阅读说明：本技术 基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法 (Method for screening and identifying biomarkers of SCA3/MJD based on lncRNA ) 是由 江泓 李天娇 陈召 彭慧蓉 唐北沙 于 2018-07-31 设计创作，主要内容包括：一种基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法,包括以下步骤：1)准备含脊髓小脑性共济失调3型的抗凝血和不含脊髓小脑性共济失调3型的抗凝血各5～10ml使用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞；2)提取含lncRNA的总RNAs；3)对总RNAs样本进行高通量测序和生物信息学分析,挑选出组间差异表达的lncRNAs；4)对筛选得到的lncRNAs,进行qRT-PCR验证,并对其进行Wilcoxon秩和检验,筛选得到SCA3/MJD生物标志物lncRNAs。该筛选方法操作简单,筛选效率高,有效筛选出6个lncRNAs为SCA3/MJD生物标志物,且有助于扩充和完善lncRNA的表达谱。(A method for screening and identifying biomarkers of SCA3/MJD based on lncRNA, comprising the following steps: 1) preparing 5-10 ml of anticoagulant containing spinocerebellar ataxia 3 and 5-10 ml of anticoagulant without spinocerebellar ataxia 3 respectively, and separating peripheral blood mononuclear cells by using lymphocyte separation liquid; 2) extracting total RNAs containing lncRNA; 3) carrying out high-throughput sequencing and bioinformatics analysis on the total RNAs samples, and selecting lncRNAs which are differentially expressed among groups; 4) and carrying out qRT-PCR verification on the screened lncRNAs, carrying out Wilcoxon rank-sum test on the lncRNAs, and screening to obtain SCA3/MJD biomarker lncRNAs. The screening method is simple to operate and high in screening efficiency, effectively screens 6 lncRNAs serving as SCA3/MJD biomarkers, and is beneficial to expanding and perfecting the expression profile of lncRNA.)

基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法

技术领域

本发明涉及一种生物标志物的筛选方法，尤其是涉及基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法。

背景技术

脊髓小脑性共济失调(spinocerebellar ataxia,SCA)是人类主要的神经退行性疾病之一，其中脊髓小脑性共济失调3型(Spinocerebellar ataxia type 3/Machado-Joseph disease,SCA3/MJD)最为常见。脊髓小脑性共济失调3型/马查多-约瑟夫病(SCA3/MJD)和SCA7和HD一样是(15)九种多聚谷氨酰胺(polyglutamine,polyQ)疾病之一，它主要由ATXN3基因中三核苷酸序列CAG的异常扩增引起，发病年龄可从4岁到70岁以上。

非编码RNA作为一类转录物而受到越来越多的关注，其可根据长度区分为长链非编码RNA(lncRNA)和短链非编码RNA，其中长链非编码RNA(lncRNA)长度超过200个核苷酸。Wapinski O,Chang HY等在《Long noncoding RNAs and human disease》中报道了，lncRNA参与转录调控，转录后调控，甚至参与基因生命周期的几乎每一步，并可与其他生物分子相互作用。

Salta E,De Strooper B等在《Noncoding RNAs in neurodegeneration》中表明：部分lncRNA与神经退行性疾病有关。

Tan JY,Vance KW等在《Cross-talking noncoding RNAs contribute to cell-specific neurodegeneration in SCA7》中公开了lnc-SCA7(ATXN7L3B)在人和成年小鼠的中枢神经系统中是高度保守的，并且对脊髓小脑性共济失调7型(SCA7)的致病基因ATXN7起转录后调节作用。在源自小鼠成神经细胞瘤的N2a细胞中敲除lnc-sca7(ATXN7L3B)后，ATXN7的转录水平显着降低，导致ATXN7蛋白显着降低。当过表达lnc-sca7(ATXN7L3B)时，ATXN7的转录水平显着增强。

Sunwoo JS,Lee St等在《Altered Expression of the Long Noncoding RNANEAT1 in Huntington's Disease》中表明，lncRNA TUNA在丘脑和纹状体中表达最高，并且通过检测44名HD患者和36名健康个体的大脑中的基因表达，证实尾状核中的TUNA可能参与病理生理学亨廷顿氏病。此外，NEAT1作为lncRNA也被证明与亨廷顿病(HD)的损伤机制有关。

