物的量为以300mg和600mg的剂量给药，每天一次或两次。
本申请所述的式(I)的化合物的量基于式(I)的化合物的游离形式，即，非盐形式。如果给药盐，则需要根据盐和游离形式之间的分子量比来计算量。
“药学上可接受的”是指联邦或州政府的监管机构或美国以外的国家(或在美国列出)的相应机构批准或可批准的。药典或其它公认的药典可用于动物、更特别用于人。
“药学上可接受的盐”是指本申请化合物的盐，其为药学上可接受的并且具有母体化合物的所需药理活性。特别地，这种盐是无毒的，可以是无机或有机酸加成盐和碱加成盐。具体而言，这种盐包括：(1)与无机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或与有机酸形成的酸加成盐，所述有机酸例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等；或(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)替代所形成的盐；或与有机碱(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等)配位形成的盐。仅作为实例，盐还包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐、四烷基铵盐等；当化合物包含基本官能团时，为无毒的有机或无机酸的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等。
通常，可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适宜的碱或酸在水或有机溶剂中或在水与有机溶剂的混合物中反应来制备这些盐。通常，非水介质如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。适宜的盐的列举得自Allen,Jr.,L.V.,ed.,Remington:The Science and Practice of Pharmacy,22nd Edition,PharmaceuticalPress,London,UK(2012)。
“药学上可接受的赋形剂”是指与本申请的化合物一起给药的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。“药学上可接受的赋形剂”是指无毒、生物学上可耐受的，并且另外在生物学上适于给药于受试者的物质，例如惰性物质，其添加到药理学组合物中或另外用作媒剂、载体或稀释剂以促进试剂的给药并且与其可相容。赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、硬脂酸酯、二氧化硅、聚乙烯醇、润滑剂、滑石、二氧化钛、氧化铁和聚乙二醇。
“受试者”包括人。术语“人”、“患者”和“受试者”在本申请可互换使用。
在一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”任何疾病或病症是指改善疾病或病症(即，阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指改善受试者可能无法辨别的至少一个物理参数。在又一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指物理地(例如，可辨别的症状的稳定)、生理地(例如，物理参数的稳定)或物理地与生理地调节疾病或病症。在又一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指延迟疾病或病症的发作。
术语“抗体”和类似术语在广义上是指并且包括免疫球蛋白分子，包括单克隆抗体(例如鼠、人、人适应、人源化和嵌合的单克隆抗体)，抗体片段，双特异性或多特异性抗体，二聚、四聚或多聚抗体，和单链抗体。取决于重链恒定域氨基酸序列，免疫球蛋白可分为五个主要类别，即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。IgA和IgG进一步细分为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。基于其恒定域的氨基酸序列，可以将任何脊椎动物物种的抗体轻链分配为两种明显不同的类型之一，即κ和λ。
“单克隆抗体”是指具有单一分子组成的抗体分子的群体。单克隆抗体组合物显示对特定表位的单一结合特异性与亲和力，或者在双特异性单克隆抗体的情况下对两个不同表位具有双重结合特异性。因此，单克隆抗体是指在每条重链和每条轻链中具有单一氨基酸组成的抗体群体，除了可能的众所周知的改变外，例如从抗体重链中去除C-末端赖氨酸。单克隆抗体可在抗体群体中具有异源糖基化。单克隆抗体可以是单特异性或多特异性的，或单价、二价或多价的。术语单克隆抗体包括双特异性抗体。
可用于本发明的抗PD-1抗体
本领域已知的任何抗PD-1抗体可用于本文描述的方法中。特别地，美国专利号8,008,449中公开以高亲和力特异性结合PD-1的各种人单克隆抗体。已证明美国专利号8,008,449中公开的各种抗PD-1人源化抗体都表现出以下特征中的一种或多种：(a)以KD为1x10-7M或更少结合人PD-1，如通过表面等离子共振使用Biacore生物传感器系统测定的；(b)基本上不结合人CD28、CTLA-4或ICOS；(c)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中增加T细胞增殖；(d)增加MLR测定中干扰素-γ的产生；(e)增加MLR测定中IL-2分泌；(f)与人PD-1和食蟹猴PD-1结合；(g)抑制PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合；(h)刺激抗原特异性记忆反应；(i)刺激抗体反应；和(j)在体内抑制肿瘤细胞生长。可用于本发明的抗PD-1抗体包括与人PD-1特异性结合并且表现出至少一种、在一些实施方案中至少五种前述特征的单克隆抗体。
其它抗PD-1单克隆抗体已描述于例如美国专利号6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509，美国公开号2016/0272708和如下PCT公开号中：WO 2012/145493、WO2008/156712、WO 2015/112900、WO 2012/145493、WO 2015/112800、WO 2014/206107、WO2015/35606、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2017/020291、WO 2017/020858、WO2016/197367、WO 2017/024515、WO 2017/025051、WO 2017/123557、WO 2016/106159、WO2014/194302、WO 2017/040790、WO 2017/133540、WO 2017/132827、WO 2017/024465、WO2017/025016、WO 2017/106061。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体选自纳武单抗(也称为"OPDIVO"；以前命名为5C4、BMS-936558、MDX-1106或ONO-4538)、派姆单抗(Merck，也称为"KEYTRUDA"，帕博利珠单抗，和MK-3475。