阅读说明：本技术 以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法 (Production method of pure solid state fermentation complex enzyme system induced by feed and diet ) 是由 胡卫华 于 2019-11-20 设计创作，主要内容包括：本发明公开了以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法,配方包括：产蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、半乳糖苷酶、甘露聚糖酶等复合酶的黑曲霉、米曲霉组合菌群,复合酶活性量分别为：产蛋白酶5000-10000Iu/g、木聚糖酶5000-8000Iu/g、果胶酶1000-2000Iu/g、淀粉酶1000-2000Iu/g、纤维素酶1000-3000Iu/g、甘露聚糖酶500-1000Iu/g、半乳糖苷酶500-1000Iu/g,步骤一,菌种选取；步骤二,菌种培养；步骤三,培养基选取及称量；步骤四,培养基发酵处理；该发明,代谢产物量高,活力比现有单一液体发酵技术生产的饲用复合酶提高5倍以上,并且酶组分更全面合理,协同性好,各种酶的活力均有不同程度的提高。(The invention discloses a production method of a pure solid state fermentation complex enzyme system induced by feed diet, which comprises the following steps: aspergillus niger and Aspergillus oryzae combined flora producing complex enzymes such as protease, xylanase, pectinase, amylase, cellulase, galactosidase and mannase, wherein the activity amounts of the complex enzymes are respectively as follows: 10000Iu/g for protease 5000-; step two, culturing strains; selecting and weighing a culture medium; step four, fermentation treatment of the culture medium; the invention has high metabolite content, activity is improved by more than 5 times compared with the feeding compound enzyme produced by the existing single liquid fermentation technology, enzyme components are more comprehensive and reasonable, the synergy is good, and the activity of various enzymes is improved to different degrees.)

以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法

技术领域

本发明涉及酶的生产、畜牧养殖技术领域，具体为以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法。

背景技术

近年来，随着我国人民的生活水平的不断提高，我国的饲料业、养殖业得到迅速发展，饲料资源不足已经成为阻碍我国饲料工业发展的一个重要原因。我国各地主要粮食作物差异较大，外源酶制剂的添加对潜在饲料资源的利用和新饲料资源的开发有较大的作用。另一方面，随着人们生活水平的提高及环境意识的增强，政府也正积极通过禁止在饲料中使用抗生素、激素等方式来保障饲料和食品的安全，维护生态平衡，实现健康可持续的养殖模式。因此设计以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法，可以获得丰富的有益发酵产物，帮助调节畜禽体内内环境，促进畜禽体内有益菌的增长，充分应用饲料饲粮诱导产生的酶系全面合理、协同性好、针对性强等特点促进饲料饲粮在畜禽体内消化吸收率的明显提高，显著降低畜禽养殖成本。

发明内容

本发明的目的在于提供以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法，配方包括：产蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、半乳糖苷酶、甘露聚糖酶等复合酶的黑曲霉组合菌群，复合酶活性量分别为：产蛋白酶5000-10000Iu/g、木聚糖酶5000-8000Iu/g、果胶酶1000-2000Iu/g、淀粉酶1000-2000Iu/g、纤维素酶1000-3000Iu/g、甘露聚糖酶500-1000Iu/g、半乳糖苷酶500-1000Iu/g；

以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法，包括：步骤一，菌种选取；步骤二，菌种培养；步骤三，培养基选取及称量；步骤四，培养基的发酵处理；

其中在上述步骤一中，在产蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、半乳糖苷酶、甘露聚糖酶等产生菌中挑选出米曲霉菌和黑曲霉菌作为生产菌株，菌种接种至斜面培养基于20～40℃下培养2～5天后保存备用；

其中在上述步骤二中，将挑选的米曲霉菌和黑曲霉菌斜面菌株接种至培养瓶中培养，然后放入种子罐中进行通风搅拌培养1～3天；

其中在上述步骤三中，按照复合酶活性量分别为：产蛋白酶5000-10000Iu/g、木聚糖酶5000-8000Iu/g、果胶酶1000-2000Iu/g、淀粉酶1000-2000Iu/g、纤维素酶1000-3000Iu/g、甘露聚糖酶500-1000Iu/g、半乳糖苷酶500-1000Iu/g的要求进行培养基称取和混合；