尽管SCA3/MJD的发病机制存在多种假说，但是目前尚没有一种精确有效的治疗方法来监测疾病进展，延迟或治疗疾病。由于长链非编码RNA(lncRNA)已被证实参与SCA7和HD的发病机制，我们推测lncRNA也可能参与SCA3/MJD的发病机制，因此，需要提供一种适用于筛选出SCA3/MJD生物标志物lncRNAs的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种操作简单，筛选效率高、高准确率的基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法，包括以下步骤：

1)准备含脊髓小脑性共济失调3型(SCA3/MJD)的抗凝血和不含脊髓小脑性共济失调3型(SCA3/MJD)的抗凝血各5～10ml，离心分离得到的血清再次分离得到外周血单个核细胞，低温(-80℃)冷冻备用；

2)提取步骤1)外周血单个核细胞中含lncRNA的总RNAs；

3)对步骤2)的总RNAs样本进行高通量测序和生物信息学分析，挑选出组间差异表达的lncRNAs；

4)对步骤3)筛选得到的lncRNAs，进行qRT-PCR(定量实时PCR)验证，并对其进行Wilcoxon秩和检验，筛选得到SCA3/MJD生物标志物lncRNAsLNCRNAS。

上述基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法，在上述步骤3)和4)之间，还包括：

目标基因预测：由于顺式机制表明lncRNA的功能与其基因座相邻的蛋白质编码基因有关，我们筛选了相邻的mRNA作为其靶基因。由于反式机制不依赖于位置，我们通过计算结合能来预测。

通过计算lncRNA和mRNA的Spearman相关系数、Pearson相关系数，当Spearman相关系数≥0.6且Pearson相关系数≥0.6时，才将该mRNA确定为靶基因。

基因功能注释：对mRNA进行GO、KEGG注释以及NT、NR、KOG、SwissProt、或InterPro注释中的一种或多种注释，即通过Blast和/或Diamond对mRNA进行NT、NR、KOG、KEGG以及SwissProt注释，使用Blast2GO以及NR注释结果进行GO注释，使用InterProScan5进行InterPro注释。

进一步，其中，高通量测序和生物信息学分析的具体操作包括：

a)采用Illumina Hiseq X-Ten对RNA样本进行高通量测序；

b)使用三个预测软件CPC、txCdsPredict和CNCI来评分转录物的编码能力，通过不同的得分范围以区分mRNA和lncRNA；

c)将转录本与蛋白质数据库Pfam进行比对，如果转录本在蛋白质数据库Pfam上，则判断该转录本为mRNA，否则，判断该转录本为lncRNA；

d)将步骤b)和c)的判断结果综合，当CPC，txCdsPredict、CNCI和蛋白质数据库Pfam比对结果中至少三种方式判断转录物是lncRNA时，则认为该转录物为lncRNA。

进一步，步骤4)中的定量实时PCR(qRT-PCR)验证的具体操作为：

a)使用GoldenstarTM RT6 cDNA合成试剂盒进行逆转录；

b)通过Primer 5设计引物；

c)采用2×T5 Fast qPCR Mix(SYBR Green I)试剂盒进行qRT-PCR；

使用GAPDH作为标准化内参，并采用2-ΔΔCt方法定量表达lncRNA。

进一步，上述基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法，其中，所述生物标志物lncRNAs包括NONHSAT165686.1、LTCONS_00051791、LTCONS_00175021、LTCONS_00175040、NONHSAT022144.2和LTCONS_00176188。

进一步，所述LTCONS_00051791、LTCONS_00175021、LTCONS_00175040和LTCONS_00176188分别位于人体染色体的chr13:31723572-31736525、chr6:1153053-1207092、chr6:2839545-2842233和chr7:20256990-20261324，且上述lncRNAs均未被报道，发明人首次发现并公开报道。

本发明一种基于lncRNA的SCA3/MJD的生物标志物的筛选和鉴定方法的有益效果：

通过高通量测序检测，含SCA3/MJD的抗凝血的PNMCs中含总共124,394个转录本，其中包含15,926个新的lncRNA，13,651个新的mRNA，61,335个已知的lncRNA和33,482个已知的mRNA。

