溴结构域蛋白4抑制剂jq1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用

文档序号：1369313 发布日期：2020-08-14 浏览：23次 >En<

阅读说明：本技术 溴结构域蛋白4抑制剂jq1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用 (Application of bromodomain protein4 inhibitor JQ1 or derivative thereof in preparation of medicines for treating sepsis intestinal barrier injury ) 是由陈玲李威钟小林杨惠曹文宇徐杨毛明莉李梦琳时萌萌张圆于 2020-06-05 设计创作，主要内容包括：本发明涉及医药技术领域,特别涉及溴结构域蛋白4(BRD4)抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用。实验表明,在细菌脂多糖(LPS)诱导的脓毒症小鼠肠屏障损伤模型中,BRD4抑制剂JQ1可有效地抑制LPS诱导的脓毒症小鼠肠道黏膜层破损,炎症因子TNFα、IL1β和IL18的释放,NLRP3炎性复合小体的释放,以及细胞焦亡标志基因GSDMD、GSDME、P2X7及Aim2的高表达。结果显示,BRD4抑制剂JQ1可通过抑制肠道组织细胞焦亡,从而有效防止脓毒症小鼠肠屏障损伤,可用于制备治疗脓毒症肠屏障损伤的药物制剂。(The invention relates to the technical field of medicines, in particular to application of a bromodomain protein 4(BRD4) inhibitor JQ1 or a derivative thereof in preparing a medicine for treating sepsis intestinal barrier injury. Experiments show that in a sepsis mouse intestinal barrier injury model induced by bacterial Lipopolysaccharide (LPS), JQ1 serving as a BRD4 inhibitor can effectively inhibit LPS-induced damage of intestinal mucosa layers of sepsis mice, release of inflammatory factors TNF alpha, IL1 beta and IL18, release of NLRP3 inflammatory complex bodies and high expression of cell apoptosis marker genes GSDMD, GSDME, P2X7 and Aim 2. The results show that JQ1 serving as a BRD4 inhibitor can effectively prevent the intestinal barrier injury of mice with sepsis by inhibiting the scorching of intestinal tissue cells, and can be used for preparing a medicinal preparation for treating the intestinal barrier injury of sepsis.)

溴结构域蛋白4抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别涉及溴结构域蛋白4(BRD4)抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用。

背景技术

脓毒症是感染引起的全身炎症反应综合征。虽然抗生素治疗、外科手术等取得长足进展，但脓毒症的发病率和死亡率仍居高不下。肠道作为脓毒症发病时最早受累的器官之一，其肠屏障损伤在脓毒症感染爆发进程中起到始动作用。在严重脓毒症时，肠黏膜受损，通透性增加，大量细菌及内毒素进入血液及淋巴循环系统，并激活释放TNFα、IL1等多种炎症因子，最终导致全身多器官功能损害。因此，在脓毒症研究中，如何有效防止肠屏障损伤成为亟待解决的重要问题之一。

溴结构域蛋白-4(bromodomain-containing protein4，BRD4)是溴结构域和超末端结构家族中关键的功能蛋白，它主要通过自身的两个溴结构域去结合乙酰化的组蛋白H3等，招募不同的转录因子，调节靶基因的表达，进而在炎症、细胞周期和细胞基因转录等调节过程中发挥重要作用。

JQ1是一种特异性BRD4抑制剂，分子量为456.99，化学式为C₂₃H₂₅ClN₄O₂S，CAS号为1268524-70-4，其结构如式I所示：

目前，关于JQ1在治疗脓毒症肠屏障损伤方面的应用未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了BRD4抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用。实验表明BRD4抑制剂JQ1可通过抑制肠道组织细胞焦亡，从而有效防止脓毒症小鼠的肠屏障损伤，可用于治疗脓毒症中炎症因素诱导的肠屏障损伤。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了BRD4的抑制剂JQ1或其衍生物在制备预防和/或治疗脓毒症肠屏障损伤的药物中的应用。

