阅读说明：本技术 Liproxstatin-1在制备治疗神经病理性疼痛制剂中的应用 (Application of Liproxstatin-1 in preparation of preparation for treating neuropathic pain ) 是由 李响 于 2020-05-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了Liproxstatin-1在制备治疗神经病理性疼痛制剂中的应用。发明人通过研究意外发现,Liproxstatin-1可以有效预防、缓解或治疗神经病理性疼痛,特别是物理损伤引起的神经病理性疼痛。通过在术前注射使用Liproxstatin-1,可以有效预防或缓解术后神经病理性疼痛。(The invention discloses an application of Liproxstatin-1 in preparing a preparation for treating neuropathic pain. The inventor unexpectedly finds that the Liproxstatin-1 can effectively prevent, relieve or treat neuropathic pain, particularly neuropathic pain caused by physical injury. By injecting the Liproxstatin-1 before the operation, the neuropathic pain after the operation can be effectively prevented or relieved.)

Liproxstatin-1在制备治疗神经病理性疼痛制剂中的应用

技术领域

本发明涉及化合物的新应用，特别涉及Liproxstatin-1在制备治疗神经病理性疼痛制剂中的应用。

背景技术

神经病理性疼痛(Neuropathic pain)是由神经系统原发性损害和功能障碍所激发或引起的疼痛，一般人群的患病率在7％至10％之间,据此推断，我国患病人数已超过1亿。神经病理性疼痛除引起患者生理上的痛苦外，还增加抑郁、焦虑等情感障碍的发病率，成为心理疾病的重要诱因，许多患者甚至产生自杀倾向，导致生活质量明显下降，这使其成为疼痛研究领域的难点与热点。

Liproxstatin-1的系统命名为N-[(3-chlorophenyl)methyl]-spiro[piperidine-4,2'(1'H)-quinoxalin]-3'-amine，CAS号950455-15-9，结构式

Liproxstatin-1是一种有效的铁死亡抑制剂，作用靶点在谷胱甘肽合成的途径当中，能够在低纳摩尔范围内抑制铁死亡和Gpx4-/-细胞增殖，阻断脂质过氧化作用，从而抑制与铁死亡相关的缺氧炎性损伤。现有文献报导的其主要治疗作用有：

Liproxstatin-1通过抑制铁死亡减少炎症因子释放，减轻肾脏脂质过氧化损伤，降低大鼠胰腺炎导致的急性肾损伤(Ma D,et al.Inhibition of FerroptosisAttenuates Acute Kidney Injury in Rats with Severe Acute Pancreatitis.Dig DisSci.2020Mar 27.doi:10.1007/s10620-020-06225-2.)。

Liproxstatin-1通过抑制铁死亡减轻小鼠肠道缺血再灌注导致的急性肺损伤(LiY,et al.Inhibitor of apoptosis-stimulating protein of p53 inhibitsferroptosis and alleviates intestinal ischemia/reperfusion-induced acute lunginjury.Cell Death Differ.2020Mar 18.doi:10.1038/s41418-020-0528-x.)。

Liproxstatin-1通过抑制铁死亡减轻脊髓胶质细胞聚集及降低活性氧浓度，缓解大鼠吗啡耐受症状(Chen X,Liproxstatin-1Attenuates Morphine Tolerance throughInhibiting Spinal Ferroptosis-like Cell Death.ACS Chem Neurosci.2019Dec 18；10(12):4824-4833.)

Liproxstatin-1通过抑制铁死亡，增加细胞存活率，降低VDAC1水平，并增加GPX4表达，保护小鼠心肌免受缺血再灌注打击损伤(Feng Y,et al.Liproxstatin-1protectsthe mouse myocardium against ischemia/reperfusion injury by decreasing VDAC1levels and restoring GPX4 levels.Biochem Biophys Res Commun.2019Dec 10；520(3):606-611.)

Liproxstatin-1通过抑制铁死亡，降低了组织活性氧及感染性细胞因子的表达，从而减轻了放射导致的肺组织纤维化(Li X,et al.Ferroptosis inhibitor alleviatesRadiation-induced lung fibrosis(RILF)via down-regulation of TGF-β1.J Inflamm(Lond).2019May 29；16:11.)

