靶向组合治疗
阅读说明：本技术 靶向组合治疗 (Targeted combination therapy ) 是由 伊丽莎白·德洛斯皮诺斯 约翰·托德·席勒 罗达·C·基尼斯 于 2018-04-11 设计创作，主要内容包括：本公开内容的一些实施方案涉及使用免疫治疗剂和肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的组合来治疗肿瘤的方法和组合物,所述肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的抗癌分子。(Some embodiments of the present disclosure relate to methods and compositions for treating tumors using a combination of immunotherapeutic agents and tumor-targeting viral capsid protein assemblies comprising an anti-cancer molecule conjugated to a viral capsid protein.)
相关申请
本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求于2017年4月12日提交的美国临时申请号62/484,693的权益，其通过引用整体并入本文。
背景技术
尽管有许多治疗可用于癌症，但是许多形式的癌症仍然不能治愈、无法治疗或对标准治疗产生抵抗力。由于抗癌药在正常/健康细胞中引起的细胞毒性，传统的癌症治疗方法经常伴有严重的副作用。
本公开内容提供了用于在同时将肿瘤抗原呈递给免疫系统并协同产生抗肿瘤免疫的同时，选择性地靶向并杀伤肿瘤细胞的方法和组合物，从而提供了用于治疗和预防癌症的组合治疗。预料不到的是，实验数据显示，在激光活化之后变成细胞毒性的肿瘤靶向性光敏分子触发了肿瘤抗原特异性免疫应答。为了增强针对癌细胞的这种免疫应答，可将免疫检查点抑制剂与肿瘤靶向性光敏分子同时(或依次)施用。
因此，在一些实施方案中，本文中提供的方法包括：(a)向患有肿瘤的对象施用包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体(assemblage)的组合物，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与该装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子；和(b)向患有肿瘤的对象施用包含免疫检查点抑制剂的组合物。
在一些实施方案中，向正在接受用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体进行治疗的患有肿瘤的对象施用免疫检查点抑制剂，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与所述装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。
本文中还提供了包含免疫检查点抑制剂和肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的组合物，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与该装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。
以上概述意指以非限制性方式举例说明本文中公开的技术的一些实施方案、优点、特征和用途。根据详细描述、附图、实施例和权利要求，本文中公开的技术的其他实施方案、优点、特征和用途将是明显的。
附图说明
图1是描述本公开内容的VLP缀合物的作用机理的示意图，其包括具有光敏分子(
图2是显示TC-1模型中小鼠的存活曲线的图。在形成约50mm3的肿瘤之后(第0天)，给小鼠注射VLP缀合物或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，并且然后在12和24小时之后用光进行处理。在第3天重复该方案。
图3是显示TC-1模型中小鼠的存活曲线的图。在形成约100至300mm3的肿瘤之后(第0天)，给小鼠注射VLP缀合物或PBS，并且然后在12小时之后用光进行处理。在第3天重复该方案。在第0和17天抽血以测量肿瘤特异性T细胞应答。
图4显示在第17天在实验小鼠的血液中检测到的肿瘤抗原特异性CD8+T细胞。显示了肿瘤体积、HPV16 E7四聚体+CD8+设门和HPV16 E7肽再刺激-IFN-γ、CD8+设门。
图5举例说明单独的光治疗不会导致肿瘤抗原特异性CD8+T细胞。显示了肿瘤体积、HPV16 E7四聚体+CD8+设门、和HPV16 E7肽再刺激-IFN-γ、CD8+设门。
图6是举例说明用NIR活化的肿瘤靶向性药物缀合物和检查点抑制剂的组合以防止肿瘤生长和复发的示意图。
图7是实施例4中进行的实验的示意图。
发明详述
为了向肿瘤特异性递送癌症/肿瘤治疗药物，可将某些病毒衣壳蛋白装配和/或化学修饰以携带治疗分子，而不会失去其肿瘤靶向性能力或结构稳定性。这些“病毒衣壳蛋白装配体”可例如通过结合至肿瘤细胞表面上的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)而选择性地结合至肿瘤细胞表面，并进入肿瘤细胞，其中治疗分子(例如，光敏分子)可产生靶向的细胞毒效应和/或抗肿瘤免疫，从而导致肿瘤细胞死亡和预防肿瘤复发。例如在2014年9月18日提交的PCT申请公开WO2015042325中描述了这样的病毒样颗粒和装配体在治疗癌症中的用途，其全部内容通过引用并入本文。
本公开内容的一些方面至少部分是基于这样的意想不到的结果，该结果表明经由肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体递送至肿瘤细胞的光敏分子产生抗肿瘤免疫。经历促免疫原性细胞死亡的肿瘤细胞释放免疫原性因子，从而刺激抗原呈递细胞(antigenpresenting cell，APC)吸收肿瘤抗原，对其进行加工，并诱导针对肿瘤的肿瘤抗原特异性T细胞免疫应答。这样的肿瘤抗原特异性T细胞应答，与治疗的坏死效应组合，显示出在不影响正常细胞的情况下选择性和有效破坏肿瘤细胞，产生抗肿瘤免疫和预防肿瘤复发的巨大潜力。
肿瘤细胞经常利用免疫系统采取的机制来防止自我攻击。已经开发了癌症免疫治疗剂以减少或消除肿瘤细胞逃避被免疫系统攻击的能力。例如在美国专利申请公开US20160024469、US20130202645、US20100189641、美国专利US5478556、US5290551和US5126129中已经描述了这样的免疫治疗剂用于治疗癌症的用途，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，免疫治疗剂是免疫检查点抑制剂。因此，本公开内容涵盖用于组合治疗癌症/肿瘤的组合物和方法，其利用通过靶向和活化肿瘤细胞中的细胞毒性光敏分子并同时或依次施用免疫检查点抑制剂(或其他免疫治疗剂)而产生的预料不到的协同作用。当与传统的化学治疗方法和肿瘤免疫治疗策略相比，这样的组合物和方法在控制肿瘤生长、诱导抗肿瘤免疫和预防肿瘤复发方面更有效。
因此，本公开内容的一些方面提供了包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的组合物，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与该装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。