在本发明的一些具体实施方案中，所述脓毒症肠屏障损伤为LPS诱导的脓毒症肠屏障损伤。

在本发明的一些具体实施方案中，JQ1对LPS诱导的脓毒症肠道黏膜损伤具有修复作用。

在本发明的一些具体实施方案中，JQ1抑制肠道组织细胞焦亡。

在本发明的一些具体实施方案中，JQ1抑制LPS诱导的脓毒症肠组织炎症因子TNFα、IL1β和/或IL18的释放。

在本发明的一些具体实施方案中，JQ1抑制LPS诱导的脓毒症肠组织NLRP3炎性复合小体的释放；所述NLRP3炎性复合小体包含NLRP3、Caspase1或ASC中的一种或多种。

在本发明的一些具体实施方案中，JQ1抑制LPS诱导的脓毒症肠组织中细胞焦亡标志基因GSDMD、GSDME、P2X7和/或Aim2的高表达。

在本发明的一些具体实施方案中，所述药物包括有效剂量的JQ1和药学上可接受的辅料。

在本发明的一些具体实施方案中，所述药物为注射制剂。

在本发明的一些具体实施方案中，所述注射制剂的输注方式为腹膜内输注。

综上所述，本发明提供了BRD4抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用。本发明具有的技术效果为：本发明观察BRD4抑制剂JQ1对LPS诱导的脓毒症小鼠肠屏障损伤的影响，发现JQ1具有明显的肠道黏膜层保护作用，并有效抑制炎症因子TNFα、IL1β、IL18和NLRP3炎性复合小体的释放，以及细胞焦亡标志基因GSDMD、GSDME、P2X7及Aim2的高表达现象。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示HE染色显示BRD4抑制剂JQ1对脓毒症小鼠小肠黏膜层的影响；

图2示HE染色显示BRD4抑制剂JQ1对脓毒症小鼠结肠黏膜层的影响。

具体实施方式

本发明公开了溴结构域蛋白4抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供了BRD4抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用。

在本发明中，NLRP3炎性复合小体为NLRP3、Caspase 1、ASC中的一种或几种。

作为优选，该药物还包括药学上可接受的辅料。

作为优选，治疗脓毒症肠屏障损伤药物的剂型为注射给药剂型。

作为优选，注射给药剂型为注射液或粉针剂。

在本发明提供的具体实施例中，注射给药剂型的输注方式为腹膜内输注。

作为优选，治疗脓毒症肠屏障损伤药物的剂型为胃肠道给药剂型。

本发明提供了BRD4抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用。本发明具有的技术效果为：本发明观察BRD4抑制剂JQ1对LPS诱导的脓毒症小鼠肠屏障损伤的影响，发现JQ1具有明显的肠道黏膜层保护作用，并有效抑制炎症因子TNFα、IL1β、IL18和NLRP3炎性复合小体的释放，以及细胞焦亡标志基因GSDMD、GSDME、P2X7及Aim2的高表达现象。

本发明提供的溴结构域蛋白4抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用中所用试剂或仪器均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

本实验入选动物为8周C57BL/6雄性小鼠，体重约25克，购自湖南斯莱克景达，许可证号：SCXK(湘)2019-0004，小鼠放至人工昼夜12小时循环照明环境中饲养，自由摄食及饮水。C57BL/6雄性小鼠被随机分为生理盐水对照组(5只)、LPS造模组(10mg/kg，5只)、JQ1给药组(50mg/kg，5只)，每组动物分别腹腔注射给予相应剂量的生理盐水或JQ1药物，1h后腹腔注射10mg/kg LPS，24h后(LPS注射完毕开始计时)，使用4％水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠，麻醉完全后取肠组织，置于4％多聚甲醛固定过夜，用于组织HE染色。