通过软件DEGseq数据过滤和分析DEGs后，我们发现了5,540个已知的lncRNA和2,759个新的lncRNA。此外，还有4701个已知的mRNA和2517个新的mRNA。

我们发现3812个上调的已知lncRNAs和2300个上调的新型lncRNAs。相反，其余的是下调lncRNA。

在已知的lncRNA和新的lncRNA中，通过qRT-PCR、Wilcoxon秩和检验我们证实6个lncRNA在PBMC中具有统计学差异，即NONHSAT165686.1、LTCONS_00051791、LTCONS_00175021、LTCONS_00175040、NONHSAT022144.2和LTCONS_00176188在含SCA3/MJD的血液中显著表达，其中，表达上调的lncRNA为NONHSAT165686.1、LTCONS_00051791、LTCONS_00175021和LTCONS_00175040，相较对照组它们分别上调5.6、4.8、2.0和2.4倍；表达下调的lncRNA：NONHSAT022144.2和LTCONS_00176188，且SCA3/MJD患者组中NONHSAT022144.2的表达接近对照组的三分之二，SCA3/MJD患者组中LTCONS_00176188的表达接近对照组的四分之一；且NONHSAT022144.2和NONHSAT165686.1表达最为显著；NONHSAT165686.1、LTCONS_00051791、LTCONS_00175021、LTCONS_00175040、NONHSAT022144.2和LTCONS_00176188为SCA3/MJD生物标志物，为研发SCA3/MJD疾病相关诊断试剂盒提供依据。

新发现的LTCONS_00051791、LTCONS_00175021、LTCONS_00175040和LTCONS_001761884个lncRNAs，有助于扩充和完善lncRNA的表达谱。

附图说明

图1—为GO分析差异表达基因DEGs(前20个)的富集结果图；

图2—为GO分析差异表达基因DEGs的靶基因(前20个)的富集结果图；

图3—为KEGG分析差异表达基因DEGs在不同通路中的富集结果图；

图4—为KEGG分析差异表达基因DEGs的靶基因在不同通路中的富集结果图；

图5—差异表达基因lncRNAs在SCA3/MJD病例和健康对照者中的表达水平对比分析图。

图6—差异表达基因lncRNAs在SCA3/MJD病例和健康对照者的小脑组织中的表达水平对比分析图。

具体实施方式

以下结合附图及实施例对本发明作进一步说明。

参照图1：

1)准备含脊髓小脑性共济失调3型(SCA3/MJD)的抗凝血(病例样本)和不含脊髓小脑性共济失调3型(SCA3/MJD)的抗凝血(对照样本)各5～10ml，离心分离得到的血清再次分离得到外周血单个核细胞(PBMCs)，低温(-80℃)冷冻备用；

a)将10ml抗凝血吸入50ml离心管中，500g离心力离心10分钟，使血清与下层细胞分层；

b)加入1:1等体积的PBS稀释；

c)小心缓慢加入15ml淋巴细胞分离液，切勿混匀；

d)500g离心30分钟，慢速升降，液体分为四层；

e)将血清层下透明的云雾层(第二层)吸出至15ml离心管，加入适量PBS洗涤；

f)500g离心5分钟，去除上清；

g)加入PBS溶解细胞沉淀，吸至新EP管；

h)500g离心5分钟，去除上清；

i)重复步骤g.h；

j)加入700ulQrizol裂解液裂解细胞，冻至负80度冰箱备用；

2)使用RNeasy试剂盒(Qiagen，Hilden，Germany)提取步骤1)外周血单个核细胞中含lncRNA的总RNAs，具体操作参见RNeasy试剂盒的使用说明书；

3)对步骤2)的总RNAs样本进行高通量测序和生物信息学分析，挑选出组间差异表达的lncRNAs：

a)采用Illumina Hiseq X-Ten对RNA样本进行高通量测序；

b)使用三个预测软件CPC、txCdsPredict和CNCI来评分转录物的编码能力，通过不同的得分范围以区分mRNA和lncRNA；

c)将转录本与蛋白质数据库Pfam进行比对，如果转录本在蛋白质数据库Pfam上，则判断该转录本为mRNA，否则，判断该转录本为lncRNA；

d)将步骤b)和c)的判断结果综合，当CPC，txCdsPredict、CNCI和蛋白质数据库Pfam比对结果中至少三种方式判断转录物是lncRNA时，则认为该转录物为lncRNA；