“病毒衣壳蛋白装配体”是由病毒衣壳蛋白形成的任何颗粒或团聚体。病毒衣壳蛋白装配体的实例包括但不限于：壳粒(capsid)和病毒样纳米颗粒，以及其他病毒假病毒和病毒纳米颗粒。病毒衣壳蛋白装配体被认为是“肿瘤靶向性”，因为其结合肿瘤(例如，癌性的)细胞而不结合非肿瘤(例如，非癌性的，其他正常的、健康的)细胞。在一些实施方案中，肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是具有72个壳粒结构(例如，包含L1或L1/L2病毒衣壳蛋白)的病毒样颗粒(VLP)。
在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体是人***瘤病毒病毒(humanpapillomavirus viral，HPV)衣壳蛋白装配体(例如，来自16型、31型或包含来自16型氨基酸和来自31型氨基酸的修饰型)。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体是非人***瘤病毒病毒(HPV)衣壳蛋白装配体。非人***瘤病毒病毒衣壳蛋白装配体的实例包括但不限于牛***瘤病毒、棉兔***瘤病毒、猕猴***瘤病毒和鼠***瘤病毒。
病毒衣壳蛋白装配体包含病毒衣壳蛋白。“衣壳蛋白”是蛋白质单体。衣壳蛋白可装配在一起以形成壳粒(例如衣壳蛋白的五聚体)。“壳粒”是病毒衣壳的亚单位，其是保护病毒(例如人***瘤病毒(HPV))的遗传物质的蛋白质的外壳。然而，应当理解，在本公开内容的上下文中，壳粒可独立于衣壳用作递送载体(肿瘤靶向性递送载体)。本公开内容的衣壳蛋白包括***瘤病毒L1衣壳蛋白、***瘤病毒L2衣壳蛋白及其变体(例如，具有降低或修饰的诱导感染抑制抗体的能力的变体)。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体仅包含L1衣壳蛋白，而在其他一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体包含L1和L2衣壳蛋白的组合。本文中使用的“外部衣壳蛋白”是指暴露在VLP表面上的衣壳蛋白。
本文中使用的病毒样颗粒或VLP是指有组织的衣壳样结构(例如，大致球形或圆柱形)，其包含L1或L1和L2的自装配有序阵列、壳粒，并且不包含病毒基因组。在一些实施方案中，病毒样颗粒在形态学和抗原性上类似于真实的病毒粒子，但是其缺乏病毒遗传物质(例如病毒核酸)，从而使颗粒无感染性。
在一些实施方案中，可修饰肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体，以降低针对颗粒本身的免疫原性，即，降低诱导针对该装配体的中和抗体。病毒衣壳蛋白装配体可例如由含有具备经修饰免疫原性的衣壳蛋白变体的壳粒装配。具有“修饰的免疫原性”的衣壳蛋白变体是在氨基酸上天然或合成地修饰(例如，突变、取代、缺失、聚乙二醇化或***)以减少或阻止预先存在(例如，内源性)的病毒血清型特异性抗体对衣壳蛋白的识别的衣壳蛋白变体。衣壳蛋白变体可以是人***瘤病毒(HPV)L1变体、非人***瘤病毒L1变体或基于来自不同HPV血清型的氨基酸的组合的***瘤病毒L1变体。例如，具有修饰的免疫原性的L1变体可以是在2009年7月24日提交的国际公开No.WO2010120266中描述的重组蛋白，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体包含具有修饰的免疫原性的L1变体(HPV16/31L1衣壳蛋白变体)。
本公开内容的肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体可特异性地靶向癌细胞，并且这样的特异性至少部分地通过病毒衣壳蛋白装配体中的L1蛋白与肿瘤细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)结合来介导。这种过程类似于病毒附着并感染其宿主细胞的过程。肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体不结合或假靶向(pseudo-target)完整的上皮细胞，并且因此是在不影响健康或正常细胞的情况下将抗癌药特异性递送至肿瘤的极佳工具。
本公开内容的肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含与具有抗癌活性的分子(本文中被称为“抗癌分子”)缀合的衣壳蛋白。这样的抗癌分子能够在肿瘤细胞上产生靶向的细胞毒效应和/或在某些情况下可诱导针对肿瘤细胞的免疫。本公开内容的分子的非限制性实例包括：硼替佐米、伊马替尼、塞利西利、阿法替尼(Gilotrif)、阿来替尼(Alecensa)、阿西替尼(Inlyta)、贝利司他(Beleodaq)、硼替佐米(Velcade)、博舒替尼(Bosulif)、卡博替尼(Cabozantinib)(Cometriq)、卡非佐米(Kyprolis)、色瑞替尼(Zykadia)、考比替尼(Cobimetinib)(Cotellic)、克唑替尼(Xalkori)、达拉非尼(Tafinlar)、达沙替尼(Sprycel)、厄洛替尼(Tarceva)、依维莫司(Afinitor)、吉非替尼(Iressa)、依鲁替尼(Imbruvica)、艾代拉利司(Zydelig)、伊马替尼(Gleevec)、艾沙佐米(Ninlaro)、拉帕替尼(Tykerb)、乐伐替尼(Lenvima)、尼洛替尼(Tasigna)、奥拉帕利(Olaparib)(Lynparza)、奥希替尼(Osimertinib)(Tagrisso)、帕博西尼(Palbociclib)(Ibrance)、帕比司他(Panobinostat)(Farydak)、帕唑帕尼(Votrient)、普纳替尼(Ponatinib)(Iclusig)、瑞戈非尼(Stivarga)、鲁索替尼(Jakafi)、Sipuleucel-T(Provenge)、索尼德吉(Sonidegib)(Odomzo)、索拉非尼(Nexavar)、西司他莫司(Torisel)、托法替尼(Tofacitinib)(Xeljanz)、曲美替尼(Mekinist)、凡德他尼(Caprelsa)、维莫非尼(Zelboraf)、维莫德吉(Erivedge)、和伏立诺他(Zolinza)。根据本公开内容，可使用本领域已知的任何抗癌分子。
在一些实施方案中，抗癌分子是光敏分子或光敏剂。“光敏分子”或“光敏剂”是可在吸收光时被激发成激发态的化合物。这种种类迅速攻击其遇到的任何有机化合物，因此具有高度细胞毒性。在一些实施方案中，活化的光敏分子在光激发时重新发射光(例如，荧光团)。在一些实施方案中，在光激发时，活化的光敏分子可变得有毒性，或可产生毒性分子。例如，一类光敏分子可在吸收光时被激发到激发态，并与氧发生系统间交叉以产生单线态氧。
预料不到地，肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子，其一旦被NIR光活化，则不仅诱导肿瘤坏死，而且诱导肿瘤的促免疫原性细胞死亡并激活针对肿瘤的持久的肿瘤抗原特异性T-细胞应答。这样，免疫系统被激活以攻击肿瘤，从而增强了局部(区域)和远距离治疗效力。预料不到的是，这种作用机制不仅减小了现有肿瘤的尺寸，即抑制了肿瘤的生长，而且还防止了小鼠经攻击之后形成新的肿瘤，即防止肿瘤复发。
根据本公开内容使用的光敏分子的实例包括但不限于荧光染料、红外染料、近红外染料、卟啉分子和叶绿素分子。