Liproxstatin-1通过抑制铁死亡减轻肠道缺血再灌注损伤(Li Y,Ischemia-induced ACSL4activation contributes to ferroptosis-mediated tissue injury inintestinal ischemia/reperfusion.Cell Death Differ.2019Nov；26(11):2284-2299.)

CN109453173A公开了Liproxstatin-1治疗放射性肺损伤疾病。CN111135177A公开了Liproxstatin-1可减轻脑外伤引起的脑水肿与血脑屏障通透性；发现了Liproxstatin-1对脑外伤引起的运动与学习记忆障碍具有改善效果；证明了Liproxstatin-1可显著改善TBI引起的焦虑和认知功能；此外，揭示了Liproxstatin-1的保护效果与逆转TBI引起FTH1与Nrf2上调以及NOX2表达下调有关。

至今为止，未有Liproxstatin-1具有治疗神经病理性疼痛作用的有关报导，通过Liproxstatin-1已知的性质无法推断其是否通过抑制铁死亡发挥缓解神经病理性疼痛的作用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供Liproxstatin-1在制备治疗神经病理性疼痛制剂中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

Liproxstatin-1在制备预防、缓解或治疗神经病理性疼痛制剂中的应用。

在一些实例中，所述神经病理性疼痛为物理损伤引起的神经病理性疼痛。

在一些实例中，所述制剂的剂型为注射剂。

在一些实例中，所述注射剂的使用方法为：

术前注射；和/或

术后3天连续注射。

在一些实例中，所述术前注射为术前30min～2小时注射。

在一些实例中，所述术后3天连续注射为每天注射一次。

具体的注射时间可以根据实际情况进行调整，在一些实例中，所述注射的时间为每天的8～10am。

在一些实例中，在术前和术后分别注射，以获得更佳的缓解术后神经病理性疼痛效果。

本发明的第二个方面，提供：

一种预防、缓解或治疗神经病理性疼痛的制剂，所述制剂中的活性成分包括Liproxstatin-1。

在一些实例中，所述制剂的剂型为注射剂。

本发明的有益效果是：

发明人通过研究意外发现，Liproxstatin-1可以有效预防、缓解或治疗神经病理性疼痛，特别是物理损伤引起的神经病理性疼痛。通过在术前注射使用Liproxstatin-1，可以有效预防或缓解术后神经病理性疼痛。

附图说明

图1是不同处理组小鼠GFAP表达量。

具体实施方式

下面结合实验，进一步说明本发明的技术方案。

神经病理性疼痛发生时，脊髓时重要的信息传递中枢，发明人前期研究意外发现，使用Liproxstatin-1可以缓解疼痛症状，并通过以下实验手段进行验证。

机械痛敏测定

通过一定弯曲力度的纤维丝刺激足底，会使动物产生抬腿动作，当动物出现这些动作时，纤维丝力度称为机械痛阈值。神经病理性疼痛发生时，较低的力度就能够使疼痛模型动物产生抬腿等动作，即机械痛阈值降低。

热痛觉过敏测定

通常采用热辐射刺激(有害刺激)，将辐射光源聚焦到动物足底，记录开始到缩足时间，称为热刺激缩足。神经病理性疼痛发生时，热刺激缩足时间缩短。

星型胶质细胞标记物测定

在神经病理性疼痛刺激条件下，激活的星形胶质细胞释放大量细胞因子如神经生长因子，神经营养因子，肿瘤坏死因子，IL-1、IL-6和TNF-a；释放神经活性物质如ROS、NO等可以使脊髓背角的痛觉传入神经元处于敏化状态，并可直接致痛。GFAP是星形胶质细胞的特异性标志物,其高表达是星形胶质细胞最常见的特征性反应之一。多种疼痛模型中均可观察到脊髓星形胶质细胞的活化增殖反应和其特征性标志物GFAP的显著增加，GFAP表达下调标志着疼痛出现缓解。

通过对比注射Liproxstatin-1后，测量机械痛敏、热痛敏以及脊髓中GFAP的表达量，评价Liproxstatin-1是否能够缓解疼痛。

实验材料

对照药物：二甲基亚砜(DMSO)

实验药物：Liproxstatin-1(HY-12726)，由MedChemExpress(Monmouth Junction,NJ,USA)公司生产。

实验动物：C57BL/6小鼠，由广东省实验动物中心提供。

实验方法

分组：将所有小鼠分为(1)CCI+DMSO组(腹腔注射DMSO，DMSO为一种有机溶剂，通常用于溶解药物，不具备药理作用)；(2)CCI+LIP组(腹腔注射Liproxstatin-1)；(3)Sham组(假手术组)，每组各15只小鼠。