参见WO 2008/156712)、PDR001(Novartis；参见WO 2015/112900)、MEDI-0680(AstraZeneca；AMP-514；参见WO 2012/145493)、西米普利单抗(REGN-2810)(Regeneron；参见WO 2015/112800)、JS001(TAIZHOU JUNSHI PHARMA；参见Si-Yang Liu等人，J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、BGB-A317(Beigene；参见WO2015/35606和US 2015/0079109)、INCSHR1210(SHR-1210；Jiangsu Hengrui Medicine；参见WO 2015/085847；Si-Yang Liu等人，J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、TSR-042(ANB011；TesaroBiopharmaceutical；参见WO2014/179664)、GLS-010(WBP3055；Wuxi/Harbin GloriaPharmaceuticals；参见Si-Yang Liu等人，J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、AM-0001(Armo)、STI-1110(Sorrento Therapeutics；参见WO 2014/194302)、AGEN2034(Agenus；参见WO2017/040790)、MGD013(Macrogenics)和IBI308(Innovent；参见WO2017/024465、WO2017/025016、WO 2017/132825、WO2017/133540)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体为纳武单抗。纳武单抗为完全人IgG4(S228P)PD-1免疫检查点抑制剂抗体，其选择性地防止与PD-1配体(PD-L1和PD-L2)相互作用，从而阻止抗肿瘤T细胞功能的下调(美国专利号8,008,449；Wang等人，2014Cancer Immunol Res.2(9):846-56)。
在其它实施方案中，抗PD-1抗体为派姆单抗。派姆单抗为针对人细胞表面受体PD-1(程序性死亡-1或程序性细胞死亡-1)的人源化单克隆IgG4抗体。派姆单抗描述于例如美国专利号8,354,509和8,900,587中；也参见www.cancer.gov/drugdictionary？cdrid＝695789(上次访问时间：2014年12月14日)。FDA已批准派姆单抗用于治疗复发性或难治性黑色素瘤。
可用于公开的方法中的抗PD-1抗体也包括与人PD-1特异性结合并且与本申请公开的任何抗PD-1抗体交叉竞争结合人PD-1的分离的抗体，例如纳武单抗(参见例如，美国专利号8,008,449和8,779,105；WO 2013/173223)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体结合与本申请所述抗PD-1抗体中的任一种(例如纳武单抗)相同的表位。抗体交叉竞争结合抗原的能力表明这些单克隆抗体与抗原的相同表位区域结合，并且在空间上阻碍其它交叉竞争抗体与那个特定表位区域的结合。预期这些交叉竞争性抗体由于其与PD-1的相同表位区域的结合而具有与参考抗体(例如纳武单抗)非常类似的功能特性。可以在标准PD-1结合测定例如Bicore分析、ELISA测定或流式细胞术中，基于其与纳武单抗交叉竞争的能力，容易地识别出交叉竞争的抗体(参见例如，WO 2013/173223)。
在某些实施方案中，与人PD-1抗体纳武单抗的相同表位区域交叉竞争结合人PD-1或结合人PD-1抗体纳武单抗的相同表位区域的抗体为单克隆抗体。为了给药于人类受试者，这些交叉竞争的抗体为嵌合抗体、工程化抗体或人源化或人抗体。可以通过本领域众所周知的方法来制备和分离这样的嵌合单克隆抗体、工程化单克隆抗体、人源化单克隆抗体或人单克隆抗体。
可用于公开的发明的方法的抗PD-1抗体也包括上述抗体的抗原结合部分。已充分证明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。
适宜用于所公开的方法或组合物中的抗PD-1抗体为与PD-1以高特异性和亲和力结合、阻断PD-L1和/或PD-L2的结合并且抑制PD-1信号传导途径的免疫抑制作用的抗体。在本申请公开的任何组合物或方法中，抗PD-1“抗体”包括与PD-1受体结合，并且在抑制配体结合和上调免疫系统方面表现出与全抗体类似的功能特性的抗原结合部分或片段。在某些实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合部分与纳武单抗交叉竞争结合人PD-1。
抗体B
由于纳武单抗与小鼠PD-1缺乏交叉反应性，因此通过将4H2(大鼠抗小鼠PD1抗体)的Fc尾部鼠源化，产生抗小鼠PD-1抗体(下文中称为抗体B)。抗体B包含小鼠IgG1 D265A，并且包含如下所示的可变区轻链和重链序列。
抗体B轻链可变区：
DTVLTQSPALAVSLGQRVTISCKASETVSSSMYSYIHWYQQKPGQQPKLLIYRASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEADDVATYFCQQSWNPWTFGGGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQID NO:1)
抗体B重链可变区：
QVQLKESGPGLVQPSQTLSLTCTVSGFSLTSYNVHWVRQPPGKGLEWMGGMRYNEDTSYNSALKSRLSISRDTSKNQVFLKMNSLQTDDTGTYYCTRDAVYGGYGGWFAYWGQGTLVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK(SEQID NO:2)
抗体B用作抗PD1小鼠替代物，以研究CCR2/5-双重拮抗剂与抗PD1抗体组合的效力。4H2与表达小鼠PD1的CHO细胞结合所表现出的EC50为2.9nM，其比得上纳武单抗与表达人PD1的CHO细胞结合的EC50(0.4nM)。此外，4H2在阻断小鼠PD1与小鼠PD-L1和小鼠PD-L2的结合所表现出的IC50分别为3.6nM和4.9nM，其比得上纳武单抗与人PD-L1和人PD-L2结合的IC50(分别为1.04nM和0.97nM)(表2)
表2.抗体B的小鼠效价与纳武单抗的人效价
用于将抗PD-1单克隆抗体(mAb)直接结合至在CHO转染子上稳定表达的PD1的测定
将针对人和小鼠PD-1的mAb进行连续稀释，并且用分别稳定表达人和小鼠PD-1的CHO细胞转染子孵育，然后用FITC缀合的抗小鼠IgG Fcγ的二抗进行检测。
用于阻断PD-L1结合至在CHO转染子上稳定表达的PD-1的测定
将稳定表达人和小鼠PD-1的CHO转染子分别用针对人和小鼠PD-1的滴定mAb进行预孵育，然后添加2μg/mL的PD-L1-Fc。用FITC缀合的抗人IgG Fcγ的二抗检测细胞结合的PD-L1-Fc。
用于阻断PD-L2结合至在CHO转染子上稳定表达的PD-1的测定
将稳定表达人和小鼠PD-1的CHO转染子分别用针对人和小鼠PD-1的滴定mAb进行预孵育，然后添加15μg/ml的PD-L2-Fc。用FITC缀合的抗人IgG Fcγ的二抗检测细胞结合的PD-L2-Fc。
可用于本发明的抗PD-L1抗体
任何抗PD-L1抗体可以用于本申请的方法中。可用于本申请方法的抗PD-L1抗体的实例包括美国专利号9,580,507中公开的抗体。已证明美国专利号9,580,507中公开的每种抗PD-L1人单克隆抗体都表现出以下特征中的一种或多种：(a)以KD为1x10-7M或更少结合人PD-L1，如通过表面等离子共振使用Biacore生物传感器系统测定的；(b)增加在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中T细胞增殖；(c)增加在MLR测定中干扰素-γ的产生；(d)增加在MLR测定中IL-2分泌；(e)刺激抗体反应；和(f)逆转T调节细胞对T细胞效应细胞和/或树突状细胞的作用。可用于本发明的抗PD-L1抗体包括与人PD-L1特异性结合并且表现出至少一种、在一些实施方案中至少五种前述特征的单克隆抗体。