根据本公开内容使用的荧光染料的实例包括但不限于：吖啶橙(acridineorange)、吖啶黄(acridine yellow)、Alexa Fluor、7-氨基放线菌素D、8-苯胺萘A-1-磺酸、ATTO染料、金胺-罗丹明染色(auramine-rhodamine stain)、苯并蒽酮(benzanthrone)、bimane、9,10-双(苯基乙炔基)蒽、5,12-双(苯基乙炔基)并四苯、双苯甲亚胺、黑光漆、钙黄绿素(calcein)、羧基荧光素、羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯、羧基荧光素琥珀酰亚胺酯、1-氯-9,10-双(苯基乙炔基)蒽、2-氯-9,10-双(苯基乙炔基)蒽、2-氯-9,10-双苯基蒽、香豆素、DAPI、暗猝灭剂、DiOC6、DyLightFluor、Fluo-3、Fluo-4、FluoProbes、荧光素、异硫氰酸荧光素、荧光图像引导手术、fluoro-jade染色、fura-2、fura-2-乙酰氧基甲基酯、GelGreen、GelRed、绿色荧光蛋白、七甲川(heptamethine)染料、印度黄、Indo-1、萤虫黄、萤光素、MCherry、部花青(Merocyanine)、尼罗蓝、尼罗红、荧光增白剂、苝、焰红染料、藻胆素、藻红蛋白、藻红胆素、碘化丙碇、荧光黄染料(pyranine)、罗丹明、罗丹明123、罗丹明6G、RiboGreen、RoGFP、玫瑰红、红荧烯(rubrene)、(E)-二苯乙烯、(Z)-二苯乙烯、磺酰罗丹明101、磺酰罗丹明B、SYBR Green I、synapto-pHluorin、四苯基丁二烯、三(红菲绕啉二磺酸盐)钌(II)四钠(tetrasodiumtris(bathophenanthroline disulfonate)ruthenium(II))、德克萨斯红、达旦黄、TSQ、伞形花内酯、黄色荧光蛋白和YOYO-1。
根据本公开内容使用的光敏性染料的实例包括但不限于：HpD、卟吩姆钠(Porfimer sodium)(
根据本公开内容使用的光敏性分子的实例包括可用于荧光成像(例如，近红外(NIR)荧光染料)的那些光敏性分子，例如卟啉、叶绿素、二氢卟吩、酞菁、菌绿素、德卟啉、(卟吩姆钠)、
根据本公开内容的多个方面，可将抗癌分子(例如
***瘤病毒的L1蛋白包含大量可用于化学缀合的赖氨酸。因此，大量的光敏分子(或其他抗癌分子)可与本公开内容的一种肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体缀合，即抗癌分子与病毒衣壳蛋白装配体的比例可变化。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体:光敏分子的比例为约1:10至约1:1000、或约1:50至约1:1000。就是说，在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体可包含约10至约1000个光敏分子。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体:光敏分子的比例为1:10、1:15、1:20、1:25、1:50、1:75、1:100、1:150、1:200、1:250、1:500、1:750或1:1000。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体可包含10、15、20、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000个光敏分子。例如，病毒衣壳蛋白装配体可包含10至1000、10至500、100至1000、200至1000、300至1000、400至1000、500至1000、100至500、200至500、300至500、400至500、100至400、200至400、300至400、100至300或200至300个光敏分子。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体可包含多于1000个光敏分子或少于10个抗癌分子。将光敏分子与病毒衣壳蛋白装配体的L1蛋白缀合不包含该装配体的结构完整性或肿瘤靶向性能力，即其选择性结合肿瘤细胞表面上的HSPG的能力。因此，本公开内容的肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的另一个优点是其即使在非常低的分子浓度下也能将大量治疗剂特异性地递送至肿瘤的能力。
在一些实施方案中，肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。在一些实施方案中，光敏分子是
本公开内容的组合物还包含用于治疗癌症的免疫治疗剂。本文中使用的“免疫治疗剂”是指促进使用免疫系统治疗癌症的试剂。这样的免疫治疗剂通常利用以下事实：癌细胞通常在其表面上具有可被免疫系统检测到的分子。在一些实施方案中，免疫治疗剂主动指导免疫系统附着肿瘤细胞。在一些实施方案中，免疫治疗剂增强现有的抗肿瘤应答，例如单克隆抗体、淋巴细胞和细胞因子。在一些实施方案中，免疫治疗剂调节免疫检查点的活性。
“免疫检查点”是增强免疫应答信号(共刺激分子)或降低免疫应答信号的免疫系统中的蛋白质。许多癌症通过利用抑制性免疫检查点蛋白抑制T细胞信号来保护自己免受免疫系统的侵害。这样的抑制性检查点蛋白包括但不限于：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、程序性死亡1受体(PD-1)、T细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域3(TIM3)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)、包含V组结构域的T细胞活化抑制剂1(VTVN1或B7-H4)、分化簇276(CD276或B7-H3)、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)、半乳凝素9(GAL9)、检查点激酶1(Chk1)、腺苷A2A受体(A2aR)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)和T细胞活化的V结构域Ig组抑基因(VISTA)。
这些免疫检查点蛋白中的一些需要其相应结合配偶体或配体用于其免疫抑制活性。例如，A2AR是腺苷A2A的受体，并且A2A与A2AR的结合活化了负免疫反馈环。作为另一个实例，PD-1与其两个配体PD-L1和PD-L2缔合，通过防止T细胞活化来下调免疫系统。PD-1促进***中抗原特异性T细胞的程序性细胞死亡并且同时减少抑制型T细胞的程序性细胞死亡，从而实现其免疫抑制功能。作为另一个实例，CTLA4存在于T细胞的表面上，并且当与抗原呈递细胞(APC)表面上的其结合配偶体CD80或CD86结合时，其向T细胞传递抑制信号，从而降低免疫应答。