高通量测序初步检测到总共124,394个转录本，其中包含15,926个新的lncRNA，13,651个新的mRNA，61,335个已知的lncRNA和33,482个已知的mRNA。通过软件DEGseq数据过滤和分析DEGs后，我们发现了5,540个已知的lncRNA和2,759个新的lncRNA。此外，还有4701个已知的mRNA和2517个新的mRNA。

4)目标基因预测：

由于顺式机制(cis调控，指非编码RNA对临近mRNA的一种转录激活与表达调控方式)表明lncRNA的功能与其基因座相邻的蛋白质编码基因有关，我们筛选了相邻的mRNA作为其靶基因。由于反式机制不依赖于位置，我们通过计算结合能来预测。

通过计算lncRNA和mRNA的Spearman相关系数、Pearson相关系数，当Spearman相关系数≥0.6且Pearson相关系数≥0.6时，才将该mRNA确定为靶基因，对已筛选出来的5,540个已知的lncRNA和2,759个新的lncRNA进行分析，发现了3443个靶基因。

通过分析lncRNA与靶基因的重叠部分，将mRNA与lncRNA的重叠关系进行细分，具体mRNA与lncRNA的重叠关系分类及各种类的数量如表2所示。

表2.mRNA与lncRNA的重叠关系分类

Lnc-Overlap-mRNA：表示与mRNA在同一链上的lncRNA，lncRNA与mRNA重叠；

Lnc-AntiOverlap-mRNA：lncRNA和mRNA在不同的链上，且lncRNA和mRNA之间存在重叠；

Lnc-CompleteIn-mRNAExon：lncRNA和mRNA在同一条链上，且lncRNA完全落入mRNA的外显子区域；

Lnc-AntiCompleteIn-mRNAExon：lncRNA和mRNA在不同的链上，且lncRNA完全落入mRNA的外显子区域；

mRNA-CompleteIn-LncExon：意味着lncRNA和mRNA在同一条链上，且mRNA完全落入lncRNA的外显子区域；

mRNA-AntiCompleteIn-LncExon：意味着lncRNA和mRNA在不同的链上，且mRNA完全落入lncRNA的外显子区域；

Lnc-CompleteIn-mRNAIntron：意味着lncRNA和mRNA在同一条链上，且lncRNA完全落入mRNA的内含子区域；

Lnc-AntiCompleteIn-mRNAIntron：意味着lncRNA和mRNA在不同的链上，且lncRNA完全落入mRNA的内含子区域；

mRNA-CompleteIn-LncIntron：意味着lncRNA和mRNA在同一条链上，且mRNA完全落入lncRNA的内含子区域；

mRNA-AntiCompleteIn-LncIntron：意味着lncRNA和mRNA在不同的链上，且mRNA完全落入lncRNA的内含子区域。

5)基因功能注释：通过Blast和/或Diamond对mRNA进行NT、NR、KOG、KEGG以及SwissProt注释，使用Blast2GO以及NR注释结果进行GO注释，使用InterProScan5进行InterPro注释。

图1示出了GO富集分析得出的前20个差异表达基因(DEG)，包括Intracellular(GO:0005622),Intracellular part(GO:0044424),Regulation of response tostimulus(GO:0048583),Regulation of intracellular signal transduction(GO:1902531),Intracellular organelle part(GO:0044446),Organelle part(GO:0044422),Nuclear part(GO:0044428),Nucleoplasm(GO:0005654),Binding(GO:0005488),Cell(GO:0005623),Membrane-enclosed lumen(GO:0031974),Organelle lumen(GO:0043233),Cytoplasm(GO:0005737),Cell part(GO:0044464),Intracellular organelle lumen(GO:0070013),Intracellular membrane-bounded organelle(GO:0043231),Regulation ofprogrammed cell death(GO:0043067),Positive regulation of biological process(GO:0048518),Nucleus(GO:0005634),Regulation of signal transduction(GO:0009966),他们主要分布在细胞各个部分。