在某些实施方案中，抗PD-L1抗体选自BMS-936559(先前的12A4或MDX-1105；参见例如，美国专利号7,943,743和WO 2013/173223)、MPDL3280A(也称为RG7446、阿妥珠单抗和TECENTRIQ；US 8,217,149；也参见，Herbst等人(2013)J Clin Oncol 31(suppl):3000)，德瓦鲁单抗(IMFINZI；MEDI-4736；AstraZeneca；参见WO 2011/066389)、阿维鲁单抗(Pfizer；MSB-0010718C；BAVENCIO；参见WO 2013/079174)、STI-1014(Sorrento；参见WO2013/181634)、CX-072(Cytomx；参见WO2016/149201)、KN035(3D Med/Alphamab；参见Zhang等人，Cell Discov.7:3(March 2017)、LY3300054(Eli Lilly Co.；参见例如WO 2017/034916)和CK-301(Checkpoint Therapeutics；参见Gorelik等人，AACR:Abstract 4606(Apr 2016))。
在某些实施方案中，PD-L1抗体为阿妥珠单抗(TECENTRIQ)。阿妥珠单抗为完全人源化的IgG1单克隆抗PD-L1抗体。
在某些实施方案中，PD-L1抗体为德瓦鲁单抗(IMFINZI)。德瓦鲁单抗为人IgG1κ单克隆抗PD-L1抗体。
在某些实施方案中，PD-L1抗体为阿维鲁单抗(BAVENCIO)。阿维鲁单抗为人IgG1λ单克隆抗PD-L1抗体。
在其它实施方案中，抗PD-L1单克隆抗体选自28-8、28-1、28-12、29-8、5H1及其任何组合。
可用于公开的方法中的抗PD-L1抗体也包括与人PD-L1特异性结合的分离的抗体，并且与本申请公开的任何抗PD-L1抗体例如阿妥珠单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争结合人PD-L1。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体结合与本申请所述任何抗PD-L1抗体例如阿妥珠单抗和/或阿维鲁单抗相同的表位。抗体交叉竞争结合抗原的能力表明这些抗体与抗原的相同表位区域结合，并且在空间上阻碍其它交叉竞争抗体与那个特定表位区域的结合。预期这些交叉竞争抗体由于其与PD-L1的相同表位区域的结合而具有与参考抗体例如阿妥珠单抗和/或阿维鲁单抗非常类似的功能特性。在标准PD-L1结合测定例如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术中，可以根据与阿妥珠单抗和/或阿维鲁单抗的交叉竞争能力容易地识别交叉竞争抗体(参见例如，WO 2013/173223)。
在某些实施方案中，与人PD-L1抗体如阿妥珠单抗和/或阿维鲁单抗的相同表位区域交叉竞争结合人PD-L1或结合人PD-L1抗体如阿妥珠单抗和/或阿维鲁单抗的相同表位区域的抗体为单克隆抗体。为了给药于人类受试者，这些交叉竞争的抗体为嵌合抗体、工程化抗体或人源化或人抗体。这样的嵌合、工程化、人源化或人单克隆抗体可以通过本领域众所周知的方法来制备和分离。
可用于公开的发明的方法中的抗PD-L1抗体也包括上述抗体的抗原结合部分。已充分证明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。
适宜用于公开的方法或组合物中的抗PD-L1抗体为与PD-L1以高特异性和亲和力结合、阻断PD-1的结合并且抑制PD-1信号传导途径的免疫抑制作用的抗体。在本申请公开的任何组合物或方法中，抗PD-L1“抗体”包括与PD-L1结合并且在抑制受体结合和上调免疫系统方面表现出与全抗体的功能特性类似的功能特性的抗原结合部分或片段。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合部分与阿妥珠单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争，结合人PD-L1。
可用于本发明的抗CTLA-4抗体
本领域已知的任何抗CTLA-4抗体可以用于本申请的方法中。本发明的抗CTLA-4抗体与人CTLA-4结合，从而破坏CTLA-4与人B7受体的相互作用。由于CTLA-4与B7的相互作用转导信号，导致带有CTLA-4受体的T细胞失活，相互作用的破坏有效地诱导、增强或延长这种T细胞的激活，从而诱导、增强或延长免疫反应。
在某些实施方案中，CTLA-4抗体选自伊匹单抗(YERVOY；美国专利号6,984,720)、MK-1308(Merck)、AGEN-1884(Agenus Inc.；WO 2016/196237)和替西木单抗(先前的ticilimumab，CP-675,206；AstraZeneca；参见例如WO 2000/037504和Ribas,UpdateCancer Ther.2(3):133-39(2007))。在特定的实施方案中，抗CTLA-4抗体为伊匹单抗。
在特定的实施方案中，CTLA-4抗体为替西木单抗(也称为CP-675,206)。替西木单抗为人IgG2单克隆抗CTLA-4抗体。替西木单抗描述于WO/2012/122444、美国公开号2012/263677或国际公开号2007/113648A2中。
在特定的实施方案中，CTLA-4抗体为MK-1308，其为Merck开发的抗CTLA-4抗体。
在特定的实施方案中，CTLA-4抗体为AGEN-1884，其为由Agenus Inc.开发的人CTLA-4的重组人单克隆抗体。
可用于公开的方法中的抗CTLA-4抗体也包括分离的抗体，其与人CTLA-4特异性结合，并且与本申请公开的任何抗CTLA-4抗体例如伊匹单抗和/或替西木单抗交叉竞争结合人CTLA-4。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体结合与本申请所述的任何抗CTLA-4抗体例如伊匹单抗和/或替西木单抗相同的表位。抗体交叉竞争结合抗原的能力表明这些抗体与抗原的相同表位区域结合，并且在空间上阻碍其它交叉竞争抗体与那个特定表位区域的结合。预期由于这些交叉竞争抗体与CTLA-4的相同表位区结合，因此它们具有与参考抗体例如伊匹单抗和/或替西木单抗非常类似的功能特性。在标准CTLA-4结合测定例如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术中，可以基于其与伊匹单抗和/或替西木单抗交叉竞争的能力，容易地识别交叉竞争抗体(参见例如，WO 2013/173223)。
在某些实施方案中，与人CTLA-4抗体如伊匹单抗和/或替西木单抗的相同表位区域交叉竞争结合人CTLA-4或与人CTLA-4抗体如伊匹单抗和/或替西木单抗的相同表位区域结合的抗体为单克隆抗体。为了给药于人受试者，这些交叉竞争的抗体为嵌合抗体、工程化抗体或人源化或人抗体。这样的嵌合、工程化、人源化或人单克隆抗体可以通过本领域众所周知的方法来制备和分离。
可用于公开的发明的方法中的抗CTLA-4抗体也包括上述抗体的抗原结合部分。已充分证明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。
适宜用于公开的方法或组合物中的抗CTLA-4抗体为与CTLA-4以高特异性和亲和力结合、阻断CTLA-4的活性并且破坏CTLA-4与人B7受体的相互作用的抗体。在本申请公开的任何组合物或方法中，抗CTLA-4“抗体”包括与CTLA-4结合并且在抑制CTLA-4与人B7受体的相互作用和上调免疫系统方面表现出与全抗体的功能特性类似的功能特性的抗原结合部分或片段。在某些实施方案中，抗CTLA-4抗体或其抗原结合部分与伊匹单抗和/或替西木单抗交叉竞争以与人CTLA-4结合。
