阅读说明：本技术 右旋地衣酸单独或联合紫杉醇在制备治疗和抗肺鳞癌药物上的应用 (Application of dextro-lichenin alone or in combination with taxol in preparing medicine for treating and resisting lung squamous carcinoma ) 是由 刘冰 齐婉辰 张陆勇 于 2019-11-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了右旋地衣酸在制备治疗和抗肺鳞癌药物上的应用,及右旋地衣酸联合紫杉醇在制备治疗和抗肺鳞癌药物上的应用。本发明经过反复实验发现,右旋地衣酸能减少肺鳞癌细胞存活,并能通过抑制线粒体呼吸链及Nrf2表达导致活性氧(ROS)的爆发产生,进而显著诱导肺鳞癌细胞凋亡；同时联合应用紫杉醇,可以协同产生抗肺鳞癌作用。裸鼠成瘤实验证实了右旋地衣酸体内抗肺鳞癌的有效性及联合紫杉醇的协同抗癌作用。本研究为临床抗肺鳞癌选择有效的辅助药物提供实验依据,实验数据支持进一步开发抗肺鳞癌候选药右旋地衣酸及其与紫杉醇的联合治疗方案。(The invention discloses an application of dextro-lichenin in preparing medicaments for treating and resisting lung squamous carcinoma, and an application of dextro-lichenin and paclitaxel in preparing medicaments for treating and resisting lung squamous carcinoma. Repeated experiments show that the dextro-lichenin can reduce the survival of the squamous cell lung carcinoma cells, and can remarkably induce apoptosis of the squamous cell lung carcinoma cells by inhibiting the outbreak generation of Reactive Oxygen Species (ROS) caused by mitochondrial respiratory chain and Nrf2 expression; and meanwhile, the paclitaxel is combined to produce the lung squamous carcinoma resisting effect synergistically. Nude mouse tumorigenicity experiment proves the effectiveness of dextro-lichenin in resisting lung squamous carcinoma and the synergistic anticancer effect of the dextro-lichenin and paclitaxel. The research provides experimental basis for selecting effective auxiliary drugs for resisting the lung squamous carcinoma clinically, and experimental data support the further development of a candidate drug (the dextro-lichenin) for resisting the lung squamous carcinoma and a combined treatment scheme of the candidate drug (the dextro-lichenin) and the taxol.)

右旋地衣酸单独或联合紫杉醇在制备治疗和抗肺鳞癌药物上 的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及右旋地衣酸单独或联合紫杉醇在制备治疗和抗肺鳞癌药物上的应用。

背景技术

在各种恶性肿瘤中，肺癌的发病率和死亡率均排第一。肺癌的基本类型分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，其中NSCLC约占80％-85％，而NSCLC分为肺腺癌，肺鳞癌和大细胞肺癌等三个主要亚型，其中肺鳞癌约占30％。相较于肺腺癌，肺鳞癌患者对目前临床应用的化疗药物及靶向药物的治疗反应均欠佳，预后较差。因此，迫切需要研究及开发用于肺鳞癌患者的有效辅助治疗药物及联合用药策略。

活性氧簇是由细胞代谢产生的能够影响一系列信号传导途径的一类物质，包括超氧阴离子O₂ ^-、羟基OH^-及过氧化氢H₂O₂。在正常机体中，为了使机体内的氧化还原平衡相对稳定，产生的过多的ROS会被抗氧化系统所清除。与正常人体细胞相比，癌细胞具有高水平的活性氧(ROS)特征。高水平的ROS可以促进肿瘤细胞的增殖，而过量的ROS则对癌细胞有损伤作用。因此，控制ROS水平以选择性杀死癌细胞将是一种有前途的策略。

近年来人们陆续将研究的目光转向天然抗肿瘤药物及其提取物的研发上。无论是诱导肿瘤细胞凋亡进而杀伤肿瘤细胞，减低手术治疗对机体的伤害，还是减轻放化疗的毒副作用，天然药物都在肿瘤辅助治疗中发挥重要作用。

