阅读说明：本技术 一种用于鸡新城疫活疫苗的佐剂及其制备方法 (Adjuvant for newcastle disease live vaccine and preparation method thereof ) 是由 邓碧华 于 2020-05-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种用于鸡新城疫活疫苗的佐剂,其成分的重量配比包括：石蜡2-4份、羊毛脂3-8份、卡介苗1.8-3.5份、结核分枝杆菌2.7-6.5份、左旋咪唑2.5-6份、维生素B1.5-4份、乳化剂0.5-2份、磷酸盐缓冲液8-12份。本发明的制作的佐剂与抗原结合良好,且毒性小,乳化效果好,同时加入少量的维生素可促进鸡的代谢功能,整个佐剂的制作成本较低。(The invention discloses an adjuvant for a newcastle disease live vaccine, which comprises the following components in parts by weight: 2-4 parts of paraffin, 3-8 parts of lanolin, 1.8-3.5 parts of BCG (bacillus calmette guerin), 2.7-6.5 parts of mycobacterium tuberculosis, 2.5-6 parts of levamisole, 1.5-4 parts of vitamin B, 0.5-2 parts of emulsifier and 8-12 parts of phosphate buffer. The prepared adjuvant has good combination with antigen, small toxicity and good emulsification effect, and simultaneously, a small amount of vitamin is added to promote the metabolic function of chicken, so that the preparation cost of the whole adjuvant is lower.)

一种用于鸡新城疫活疫苗的佐剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及动物疫苗技术领域，尤其是一种用于鸡新城疫活疫苗的佐剂及其制备方法。

背景技术

鸡新城疫疫苗：分灭活苗和活苗，活苗主要有Ⅰ系，Ⅱ系(B1 株)、Ⅲ系(F系)、Ⅳ系(Lasota株)、克隆-30等。Ⅰ系为中等毒力疫苗对雏鸡毒力较强可出现症状甚至引起死亡，但能较快产生坚强免疫力，多用于2月龄以上的鸡或紧急预防接种。Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系、克隆-30为弱毒疫苗，其中克隆-30、Ⅳ系的效果好于Ⅱ系Ⅲ系。灭活苗多为油佐剂苗，效力可靠免疫期长，多用于种鸡和蛋鸡好的加强免疫。

疫苗的配制过程中需要使用佐剂，免疫佐剂简称佐剂，即非特异性免疫增生剂，指那些同抗原一起或预先注入机体内能增强机体对抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质。佐剂可以具有免疫原性，也可无免疫原性。佐剂种类很多，目前尚无统一的分类方法，应用最多的是弗氏佐剂和细胞因子佐剂，现有的免疫佐剂，因为效果差或者毒力大，尤其是缺乏针对性，没有一种得到满意效果，针对这些问题，在这里我们提出一种用于鸡新城疫活疫苗的佐剂及其制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于鸡新城疫活疫苗的佐剂及其制备方法，解决了背景技术中所提出的问题。

为解决上述问题，本发明提供如下技术方案：一种用于鸡新城疫活疫苗的佐剂，其成分的重量配比包括：石蜡2-4份、羊毛脂3-8 份、卡介苗1.8-3.5份、结核分枝杆菌2.7-6.5份、左旋咪唑2.5-6 份、维生素B1.5-4份、乳化剂0.5-2份、磷酸盐缓冲液8-12份。

作为本发明的进一步优选方式，还包括以下重量百分数的组分：石蜡4份、羊毛脂8份、卡介苗3.5份、结核分枝杆菌6.5份、左旋咪唑6份、维生素B 4份、乳化剂2份、磷酸盐缓冲液12份。

作为本发明的进一步优选方式，还包括以下重量百分数的组分：石蜡2份、羊毛脂3份、卡介苗1.8份、结核分枝杆菌2.7份、左旋咪唑2.5份、维生素B1.5份、乳化剂0.5份、磷酸盐缓冲液8份。

作为本发明的进一步优选方式，制作工艺步骤如下：

S1,首先按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃以下保存备用；

S2，微生物混合处理，将卡介苗和结核分枝杆菌分别送入不同培养基中，加入生理盐水震荡摇均匀，温度控制常温，持续5-20min，然后将其与步骤S1进行混合；

S3，将左旋咪唑、维生素B分别加入进行混合，并送入保温箱，温度控制在35-55℃，持续2-4h；

S4，混合加工，再加入乳化剂进行混合搅拌，并加入磷酸盐缓冲液，搅拌过程中保持60-72℃，持续30min；

S5，消毒处理，带混合完成后，对溶液进行消毒处理，处理完成后静置15min即完成加工。

作为本发明的进一步优选方式，所述磷酸盐缓冲液百分浓度在 38-74％，选择NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄,溶于蒸馏水中，通过按照1.2:1.5:0.8：0.6的比例进行充分混合而成，PH控制在7.3。

作为本发明的进一步优选方式，步骤S4中，搅拌采用间歇式，每次搅拌时间控制15-20s，然后静置10s，并控制搅拌转速在 800r/min-1200r/min，离心转动。

作为本发明的进一步优选方式，步骤S5中，消毒处理选择紫外线消毒处理。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明的制作的佐剂与抗原结合良好，且毒性小，乳化效果好，同时加入少量的维生素可促进鸡的代谢功能，整个佐剂的制作成本较低。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本实用发明提供一种技术方案：一种用于鸡新城疫活疫苗的佐剂，其成分的重量配比包括：石蜡2-4份、羊毛脂3-8份、卡介苗 1.8-3.5份、结核分枝杆菌2.7-6.5份、左旋咪唑2.5-6份、维生素 B1.5-4份、乳化剂0.5-2份、磷酸盐缓冲液8-12份。