如本申请所用的“组合”意指包括可以单独给药、例如单独配制用于单独给药的疗法(例如，如可以在试剂盒中提供的)，以及可以在单一制剂中一起给药的疗法(即“共制剂”)。在某些方面，将单克隆抗体和式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和/或化学疗法顺序给药或施用，例如，其中一种试剂先于一种或多种其它试剂给药。在其它实施方案中，将单克隆抗体和式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和/或化学疗法同时给药，例如，其中同时或约同时施用两种或更多种试剂；两种或更多种试剂可以两种或更多种单独的制剂存在或组合成单一制剂(即，共制剂)。不管是顺序地还是同时地给药两种或更多种试剂，出于本申请的目的，认为它们是组合给药。
在本公开的示例性方面，抗体为纳武单抗。在一些方面，纳武单抗可以通过静脉输注以每4周约400mg至500mg的剂量给药。例如，纳武单抗可以通过静脉输注以如下剂量给药于受试者：每4周约400mg、410mg、420mg、430mg、440mg、450mg、460mg、470mg、480mg、490mg或约500mg。在优选的方面，纳武单抗可以通过静脉输注以每4周约480mg的剂量给药。
在一些方面，纳武单抗可以通过静脉输注以每3周约80mg至360mg的剂量给药于受试者。例如，纳武单抗可以通过静脉输注以如下剂量给药于受试者：每3周约80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg、300mg、310mg、320mg、330mg、340mg、350mg或约360mg。在优选的方面，纳武单抗可以通过静脉输注以每3周约80mg的剂量给药。在其它优选的方面，纳武单抗通过静脉输注以每3周约360mg的剂量给药。
在一些方面，纳武单抗可以通过静脉输注以每2周约200mg至300mg的剂量给药。例如，纳武单抗可以通过静脉输注以如下剂量给药于受试者：每2周约200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg或约300mg。在优选的方面，纳武单抗可以通过静脉输注以每2周约240mg的剂量给药。
在一些方面，纳武单抗进一步与伊匹单抗一起给药，其中伊匹单抗可以通过静脉输注以每3周约1mg/kg至10mg/kg的剂量给药。例如，伊匹单抗可以通过静脉输注以如下剂量给药于受试者：每3周约1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg。在优选的方面，伊匹单抗可以通过静脉输注以每3周约3mg/kg的剂量给药。
如本申请所用的“给药于受试者”和类似术语表示将化合物注入患者体内使得受试者身体的靶细胞、组织或片段与化合物接触的程序。本申请预想到的给药方法包括但不限于口服、局部、吸入或肠胃外给药。适宜的肠胃外给药方法包括但不限于静脉内、肌肉内、皮下和皮内亲本给药。
在一些方面，本申请所述的单克隆抗体和式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的组合可以给药于患有癌症的受试者，其中受试者可以已经先前给药至少一种用于治疗癌症的先前疗法。这样的受试者可称为“经历过治疗”或“未经历过治疗”。在一些方面，先前疗法正在进行中。在其它方面，先前疗法已经终止。这些受试者中，先前疗法可中止约12小时或24小时。在其它方面，先前疗法可中止约2天、3天、4天、5天或6天。在其它方面，先前疗法可中止约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周或更长。在一些方面，先前疗法可中止约3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月或约11个月。在其它方面，先前疗法可中止约1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年或约10年。
先前疗法的实例包括但不限于：手术、放射疗法、化学疗法、免疫疗法、靶向疗法、激素疗法、干细胞移植或精准医学疗法。
如本申请所用的“化学疗法”是指通过各种方法向癌症患者给药一种或多种化学治疗药物和/或其它试剂，所述方法包括静脉内、口服、肌肉内、腹膜内、膀胱内、皮下、经皮、经颊、吸入或栓剂形式。
如本申请所用的“手术”是指用于切除癌组织的手术方法，包括但不限于肿瘤活组织检查或切除部分或全部结肠(结肠造口术)、膀胱(膀胱切除术)、脾脏(脾脏切除术)、胆囊(胆囊切除术)、胃(胃切除术)、肝脏(部分肝脏切除术)、胰腺(胰腺切除术)、卵巢和输卵管(双侧输卵管卵巢切除术)、网膜(网膜切除术)和/或子宫(子宫切除术)。
在一些方面，本申请所述的单克隆抗体和式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的组合可以给药于患有癌症的受试者，其中受试者为未经治疗的。如本申请所用的“未经治疗的”是指先前未对受试者施用过用于癌症治疗的先前疗法。
在某些方面，单克隆抗体和式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以根据情况适当地以任何方式与其它治疗剂进一步组合给药。可组合使用用于治疗本申请公开的癌症的治疗剂的实例包括放射线、免疫调节剂或化疗剂或诊断剂。可用于本发明的适宜免疫调节剂包括本申请所述的其它单克隆抗体、CD40L、B7和B7RP1；激活刺激受体的单克隆抗体(mAb)，例如抗CD40、抗CD38、抗ICOS和4-IBB配体；树突状细胞抗原负荷(体外或体内)；抗癌疫苗例如树突状细胞癌疫苗；细胞因子/趋化因子，例如IL1、IL2、IL12、IL18、ELC/CCL19、SLC/CCL21、MCP-1、IL-4、IL-18、TNF、IL-15、MDC、IFNa/b、M-CSF、IL-3、GM-CSF、IL-13和抗IL-10；细菌脂多糖(LPS)；和免疫刺激性寡核苷酸。
化疗剂的实例包括但不限于烷基化剂，例如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸盐，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类例如苯并多巴、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌；乙撑亚胺类和甲基蜜胺类，其包括六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺；氮芥类，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类，例如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素类，例如阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡奇霉素、卡拉比辛、卡米诺霉素、嗜癌菌素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、表柔比星、依索比星、伊达比星、马塞罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物类，例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨和氟尿苷；雄激素类，例如卡鲁睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺药，例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补偿剂，例如亚叶酸；醋葡醛内酯；羟醛磷酰胺配糖；5-氨基酮戊酸；安吖啶；阿莫司汀；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖啶；喷司他丁；异丙嗪；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加胞嘧啶；阿糖胞苷(Ara-C)；环磷酰胺；塞替派；紫杉烷类，例如紫杉醇和多西他赛；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂和铂配位络合物，例如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维本；诺消灵；替尼泊苷；道诺霉素；氨蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT11；拓扑异构酶抑制剂；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃斯波霉素；卡培他滨；以及以上任一种的药学可接受的盐、酸或衍生物。