已知癌细胞利用免疫检查点蛋白来逃避免疫系统的攻击。因此，已经描述了使用免疫检查点抑制剂来增强针对癌症的免疫应答，并且因此治疗癌症。本公开内容的组合物中的免疫治疗剂也可以是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制以下中的任一种或更多种：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、程序性死亡1受体(PD-1)、T细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域3(TIM3)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)、包含V组结构域的T细胞活化抑制剂1(VTVN1或B7-H4)、分化簇276(CD276或B7-H3)、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)、半乳凝素9(GAL9)、检查点激酶1(Chk1)、腺苷A2A受体(A2aR)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)和T细胞活化的V结构域Ig组抑基因(VISTA)。
在一些实施方案中，“抑制”意指防止或减弱免疫检查点蛋白与其相应结合配偶体例如PD-1、CTLA-4或A2aR的结合。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗体。在一些实施方案中，抗体包含抗CTLA-4、抗PD-1、抗PD-L1、抗TIM3、抗LAG3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗BTLA、抗GAL9、抗Chk、抗A2aR、抗IDO、抗KIR、抗LAG3、抗VISTA抗体或前述抗体中任意两种或更多种的组合。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是单克隆抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗PD1、抗PD-L1、抗CTLA-4或前述抗体中的任意两种或更多种的组合。例如，抗PD-1抗体是派姆单抗
本文中公开的包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂的组合物适用于治疗癌症。因此，本公开内容还涵盖向患有肿瘤的对象施用这样的组合物以***的方法。将该组合物以有效减少肿瘤生长和/或预防肿瘤复发的量向对象施用。
“施用”及其变化形式意指以药理学有用的方式向对象提供物质。可使用医学领域普通技术人员已知的常规方法将治疗剂或组合物施用于对象，这取决于待治疗的癌症类型或癌症的部位。该组合物还可通过其他常规途径施用，例如经口、肠胃外、通过吸入喷雾、表面、直肠、鼻腔、口腔、***或通过植入的储库施用。本文中使用的术语“肠胃外”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、膀胱内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。另外，其可通过可注射的储库施用途径施用于对象，例如使用1个月、3个月或6个月储库可注射或可生物降解的材料和方法。在一些实施方案中，组合物可全身施用例如静脉内。在一些实施方案中，该组合物是局部施用的。在一些实施方案中，所述组合物通过植入施用。
在一些实施方案中，可将本公开内容的组合物注射到存在肿瘤生长的靶位点。可根据本公开内容使用的注射方法包括但不限于静脉内注射、病灶内注射、皮下注射、玻璃体内注射、脉络膜上腔注射、腹膜内注射、动脉内注射、肝内注射和膀胱内注射。在使用注射剂的情况下，根据注射面积，使用空心针、涂层针、小针或微针。
在一些实施方案中，本公开内容的癌症治疗方法包括向患有肿瘤的对象施用包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的组合物，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子，以及包含免疫治疗剂的组合物。
在一些实施方案中，肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂同时施用。“同时”意指同时向对象施用两种或更多种材料/试剂(例如肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂)。例如，可在施用之前将包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体或免疫治疗剂的组合物组合/混合。
在一些实施方案中，依次施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂。“依次”意指一种药剂的施用和另一种药剂的施用在时间上分开(在两个单独的步骤中)。在一些实施方案中，首先施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体，并且然后施用免疫治疗剂(例如检查点抑制剂)。在一些实施方案中，首先施用免疫治疗剂，并且然后施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体。施用步骤的两个步骤之间的时间可以是至少1分钟、至少5分钟、至少30分钟、至少1小时、至少5小时、至少10小时、至少1天、至少1周、或甚至至少一个月。当依次施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂时，其也可通过不同途径或在不同位置施用。例如，可将肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体病灶内施用于暴露的肿瘤病灶或皮下施用于对象的皮肤，而免疫治疗剂可全身施用，例如静脉内。
在一些实施方案中，本公开内容的癌症治疗方法包括向正在接受用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体进行治疗的患有肿瘤的对象施用免疫治疗剂，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的分子(例如光敏分子)。
根据分子的类型，本公开内容的光敏分子可被红外、近红外或紫外光活化。例如，在一些实施方案中，可使用红外、近红外或紫外激光来活化肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的光敏分子。激光递送的能量可为5焦耳(J)至约150J，或8J至36J。在一些实施方案中，激光递送的能量为5J、6J、7J、8J、9J、10J、12J、14J、16J、18J、20J、22J、24J、26J、28J、30J、32J、34J、36J、38J、40J、50J、60J、70J、80J、90J、100J、110J、120J、130J、140J或150J。
可将光或激光施加至光敏分子(或肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体)约5秒至约5分钟。例如，在一些实施方案中，将光或激光施加至光敏分子经5、10、15、20、25、30、35、40、45、50或55秒以活化分子。在一些实施方案中，将激光施加至光敏分子经1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5分钟。
在施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体之后约30分钟至约48小时，可将光或激光施加至光敏分子(或肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体)。例如，在一些实施方案中，在施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体之后30、35、40、45、50或55分钟将光或激光施加至光敏分子。在一些实施方案中，在施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时将光或激光施加至光敏分子。在一些实施方案中，在施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体之后36或48小时将光或激光施加至光敏分子。
