金发藓酮a在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用
阅读说明：本技术 金发藓酮a在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用 (Application of trichophyton A in preparation of medicine for treating Alzheimer's disease ) 是由 郭龙 郑玉光 段绪红 张丹 侯芳洁 景松松 于 2021-08-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了金发藓酮A在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。金发藓酮A为本发明发明人先前发现并发表公开的一个化合物,本发明研究发现该化合物具有明显的乙酰胆碱酯酶抑制活性,因此具备开发成治疗阿尔兹海默症的药物的前景。(The invention discloses application of trichophyton A in preparation of a medicine for treating Alzheimer's disease. The trichophyton A is a compound which is discovered and published by the inventor previously, and the research of the invention discovers that the compound has obvious acetylcholinesterase inhibition activity, so the trichophyton A has the prospect of being developed into a medicament for treating the Alzheimer disease.)
技术领域
本发明属于医药领域，涉及已知化合物的新用途，具体涉及金发藓酮A在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
背景技术
东亚小金发藓为金发藓科小金发藓属植物东亚小金发藓Pogonatum inflexum(Lindb.)Lac.的全草，生长于林边潮湿土壁，在我国南北山区常成大片生长，具有镇静安神、散瘀止血之功效。发明人段绪红先前从东亚小金发藓中分离得到1个新的二苯甲酮类化合物，化学结构如下所示，并将其命名为金发藓酮A(参考文献：段绪红等，东亚小金发藓中1个新的二苯甲酮类化合物，中草药，第50卷第6期2019年3月)。
为了开发拓展其医药用途，特提出本发明创造。
发明内容
本发明的目的在于提供金发藓酮A在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
金发藓酮A在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
一种治疗阿尔兹海默症的药物，活性成分为金发藓酮A。
进一步地，所述药物还含有药学上可以接受的辅料，制成药学上可以接受的剂型。
更进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊、注射剂和口服液。
有益效果：
金发藓酮A为本发明发明人先前发现并发表公开的一个化合物，本发明研究发现该化合物具有明显的乙酰胆碱酯酶抑制活性，因此具备开发成治疗阿尔兹海默症的药物的前景。
附图说明
图1为金发藓酮A和阳性药他克林均对乙酰胆碱酯酶抑制率曲线。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
1.实验试剂及仪器
乙酰胆碱酯酶(AChE)购自于Sigma-Aldrich公司；5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、碘代硫代乙酰胆碱(ATCI)，均购自阿拉丁试剂有限公司；十二烷基硫酸钠(SDS)、二甲基亚砜(DMSO)、Tris-HCl(pH＝8.0)均购自北京索莱宝科技有限公司，其它试剂均为分析纯。金发藓酮A从金发藓科小金发藓属植物东亚小金发藓Pogonatum inflexum(Lindb.)Lac.中分离制备得到，经高效液相色谱法测定纯度大于98％。
VICTORNivo酶标仪(珀金埃尔默仪器有限公司)；XS205 DU型电子分析天平(梅特勒—托利多仪器有限公司)；高速离心机(德国艾本德股份公司)；由Milli-Q超纯水系统(德国默克)。
2.实验方法
2.1溶液的配制
Tris-HCl缓冲液的配制：取5mL的1M Tris-HCl加蒸馏水至100mL，稀释成浓度为50mM的Tris-HCl缓冲液。
乙酰胆碱酯酶(AChE)溶液的配制：称取1mg的AChE，溶于10mL的Tris-HCl缓冲液中，得最终浓度为0.1mg/mL的乙酰胆碱酯酶(AChE)溶液。
碘代硫代乙酰胆碱(ATCI)溶液的配制：称取取1.10mg的ATCI溶解到0.5mL的Tris-HCl缓冲液中，配制成浓度为8mM的ATCI储备液。取200μL的ATCI储备液，用Tris-HCl缓冲液稀释到1mL，得最终浓度为1.6mM碘代硫代乙酰胆碱(ATCI)溶液。
5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)溶液的配制：称取2.30mg的DTNB溶于1mL的Tris-HCl缓冲液中，配制成6mM浓度的DTNB储备液，取400μL的DTNB储备液，用Tris-HCl缓冲液稀释至1mL，得最终浓度为2.4mM的5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)溶液。
十二烷基硫酸钠(SDS)溶液的配制：称取20mg的SDS加入到5mL的Tris-HCl缓冲液中，配制成终浓度为0.4％的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液。
金发藓酮A溶液的配制：称取金发藓酮A适量，溶于1mL DMSO，配制成4mM的储备溶液，取100μL的储备溶液，Tris-HCl缓冲液稀释至5mL，配制成80μM的金发藓酮A溶液。分别取不同体积金发藓酮A溶液溶液，使用Tris-HCl缓冲溶液稀释成系列合适的浓度。
他克林溶液的配制：称取他克林1.8mg溶于2mLDMSO中，配制成4mM的储备溶液，取4mM储备溶液10μL加入990μL的Tris-HCl缓冲溶液，配制成40μM他克林溶液；分别取适量的他克林溶液，使用Tris-HCl缓冲溶液稀释成一系列合适的浓度。
2.2乙酰胆碱酯酶抑制活性的测定
采用Ellman’s方法测定金发藓酮A对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。实验分别设置样品测定组、样品对照组、酶溶液对照组、空白对照组、阳性对照组(他克林)样品组，反应在96孔板中进行，每组实验重复3次。样品测定组中每孔依次加入Tris-HCl缓冲液30μL(50mM)、DTNB溶液10μL(2.4mM)、AChE溶液10μL(0.1mg/mL)和不同浓度的样品溶液10μL，37℃孵育15min。然后加入底物ATCI溶液10μL(1.6mM)，继续在37℃孵育15min，迅速加入终止剂SDS溶液30μL(0.4％)终止反应。使用酶标仪在405nm处测量吸光度。
按下面方法计算不同样品对乙酰胆碱酯酶的抑制率，金发藓酮A和他克林样品分别设置5个不同浓度，计算不同浓度的金发藓酮A和他克林对乙酰胆碱酯酶的抑制率，并计算金发藓酮A和他克林对乙酰胆碱酯酶抑制作用的半数抑制浓度(IC50)。
Axi为样品测定组(10μL酶溶液+10μL样品)；
Ax为样品对照组(10μL Tris-HCl缓冲液+10μL样品)；
Ai为酶溶液对照组(10μLTris-HCl缓冲液+10μL酶溶液)；
A0为空白对照组(20μL Tris-HCl缓冲液)。
3.实验结果
通过所建立方法测定了金发藓酮A对乙酰胆碱酯酶的抑制作用，由图1可知，金发藓酮A和阳性药他克林均表现出较好的乙酰胆碱酯酶抑制作用，且随着浓度的增加抑制率不断地增加，呈剂量依赖性。计算得金发藓酮A乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度(IC50)为1.583±0.03μM，阳性药他克林的半数抑制浓度(IC50)为0.910±0.02μM。结果提示金发藓酮A表现出良好的乙酰胆碱酯酶抑制能力，与阳性药他克林抑制能力相近。
综上可见，金发藓酮A具有明显的乙酰胆碱酯酶抑制活性，因此具备开发成治疗阿尔兹海默症的药物的前景。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。
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