化疗剂也包括抗激素剂，其作用是调节或抑制激素对肿瘤的作用，例如抗***，包括例如他莫昔芬，雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香化酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、凯奥昔芬、奥那司酮和托瑞米芬；以及抗雄激素，例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及以上任一种的药学可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方案中，组合疗法包括给药激素或相关激素制剂。
化疗剂也包括信号转导抑制剂(STI)。术语“信号转导抑制剂”是指选择性地抑制信号传导途径中一个或多个步骤的试剂。本发明的信号转导抑制剂(STI)包括：(i)bcr/abl激酶抑制剂(例如，GLEEVECTM)；(ii)表皮生长因子(EGF)受体抑制剂，包括激酶抑制剂和抗体；(iii)her-2/neu受体抑制剂(例如，HERCEPTINTM)；(iv)Akt家族激酶或Akt传导途径的抑制剂(例如，雷帕霉素)；(v)细胞周期激酶抑制剂(例如，夫拉平度)；和(vi)磷脂酰肌醇激酶抑制剂。
化疗剂也包括奥沙利铂、维生素B衍生物例如甲酰四氢叶酸(FOL，亚叶酸)和拓扑异构酶抑制剂例如伊立替康。
在一些实施方案中，化疗剂选自紫杉醇、吉西他滨、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸和伊立替康。
FOLFIRI为化学疗法方案，其包括FOL-亚叶酸(甲酰四氢叶酸)和F-氟尿嘧啶(5-FU)及IRI-伊立替康。
FOLFOX为化学疗法方案，其包括FOL–亚叶酸(甲酰四氢叶酸)和F–氟尿嘧啶(5-FU)及OX–奥沙利铂。
Gem/ABRAXANE(nab-紫杉醇)为化学疗法方案，其包括吉西他滨和nab-紫杉醇。
可以与单克隆抗体和式(I)的化合物或其药学上可接受的盐组合使用的其它治疗方式包括细胞因子或细胞因子拮抗剂，例如IL-12、IFN或抗表皮生长因子受体、放射疗法、针对另一种肿瘤抗原的单克隆抗体、单克隆抗体和毒素的复合物、T细胞佐剂、骨髓移植或抗原呈递细胞(例如树突状细胞疗法)。本申请也提供疫苗(例如，作为可溶性蛋白或作为编码蛋白的核酸)。
“癌症”是指各种疾病，其特征在于体内异常细胞的不受控制的生长。“癌症”或“癌组织”可包括肿瘤。不受控制的细胞***和生长导致恶性肿瘤的形成，其侵袭邻近组织，并且还可以通过淋巴系统或血流转移到身体较远的部分。转移后，远端肿瘤可以说“源自”转移前肿瘤。例如，“源自胰腺癌的肿瘤”是指由于转移的胰腺癌导致的肿瘤。因为远端肿瘤源自转移前肿瘤，所以“源自”肿瘤也可以包括转移前肿瘤，例如，源自胰腺癌的肿瘤可以包括胰腺癌。
在一些方面，癌症为恶性实体瘤。在进一步的方面，癌症为转移的和/或不可切除的。可以使用本申请所述的化合物和组合物治疗的癌症的实例包括但不限于：胰腺癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、肾细胞癌；头颈部鳞状细胞癌、膀胱癌、***癌、子***、胃癌、子宫内膜癌、脑癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、头癌、颈癌、皮肤癌(包括黑色素瘤和基底癌)、间皮内膜癌(Mesothelial lining cancer)、食道癌、乳腺癌、肌肉癌、***癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞癌)、肾上腺癌、甲状腺癌、肾癌或骨骼癌；胶质母细胞瘤、间皮瘤、胃癌、肉瘤、绒毛膜癌、皮肤基底细胞癌和睾丸***瘤。在优选的方面，癌症为子***、非小细胞肺癌、肾细胞癌；头颈部鳞状细胞癌、膀胱癌、胰腺癌、黑色素瘤、淋巴瘤或胃癌。在更优选的方面，癌症为黑色素瘤、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、膀胱癌、肾细胞癌或胃癌。
在本申请的一些方面，在根据任何公开的方法进行治疗之后，受试者在其东部肿瘤协作组(ECOG)表现状态上表现出改善。在一些方面，在本申请所述的治疗之后，受试者表现出的ECOG表现状态小于或等于1。在其它方面，受试者在治疗后表现出小于或等于2的ECOG表现状态。在其它方面，受试者在治疗后表现出小于或等于3的ECOG表现状态。在其它方面，受试者在治疗后表现出小于或等于4的ECOG表现状态。东部肿瘤协作组开发的ECOG表现状态按等级提供以下状态描述：0级为全主动，能够不受限制地进行所有疾病前表现；1级在身体上的剧烈活动受到限制，但可以走动，并且能够进行轻度或久坐的工作，例如职业咨询室工作、办公室工作；3级是可移动的，能够进行所有自我保健，但是无法进行任何工作活动；占醒来小时数的约大于50％。
在一些方面，受试者为成年人。例如，成人人群可包括18岁及以上的受试者。在其它方面，受试者为老年受试者。例如，老年人群可以包括64岁及以上的受试者。在其它方面，受试者为儿科受试者。例如，儿科受试者可以为早产儿(在整个妊娠期之前出生的新生儿的出生时期)、足月新生儿(出生至27天)、婴儿(28天至12个月)、学步幼儿(13个月至2岁)、幼儿时期(2岁至5岁)、儿童中期(6岁至11岁)、***早期(12岁至18岁)或***后期(19岁至21岁)。
在一些方面，本申请公开的治疗方法可导致与治疗有关的不良事件(TRAE)，如由美国卫生和公众服务部发布的《不良事件通用术语标准》(CTCAE)建立的。不良事件(AE)为任何不利和意外的征象(包括实验室检查结果异常)、症状或疾病，其在时间上与医疗治疗或程序的使用有关，可以认为与医疗治疗或程序有关或可以认为与医疗治疗或程序无关。AE是一种术语，是用于医学文献和科学分析中特定事件的独特表示。CTCAE建立的一般准则如下：等级是指AE的严重程度，其中1级定义为轻度；无症状或轻度症状；仅临床或诊断意见；未指明干预措施。2级定义为中度；指示的最小、局部或非侵入性干预；在年龄相关工具性日常生活活动(ADL)受限。3级为重度或重要医学意义，但非立即致命的；指示入院或延长住院时间；残障；自理性日常生活活动受限。4级为威及生命的结果；指示紧急干预。5级为与AE相关的死亡。TRAE大于或等于2的实例包括葡萄膜炎，食欲减退、发热、贫血、自身免疫性肝炎、疲劳、头痛、恶心和/或呕吐。3/4级TRAE(也称为“严重TRAE”)的实例包括增加脂肪酶、低磷血症、皮疹、天冬氨酸氨基转移酶增加、丙氨酸氨基转移酶增加、肝炎、高血压、胰腺炎和/或自身免疫性肝炎。
在某些方面，本申请所述的治疗可能不会导致4级或5级不良事件。在其它方面，本申请所述的治疗可导致不超过1级不良事件。在进一步的方面，本申请所述的治疗可导致不超过2级不良事件。在仍进一步方面，本申请所述的治疗可导致不超过3级不良事件。