处理：CCI+DMSO组和CCI+LIP组均建立坐骨神经结扎疼痛模型，制作方法参照Bennett等提出的方法(Gary J Bennett，Xie Y K.A peripheral mononeuropathy in ratthat produces disorders of pain sensation like those seen in man.Pain,1988，33(1)：87-107.)：将小鼠麻醉，暴露一侧坐骨神经，用4道5-0铬制羊肠线轻轻结扎小鼠坐骨神经主干。术后2天开始出现自发抬足、脚趾并拢蜷缩、脚不着地、爪外翻、跛行等步态异常的自发痛表现，此模型表现出的冷、触痛觉超敏、伤害性热刺激和机械刺激痛觉过敏，14天左右痛敏达到高峰，可以持续2个月以上。Sham组小鼠只暴露神经，不做结扎。

CCI+DMSO组和CCI+LIP组在建模前1小时及建模后连续3天注射药物，CCI+DMSO组腹腔注射DMSO(10mg/kg，)，CCI+LIP组小鼠腹腔注射Liproxstatin-1(10mg/kg)，两组小鼠注射药物容量相同；Sham组小鼠不做药物注射。

三组小鼠分别在建模前和建模后1、3、5、7、10天进行机械痛敏和热痛敏值，并在第5天和第10天取小鼠脊髓进行电镜下观察铁死亡小体及检测铁含量，并进行GFAP测定。机械痛敏通过Von Frey纤维丝(购自美国IITC Life Science Inc)刺激大鼠足底测定；热痛敏(购自意大利UgoBasile公司)通过热辐射仪加热大鼠足底测定；GFAP通过Western-Blot测定，其中GFAP抗体购自美国CST公司。机械痛敏及热痛敏降低、GFAP表达增加视为发生疼痛症状，机械痛敏及热痛敏增加、GFAP表达下调视为疼痛症状缓解。

实验结果：

1)小鼠坐骨神经结扎后1天起，机械痛敏阈值明显降低，直至观察期结束，而术前1小时注射及术后连续腹腔注射Liproxstatin-1三天后，CCI小鼠的机械痛阈上升，直至观察期结束。

2)小鼠坐骨神经结扎后1天起，热痛敏阈值明显降低，直至观察期结束，而术前1小时注射及术后连续腹腔注射Liproxstatin-1三天后，CCI小鼠的热痛敏阈值上升，直至观察期结束。

3)小鼠坐骨神经结扎后第5天及第10天可见脊髓内GFAP表达显著上升，术前1小时注射及术后连续腹腔注射Liproxstatin-1三天后可下调GFAP表达水平。

Liproxstatin-1对神经病理性疼痛的缓解作用

小鼠坐骨神经结扎后1天起，机械痛敏阈值明显降低，直至观察期结束，而术前1小时注射及术后连续腹腔注射Liproxstatin-1三天后，CCI小鼠在术后第五天起机械痛阈较未注射Liproxstatin-1显著上升，直至观察期结束(表1)。

表1术后各组小鼠机械痛敏值比较(X±SD，g)

注：*与Sham组比较，P<0.05，#与CCI+Veh组比较，P<0.05。

Liproxstatin-1对神经病理性疼痛小鼠热痛敏的作用

小鼠坐骨神经结扎后1天起，热痛敏阈值明显降低，直至观察期结束，而术前1小时注射及术后连续腹腔注射Liproxstatin-1三天后，CCI小鼠在术后第五天起热痛阈较未注射Liproxstatin-1显著上升，直至观察期结束(表2)。

表2术后各组小鼠热痛敏值比较(X±SD，s)

注：*与Sham组比较，P<0.05，#与CCI+Veh组比较，P<0.05

Liproxstatin-1对神经病理性疼痛小鼠脊髓内星型胶质细胞聚集的抑制作用

通过Western-Blot发现，小鼠坐骨神经结扎后第5天及第10天可见脊髓内GFAP表达显著上升(CCI+Veh)，术前1小时注射及术后连续腹腔注射Liproxstatin-1三天后可下调GFAP表达水平(CCI+Lip)，见图1。