阅读说明：本技术 一种用于检测膀胱癌的标志物及膀胱癌检测试剂盒 (Marker for detecting bladder cancer and bladder cancer detection kit ) 是由 王帆 李霞玲 于 2019-09-09 设计创作，主要内容包括：本发明属于基因检测技术领域,具体公开了一种用于检测膀胱癌的标志物及膀胱癌检测试剂盒。所述的检测膀胱癌的标志物具有SEQ ID NO：1所示的序列；所述的膀胱癌检测试剂盒是以SEQ ID NO：1所述的序列作为标志物进行膀胱癌检测；其包含检测SEQ ID NO：1的检测引物,所述SEQ ID NO：1的检测引物的序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。本发明首次以SEQ ID NO：1作为标志物进行膀胱癌检测,提供了一种新的检测途径；同时,以SEQ ID NO：1作为标志物检测膀胱癌具有较高的准确度。(The invention belongs to the technical field of gene detection, and particularly discloses a marker for detecting bladder cancer and a bladder cancer detection kit. The marker for detecting bladder cancer has the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1; the bladder cancer detection kit is a kit comprising the following components in parts by weight of SEQ ID NO: 1 as a marker for detecting bladder cancer; which comprises detecting the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, the detection primer of SEQ ID NO: 1 is shown as SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3, respectively. The invention is expressed by SEQ ID NO: 1 as a marker for detecting bladder cancer, provides a new detection way; meanwhile, the sequence shown as SEQ ID NO: 1 as a marker for detecting bladder cancer has high accuracy.)

一种用于检测膀胱癌的标志物及膀胱癌检测试剂盒

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种用于检测膀胱癌的标志物及膀

胱癌检测试剂盒。

背景技术

膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤，是***最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一。在膀胱癌的筛查中，首先的难点在于需要确定哪些基因突变与膀胱癌相关，进一步以该基因为标志物设计引物来检测该基因，从而实现膀胱癌的筛查。但现有技术中对膀胱癌的标志物的研究不够深入，能够用于预测膀胱癌的标志物不多，因此急需研究更多的预测膀胱癌的标志物。

现有技术中虽然已有针对膀胱癌的检测试剂盒，但现有技术中的试剂盒对于膀胱癌检测的准确度有待进一步提高。因此，进一步开发一种检测准确度高的膀胱癌检测试剂盒，对于降低膀胱癌的检测步骤以及节约膀胱癌的筛查成本具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的首要技术问题是，提供一种膀胱癌检测试剂盒。本发明首次发现膀胱癌患者血液中存在SEQ ID NO：1所示的序列；因此，以SEQ ID NO：1为标志物，检测待测试人员血液中是否含有SEQ ID NO：1序列可以用来判定待测试人员是否患有膀胱癌。

本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：

本发明提供一种用于检测膀胱癌的标志物，具有SEQ ID NO：1所示的序列；其中SEQ IDNO：1的序列如下：5’-GCTAGACATGCTGCGCTACCATCGAAGACGATAGCTTATCT-3’；

优选地，所述的标志物在制备膀胱癌检测试剂盒中的应用。

本发明还提供一种膀胱癌检测试剂盒，所述的膀胱癌检测试剂盒是以SEQ ID NO：1所述的序列作为标志物进行膀胱癌检测。

优选地，所述SEQ ID NO：1的检测引物的序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示；

SEQ ID NO：2的序列如下：5’-GCGCAGATGCTACCCTGCTAGATCAGT-3’；

SEQ ID NO：3的序列如下：5’- GTGCGTTAATATCTCAGCGAT-3’。

优选地，所述的膀胱癌检测试剂盒，还包含RT-qPCR专用预混液、ddH2O。

所述的RT-qPCR专用预混液选用HiScript II Q RT SuperMix for qPCR。

进一步优选地，试剂盒中各组分的用量为：RT-qPCR专用预混液 5~15 ul；SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：3、所示的引物分别为0.8~1.2 ul；ddH₂O 3~6ul。