例如，可将光或激光直接施加至肿瘤部位。
根据本公开内容的癌症治疗方法，可对正在接受用与光敏分子缀合的病毒衣壳蛋白装配体治疗的患有肿瘤的对象进一步施用免疫治疗剂，例如免疫检查点抑制剂。本文中所述的任何免疫治疗剂均适合于施用于对象。应当理解，根据待治疗的肿瘤的类型，可施用不同的免疫治疗剂。本领域技术人员能够确定适当的免疫治疗剂。在一些实施方案中，施用免疫检查点抑制剂，例如抗PD-1、抗PD-L1和/或抗CTLA-4抗体。
可使用本公开内容的组合物和方法治疗的肿瘤类型包括但不限于恶化前肿瘤、恶性肿瘤、转移瘤，或以不受控制的细胞生长为特征使得其被认为是癌性或癌前的任何疾病或病症。癌症可以是原发性或转移癌。癌症包括但不限于：眼癌，胆道癌，膀胱癌，胸膜癌，胃癌，卵巢癌，脑膜癌，肾癌，包括胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤的脑癌，乳腺癌，***，绒毛膜癌，结肠癌，子宫内膜癌，食管癌，胃癌，包括急性淋巴细胞和髓性白血病的血液系统肿瘤(hematological neoplasm)，多发性骨髓瘤，AIDS相关白血病和成体T细胞白血病淋巴瘤，包括鲍恩病(Bowen’s disease)和佩吉特病(Paget’s disease)的上皮内肿瘤，肝癌，肺癌，包括霍奇金病(Hodgkin’s disease)和淋巴细胞性淋巴瘤的淋巴瘤，神经母细胞瘤，包括鳞状细胞癌的口腔癌，包括由上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞产生的那些的卵巢癌，胰腺癌，***癌，直肠癌，包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤的肉瘤，包括黑素瘤、卡波西肉瘤、基底细胞癌和鳞状细胞癌的皮肤癌，包括生殖肿瘤(germinal tumor)例如***瘤、非***瘤、畸胎瘤、绒毛膜癌，间质瘤和生殖细胞肿瘤的睾丸癌，包括甲状腺腺癌和髓样癌的甲状腺癌，以及包括腺癌和肾母细胞瘤(Wilm’stumor)的肾癌。常见的癌症包括乳腺癌、***癌、肺癌、卵巢癌、结直肠癌和脑癌。在一些实施方案中，肿瘤是黑素瘤、癌、肉瘤或淋巴瘤。
在一些实施方案中，肿瘤已经转移并且其具有皮肤或表面暴露的肿瘤病灶(例如梅克尔(Merkel)细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、基底细胞癌、乳腺癌和转移性乳腺癌、皮肤T细胞淋巴瘤(塞扎里(Sezary)综合征)和肉瘤)。在一些实施方案中，无需外科干预即可进入肿瘤，例如位于头部、颈部、宫颈、喉、食道或皮肤中的肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是癌性或恶性的。在一些实施方案中，通过外科手术或内窥镜干预可进入肿瘤(使光/激光可进入)。在一些实施方案中，肿瘤是转移性的。在一些实施方案中，肿瘤是原发性肿瘤并且已经转移。在一些实施方案中，转移癌具有皮肤或表面暴露的肿瘤病灶。在一些实施方案中，肿瘤具有可被红外激光治疗的病灶。在一些实施方案中，转移性癌症具有在眼中的肿瘤病灶或转移。在一些实施方案中，肿瘤是眼肿瘤并且已经转移至肝脏。当肿瘤是眼肿瘤或已经转移至眼时，眼肿瘤位于玻璃体、脉络膜上腔、虹膜、睫状体、巩膜、中央凹、视网膜、视盘或视神经中。
在一些实施方案中，患有肿瘤的对象是哺乳动物，例如人。
将本公开内容的组合物和/或治疗剂以有效量向对象施用，以减少或阻止癌症的生长。本文中使用的“有效量”是指每种药剂单独或与一种或更多种其他药剂组合赋予对象治疗效果所需的量。如本领域技术人员所认识到的，有效量根据所治疗的具体病症、病症的严重程度、个体对象参数(包括年龄、身体状况、身材大小、性别和体重、治疗持续时间、同时治疗(如果有的话)的性质、具体的施用途径等健康从业者的知识和专长中的相似因素。这些因素是本领域普通技术人员公知的并且仅用常规实验就可解决。通常优选使用最大剂量的单个组分或其组合，即根据合理的医学判断的最高安全剂量。然而，本领域普通技术人员将理解，对象可出于医学原因、心理原因或实际上任何其他原因坚持较低剂量或可耐受剂量。
例如半衰期的经验性考虑通常将有助于确定剂量。例如，可使用与人免疫系统相容的药剂，例如包含来自人源化抗体或完全人抗体的区域的药剂来延长化合物的半衰期并防止化合物被宿主的免疫系统攻击。施用的频率可以在治疗过程中确定和调整，并且通常但不是必须基于疾病的治疗和/或抑制和/或改善和/或延迟。或者，化合物的持续连续释放制剂可能是合适的。本领域中已知用于实现持续释放的多种制剂和装置。
在一些实施方案中，剂量是每天、每隔一天、每三天、每四天、每五天或每六天一次。在一些实施方案中，给药频率是每周一次、每2周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每9周一次或每10周一次；或每月一次、每2个月一次，或每3个月或更长时间一次。这种治疗的过程容易通过常规技术和测定进行监测。给药方案(包括使用的化合物)可随时间变化。
在一些实施方案中，对于正常体重的成年对象，可施用约0.01至1000mg/kg的剂量。在一些实施方案中，剂量为1至200mg。具体的剂量方案，即剂量、时机和重复，将取决于具体对象和对象的病史，以及药剂的特性(例如药剂的半衰期以及本领域其他公认的因素)。
为了本公开内容的目的，如本文中所述的治疗剂的合适剂量将取决于所用的具体药剂(或其组合物)、制剂和施用途径、疾病的类型和严重程度、所述化合物是用于预防还是治疗目的、先前的治疗、对象的临床病史和对拮抗剂的应答以及主治医师的判定。通常来说，临床医师将施用药剂，直至达到实现期望结果的剂量。一种或更多种药剂的施用可以是连续的或间歇的，这取决于例如受体的生理状况、施用的目的是治疗性的还是预防性的以及技术人员已知的其他因素。药剂的施用可以在预选的时间段内基本上连续，或者可以是一系列间隔剂量，例如在疾病发生之前、期间或之后。
本文中使用的术语“治疗”是指向患有疾病、疾病的症状或对疾病有倾向的对象应用或施用药剂或包含药剂的组合物，其目的是治疗、治愈、缓和、减轻、改变、补救、改善、改进或影响疾病、疾病的症状或对疾病的倾向。
减轻疾病包括延迟疾病的发展或进展，或降低疾病严重程度。减轻疾病并不一定需要治疗结果。本文中使用的“延迟”疾病的发展意味着推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定和/或推迟疾病的进展。这种延迟的时间长度可以有所不同，这取决于疾病史和/或正在接受治疗的个体。“延迟”或减轻疾病的发展或延迟疾病发作的方法是，与不使用该方法相比，在给定时间范围内降低发生一种或更多种疾病的症状的可能性和/或在给定的时间范围内降低症状程度的方法。这样的比较通常基于临床研究，使用足以给出统计学显著结果的许多对象来进行。
疾病的“发展”或“进展”意指疾病的初始表现和/或随后的进展。可以使用本领域熟知的标准临床技术检测和评估疾病的发展。然而，发生也是指可无法检出的进展。出于本公开内容的目的，发生或进展是指症状的生物学过程。“发展”包括发生、复发和发作。本文中使用的疾病的“发作”或“发生”包括初始发作和/或复发。
本公开内容还涵盖以下编号的段落：
1.方法，其包括