同时，我们对差异表达基因的靶基因进行GO分析，富集得出的差异表达基因的靶基因前20个,包括CCR chemokine receptor binding(GO:0048020),chemokine receptorbinding(GO:0042379),response to external biotic stimulus(GO:0043207),responseto other organism(GO:0051707),chemokine activity(GO:0008009),response tobiotic stimulus(GO:0009607),protein refolding(GO:0042026),positive regulationof response to external stimulus(GO:0032103),CCR5chemokine receptor binding(GO:0031730),response to stress(GO:0006950),CCR1chemokine receptor binding(GO:0031726),regulation of fever generation(GO:0031620),positive regulationof fever generation(GO:0031622),positive regulation of heat generation(GO:0031652),positive regulation of natural killer cell chemotaxis(GO:2000503),response to external stimulus(GO:0009605),regulation of heat generation(GO:0031650),regulation of lymphocyte chemotaxis(GO:1901623),regulation ofnatural killer cell chemotaxis(GO:2000501),cytokine receptor binding(GO:0005126)，如图2所示。KEGG分析表明差异表达基因DEGs及其靶基因在不同通路中富集的情况，具体如图3和图4所示。

4)将步骤3)筛选得到的lncRNAs，进行qRT-PCR(定量实时PCR)验证，并对其进行Wilcoxon秩和检验，筛选得到SCA3/MJD生物标志物LNCRNAS：

从步骤3)筛选得到的lncRNAs中，进一步选择病例样本和对照样本的差异表达基因的差异表达倍数>5的lncRNAs做qRT-PCR验证试验，差异表达基因的差异表达倍数>5的lncRNAs包括20个与SCA/MJD3相关的lncRNAs。具体名称及位置参见表2。

a)使用Goldenstar^TMRT6 cDNA合成试剂盒对筛选的lnrRNAs进行逆转录：

将RNA模板和试剂盒中的各种组分置于冰上融解备用。

在无核酸酶的微量离心管中按下表格配置反转录反应体系(20μl)，用枪头轻轻混匀，短暂离心；

*如果用基因特异性引物，使用量为2pmol；

**RNA模板建议使用f为：总RNA,10ng～5μg；mRNA,0.5ng～0.5μg。

如果用Goldenstar^TMOligo(dT)17或基因特异性引物50℃孵育30～50min

如果用Goldenstar'"'Randomer，25℃孵育10min，50℃孵育30～50min

或15min(产物用于做Real-time Quantification PCR)。

85℃孵育5min置于冰上或冷藏备用；

b)通过Primer 5设计引物，引物信息如表2所示；

表2.lncRNAs的位置、失调类型以及引物设计

Novel lncRNAs:using the‘LTCONS’；known lncRNAs:using the‘NONHSAT’

F:represents forward primer；R:represents reverse primer；

Location information based on database hg19(raw data from high-throughput sequencing)

c)采用2×T5 Fast qPCR Mix(SYBR Green I)试剂盒进行Quantitative Real-time PCR，使用GAPDH作为标准化内参，并采用2^-ΔΔCt方法定量表达lncRNA。

将所有cDNA样品分别配置Realtime PCR反应体系：2×T5 Fast qPCR Mix 10μl、10uM的PCR特异引物F 0.8μl、10uM的PCR特异引物R 0.8μl、模板DNA(<100ng)，加双蒸水至总体积为20μl；

将18ul混合液加到384-PCR板对应的每个孔中，再加入对应的2μl cDNA；将上述置于quant sutdio 5 384 qPCR仪上进行PCR反应，采用GAPDH做内参，GAPDH及所有的指标均按以下程序进行：95℃，3min；40个PCR循环(95℃，60秒；60℃，10～15秒；95℃，10秒；(60℃采集荧光信号))；采用2^-ΔΔCt法进行数据分析。

通过Wilcoxon秩和检验组间差异表达基因是否存在统计学差异，当P值<0.05，被认为具有统计学意义，其中，6个lncRNAs具有统计学意义，包括已知的NONHSAT165686.1、NONHSAT022144.2和新发现的LTCONS_00051791、LTCONS_00175021、LTCONS_00175040、和LTCONS_00176188共6个lncRNAs。