其中在上述步骤四中，按重量百分比取5～15％的培养菌种接入已灭菌消毒的固体发酵培养基中，混匀后加水调整至消毒后含水量为重量百分比50～70％，用乳酸：柠檬酸：富马酸按2：1：1的比重份数进行添加，调节培养基的PH值至4.5-5.5；将混合均匀的培养基送入曲房，再自然补给无菌空气，保持环境温度为20～40℃，环境湿度为50～85％的条件下发酵3～5天；发酵成熟的固体料利用低温干燥器进行干燥，直至含水量达到5～12％，再利用粉碎机粉碎至40～60目。

根据上述技术方案，所述步骤四中该培养基的构成为：玉米粉10～30％，小麦粉0～30％，大麦粉0～30％，麸皮20～30％，玉米芯8～15％，豆粕10～20％，菜粕5～15％，糖蜜0.3～0.5％。

根据上述技术方案，所述步骤一中，培养达到生产需要活菌数即米曲霉菌≥2±1.5×109次方CFU/ml；黑曲霉菌≥2±1.5×109次方CFU/ml。

根据上述技术方案，所述步骤二中在培养瓶为20～40℃的温度条件下摇瓶培养1～3天。

根据上述技术方案，所述步骤四中将称取好的培养基灭菌消毒、调节PH值后接种混匀，送入曲房，再自然补给无菌空气，保持环境温度为20～40℃，环境湿度为50～85％的条件下发酵3～5天。

与现有技术对比，本发明具备以下有益效果：该发明，采用高产蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶和纤维素酶等酶系的米曲霉菌、黑曲霉菌株，玉米粉、小麦粉、大麦粉、麸皮、豆粕等饲料饲粮作为发酵基料，诱导式纯固态发酵，能够保证菌株快速生长繁殖快，代谢目的产物丰富，代谢产物量高，复合酶活性比现有单一液体发酵技术生产的饲用复合酶提高5倍以上，并且酶组分更系统全面，协同性好，针对性强，各种酶的活性均有不同程度的提高，同时可以缩短培养、发酵周期，提高生产效率，降低生产成本；该方法还具有生产工艺简单、操作简便、技术容易掌握、原料来源广泛、对环境无污染、适合的规模生产等优点。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，本发明提供技术方案：以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法，配方包括：产蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、半乳糖苷酶、甘露聚糖酶等复合酶的黑曲霉组合菌群，复合酶活性量分别为：产蛋白酶5000-10000Iu/g、木聚糖酶5000-8000Iu/g、果胶酶1000-2000Iu/g、淀粉酶1000-2000Iu/g、纤维素酶1000-3000Iu/g、甘露聚糖酶500-1000Iu/g、半乳糖苷酶500-1000Iu/g的要求进行培养基称取和混合；

以饲料饲粮诱导产生的纯固态发酵复合酶系的生产方法，包括：步骤一，菌种选取；步骤二，菌种培养；步骤三，培养基选取及称量；步骤四，培养基的发酵处理；

其中在上述步骤一中，在产蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、半乳糖苷酶、甘露聚糖酶等复合酶的产生菌中挑选出米曲霉菌和黑曲霉菌作为生产菌株，以便提高生产效率，降低生产成本，将挑选的菌株分别接种在斜面上培养成熟；

其中在上述步骤二中，然后将挑选培养好的斜面菌株分别接入培养瓶中在20～40℃的温度条件下培养1～3天，再将瓶中菌种按重量百分比5％分别放入种子罐中进行通风搅拌培养2～3天，培养达到生产需要活菌数即米曲霉菌≥2±1.5×109次方CFU/ml；黑曲霉菌≥2±1.5×109次方CFU/ml；

其中在上述步骤三中，按照复合酶活性量分别为：产蛋白酶5000-10000Iu/g、木聚糖酶5000-8000Iu/g、果胶酶1000-2000Iu/g、淀粉酶1000-2000Iu/g、纤维素酶1000-3000Iu/g、甘露聚糖酶500-1000Iu/g、半乳糖苷酶500-1000Iu/g的要求进行培养基称取和混合；