天然植物来源抗生素是天然产物中一类重要的成员。近年来，关于天然植物来源抗生素抗肿瘤的研究已成为抗肿瘤药物研究领域中的焦点。右旋地衣酸来自于天然松萝，是具有独特的二苯并呋喃骨架的天然次生代谢产物，是一种公认有效的广谱抗生素，对多数***具有强大的抑制作用。右旋地衣酸具有广泛的生物活性，包括抗微生物，抗病毒，抗炎和止痛。令人感兴趣的是，有研究发现，在某些肿瘤中，右旋地衣酸也具有良好的抗癌细胞作用。然而，右旋地衣酸对肺鳞癌是否有效至今尚无报道。因此，右旋地衣酸在肺鳞癌中的作用及作为辅助治疗药物联合现有临床药物的相关研究亟需开展。

基于以上研究背景及存在的问题，本研究将在体内外水平充分探讨右旋地衣酸对肺鳞癌细胞的作用及其相关机制，并在此基础上，深入研究其与紫杉醇联合应用的潜在价值。

发明内容

基于临床针对肺鳞癌患者的有效辅助治疗药物及联合用药策略的缺乏，本发明在体内外水平深入探讨右旋地衣酸对肺鳞癌细胞的作用及其相关机制，并在此基础上，阐明其与紫杉醇联合应用的潜在价值，以期为临床抗肺鳞癌选择有效的辅助药物提供实验依据。因此，本发明的目的在于提出右旋地衣酸在制备治疗和抗肺鳞癌药物上的应用。

本发明首次阐明了右旋地衣酸抗肺鳞癌的作用和机制，在此基础上阐释了联合应用紫杉醇协同抗肺鳞癌细胞的良好效果。

本发明经过反复实验发现，右旋地衣酸能减少肺鳞癌细胞存活，并能通过抑制线粒体呼吸链及Nrf2表达导致活性氧(ROS)的爆发产生，进而显著诱导肺鳞癌细胞凋亡；同时联合应用紫杉醇，可以协同产生抗肺鳞癌作用。裸鼠成瘤实验证实了右旋地衣酸体内抗肺鳞癌的有效性及联合紫杉醇的协同抗癌作用。本研究为临床抗肺鳞癌选择有效的辅助药物提供实验依据，实验数据支持进一步开发抗肺鳞癌候选药右旋地衣酸及其与紫杉醇的联合治疗方案。

本发明涉及的治疗和抗肺鳞癌的药物包括右旋地衣酸和紫杉醇，右旋地衣酸通过协同增敏紫杉醇达到抗肿瘤作用，为扩大临床上现有药物的治疗范围提供新的理论依据，为提高临床上肺鳞癌的治疗效果提供新的理论基础。

附图说明

图1为右旋地衣酸抑制肺鳞癌细胞活力示意图:(A)右旋地衣酸的分子结构；(B)MTT法检测分析，右旋地衣酸以浓度梯度(10-40μM)处理48小时后对人肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)活力的影响；

图2为右旋地衣酸通过ROS积累诱导细胞凋亡示意图：(A)右旋地衣酸作用24小时后，对人肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)凋亡的影响；(B)右旋地衣酸对人肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)ROS的影响；(C)流式细胞术分析，给予抗氧化剂NAC(25mM)可以显著逆转右旋地衣酸(30μM)对H520和Calu-1细胞的凋亡诱导作用；

图3为右旋地衣酸增加线粒体ROS并损伤线粒体氧化呼吸链示意图：(A-B)右旋地衣酸处理H520和Calu-1细胞12小时，加入特异性线粒体ROS探针-MitoSOX-red(5μM)，利用荧光显微镜观察细胞中荧光改变以检测线粒体ROS变化；(C)右旋地衣酸作用于H520和Calu-1细胞，检测线粒体复合体酶I和III的活性。

图4为抑制Nrf2表达介导了右旋地衣酸诱导的LUSC细胞凋亡示意图：(A)右旋地衣酸作用12小时后，在H520和Calu-1细胞中加入针对线粒体ROS的靶向抗氧化剂-Mito-TEMPOL(10mM)，流式细胞术检测分析右旋地衣酸对ROS的影响；(B)右旋地衣酸处理8小时后，以剂量依赖的方式抑制H520和Calu-1细胞中Nrf2蛋白的表达；(C)实时定量PCR法检测分析，在H520和Calu-1细胞中右旋地衣酸对Nrf2 mRNA表达的影响；(D)实时定量PCR法检测分析，在H520和Calu-1细胞中右旋地衣酸对Nrf2下游靶基因HO-1和NQO-1mRNA表达的影响；

图5为tBHQ可有效逆转H520和Calu-1细胞中右旋地衣酸诱导的ROS积累和细胞凋亡示意图：(A)流式细胞术检测分析，tBHQ(20μM)处理可有效逆转H520和Calu-1细胞中右旋地衣酸诱导的ROS积累；(B)流式细胞术检测分析，tBHQ可显著挽救右旋地衣酸(30μM)诱导的细胞凋亡；

图6为PI3K/Akt信号通路介导右旋地衣酸抑制肺鳞癌细胞中Nrf2表达示意图：(A)右旋地衣酸处理8小时后，右旋地衣酸剂量依赖性地降低H520和Calu-1细胞中Akt的磷酸化；(B)与单独使用右旋地衣酸相比，LY294002抑制PI3K/Akt信号后，蛋白质免疫印迹分析右旋地衣酸在H520和Calu-1细胞中对Nrf2和p-AKT的蛋白表达；(C-D)与单独使用右旋地衣酸相比，LY294002抑制PI3K/Akt信号后，实时定量PCR法检测分析右旋地衣酸在H520和Calu-1细胞中对Nrf2下游靶基因HO-1和NQO-1mRNA表达的影响；

图7为右旋地衣酸增强紫杉醇在肺鳞癌中的细胞毒性示意图：(A)MTT法检测紫杉醇处理48小时后对人肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)活力的影响；(B)MTT法检测右旋地衣酸和紫杉醇联合应用对人肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)活力的影响；(C)流式细胞术检测分析，右旋地衣酸和紫杉醇联合应用对人肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)ROS的影响；(D-E)在人肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)中联合应用右旋地衣酸和紫杉醇，采用CalcuSyn分析软件计算联合指数(CI)；

图8为右旋地衣酸在LUSC的异种移植小鼠模型中抑制肿瘤生长示意图：(A)应用H520细胞建立异种移植小鼠模型，成瘤展示；(B-C)给予小鼠不同给药组处理，药物对小鼠瘤体积与瘤重量的影响；(D)荧光显微镜20×拍照分析，分别用Nrf2和ki67抗体对肿瘤组织染色；通过TUNEL染色检测具有片段化DNA的凋亡核。

具体实施方式

为让本领域的技术人员更加清晰直观的了解本发明，下面将对本发明作进一步的说明。

材料和方法

试剂种类

右旋地衣酸(S2252)购自Selleckchem。TBHQ(HY-B0015，CAS号：33069-62-4)，LY294002(PI3K抑制剂)(HY-10108，CAS号：154447-36-6)和紫杉醇(HY-B0015，CAS号：33069-62-4购自MedChemExpres(MCE).Co，N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)(#A7250，CAS号：616-91-1)购自SigmaChemical Co.，所有其他试剂均购自Sigma Chemical Co.。

细胞系和细胞培养

人肺鳞癌细胞系(H520和Calu-1))均来自美国模式培养物收集中心(ATCC,Rockville,MD,USA)。细胞在10％FBS的RPMI-1640培养基(GIBCO，Invitrogen，美国)中生长，并在5％CO₂和37℃温度的CO₂培养箱(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)。

细胞活力测定

MTT法检测细胞活力。将细胞以5×10³个细胞/孔的密度接种到96孔板中，并置于100μL培养基中，单独处理孵育48小时。然后，向每个孔中加入约100μL新鲜培养基和20μL的MTT溶液，并将细胞孵育4小时。小心地除去上清液，并将甲臢晶体溶解在150μL的DMSO中。将板轻轻摇动孵育10分钟，然后使用酶标仪(Thermo Scientific^TMMultiskan^TMFC，美国)在570nm下测量吸光度。使用GraphPad Prism版本7.01(GraphPad Software,San Diego,CA,USA)计算IC₅₀值。

凋亡的测定

药物处理24小时后，胰蛋白酶消化并收集细胞，然后用冷PBS洗涤2次。将细胞重悬于含有5μL Annexin V-FITC和10μL碘化丙啶(PI)(BB-4101-3)的400μL 1x结合缓冲液中。在黑暗中于2-8℃孵育15分钟后，通过流式细胞仪(Thermo Scientific^TM，Attune NxT，美国)进行分析检测。

ROS的检测

通过用2，7-二氯荧光素二乙酸酯(DCF-DA，Sigma Chemical Co，35845)染色细胞来检测细胞内ROS水平。简要地说，用胰蛋白酶消化细胞后，离心收集，然后用PBS洗涤2次，并在Hank的平衡盐溶液(HBSS)中用10μM的DCF-DA染色30分钟。染色的细胞用PBS洗涤并通过流式细胞仪(Thermo Scientific TM，Attune NxT，USA)进行分析，激发波长为488nm，发射波长为525nm。

线粒体ROS的检测

用线粒体ROS指示剂MitoSOX-Red(Invitrogen，Molecular，Probes)检测。收集细胞，用PBS洗涤2次，并与5μM的MitoSOX-Red在37℃孵育15分钟，然后在流式细胞仪上进行分析(Thermo Scientific^TM，Attune NxT，美国，10,000个细胞/样品)。

线粒体复合物酶I和III的检测

根据制造商的说明，使用线粒体复合物I活性检测试剂盒(Abcam)来测定线粒体复合物酶I活性。用线粒体复合物III活性检测试剂盒(GENMED，中国)测定复合物酶III的活性。

蛋白质免疫印迹

在指定的时间用0.5％蛋白酶抑制剂混合物(Sigma，St Louis，MO，USA)用另一种药物处理后，收获细胞并裂解细胞(Cell Signaling Technology，Beverly，MA，USA)。抗体如下：Nrf2(Abcam，Cat#ab31163，RRID：AB_881705)，p-Akt(Cell Signaling.Cat#4060，RRID：AB_2315049)，Akt(Cell Signaling.Cat#4685，RRID：AB_2225340)和β-tubulin(Abcam.Cat#ab6046，RRID：AB_2210370)。为了分析Nrf2和p-Akt，其特异性抗体(用5％BSA稀释至1：1000)进行实验。为了分析β-tubulin，其抗体(用5％BSA稀释至1：5000)进行实验。HRP标记的Cell Signaling兔二抗(用5％BSA稀释至1：1000)应用于实验。化学发光检测试剂盒(ECL)(英国Amersham International plc)检测抗体结合。

实时定量RT-PCR

使用Trizol试剂(Invitrogen)从H520，Calu-1细胞中提取总RNA，然后根据制造商的规程使用ReverTra Ace逆转录酶(日本TOYOBO，FSQ-301)合成互补DNA(cDNA)。按照SYBRGreen实时PCR预混液(日本TOYOBO，QPK-201)在iCycler(Bio-Rad)上按照制造商的说明进行实时RT-PCR。引物序列如下：

Nrf2正向引物：GACGTGTGGCGGCTGAGC；

Nrf2反向引物：GCACCGCGTCCGAACTAGAAG；

GAPDH正向引物：GGCACCGTCAAGGCTGAGAAC；

GAPDH反向引物：CATGGTGGTGAAGACGCCAGTG；

HO-1正向引物：GGTGCTCGTACTGCTACTGTCATG；

HO-1反向引物：GCCACGAACCTCATCTCTTCCAC；

NQO-1正向引物：CGCCTGCCATCATGCCTGAC；

NQO-1反向引物：GTGTGGTGGATCACGCCTGTAATC。

使用ΔΔCT方法计算每次扩增的基因表达水平，并针对GAPDH的mRNA进行标准化。

联合指数分析

以MTT法测得单药不同剂量的抑制率后可以得到细胞的剂量-效应曲线，采用CalcuSyn分析软件计算联合指数(CI)。CI＝(D)₁/(D_X)₁+(D)₂/(D_X)₂，其中，(D)1、(D)2分别为联合用药时两组药物各自浓度，D_X为联合用药时达fa时，单药抑制率也达fa所需要的药物浓度，D_X＝Dm[fa/(1-fa)]1/m，fa表示一定浓度的两药联合用药达到的抑制率。通过软件输入单药的剂量及抑制率可得到Dm值和m值，再经上述联合指数计算公式就可得到某种联合用药方案的效应，CI值小于1表示此方案具有协同效应。

异种移植模型

动物实验已获得广东省动物中心批准。所有动物实验均符合美国国立卫生研究院关于实验动物的护理和使用的指南(NIH出版物第8023号，1978年修订)。雌性无胸腺裸鼠(4-6周大)购自广东省医学检验动物中心。

将H520细胞(约4×10⁶个细胞)皮下接种到6周龄雌性裸鼠的右胁中。当肿瘤达到约80-100mm³时，将小鼠分成五组(每组n＝6)。用右旋地衣酸(50mg/kg，两天一次，通过腹膜内注射)，右旋地衣酸加NAC(实验期间在饮用水中给予7mg/ml)，紫杉醇(10mg/kg，两天一次，通过腹膜内注射)右旋地衣酸加紫杉醇组。治疗持续4周。每两天测量并计算一次体重和肿瘤大小。处理4周后处死小鼠。收集肿瘤对Nrf2和Ki67(抗Ki67抗体，AbcamCat#ab15580)表达进行免疫染色分析。

统计分析

所有体外实验均重复三次。使用GraphPad Prism版本7.01(GraphPad软件)对合并的数据进行统计分析。来自两个不同组的均值之间的差异“t”检验分析，而单向方差分析(ANOVA)用于测试三个或更多组之间的显著差异。体内肿瘤生长数据“t”检验分析。当P<0.05时，结果被认为是显著不同的，用*符号表示。

实验结果

右旋地衣酸通过细胞ROS积累抑制人肺鳞细胞增殖并诱导凋亡

采用MTT法检测右旋地衣酸(结构式如图1A)对人肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)活力的影响，发现右旋地衣酸处理48小时后，从(10-40μM)剂量依赖性地减少生存细胞数，在H520和Calu-1细胞中半数抑制浓度(IC₅₀)分别为32.51±0.44μM和34.25±0.05μM(图1B)。流式细胞术结果表明：右旋地衣酸作用24小时后，可呈剂量依赖性地诱导H520和Calu-1细胞出现凋亡(图2A)。图2B显示右旋地衣酸剂量依赖性地增强H520和Calu-1细胞中的ROS，给予抗氧化剂NAC(25mM)可以显著逆转右旋地衣酸(30μM)对H520和Calu-1细胞的凋亡诱导作用(图2C)。

右旋地衣酸增加线粒体ROS并损伤线粒体氧化呼吸链

然而，肿瘤中ROS的主要来源之一是线粒体氧化呼吸链途径。因此，接下来研究右旋地衣酸诱导的肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)中ROS产生是否由线粒体氧化呼吸链的损伤而引起。

首先，我们研究在肺鳞癌细胞(H520和Calu-1)中，右旋地衣酸是否可以诱导线粒体ROS升高。将右旋地衣酸处理H520和Calu-1细胞12小时，加入特异性线粒体ROS探针-MitoSOX-red(5μM)，利用荧光显微镜观察细胞中荧光改变以检测线粒体ROS变化。与对照组相比，右旋地衣酸剂量依赖性地增加H520和Calu-1细胞中线粒体ROS的产生，红色的荧光强度逐渐增强(图3A，3B)。图3C显示：将右旋地衣酸作用于H520和Calu-1细胞，可剂量依赖性地破坏H520和Calu-1细胞中的线粒体氧化呼吸链复合酶I和III的活性(图3C)。

抑制Nrf2表达介导了右旋地衣酸诱导的LUSC细胞凋亡

为了验证细胞中由右旋地衣酸产生的ROS是否全部来自线粒体呼吸链抑制，本实验采用针对线粒体ROS的靶向抗氧化剂-Mito-TEMPOL(10mM)。

实验结果表明：与单独使用右旋地衣酸相比，Mito-TEMPOL仅可部分消除H520和Calu-1细胞产生的ROS(图4A)。以上实验结果表明：右旋地衣酸引起的ROS升高不仅源自细胞内线粒体呼吸链抑制，可能存在其他机制。

Nrf2是通过NFE2L2基因编码亮氨酸的转录因子，通过调节下游抗氧化蛋白的表达在防御氧化损伤中发挥作用，因此，为进一步确定右旋地衣酸诱导的ROS积累的机制，本研究接下来检测其对Nrf2表达的影响。图4B和图4C显示：右旋地衣酸处理8小时后，以剂量依赖的方式有效抑制H520和Calu-1细胞中Nrf2蛋白的表达，但不影响Nrf2 mRNA的表达水平。通过实时定量RT-PCR的方法，发现右旋地衣酸作用细胞4小时后，可抑制Nrf2下游靶基因的mRNA水平，靶基因包括血红素加氧酶1(HO1)和NAD(P)H氧化酶，醌氧化还原酶(NQO1)(图4D)。

tBHQ是一种常用的Nrf2激动剂。接下来，我们验证tBHQ是否可以抵消右旋地衣酸在肺鳞癌细胞中的上述效应。如图5A所示，用tBHQ(20μM)处理可有效逆转H520和Calu-1细胞中右旋地衣酸诱导的ROS积累。此外，添加tBHQ可显著挽救右旋地衣酸(30μM)诱导的细胞凋亡(图5B)。

以上数据充分证实右旋地衣酸可通过抑制Nrf2表达，导致ROS积累进而诱导肺鳞癌细胞凋亡。

PI3K/Akt信号通路介导右旋地衣酸抑制肺鳞癌细胞中Nrf2表达

图6A显示右旋地衣酸处理8小时后，右旋地衣酸剂量依赖性地降低H520和Calu-1细胞中Akt的磷酸化。用PI3K/Akt信号选择性抑制剂LY294002(30μM)处理产生了类似的Nrf2表达抑制效应；用LY294002抑制PI3K/Akt信号后，右旋地衣酸(30μM)处理不会进一步降低Nrf2蛋白水平(图6B)。在Nrf2靶基因HO-1和NQO-1mRNA表达中也发现了类似的趋势(图6C)。以上数据表明右旋地衣酸通过抑制PI3K/Akt信号调节Nrf2表达。

右旋地衣酸增强紫杉醇在肺鳞癌中的细胞毒性

研究表明，ROS的积累是紫杉醇诱导癌细胞死亡的关键途径，因此，本研究接下来确定右旋地衣酸是否可增敏紫杉醇在肺鳞癌细胞中的作用。

如图7A所示，经过48小时处理后，紫杉醇以剂量依赖性方式降低H520和Calu-1细胞存活率，IC₅₀分别为0.40±0.04μM和0.38±0.02μM。为了评估右旋地衣酸和紫杉醇之间是否存在潜在的协同作用，我们向H520和Calu-1细胞中加入低于一半IC₅₀(15μM)的右旋地衣酸，并与较低剂量(0.1μM)的紫杉醇联合使用。如图7B所示，在紫杉醇治疗中观察到较高的抗癌细胞作用，并且联合应用右旋地衣酸及紫杉醇后效果更佳。此外，与单独用药相比，联合用药导致ROS的增加更为显著(图7C)。

图7D及7E中显示的分数效应与组合指数(FA–CI)曲线表明，右旋地衣酸和紫杉醇的组合在降低细胞存活效应中存在协同作用(CI<1)，在H520细胞中的CI值范围为0.712至1.087，在Calu-1细胞中的CI值范围为0.660至1.050。

右旋地衣酸在LUSC的异种移植小鼠模型中抑制肿瘤生长。

为了确定以上体外发现是否适用于体内，将6周大的雌性裸鼠的右肋部皮下接种H520细胞(约4×10⁶个细胞)。当肿瘤长到80-100mm³时，给予小鼠不同给药组处理，包括右旋地衣酸(每两天通过腹膜内注射每两天50mg/kg，持续四周)，右旋地衣酸加NAC(7mg/ml)(在整个实验期间的饮用水中)，紫杉醇(10mg/kg，每两天一次，共四周，通过腹膜内注射)以及右旋地衣酸联合紫杉醇组。

实验结果表明，单独的右旋地衣酸和紫杉醇可以显著抑制肿瘤的生长(图8A-C)。氧化清除剂NAC可以降低由右旋地衣酸引起的肿瘤抑制作用。与单独给药组(右旋地衣酸或紫杉醇单独给药)相比，联合用药可显著增强对肿瘤生长的抑制作用。此外，在通过IHC检测的右旋地衣酸处理的异种移植肿瘤组织中，Nrf2和Ki67水平降低，TUNEL染色增强(图8D)。

实验结论

右旋地衣酸能抑制肺鳞癌细胞增殖，并能通过ROS的积累选择性的诱导肺鳞癌细胞凋亡；同时联合应用紫杉醇，可以进一步协同增强紫杉醇在体外和体内的抗肺鳞癌作用，因此，右旋地衣酸很可能是LUSC治疗的潜在辅助治疗药物。为临床抗肺鳞癌选择有效的辅助药物提供实验依据，为扩大临床上现有药物的治疗范围提供新的理论依据，为临床上治疗肺鳞癌提供新的治疗方案。

上述对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和应用本发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于这里的实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，对于本发明做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。