在本申请公开的方法的方面，受试者可以表现出改善的抗肿瘤活性，如通过客观反应率(ORR)、反应持续时间和无进展生存(PFS)率所测量的。
客观反应率(ORR)可以通过使用实体瘤反应评估标准(RECIST)v1.1以评估反应的研究人员和/或医师进行量化，所述实体瘤反应评估标准(RECIST)v1.1如通过欧洲癌症研究与治疗组织(EORTC)、美国国家癌症研究所(NCI)以及美国和加拿大国家癌症研究所临床试验小组合作开发的。任选地，ORR可以任选地通过中央成像实验室进行检查。
如本申请所述癌症的上下文中使用的“无进展生存期(PFS)”是指在癌症治疗期间和之后直至肿瘤客观进展或死亡的时间长度。可以通过客观或主观参数评估治疗；包括体格检查、神经系统检查或精神病学评价的结果。在优选的方面，PFS可以通过设盲成像中心检查来评估，并且可以进一步任选地通过ORR或设盲独立中心检查(BICR)确认。
可以通过Kaplan-Meier方法在某些时间点(例如1年和2年)通过OS率评估“总体生存率(OS)”，并且通过研究每种肿瘤的治疗基于Greenwood公式得出相应的95％CI。OS率定义为在该时间点还活着的参与者的比例。参与者的OS定义为从第一次给药的日期到由于任何原因导致死亡的日期的时间。
如本申请所用的“不良事件”(AE)是与使用医学治疗有关的任何不利和通常意外或不期望的征象(包括实验室结果异常)、症状或疾病。医学治疗可以具有一件或多件相关联的不良事件，各件不良事件的严重性可以相同或不同。提及能够“改变不良事件”的方法是指降低与使用不同治疗方案相关的一件或多件不良事件的发生率和/或严重性的治疗方案。
“亚治疗剂量”是指低于当单独给药用于治疗过度增生性疾病(例如癌症)时治疗化合物的通常或典型剂量的治疗化合物(例如抗体)的剂量。
在一些实施方案中，本申请公开的方法用于代替标准护理疗法。在某些实施方案中，护理疗法的标准与本申请公开的任何方法组合使用。对于不同类型的癌症的标准护理疗法是本领域技术人员众所周知的。例如，由美国21个主要癌症中心组成的国家综合癌症网络(NCCN)发布了《NCCN肿瘤学临床实践指南》(NCCN)，其提供了关于多种癌症的标准护理治疗的最新信息(参见NCCN2014，可得自：www.nccn.org/professionals/physician_gls/f_guidelines.asp，上次访问时间为2014年5月14日)。
只要观察到临床益处或直到出现不可接受的毒性或疾病进展，就继续治疗。在某些实施方案中，抗PD-1抗体可以以在临床试验中已显示产生作为单一疗法最高疗效的剂量给药，例如给药约3mg/kg纳武单抗，约每三周一次(Topalian等人，2012N Engl J Med 366:2443-54；Topalian等人，2012Curr Opin Immunol 24:207-12)，以平剂量240mg，或以明显较低的剂量，即亚治疗剂量。
剂量和频率取决于抗体在受试者中的半衰期。通常，人抗体显示最长的半衰期，然后是人源化抗体、嵌合抗体和非人抗体。给药的剂量和频率可以取决于治疗是预防性还是治疗性而变化。在预防性应用中，通常在长时间段内以相对不频繁的间隔给药相对低的剂量。一些患者终生继续接受治疗。在治疗应用中，有时需要以相对短的时间间隔使用相对高的剂量，直到减少或终止疾病的进展，以及直到患者显示疾病症状的部分或完全缓解。此后，可以对患者施用预防方案。
可以改变本申请的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平，从而获得对于特定患者、组合物和给药方式有效地实现期望治疗反应的活性成分的量，而无需对患者有过度毒性。选择的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，其包括采用的本申请特定组合物的活性、给药途径、给药时间、采用的特定化合物的***速率、治疗持续时间、与所用特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或物质、年龄、性别、体重、状况、一般健康状况以及所治疗患者的既往病史以及医学领域中众所周知的类似因素。本申请的组合物可以使用本领域众所周知的多种方法中的一种或多种经由一种或多种给药途径来给药。如本领域技术人员将会理解的，给药途径和/或方式将会取决于所需结果而变化。
试剂盒
也在本申请的范围内的是包含CCR2/5双重拮抗剂、单克隆抗体和/或化疗剂的试剂盒，其用于治疗用途。试剂盒通常包含标签，其指示试剂盒内容物的预期用途和使用说明。术语标签包括试剂盒上或与试剂盒一起提供或随试剂盒附带的任何文字或记录材料。
以下实施例仅是说明性的，并不意在将本申请限于其中阐述的物质、条件或工艺参数。
实施例
实施例1.抵抗小鼠结肠肿瘤(MC38)进展的化合物A和抗体B的组合
在荷瘤小鼠中进行联合药理学研究以评价CCR2/5-双重拮抗剂、化合物A与抗PD-1抗体、抗体B的组合。
来自查尔斯河实验室(Raleigh，NC)的雌性C57BL/6小鼠在6-8周龄进入室内，并且在植入前适应3-7天。将小鼠结肠肿瘤MC38细胞使用1mL具有25g针头的结核菌素注射器以1x107个细胞/mL的浓度皮下植入，每次注射0.1mL。
植入后第6天，将小鼠随机分组，每组10只小鼠。在第6天用对照媒介物和同型对照开始治疗；单独给药抗体B(抗小鼠PD1)10mg/kg；化合物A单独给药25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg(对于研究#1)，给药6.25mg/kg、12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg(对于研究#2)；将化合物A以25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg与抗体B以10mL/kg进行组合给药(对于研究#1)，将化合物A以6.25mg/kg、12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg与抗体B以10mg/kg组合给药(对于研究#2)。化合物A每天连续两次通过口服给药，持续28天。抗体B腹膜内给药，每4天共计3个剂量。在实验的中点，在1小时、4小时、7小时和24小时的时间点，将血液收集(10μL尾巴出血)到DBS(干血斑)卡上以进行化合物A的PK评价。
每周称重肿瘤和组体重并且测量两次，直到肿瘤达到约1500mm3的体积。如果肿瘤达到大于约1500mm3的体积或出现溃疡，则对动物实施安乐死。计算无肿瘤小鼠的平均值、中位数和/或存活图以及数量以确定疗效。
这些研究的结果表明，分别以25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg口服给药、每天两次、持续28天的化合物A，和以10mg/kg给药、每周两次、共计3个剂量的抗体B的组合，相对于单独给药的任一种试剂提供较大的抗肿瘤疗效，如通过肿瘤体积减少测量的(参见图1)。
化合物A的谷暴露(trough exposure)分析显示分别在剂量25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg的0.6倍、2.5倍和26.5倍IC90，表明谷覆盖率在0.6倍至26.5倍IC90的化合物A与抗体B协同抵抗肿瘤进展(表1)。单独或组合使用的化合物A和抗体B都具有良好的耐受性。组合治疗的小鼠都未表现出任何临床毒性征象，并且对体重没有影响。
表1：化合物A单独和化合物A与抗体B组合使用的剂量、抗肿瘤疗效和暴露/谷覆盖率
进行低剂量的化合物A与抗体B组合的另一项研究，结果表明，分别以6.25mg/kg、12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg口服给药、每天两次、持续28天的化合物A，和以10mg/kg给药、每周两次、共计3个剂量的抗体B的组合，相对于单独给药的任一种试剂提供较大的抗肿瘤疗效，如通过肿瘤体积减少测量的(参见图2)。