最优选地，试剂盒中各组分的用量为：RT-qPCR专用预混液 13 ul；SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、所示的引物分别为1 ul；ddH₂O 5 ul。

进一步优选地，SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的浓度分别为600~900nM。

最优选地，SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的浓度分别为800nM。

有益效果：本发明首次以SEQ ID NO：1作为标志物进行膀胱癌检测，现有技术并未提SEQ ID NO：1与膀胱癌有关；本发明为膀胱癌的检测提供了一种新的检测途径，丰富了膀胱癌的检测产品。研究表明，以SEQ ID NO：1作为标志物具有较高的准确度；此外，本发明所述的试剂盒可以实现对膀胱癌患者血液中SEQ ID NO：1的定量检测，进一步经实验表明，膀胱癌患者血液中SEQ ID NO：1的表达量大于1.6 x10^-4 umol/L，因此以该定量数据为参考标准可以进一步提高膀胱癌检测的准确度。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。

实施例1 膀胱癌检测试剂盒

膀胱癌检测试剂盒包含如下组分：

RT-qPCR专用预混液 13 ul；

SEQ ID NO：2所示的引物分别为1 ul；

SEQ ID NO：3所示的引物分别为1 ul；

ddH₂O 5 ul；

其中，SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的浓度分别为800nM。

实施例2 膀胱癌检测方法

（1）收集待筛查人员的血液，进一步从血液中提取总核酸；

（2）取5 ul经步骤（1）提取的总核酸，采用实施例1所示的膀胱癌检测试剂盒中的SEQID NO：2和SEQ ID NO：3的引物，对SEQ ID NO：1所述的序列进行PCR扩增，扩增条件为：92℃预变性5 min，1个循环；94℃变性40秒，69℃延伸45秒，40 个循环；35℃冷却20s；放置5min后采集Cq值；

（3）分别将人工合成的SEQ ID NO：1序列作为模板，按步骤（2）进行扩增，然后分别将SEQ ID NO：1序列稀释成10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7umol/L，检测不同浓度下的SEQ IDNO：1序列的Cq值；并以横坐标为浓度，纵坐标为Cq值绘制标准曲线。

（4）采集100名诊断为膀胱癌的患者以及100名未患膀胱癌的人员的血液，按步骤（1）~（2）所述的方法检测膀胱癌患者和未患膀胱癌人员的血液中SEQ ID NO：1序列的Cq值，并根据步骤（3）绘制的标准曲线计算血液中SEQ ID NO：1序列的含量；据统计分析，100名膀胱癌患者的血液中的SEQ ID NO：1序列的含量均高于1.6 x10^-4 umol/L；100名未患膀胱癌人员的血液中均未检测到有SEQ ID NO：1序列。

综上所述，本发明可以以SEQ ID NO：1序列作为血液中的标志物，用于筛查患膀胱癌；经本发明试剂盒检测，如果待检测人员血液中表达有SEQ ID NO：1所示的序列，则可以确定该待检测人员患有膀胱癌。进一步地，如果待检测人员血液中的SEQ ID NO：1序列的表达高于1.6 x10^-4umol/L，可以进一步判定待检测人员患有膀胱癌。此外，本发明所述试剂盒采用特异性引物SEQ ID NO：2和3，可以实现对SEQ ID NO：1序列的特异性扩增，并可以实现对SEQ ID NO：1序列的定量检测，从而进一步保证了膀胱癌筛查的准确性。

序列表

<110> 广州中鑫医学检验科技有限公司

<120> 一种用于检测膀胱癌的标志物及膀胱癌检测试剂盒

<130> 2019

<141> 2019-09-09

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 41

<212> DNA

<213> 未知(unknown)

<400> 1

gctagacatg ctgcgctacc atcgaagacg atagcttatc t 41

<210> 2

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

gcgcagatgc taccctgcta gatcagt 27

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gtgcgttaat atctcagcga t 21