(a)向患有肿瘤的对象施用包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的组合物，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与所述装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子；和
(b)向患有肿瘤的对象施用包含免疫检查点抑制剂的组合物。
2.段落1所述的方法，其中病毒衣壳蛋白是人***瘤病毒衣壳蛋白。
3.段落1所述的方法，其中病毒衣壳蛋白是非人***瘤病毒衣壳蛋白。
4.段落3所述的方法，其中非人***瘤病毒衣壳蛋白是牛***瘤病毒衣壳蛋白或棉尾兔***瘤病毒蛋白。
5.段落1至4中任一项所述的方法，其中病毒衣壳蛋白包含***瘤病毒L1衣壳蛋白，或者***瘤病毒L1衣壳蛋白与***瘤病毒L2衣壳蛋白的组合。
6.段落1至5中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是壳粒或病毒样颗粒。
7.段落1至6中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含10至1000个光敏分子，任选地其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含200至500个光敏分子。
8.段落1至7中任一项所述的方法，其中光敏分子包含荧光染料、红外(infrared，IR)染料、近红外(near infrared，NIR)染料、卟啉、叶绿素、二氢卟酚、酞菁、菌绿素、德卟啉、卟吩姆钠、维替泊芬、替莫泊芬、他拉泊芬、亚甲蓝、氨基乙酰丙酸，或其组合。
9.段落1至8中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是病毒样颗粒，其包含72个由变体或经修饰HPV 16/31L1衣壳蛋白和野生型HPV L2衣壳蛋白装配的壳粒，并且其中光敏分子包含IRdye700DX。
10.段落1至9中任一项所述的方法，其中免疫检查点抑制剂抑制CTLA-4、PD-1、PD-L1、TIM3、LAG3、B7-H3、B7-H4、BTLA、GAL9、Chk1或A2aR与相应结合配偶体的结合。
11.段落10所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是抗体。
12.段落11所述的方法，其中抗体是单克隆抗体。
13.段落1至12中任一项所述的方法，其中抗体选自抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM3抗体、抗LAG3抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗BTLA抗体、抗GAL9抗体、抗Chk1抗体、抗A2aR抗体，以及任意两种或更多种前述抗体的组合。
14.段落13所述的方法，其中抗体选自派姆单抗、纳武单抗、伊匹单抗以及两种或更多种前述抗体的任意组合。
15.段落1至14中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫检查点抑制剂是同时施用的。
16.段落1至14中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫检查点抑制剂是依次施用的。
17.段落16所述的方法，其中在向对象施用免疫检查点抑制剂之前，向对象施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体。
18.段落16和17所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体局部施用于肿瘤或肿瘤病灶，并且其中免疫检查点抑制剂是全身施用的。
19.段落1至18中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和/或免疫检查点抑制剂通过注射施用、表面施用或通过植入施用。
20.段落19所述的方法，其中注射是病灶内注射、皮下注射、玻璃体内注射、脉络膜上腔注射、腹膜内注射、动脉内注射、肝内注射、膀胱内注射，或其任意组合。
21.段落1至20中任一项所述的方法，其进一步包括使用红外激光、近红外激光或紫外激光来活化光敏分子。
22.段落1至21中任一项所述的方法，其中肿瘤是癌性的。
23.段落23所述的方法，其中肿瘤是转移性的。
24.段落1至23中任一项所述的方法，其中肿瘤是黑素瘤、癌、肉瘤或淋巴瘤。
25.段落1至24中任一项所述的方法，其中肿瘤具有可用红外激光治疗的病灶。
26.段落25所述的方法，其中肿瘤是梅克尔细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、转移性乳腺癌、皮肤T细胞淋巴瘤或肉瘤。
27.段落1至25中任一项所述的方法，其中肿瘤是原发性肿瘤并且已经转移。
28.段落1至27中任一项所述的方法，其中肿瘤位于以下中和/或已经转移至以下：肝、膀胱、眼、头、颈、宫颈、喉、皮肤、肺、胸膜、胰、胃、食管、结肠、乳腺、卵巢、***、睾丸、脑、脑膜、肾。
29.段落1至27中任一项所述的方法，其中对象是人。
30.方法，其包括向正在接受用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体进行治疗的患有肿瘤的对象施用免疫检查点抑制剂，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与所述装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。
31.组合物，其包含免疫检查点抑制剂和肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与所述装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。
32.段落31所述的组合物，其中病毒衣壳蛋白是人***瘤病毒衣壳蛋白。33.段落31所述的组合物，其中病毒衣壳蛋白是非人***瘤病毒衣壳蛋白。
34.段落33所述的组合物，其中非人***瘤病毒衣壳蛋白是牛***瘤病毒衣壳蛋白或棉尾兔***瘤病毒蛋白。
35.段落31至34中任一项所述的组合物，其中病毒衣壳蛋白包含***瘤病毒L1衣壳蛋白，或者***瘤病毒L1衣壳蛋白与***瘤病毒L2衣壳蛋白的组合。
36.段落31至35中任一项所述的组合物，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是壳粒或病毒样颗粒。
37.段落31至36中任一项所述的组合物，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含10至1000个光敏分子。
38.段落31至37中任一项所述的组合物，其中光敏分子包含荧光染料、红外(IR)染料、近红外(NIR)染料、卟啉、叶绿素、二氢卟酚、酞菁、菌绿素、德卟啉、卟吩姆钠、维替泊芬、替莫泊芬、他拉泊芬、亚甲蓝、氨基乙酰丙酸，或其组合。
39.段落31至38中任一项所述的组合物，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是病毒样颗粒，其包含72个由变体或经修饰HPV 16/31L1衣壳蛋白和野生型HPV L2衣壳蛋白装配的壳粒，并且其中光敏分子包含IRdye700DX。
40.段落31至39中任一项所述的组合物，其中免疫检查点抑制剂抑制CTLA-4、PD-1、PD-L1、TIM3、LAG3、B7-H3、B7-H4、BTLA、GAL9、Chk1或A2aR与相应结合配偶体的结合。