化合物A的谷暴露分析显示分别在剂量6.25mg/kg、12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg的0.6倍、2.5倍和26.5倍IC90，表明具有0.05倍至1.56倍IC90的谷覆盖率的化合物A与抗体B协同抵抗肿瘤进展(表2)。
表2：化合物A单独和化合物A与抗体B组合使用的剂量、抗肿瘤疗效和暴露/谷覆盖率
n.d.：未测定
实施例2.抵抗小鼠结肠肿瘤(CT26)进展的化合物A和抗体B的组合
进行组合药理学研究，以评价CT26结肠肿瘤模型中化合物A与抗体B的组合。
来自ENVIGO(Frederick，MD)的雌性BALB/C小鼠在6-8周龄进入室内，并且在植入前适应3-7天。将小鼠结肠肿瘤CT26细胞使用1mL具有25g针头的结核菌素注射器以1x107个细胞/mL的浓度皮下植入，每次注射0.1mL。
植入后第10天，将小鼠随机分组，每组10只小鼠。在第10天用对照媒介物和同型对照开始治疗；单独给药抗体B(抗小鼠PD1)10mg/kg；化合物A单独给药6.25mg/kg、12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg。将化合物A以6.25mg/kg、12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg与抗体B以10mL/kg组合给药。化合物A每天连续两次通过口服给药，持续28天。每4天腹膜内给药抗体B，共计3个剂量。
每周称重肿瘤和组体重并且测量两次，直到肿瘤达到约1500mm3的体积。如果肿瘤达到大于约1500mm3的体积或出现溃疡，则对动物实施安乐死。计算无肿瘤小鼠的平均值、中位数和/或存活图以及数量以确定疗效。
这些研究的结果表明，分别以6.25mg/kg、12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg口服给药、每天两次、持续28天的化合物A，和以10mg/kg给药、每周两次、共计3个剂量的抗体B的组合，相对于单独给药的任一种试剂提供较大的抗肿瘤疗效，如通过肿瘤体积减少测量的(参见图3和表3。错误！找不到引用源)，其中12.5mg/kg化合物A与抗体B的组合显示四个组合组中最强的抗肿瘤活性。
基于化合物A在BALB/C小鼠中的PK结果，预计(project)其谷暴露在剂量6.25mg/kg、12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg分别显示约0.1倍、0.2倍、0.5倍和1倍的IC90，表明谷覆盖率在0.1倍至1倍IC90的化合物A与抗体B协同抵抗肿瘤进展(表3)。单独或组合使用的化合物A和抗体B都具有良好的耐受性。组合治疗的小鼠都未表现出任何临床毒性征象，并且对体重没有影响。
表3：化合物A单独和化合物A与抗体B组合使用的剂量、抗肿瘤疗效和谷覆盖率
实施例3.化合物C与纳武单抗或化学疗法组合给药晚期癌症患者
以下描述1b/2期、开放标签、两部分临床试验的非限制性实施例。
目的：
这项研究的目的是，特别评价化合物C与纳武单抗或化学疗法组合给药治疗转移性结直肠癌和胰腺癌患者的安全性、耐受性、PK、PD和初步疗效。
干预：
以指定时间间隔以指定剂量向患者给药化合物C。在一些实施方案中，除化合物C外，还会向患者给药第二种治疗剂或化学疗法方案。在一些实施方案中，第二种治疗剂为纳武单抗，其以指定时间间隔给药。在一些实施方案中，化学疗法方案为FOLFIRI或Gem/ABRAXANE(nab-紫杉醇)，其以指定时间间隔给药。
研究设计
研究分两部分进行。第1部分将评价两种不同剂量的化合物C(即，300mg、每天两次，或600mg、每天一次)与FOLFIRI(A组)、Gem/ABRAXANE(nab-紫杉醇)[B组]或纳武单抗(C组)组合用于患有晚期结直肠癌和胰腺癌患者的安全性、耐受性、PK和PD。第2部分为剂量扩展研究，以评估化合物C与化学疗法或纳武单抗组合治疗晚期结直肠癌或胰腺癌的初步疗效。如果C组的参与者显示约15％的客观反应率(ORR)或纳武单抗和化合物C的组合可见持久反应，则D组(化合物C单一疗法)将开放。
表3(第1部分)和表4(第2部分)显示本研究的主要和辅助分析的目标和终点。
表3：目标和终点(第1部分)
缩写：％UR＝给药间隔内尿药回收率；ADA＝抗药物抗体；AE＝不良事件；AI＝累积指数；AUC(0-8)＝给药后0至8小时的浓度-时间曲线下面积；AUC(TAU)＝在1个给药间隔内浓度-时间曲线下面积；CCR2＝半胱氨酸-半胱氨酸趋化因子受体2；CL＝清除率；CLR＝肾脏清除率；CLT/F＝表观总体清除率；Cmax＝观察到的最大血浆浓度；CRC＝结肠直肠癌；Ctau＝在给药间隔结束时观察到的血浆浓度；Ctrough＝观察到的谷血浆浓度；DLT＝剂量限制性毒性；ECG＝心电图；Gem＝吉西他滨；MATE＝多药和毒素挤出蛋白；MCP-1＝单核细胞趋化蛋白-1；MR_AUC(TAU)＝代谢物AUC(TAU)与母体AUC(TAU)之比，校正分子量；MR_Cmax＝代谢物Cmax与母体Cmax之比，校正分子量；NMN＝N-甲基烟酰胺；OS＝总生存率；PK＝药代动力学；SAEs＝严重不良事件；TAM＝肿瘤相关巨噬细胞；Tmax＝观察到的最大血浆浓度时间；Treg＝调节性T细胞
表4：目标和终点(第2部分)
缩写：ADA＝抗药物抗体；AE＝不良事件；Gem＝吉西他滨；SAE＝严重不良事件；Treg＝调节性T细胞
研究人群
入选标准(针对18岁及以上的所有性别开放的研究)：
·参与者必须患有转移性结直肠癌或胰腺癌
·东部肿瘤协作组(ECOG)的表现状态≤1
·吞服药片或胶囊的能力
·将会要求所有参与者进行强制性的治疗前活组织检查和治疗中活组织检查
·足够的骨髓功能
·足够的其它器官功能
·能够遵守研究访视、治疗、程序、PK和PD样本收集以及所需研究随访的能力
排除标准：
·除腺癌(神经内分泌或腺泡细胞)以外的组织学
·疑似、已知或进行中的CNS转移(仅当参与者有症状时才需要成像)
·患有活动性、已知或疑似自身免疫性疾病的参与者
·在研究治疗给药的14天内需要用皮质类固醇(>10mg的***日当量)或其它免疫抑制药物全身治疗的状况下的参与者
·有症状或可能干扰与治疗相关的可疑肺毒性的检测或管理的间质性肺疾病
·预先用CCR2和/或CCR5抑制剂治疗
·对参与者加入的研究治疗或研究治疗的任何研究组组成部分过敏的历史
治疗期(第1部分)
治疗期(第1部分)会有2周的化合物C的单药导入，然后是化合物C与FOLFIRI、Gem/nab紫杉醇或纳武单抗组合治疗。所有三个组会同时招募参与者。在研究的每一组中，参与者会被分配到化合物C的300mg BID或600mg QD队列中。每种化合物C剂量(即300mg BID或600mg QD)会治疗约6位可评价的参与者，每组总计约12位参与者。在与赞助商和研究者讨论后，如果需要，可以将多达6名其它参与者加入到剂量组中，以较好地表征化合物C的安全性、PK或PD曲线并且告知化合物C的第2部分剂量选择。
化合物C单药导入允许评估癌症参与者的初始耐受性，有助于表征后续组合给药方案的增加的毒性或协同毒性，并且使2周的活组织检查能够表征化合物C的PD效应。化合物C进行单一疗法2周后，参加者会在进行强制性活组织检查(±3天)后开始用FOLFIRI、Gem/nab-紫杉醇或纳武单抗治疗连同继续用化合物C治疗的组合阶段。如果活组织检测采集超过2周则应该继续单一疗法，仅在进行活组织检测后开始应该组合用化学疗法或纳武单抗。参与者会继续合并，直到疾病进展、不耐受、达到治疗中止标准或撤回同意为止。
治疗期(第2部分)