还包括以下重量百分数的组分：石蜡4份、羊毛脂8份、卡介苗 3.5份、结核分枝杆菌6.5份、左旋咪唑6份、维生素B 4份、乳化剂2份、磷酸盐缓冲液12份。

还包括以下重量百分数的组分：石蜡2份、羊毛脂3份、卡介苗1.8份、结核分枝杆菌2.7份、左旋咪唑2.5份、维生素B1.5份、乳化剂0.5份、磷酸盐缓冲液8份。

制作工艺步骤如下：

S1,首先按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃以下保存备用；

S2，微生物混合处理，将卡介苗和结核分枝杆菌分别送入不同培养基中，加入生理盐水震荡摇均匀，温度控制常温，持续5-20min，然后将其与步骤S1进行混合；

S3，将左旋咪唑、维生素B分别加入进行混合，并送入保温箱，温度控制在35-55℃，持续2-4h；

S4，混合加工，再加入乳化剂进行混合搅拌，并加入磷酸盐缓冲液，搅拌过程中保持60-72℃，持续30min；

S5，消毒处理，带混合完成后，对溶液进行消毒处理，处理完成后静置15min即完成加工。

所述磷酸盐缓冲液百分浓度在38-74％，选择NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄,溶于蒸馏水中，通过按照1.2:1.5:0.8：0.6的比例进行充分混合而成，PH控制在7.3。

步骤S4中，搅拌采用间歇式，每次搅拌时间控制15-20s，然后静置10s，并控制搅拌转速在800r/min-1200r/min，离心转动。

步骤S5中，消毒处理选择紫外线消毒处理。

实施例1

石蜡4g、羊毛脂8g、卡介苗3.5g、结核分枝杆菌6.5g、左旋咪唑6g、维生素B 4g、乳化剂2g、磷酸盐缓冲液12g。

羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃以下保存备用；再将卡介苗和结核分枝杆菌分别送入不同培养基中，加入生理盐水震荡摇均匀，温度控制常温，持续5-20min，然后将其与步骤S1进行混合，将左旋咪唑、维生素B分别加入进行混合，并送入保温箱，温度控制在35-55℃，持续2-4h；然后混合加工，再加入乳化剂进行混合搅拌，并加入磷酸盐缓冲液，搅拌过程中保持60-72℃，持续30min，最后对溶液进行消毒处理，处理完成后静置 15min即完成加工，按照0.5ml的份量进行包装。

安全检验：用1-2月龄的肉鸡20只，将佐剂与疫苗进行混合，每只肌注疫苗0.8mg，观察36小时，具体见表格参数。

实施例2

石蜡2g、羊毛脂3g、卡介苗1.8g、结核分枝杆菌2.7g、左旋咪唑2.5g、维生素B1.5g、乳化剂0.5g、磷酸盐缓冲液8g。

羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃以下保存备用；再将卡介苗和结核分枝杆菌分别送入不同培养基中，加入生理盐水震荡摇均匀，温度控制常温，持续5-20min，然后将其与步骤S1进行混合，将左旋咪唑、维生素B分别加入进行混合，并送入保温箱，温度控制在35-55℃，持续2-4h；然后混合加工，再加入乳化剂进行混合搅拌，并加入磷酸盐缓冲液，搅拌过程中保持 60-72℃，持续30min，最后对溶液进行消毒处理，处理完成后静置 15min即完成加工，按照0.8ml的份量进行包装。

安全检验：用3-6月龄的肉鸡20只，将佐剂与疫苗进行混合，每只肌注疫苗0.75mg，观察48小时，具体见表格参数。

实施例3

石蜡3g、羊毛脂5g、卡介苗2g、结核分枝杆菌4g、左旋咪唑 3g、维生素B 2g、乳化剂1.5g、磷酸盐缓冲液10g。

羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃以下保存备用；再将卡介苗和结核分枝杆菌分别送入不同培养基中，加入生理盐水震荡摇均匀，温度控制常温，持续5-20min，然后将其与步骤S1进行混合，将左旋咪唑、维生素B分别加入进行混合，并送入保温箱，温度控制在35-55℃，持续2-4h；然后混合加工，再加入乳化剂进行混合搅拌，并加入磷酸盐缓冲液，搅拌过程中保持 60-72℃，持续30min，最后对溶液进行消毒处理，处理完成后静置 15min即完成加工，按照0.8ml的份量进行包装。

安全检验：用2-4月龄的肉鸡20只，将佐剂与疫苗进行混合，每只肌注疫苗0.95mg，观察72小时，具体见表格参数。

实施例4

石蜡3g、羊毛脂5g、卡介苗2g、结核分枝杆菌4g、左旋咪唑 3g、维生素B 2g、乳化剂1.5g、磷酸盐缓冲液10g。

羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃以下保存备用；再将卡介苗和结核分枝杆菌分别送入不同培养基中，加入生理盐水震荡摇均匀，温度控制常温，持续5-20min，然后将其与步骤S1进行混合，将左旋咪唑、维生素B分别加入进行混合，并送入保温箱，温度控制在35-55℃，持续2-4h；然后混合加工，再加入乳化剂进行混合搅拌，并加入磷酸盐缓冲液，搅拌过程中保持 60-72℃，持续30min，最后对溶液进行消毒处理，处理完成后静置 15min即完成加工，按照0.8ml的份量进行包装。

安全检验：用2-4月龄的肉鸡20只，将佐剂与疫苗进行混合，每只肌注疫苗0.9mg，观察7天，具体见表格参数。

实验数据：

综上，本发明的制作的佐剂与抗原结合良好，且毒性小，乳化效果好，同时加入少量的维生素可促进鸡的代谢功能，整个佐剂的制作成本较低。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。