41.段落40所述的组合物，其中免疫检查点抑制剂是抗体。
42.段落41所述的组合物，其中抗体是单克隆抗体。
43.段落31至42中任一项所述的组合物，其中抗体选自抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM3抗体、抗LAG3抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗BTLA抗体、抗GAL9抗体、抗Chk1抗体、抗A2aR抗体，以及任意两种或更多种前述抗体的组合。
44.段落43的组合物，其中抗体选自派姆单抗、纳武单抗、伊匹单抗以及两种或更多种前述抗体的任意组合。
通过以下实施例进一步说明本公开内容，这些实施例决不应解释为进一步限制。
实施例
实施例1：使用静脉内施用的VLP缀合物的抗肿瘤免疫应答的效力和诱导
方法。向白化病C57Bl/6小鼠皮下注射5×105TC-1细胞，作为肺癌模型的一部分。当肿瘤达到约100至300mm3时，指定为第0天，通过静脉内注射，向动物施用25μg VLP缀合物(与
结果。与PBS处理的动物相比，VLP缀合物/光处理的动物的存活总体显著提高，所有对照动物在第21天均被安乐死，中位存活为11天。VLP缀合物/光处理的动物中位存活24天，并且两种处理的动物展示出完全的肿瘤消退(图3和表2)。在这些相同的两种处理的动物中检测到肿瘤特异性CD8+T细胞(E7肽刺激之后E7四聚体阳性和IFN-γ分泌)，表明VLP缀合物能够引发针对新肿瘤抗原的抗肿瘤免疫(图4)。肿瘤较小的动物控制肿瘤生长，并在第17天检测到E7特异性免疫应答。在治疗时，肿瘤负荷高于典型实验，并且两种处理的有应答的动物在治疗开始时也具有最小的肿瘤，表明可能存在治疗阈值。单独的光治疗被证明是无效的(图5)。因此，在侵袭性肺癌的动物模型(可免疫型)中，组合治疗显示出良好的效力(两种完全应答)。四聚体染色和响应于E7肽刺激的细胞因子分泌证明了抗肿瘤免疫的启动。
表1.TC-1模型中的中位存活
实施例2：在新的制剂缓冲剂中使用IV施用的VLP缀合物的抗肿瘤免疫应答的效力和诱导
方法。向白化病C57Bl/6小鼠皮下注射5×105TC-1细胞，作为肺癌模型的一部分。当肿瘤达到约50mm3时，指定为第0天，通过静脉内注射，向动物施用100μg VLP缀合物或PBS，随后在12和24小时之后进行肿瘤靶向性近红外光治疗(50J/cm2；690nm)。包含两个另外的臂，其不进行治疗以及在没有光的情况下施用VLP缀合物。在第3天重复该方案。在第0和17天抽血以测量肿瘤特异性T细胞应答。当肿瘤尺寸达到>1500mm3时，对动物实施安乐死。
对初始小鼠和展示出肿瘤消退的小鼠在其相对的侧面和肿瘤负荷上用5×105TC-1细胞进行皮下攻击，并测量一个月。用TC-1细胞进行重新攻击的动物在重新攻击之后没有表现出肿瘤生长，而所有进行重新攻击的对照动物都具有肿瘤生长。
结果。与侵袭性肺癌动物模型(可免疫型)中的所有其他臂相比，VLP缀合物/光组动物的存活总体显著提高(图2和表2)。未经治疗组中的一只动物展示出自发的消退。两只VLP缀合物/光小鼠展示出完全消退，并且一只小鼠显示出受控的生长，因为肿瘤的尺寸缩小并且没有生长或清除。因此，组合治疗显示出良好的效力。产生的抗肿瘤应答能够阻止在攻击之后新的肿瘤生长。
在两种处理的动物中可检测到E7四聚体染色和IFN-γ分泌。但是，背景染色高，因此可能掩盖了低阳性值。其余四只小鼠随后与三只初始小鼠一起受到TC-1肿瘤攻击。到了由于肿瘤负荷而不得不对初始小鼠实施安乐死的时候，3/4受攻击的小鼠仍然没有肿瘤。唯一不能幸免于肿瘤攻击的动物是展示出肿瘤控制能力(无生长)的小鼠。攻击性肿瘤没有生长；然而，原发性肿瘤已不再受控制并开始再次生长。这些数据表明产生了免疫学应答并且不仅能够去除原发性肿瘤，而且能够预防以后的肿瘤的发生。VLP缀合物缓冲剂的改变可能导致IV注射之后稳定性下降，从而导致更少的应答者。
表2.TC-1模型中的中位存活
实施例3：将VLP缀合物与现有的癌症治疗组合以增强肿瘤特异性T细胞的产生
背景。数类癌症治疗驱使肿瘤细胞发生凋亡性死亡，其通常被宿主免疫应答忽略。另外，许多肿瘤已经进化以逃避宿主的免疫识别。鉴于此，已经引入了新一代的免疫调节剂/检查点抑制剂。即针对T细胞和肿瘤细胞表面抗原的抗体，其阻断细胞之间传递的抑制性信号(例如PD-1、PD-L1、CTLA-4)(Melero,2015年)。数据表明，VLP缀合物能够诱导抗肿瘤免疫，其可能是由于急性坏死性死亡。将其与增强T细胞/肿瘤相互作用的治疗形式组合显著提高了其针对原发性肿瘤的效力，并导致全身抗肿瘤免疫，从而潜在地靶向未确定的远端转移并预防疾病复发。
方法。使用TC-1肿瘤模型，将VLP缀合物/光治疗与抗PD-1、抗PD-L1和/或抗CTLA-4(或其他适当分子)组合。对照臂包括只接受这些抗体或VLP缀合物的动物。VLP缀合物/光治疗在治疗之后立即对肿瘤微环境具有高度破坏性。这与估计需要两周以产生肿瘤特异性T细胞应答的知识组合，意味着在VLP缀合物/光治疗之前和/或之后应用免疫检查点抑制剂以评价对肿瘤应答的协同效应。读数是治疗之后每两周一次的循环中肿瘤特异性T细胞的存活和测量。当与作为单个治疗的相同检查点抑制剂或VLP缀合物相比，VLP缀合物加上检查点抑制剂治疗在控制肿瘤生长和诱导抗肿瘤免疫方面更有效(图6)。
实施例4：皮下模型
小鼠将被植入TC-1(肺)或MB49(膀胱)癌细胞(1-5×105)。当肿瘤达到约50mm3时(约10天)，其将接受i.p.100μg抗体(αCTLA-4、αPD-L1或αPD-1和相应的同种型对照)；i.v.100至200μg肿瘤靶向性病毒样颗粒(VLP)，其光敏分子(
抗体将再施用两次，相隔两天。
24小时之后将重复药物和690nm的光暴露。
可在一周之后施用第二轮药物/光和抗体治疗。
抗体-i.p.递送100μg；来源于BioXCell
αCTLA-4-克隆9D9
αPD-L1-克隆10F.9G2
αPD-1-克隆RMP1-14
同种型对照
参考文献
Feltkamp MC，Smits HL，Vierboom MP，Minnaar RP，de Jongh BM，Drijfhout JW，ter Schegget J，Melief CJ，Kast WM.Vaccination with cytotoxic T lymphocyteepitope-containing peptide protects against a tumor induced by humanpapillomavirus type 16-transformed cells.Eur J Immunol.1993 Sep；23(9)：2242-9.
Lin KY，Guarnieri FG，Staveley-O′Carroll KF，Levitsky HI，August JT，Pardoll DM，Wu TC.Treatment of established tumors with a novel vaccine thatenhances major histocompatibility class II presentation of tumorantigen.Cancer Res.1996 Jan 1；56(1)：21-6.
Melero I，Berman DM，Aznar MA，Korman AJ，Pérez Gracia JL，HaanenJ.Evolving synergistic combinations of targeted immunotherapies to combatcancer.Nat Rev Cancer.2015Aug；15(8)：457-72.