治疗期(第2部分)会探讨在如下各种组合下化合物C的疗效的初步信号。一旦化合物C的剂量和时间表已选自第1部分中研究的剂量，则第2部分会开放招募。第2部分中化合物C的剂量会基于研究的第1部分中获得的安全性、PK和PD数据进行选择，并且不会超出第1部分中确定为安全的剂量和时间表。第2部分的参与者会用化合物C与FOLFIRI、Gem/nab-紫杉醇或纳武单抗的组合进行治疗，而无需进行化合物C的单药导入。
最初，会有三个研究组(A、B和C组)，总共包含6个队列(每个队列中30至40个可评价的参与者)。如果C组的参与者显示约15％的客观反应率(ORR)或纳武单抗和化合物C的组合出现持久反应，则D组(化合物C的单一疗法)会开放。
在第2部分中的第一次给药后4周(±3天)会获得活组织检查用于相关研究。A组中关于贝伐珠单抗的参与者应脱离贝伐珠单抗至少14天或根据机构指南防止任何出血或伤口愈合延迟。
参与者会继续合并，直到疾病进展、不耐受、达到治疗中止标准或撤回同意为止。
治疗期(第1和2部分)
会采集血液、尿液、粪便和肿瘤活检标本和心电图(ECG)，参与者会按照活动时间表接受研究治疗。参与者会在研究开始后约28天内进行基线成像，然后在开始组合治疗后每8周进行一次重新评估。会使用RECIST v1.1评估实体瘤的肿瘤进展或反应终点。参与者会继续接受治疗，直到疾病进展、临床恶化、有毒性、达到中止研究治疗的标准或撤回同意为止。停止治疗的参与者会接受安全性评估和生存状态的跟踪。
在给定周期结束时对SD、PR或CR有反应的参与者会继续进行下一个治疗周期。通常会允许参与者继续研究治疗，直到第一次出现以下情况之一：1)PD，2)临床恶化提示不再从治疗中获益，3)治疗不耐受，4)参与者符合中止研究治疗的标准。
在整个给药间隔期间的选定时间，会进行体格检查、生命体征测量、12导联心电图(ECG)和临床实验室评估。在单个时间点需要执行多个程序的情况下，以下是从最高优先级到低优先级的一系列程序：PK采样、ECG和生命体征以及实验室测试。在整个研究过程中，会密切监测参与者的不良事件。将在基线和研究治疗给药后采集血液和尿液样本以根据药代动力学研究的时间表进行PK以及多药和毒素挤出(MATE)肾转运蛋白生物标志物分析。
治疗组和持续时间：
表5.研究治疗：
a纳武单抗将以240mg试剂盒供应-每个试剂盒包含(2)100mg小瓶和(1)40mg小瓶
b如果当地法规允许或通过调查网站的标准处方程序，这些产品将作为国家的本地商业产品获得，否则赞助商会提供这些产品。
表6：剂量的选择和时机
表6：剂量的选择和时机
缩写：5-FU＝5-氟尿嘧啶；BID＝每天两次；IV＝静脉；PO＝口服给药(经口[口服])；Q4W＝每4周；QD＝每天一次
a可以研究600mg BID方案以探索化合物C PK/PD关系用于潜在剂量优化(参见第5.5.1节)。
在28天周期的第1天和第15天，FOLFIRI(伊立替康180mg/m2，第1天，经90分钟；甲酰四氢叶酸400mg/m2，第1天，经2小时(甲酰四氢叶酸可以与伊立替康并行给予)；第1天5-FU 400mg/m2大丸剂，然后2400mg/m2、经46小时持续输液)。必要时，可将贝伐珠单抗、西妥昔单抗或帕尼单抗添加到1L FOLFIRI中，并且将按照当地卫生监督局批准的这些试剂标签进行给药。可以根据现场标准做法，用醛氢叶酸代替甲酰四氢叶酸，也可以平剂量(flatdose)使用甲酰四氢叶酸。
在每个28天周期的第1、8和15天，以静脉输注经30分钟至40分钟给药推荐剂量的nab-紫杉醇(ABRAXANE)为125mg/m2。在每个28天周期的第1、8和15天，给药nab-紫杉醇后立即经30分钟至40分钟给药吉西他滨1000mg/m2。
以静脉输注每4周经30分钟给药纳武单抗480mg。
治疗持续时间：将对参与者进行治疗，直到疾病进展、对治疗不耐受、达到中止标准或撤回同意为止。只要参与者符合第7.4.8节中的标准，就可以对其超越进展期进行治疗。由于不耐受而部分或全部中止化学疗法的参与者可以在研究者与医学监护人或赞助商指定人员讨论后继续进行化合物C研究。参加者会继续按照事件时间表获得所有研究评估以进行不同组的治疗中的研究评估和程序。
疗效评估
在基线和约每8周(从第1周期第1天的±1周)直到疾病进展、治疗中止、退出研究或开始后续治疗为止，以较早者为准，必要时将使用计算机断层扫描(CT)和/或MRI进行疾病评估。
研究的影像学评估
对于这项研究，优选在专用CT设备上进行对比增强CT扫描的疾病肿瘤评估。应当对胸部、腹部、骨盆和其它已知/疑似疾病部位进行对比增强CT检查，以进行肿瘤评估。如果参与者有CT静脉造影的禁忌症，则应获得胸部的非对比CT和腹部、骨盆以及其它已知/疑似疾病部位的对比增强MRI。
如果参与者同时具有MR和CT静脉造影的禁忌症，则应获取胸部的非对比CT和腹部、骨盆以及其它已知/疑似疾病部位的非对比MRI。
如果参与者除了CT静脉造影的禁忌症外还有MRI的禁忌症(例如，起搏器不兼容)，则胸部、腹部、骨盆和其它已知/疑似疾病部位的非对比CT是可接受的。
CT和MRI扫描应以5mm或更少并且无中间间隙(连续)的薄片采集。对于所有成像时间点，都应尝试使用相同采集方案对各个参与者进行成像。
正电子发射断层扫描(PET)-CT扫描仪的CT部件的使用：例如与氟脱氧葡萄糖(FDG)PET CT的组合模态扫描在临床护理中越来越多地使用，并且是正在迅速发展的模态/技术；因此，此处概述的建议可随着时间而迅速变化。目前，组合的FDG PET-CT的低剂量或衰减校正CT部分在基于解剖学的疗效评估中用途有限，因此建议不要将其替代基于解剖学的RECIST测量的专用诊断对比增强CT扫描。然而，如果现场可以证明作为FDG PET-CT的一部分执行的CT具有与诊断CT相同的诊断质量(具有IV和口腔对比)，则可以将FDG PET-CT的CT部分用于RECIST 1.1测量。然而注意的是，如果不按常规或顺序进行，CT的FDG PET部分引入其它数据，其可使研究者产生偏见。
如果有临床指征，则有骨转移史的参与者可以进行骨扫描。
评估会在基线和按照RECIST v1.1标准所述的时间点进行，直到疾病进展达到RECIST v1.1标准或退出研究为止。
序列表
<110> 百时美施贵宝公司
赵启洪
<120> 治疗癌症的组合物和方法
<130> 13082-WO-PCT
<160> 2
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体B轻链可变区
<400> 1
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1 5 10 15
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20 25 30
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Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
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180 185 190
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Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 2
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体B重链可变区
<400> 2
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Met Arg Tyr Asn Glu Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
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100 105 110
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