其中在上述步骤四中，将米曲霉菌：黑曲霉按1：2份量按重量百分比取5～10％的培养菌种接入已消毒的固态发酵培养基中，该培养基的构成为：玉米粉10～30％，小麦粉0～30％，大麦粉0～30％，麸皮20～30％，玉米芯8～15％，豆粕10～20％，菜粕5～15％，糖蜜0.3～0.5％，混匀后加水调整至消毒后含水量为重量百分比50～70％，用乳酸：柠檬酸：富马酸按2：1：1的比重份数进行添加，调节培养基的PH值至4.5～5.5；将混匀后的培养基送入曲房，再自然补给无菌空气，保持环境温度为20～40℃，环境湿度为50～85％的条件下发酵3～5天；选用玉米粉、小麦粉、大麦粉、麸皮和豆粕等饲料饲粮作为诱导性发酵基料，有利菌株的生长繁殖和代谢目的产物的获得，可缩短生产周期，在发酵过程中根据菌株生长发酵情况，每间隔24小时补加一次培养液，其添加量按1％重量比进行均匀喷雾添加；其培养液组成为：糖蜜2％，蛋白胨0.5％，酵母粉0.5％，其余分量为水；菌株生长快、长势好的条件下，环境温度、补液和通风调节可控制低一些，反之可控制高一些，视菌株生长代谢情况达到最佳状态，即可停止发酵，发酵成熟的固体料利用低温干燥器进行干燥，直至含水量达到5～12％，再利用粉碎机粉碎至40～60目即可。

从上所述，本发明用高产蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶和纤维素酶的米曲霉菌、黑曲霉菌株，玉米粉、小麦粉、大麦粉、麸皮、豆粕等饲料饲粮作为发酵基料，采用饲料饲粮诱导式固态发酵工艺，能够保证菌株快速生长繁殖快，酶系形成不受阻遏，全面协调、针对性强，制得的饲用复合酶制剂酶活与成本性价比高，使用效果显著，技术易掌握、发酵周期短、产品质量稳定，无毒无污染。

实施例1：

下面再以发酵设备试验为实施例对本发明作以详细的说明。

按照复合酶活性量分别为：产蛋白酶8000Iu/g、木聚糖酶6000Iu/g、果胶酶1000Iu/g、淀粉酶1000Iu/g、纤维素酶2000Iu/g、甘露聚糖酶500Iu/g、半乳糖苷酶500Iu/g进行称取，先在产蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、半乳糖苷酶、甘露聚糖酶产生菌中挑选出米曲霉菌、黑曲霉菌株作为生产菌株接种在斜面上，在30℃的温度条件培养48h-62h，然后从斜面菌株接入500ml三角培养瓶中在30℃的温度条件下震荡培养1天，放入装有20L培养液的25L种子罐中进行气流搅拌培养24-48h；全部接入已消毒的500kg固体发酵培养基中，该培养基的构成为：玉米粉20％，麸皮30％，小麦粉20％，豆粕15％，菜粕5％，玉米芯10％，糖蜜0.5％，培养基混匀灭菌消毒后含水量调整为65％，用乳酸：柠檬酸：富马酸按2：1：1的比重份数进行添加，调节培养基的PH值至4.5-5.5，将500kg固态培养基送入曲房，持续补给无菌空气，保持环境温度20-40℃，环境湿度为50～85％之间，间隔24小时补加一次培养液，其添加量按1％重量比进行均匀喷雾添加；其培养液组成为：糖蜜2％，蛋白胨0.5％，酵母粉0.5％，其余分量为水，持续发酵5天，即可停止发酵；发酵成熟的固体料利用低温干燥器进行干燥，直至含水量达到5～12％，再利用粉碎机粉碎至40～60目即可。

实施案例2

选择断奶后3日龄健康状况、体重大小接近的仔猪400头，随机分成A\B两组，按实际生产进行饲养管理，试验采用地面平养的方式进行，在一栋猪舍内A\B组交叉分栏，对照组A不做任何处理，试验组B在日粮中按0.03％比例添加本发明产品，饲养35天。

试验期间每天记录投料量，试验开始和结束时称仔猪体重，计算料肉比和日增重。

实验结果如下表：

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。