肠道组织HE染色步骤：

(1)将固定后的肠组织梯度酒精脱水后，石蜡包埋，制成石蜡切片。

(2)使用二甲苯将切片脱蜡后，梯度水化。

(3)苏木素染色5min，1％盐酸酒精分化5-10s。

(4)自来水冲洗15min后，伊红染色2min。

(5)梯度酒精脱水后，二甲苯浸泡2min，中性树脂封片，显微镜下拍照。

实验结果见图1及图2。

实验结果显示：BRD4抑制剂JQ1可明显抑制LPS诱导的脓毒症小鼠的小肠及结肠黏膜层损伤。

实施例2

实验动物来源、饲养条件以及给药处理过程均参照实施例1。在麻醉小鼠后，取肠道组织保存于-80℃，用于荧光定量PCR检测。

肠道组织荧光定量PCR步骤：

(1)RNA抽提及反转录：1ml Trizol裂解液匀浆组织，加入200μl氯仿，混匀后静置5min；4℃，12000g离心15min，转移上层水相，加入等体积异丙醇混匀；4℃，12000g离心10min；弃上清，加入1ml的75％乙醇；4℃，7500g离心5min，弃上清；晾干后加入20μl去酶水溶解；按照反转录试剂盒(Thermo，货号：K1621)说明书将RNA反转录成cDNA。

(2)RT-PCR：10μl反应体系：TB反应液5μl，ROX染料0.2μl，上下游引物(10μM)各0.4μl；cDNA 1μl；去酶水3μl。

步骤1：95℃，5min

步骤2：95℃，15s；60℃，15s；72℃，45s，40个循环

步骤3：GAPDH作为内参基因，通过2^-ΔΔCT计算目标基因的相对表达量。

所采用Q-PCR引物及序列如表1所示：

表1

实验结果见表2至表4。表2为BRD4抑制剂JQ1对脓毒症小鼠肠组织炎症因子基因表达水平的影响；表3为BRD4抑制剂JQ1对脓毒症小鼠肠组织NLRP3炎性复合小体基因表达水平的影响；表4为BRD4抑制剂JQ1对脓毒症小鼠肠组织焦亡标志基因表达水平的影响。

表2.JQ1对脓毒症小鼠肠组织炎症因子基因表达水平的影响

炎症因子	TNFα	IL1β	IL18
				NS组	1.0±0.235	1.0±0.161	1.0±0.197
LPS组	9.0±3.241<sup>*</sup>	6.1±1.461<sup>**</sup>	1.9±0.209<sup>**</sup>
				LPS+JQ1组	0.6±0.098<sup>#</sup>	0.3±0.090<sup>##</sup>	0.4±0.115<sup>###</sup>
F	7.13	11.35	19.13
				P	0.008	0.0014	0.0001

^*P﹤0.05，^**P﹤0.01vs NS组；^#P﹤0.05，^##P﹤0.01，^###P﹤0.001vs LPS组。采用One-wayANOVA法进行统计分析。

表3.JQ1对脓毒症小鼠肠组织NLRP3炎性复合小体基因表达水平的影响

炎症小体	NLRP3	Caspase1	ASC
				NS组	1.0±0.309	1.0±0.167	1.0±0.081
LPS组	3.0±0.550<sup>*</sup>	1.6±0.178<sup>*</sup>	1.4±0.127<sup>*</sup>
				LPS+JQ1组	0.7±0.239<sup>##</sup>	0.3±0.100<sup>###</sup>	0.2±0.030<sup>###</sup>
F	9.926	20.81	55.07
				P	0.0021	0.0003	﹤0.0001

^*P﹤0.05vs NS组；^##P﹤0.01，^###P﹤0.001vs LPS组。采用One-way ANOVA法进行统计分析。

表4.JQ1对脓毒症小鼠肠组织焦亡标志基因表达水平的影响

^*P﹤0.05，^**P﹤0.01vsNS组；^##P﹤0.01，^###P﹤0.001vs LPS组。采用One-way ANOVA法进行统计分析。

实验结果显示：BRD4抑制剂JQ1可以有效LPS诱导的脓毒症小鼠肠道组织炎症因子TNFα、IL1β、IL18和NLRP3炎性复合小体的释放；JQ1可明显抑制LPS诱导的脓毒症小鼠肠道组织中细胞焦亡标志基因GSDMD、GSDME、P2X7及Aim2的高表达现象。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 南华大学附属第一医院

<120> 溴结构域蛋白4抑制剂JQ1或其衍生物在制备治疗脓毒症肠屏障损伤药物中的应用

<130> MP2008021

<160> 22

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA