阅读说明：本技术 一种桑辛素n在制备抗肿瘤药物中的应用 (Application of morin N in preparation of antitumor drugs ) 是由 田景奎 高成成 李守信 袁婳婳 吴知盼 韩昊特 朱玮 于 2019-12-24 设计创作，主要内容包括：本发明属医药生物技术领域,涉及一种桑辛素N在制备抗肿瘤药物中的应用,特别是在肺癌的治疗药物中的用途。桑辛素N制备的肿瘤药物能够通过抑制肿瘤细胞的活力、抑制肿瘤细胞迁移、诱导肿瘤细胞凋亡等途径抑制肿瘤。(The invention belongs to the field of medical biotechnology, and relates to application of sangusin N in preparation of antitumor drugs, in particular to application in treatment of lung cancer. The tumor drug prepared from the morin N can inhibit tumors by inhibiting the activity of tumor cells, inhibiting the migration of the tumor cells, inducing the apoptosis of the tumor cells and the like.)

一种桑辛素N在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种桑辛素N在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症是世界严重的公共卫生问题，是严重影响居民健康的危险因素，近十年来全球范围内癌症负担呈持续增长态势，据国际癌症研究机构公布的数据显示，每年全世界约800万人死于癌症。在我国因癌症死亡的患者占全部死因的1/4，位居死亡第一位。严重威胁我国居民健康的癌症主要有肺癌、肝癌、乳腺癌和胃癌等。由于多种因素如环境污染、人口老龄化，及不良生活方式如不健康饮食、身体活动不足、吸烟、酗酒及肥胖等广泛存在，我国癌症发病近十年来呈上升趋势。因此，对癌症的防治任务异常艰巨。

桑辛素是桑叶中重要的次生代谢产物，我们研究发现桑叶经UV-B诱导，次生代谢产物的含量发生变化，其中桑辛素N(Moracin N，CAS NO.:135248-05-4)的含量显著增加，本发明首次发现桑辛素N能有效抑制肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤细胞迁移，诱导肿瘤细胞发生凋亡。

发明内容

本发明目的是提供一种桑辛素N在制备抗肿瘤药物中的应用。桑辛素N能有效抑制肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤细胞迁移，诱导肿瘤细胞发生凋亡。

本发明采用以下技术方案实现：

一种桑辛素N在制备抗肿瘤药物中的应用。

上述技术方案中，优选地，所述肿瘤包括以下肿瘤：肺癌、结肠癌、***癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、胶质瘤，桑辛素N可用于上述多种肿瘤药物的制备。

更优选地，所述肿瘤为肺癌。

优选地，在抗肿瘤药物的制备中，桑辛素N经常规的制剂工艺，单独或与其他药物配伍制备可在临床上使用的各种不同剂型的药物，包括注射剂、片剂、胶囊、软胶囊、微囊、纳米制剂、颗粒剂、膜剂、栓剂、气雾剂等多种剂型。

本发明的有益效果在于：

本发明提供了桑辛素N作为一种抗肿瘤药物原料或潜药的应用，桑辛素N可通过抑制肿瘤细胞的活力、抑制肿瘤细胞迁移和诱导肿瘤细胞发生凋亡等多种机制发挥作用，具有较好的开发潜力。

附图说明

图1桑辛素N对A549肺癌细胞划痕愈合抑制作用；

图2桑辛素N对PC-9肺癌细胞划痕愈合抑制作用；

图3桑辛素N对A549肺癌细胞凋亡率的影响；

图4桑辛素N对PC-9肺癌细胞凋亡率的影响。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合实施例进一步说明本发明的技术方案。但是本发明不限于所列出的实施例，还应包括在本发明所要求的权利范围内其他任何公知的改变。

本发明所述桑辛素N在制备抗肿瘤药物中的应用。尤其在治疗肺癌、结肠癌、***癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、胶质瘤等各种肿瘤药物的药物制剂中的应用。本发明还提供了桑辛素N单独或与其他药物配伍制备可在临床上使用的各种不同剂型的药物，包括注射剂、片剂、胶囊、软胶囊、微囊、纳米制剂、颗粒剂、膜剂、栓剂、气雾剂等多种剂型。

实施例1桑辛素N对肿瘤细胞活力的影响

人肺癌细胞(A549、PC-9)、人结肠癌细胞(SW620)、人***癌细胞(PC-3)、人胃癌细胞(BGC823)、人肝癌细胞(HepG2)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)、人胶质瘤细胞(U251)分别接种于96孔(3000个/孔)培养板中，37℃、5％二氧化碳培养24h；加入不同浓度桑辛素N的工作液，使培养液中桑辛素N的终浓度为12.5、25、50、100μM(n＝3)，工作液加入作用48h后弃去培养液，每孔加入100μL含0.5mg/mL MTT的培养基，置于培养箱中继续培养4h后；终止培养，弃去孔内培养液，每孔加入100μL二甲基亚砜(DMSO)，常温下震荡10min，使蓝色结晶完全溶解，利用酶标仪测定每孔溶液在490nm处的吸光度值，不含细胞的孔作为空白对照，计算细胞活力。结果见表1～8，桑辛素N对人肺癌细胞A549、人肺癌细胞PC-9、人结肠癌细胞(SW620)、人***癌细胞(PC-3)、人胃癌细胞(BGC823)、人肝癌细胞(HepG-2)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)和人胶质瘤细胞(U251)的IC50分别为150.77μM、6.6μM、22.45μM、63.28μM、181.6μM、39.86μM、44.95μM和64.61μM，均具有较好抑制作用。

表1桑辛素N对A549细胞活力的影响

表2桑辛素N对PC-9细胞活力的影响

表3桑辛素N对SW620细胞活力的影响

表4桑辛素N对PC-3细胞活力的影响

表5桑辛素N对BGC823细胞活力的影响

表6桑辛素N对HepG2细胞活力的影响

表7桑辛素N对MDA-MB-231细胞活力的影响

表8桑辛素N对U251细胞活力的影响

实施例2桑辛素N对A549肺癌细胞划痕愈合抑制作用

A549肺癌细胞接种于6孔板(3*10^5个/孔)，贴壁24h后细胞刚好铺满6孔板底面，加入桑辛素N工作液至终浓度20μM和30μM，培养箱孵育48h后弃培养液，用200μL抢头划痕，PBS清洗两次，拍照记录划痕面积，加入含2.5％FBS培养基，培养一定48h后拍照记录划痕面积。用Photoshop软件磁性选框工具计算划痕区域面积，计算划痕愈合面积占初始划痕面积百分比。结果见图1，表明桑辛素N能显著减缓划痕愈合，抑制癌细胞的迁移。

实施例3桑辛素N对PC-9肺癌细胞划痕愈合抑制作用

PC-9肺癌细胞接种于6孔板(3×10⁵个/孔)，贴壁24h后细胞刚好铺满6孔板底面，加入桑辛素N工作液至终浓度6μM和8μM，培养箱孵育48h后弃培养液，用200μL抢头划痕，PBS清洗两次，拍照记录划痕面积，加入含2.5％FBS培养基，培养一定48h后拍照记录划痕面积。用Photoshop软件磁性选框工具计算划痕区域面积，计算划痕愈合面积占初始划痕面积百分比。结果见图2，表明桑辛素N能显著减缓划痕愈合，抑制癌细胞的迁移。

实施例4：桑辛素N诱导A549肺癌细胞凋亡的作用

A549肺癌细胞接种于6孔板(2*10^5个/孔)，贴壁24h后，加入桑辛素N工作液至终浓度15μM、30μM和45μM，处理48h后，用无EDTA胰酶消化细胞，2000rpm离心5min收集细胞，1mL PBS重悬细胞，2000rpm离心5min，丢弃上清液。根据细胞凋亡检测试剂盒说明书，加入500μL Binding Buffer重悬细胞，加入5μL Annexin V-FITC和5μL PI染色，上流式细胞仪，选择FITC通道与PE通道检测凋亡率。根据仪器检测得到凋亡率统计凋亡细胞占总细胞比值。实验重复三次。统计结果见图3，表明桑辛素N可浓度依赖地增加A549肺癌细胞凋亡率。

实施例5：桑辛素N诱导PC-9肺癌细胞凋亡的作用

PC-9肺癌细胞接种于6孔板(2*10^5个/孔)，贴壁24h后，加入桑辛素N工作液至终浓度10μM、20μM和30μM，处理48h后，用无EDTA胰酶消化细胞，2000rpm离心5min收集细胞，1mL PBS重悬细胞，2000rpm离心5min，丢弃上清液。根据细胞凋亡检测试剂盒说明书，加入500μL Binding Buffer重悬细胞，加入5μL Annexin V-FITC和5μL PI染色，上流式细胞仪，选择FITC通道与PE通道检测凋亡率。根据仪器检测得到凋亡率统计凋亡细胞占总细胞比值。实验重复三次。统计结果见图4，表明桑辛素N可浓度依赖地增加PC-9肺癌细胞凋亡率。

应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。