病例样本和对照样本的外周血单个核细胞内的差异表达基因lncRNAs的表达水平对比结果如图5所示，其中，NONHSAT165686.1、LTCONS_00051791、LTCONS_00175021和LTCONS_00175040共4个lncRNAs为表达水平上调，lncRNA NONHSAT022144.2和lncRNALTCONS_00176188的表达水平下调，且与对照样本相比，病例样本中的NONHSAT165686.1的表达水平约为5.6倍(p＝0.036)，LTCONS_00051791的表达是约4.8倍(p＝0.018)，且LTCONS_00175021和LTCONS_00175040都是两倍以上(p＝0.027的LTCONS_00175021和p＝0.032的LTCONS_00175040)；与此相反，病例样本中，已知的lncRNANONHSAT022144.2和新的lncRNA LTCONS_00176188的表达水平分别为对照组的0.259倍(p＝0.000)和0.640倍(p＝0.043)。

病例样本和对照样本的小脑中上述差异表达基因的表达水平对比结果如图6所示，其中，表达下调的差异表达基因在SCA3/MJD患者的小脑组织中LTCONS_00176188和NONHSAT022144.2的表达水平相对于对照组(健康个体)降低了约四分之一；在SCA3/MJD患者的小脑组织中，表达上调的差异表达基因LTCONS_00051791的表达水平高达对照组(健康个体)的1.5倍，NONHSAT165686.1的表达水平仅比对照组高5％，而SCA3/MJD患者的小脑组织中LTCONS_00175040的表达仅为对照组的5％；LTCONS_00175021的表达水平在小脑中降低了约三分之一。

NONHSAT022144.2，在NONCODE数据库(https://www.bioinfo.org/NONCODE2016/)显示它位于chr11：65499058-65506444，在心脏中最高表达(FPKM＝202.808)，其次是大脑(FPKM＝152.041)，这可能表明NONHSAT022144.2参与了神经系统的调节。

NONHSAT022144.2通过UCSC基因组浏览器的搜索(http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgTracks？db＝hg38&lastVirtMode Type＝default&lastVirtModeExtraState＝&virtModeType＝default&virtMode＝0&nonVirtPosition＝&position＝chr11％3A65499058％2D65506444&hgsid＝676890129_Aq5cHx7Rh4F0aQA3W9anN1Ww5rP0)，显示该lncRNA的位置与MALAT1基因的位置重叠，可能是MALAT1基因的转录物，NCBI数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/378938)显示该基因产生的成熟转录本的稳定性不是由poly(A)保持的，而是由于3'三螺旋结构来保持稳定，且该lncRNA可能与癌症转移，细胞迁移和参与细胞周期调节有关。MALAT1基因也被称为NEAT2，nuclear paraspeckleassembly transcript 2，同一家族的基因NEAT1已被证实能够抵抗神经元损伤，有助于亨廷顿病例者的神经保护，并可用作潜在的治疗方法。由于亨廷顿氏病和SCA3/MJD的发病机制非常相似，并且都是PolyQ疾病之一，这说明NONHSAT022144.2可能是SCA3/MJD的潜在治疗分子。

在NONCODE数据库中显示，NONHSAT165686.1的位置位于Chr13：48233221-48261860(http://www.noncode.org/show_rna.phpid＝NONHSAT165686&version＝1&utd＝1#)，通过UCSC基因组浏览器的搜索发现，它与ITM2B基因重叠并占据了该基因大部分的区域，众所周知，ITM2B基因突变可导致两种常染色体显性遗传的神经退行性疾病，家族性英国痴呆(FBD)和家族性丹麦痴呆(FDD)。FBD的特征是进行性痴呆，小脑性共济失调和痉挛，其部分临床特点类似于SCA3/MJD。巧合的是，FDD也有进行性共济失调等症状。

结合图6中示出的病例样本和对照样本的小脑中上述差异表达基因的表达水平对比，可以得出NONHSAT165686.1、LTCONS_00051791、LTCONS_00175021、LTCONS_00175040、NONHSAT022144.2和LTCONS_00176188共6个lncRNAs是SCA3/MJD的生物标志物。