本文所公开的所有参考文献、专利及专利申请相对于每一个所引用的主题通过引用并入，在一些情况下，其可以涵盖整个文件。
除非有相反指示，否则如在说明书和权利要求中使用的不定冠词″一个/一种″应理解为意指″至少一个/一种″。除非上下文另有明确规定，否则术语“或者”通常采用其包括“和/或”的含义。
应当理解，除非另有明确的相反指示，在本文要求保护的包括多于一个步骤或动作的任何方法中，方法的步骤或动作的顺序不必需限于所叙述的方法的步骤或动作的顺序。
在权利要求书以及在上述说明书中，所有的过渡词语例如“包含”，“包括”，“携带”，“具有”，“含有”，“涉及”，“持有”等应理解为开放式的(包括但不限制于)。如美国专利局专利审查程序手册第2111.03节中所述，仅过渡短语″由......组成″和″基本上由......组成″应当分别是封闭或半封闭的过渡短语。还应理解，所有开放式过渡短语可用封闭或半封闭过渡短语替换。因此，术语“包括”可被“由……组成”或“基本上由……组成”替换。
具体实施方式
图1是描述本公开内容的VLP缀合物的作用机理的示意图，其包括具有光敏分子(
图2是显示TC-1模型中小鼠的存活曲线的图。在形成约50mm3的肿瘤之后(第0天)，给小鼠注射VLP缀合物或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，并且然后在12和24小时之后用光进行处理。在第3天重复该方案。
图3是显示TC-1模型中小鼠的存活曲线的图。在形成约100至300mm3的肿瘤之后(第0天)，给小鼠注射VLP缀合物或PBS，并且然后在12小时之后用光进行处理。在第3天重复该方案。在第0和17天抽血以测量肿瘤特异性T细胞应答。
图4显示在第17天在实验小鼠的血液中检测到的肿瘤抗原特异性CD8+T细胞。显示了肿瘤体积、HPV16 E7四聚体+CD8+设门和HPV16 E7肽再刺激-IFN-γ、CD8+设门。
图5举例说明单独的光治疗不会导致肿瘤抗原特异性CD8+T细胞。显示了肿瘤体积、HPV16 E7四聚体+CD8+设门、和HPV16 E7肽再刺激-IFN-γ、CD8+设门。
图6是举例说明用NIR活化的肿瘤靶向性药物缀合物和检查点抑制剂的组合以防止肿瘤生长和复发的示意图。
图7是实施例4中进行的实验的示意图。
发明详述
为了向肿瘤特异性递送癌症/肿瘤治疗药物，可将某些病毒衣壳蛋白装配和/或化学修饰以携带治疗分子，而不会失去其肿瘤靶向性能力或结构稳定性。这些“病毒衣壳蛋白装配体”可例如通过结合至肿瘤细胞表面上的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)而选择性地结合至肿瘤细胞表面，并进入肿瘤细胞，其中治疗分子(例如，光敏分子)可产生靶向的细胞毒效应和/或抗肿瘤免疫，从而导致肿瘤细胞死亡和预防肿瘤复发。例如在2014年9月18日提交的PCT申请公开WO2015042325中描述了这样的病毒样颗粒和装配体在治疗癌症中的用途，其全部内容通过引用并入本文。
本公开内容的一些方面至少部分是基于这样的意想不到的结果，该结果表明经由肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体递送至肿瘤细胞的光敏分子产生抗肿瘤免疫。经历促免疫原性细胞死亡的肿瘤细胞释放免疫原性因子，从而刺激抗原呈递细胞(antigenpresenting cell，APC)吸收肿瘤抗原，对其进行加工，并诱导针对肿瘤的肿瘤抗原特异性T细胞免疫应答。这样的肿瘤抗原特异性T细胞应答，与治疗的坏死效应组合，显示出在不影响正常细胞的情况下选择性和有效破坏肿瘤细胞，产生抗肿瘤免疫和预防肿瘤复发的巨大潜力。
肿瘤细胞经常利用免疫系统采取的机制来防止自我攻击。已经开发了癌症免疫治疗剂以减少或消除肿瘤细胞逃避被免疫系统攻击的能力。例如在美国专利申请公开US20160024469、US20130202645、US20100189641、美国专利US5478556、US5290551和US5126129中已经描述了这样的免疫治疗剂用于治疗癌症的用途，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，免疫治疗剂是免疫检查点抑制剂。因此，本公开内容涵盖用于组合治疗癌症/肿瘤的组合物和方法，其利用通过靶向和活化肿瘤细胞中的细胞毒性光敏分子并同时或依次施用免疫检查点抑制剂(或其他免疫治疗剂)而产生的预料不到的协同作用。当与传统的化学治疗方法和肿瘤免疫治疗策略相比，这样的组合物和方法在控制肿瘤生长、诱导抗肿瘤免疫和预防肿瘤复发方面更有效。
因此，本公开内容的一些方面提供了包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的组合物，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与该装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。
“病毒衣壳蛋白装配体”是由病毒衣壳蛋白形成的任何颗粒或团聚体。病毒衣壳蛋白装配体的实例包括但不限于：壳粒(capsid)和病毒样纳米颗粒，以及其他病毒假病毒和病毒纳米颗粒。病毒衣壳蛋白装配体被认为是“肿瘤靶向性”，因为其结合肿瘤(例如，癌性的)细胞而不结合非肿瘤(例如，非癌性的，其他正常的、健康的)细胞。在一些实施方案中，肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是具有72个壳粒结构(例如，包含L1或L1/L2病毒衣壳蛋白)的病毒样颗粒(VLP)。
在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体是人***瘤病毒病毒(humanpapillomavirus viral，HPV)衣壳蛋白装配体(例如，来自16型、31型或包含来自16型氨基酸和来自31型氨基酸的修饰型)。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体是非人***瘤病毒病毒(HPV)衣壳蛋白装配体。非人***瘤病毒病毒衣壳蛋白装配体的实例包括但不限于牛***瘤病毒、棉兔***瘤病毒、猕猴***瘤病毒和鼠***瘤病毒。
病毒衣壳蛋白装配体包含病毒衣壳蛋白。“衣壳蛋白”是蛋白质单体。衣壳蛋白可装配在一起以形成壳粒(例如衣壳蛋白的五聚体)。“壳粒”是病毒衣壳的亚单位，其是保护病毒(例如人***瘤病毒(HPV))的遗传物质的蛋白质的外壳。然而，应当理解，在本公开内容的上下文中，壳粒可独立于衣壳用作递送载体(肿瘤靶向性递送载体)。本公开内容的衣壳蛋白包括***瘤病毒L1衣壳蛋白、***瘤病毒L2衣壳蛋白及其变体(例如，具有降低或修饰的诱导感染抑制抗体的能力的变体)。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体仅包含L1衣壳蛋白，而在其他一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体包含L1和L2衣壳蛋白的组合。本文中使用的“外部衣壳蛋白”是指暴露在VLP表面上的衣壳蛋白。
本文中使用的病毒样颗粒或VLP是指有组织的衣壳样结构(例如，大致球形或圆柱形)，其包含L1或L1和L2的自装配有序阵列、壳粒，并且不包含病毒基因组。在一些实施方案中，病毒样颗粒在形态学和抗原性上类似于真实的病毒粒子，但是其缺乏病毒遗传物质(例如病毒核酸)，从而使颗粒无感染性。
在一些实施方案中，可修饰肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体，以降低针对颗粒本身的免疫原性，即，降低诱导针对该装配体的中和抗体。病毒衣壳蛋白装配体可例如由含有具备经修饰免疫原性的衣壳蛋白变体的壳粒装配。具有“修饰的免疫原性”的衣壳蛋白变体是在氨基酸上天然或合成地修饰(例如，突变、取代、缺失、聚乙二醇化或***)以减少或阻止预先存在(例如，内源性)的病毒血清型特异性抗体对衣壳蛋白的识别的衣壳蛋白变体。衣壳蛋白变体可以是人***瘤病毒(HPV)L1变体、非人***瘤病毒L1变体或基于来自不同HPV血清型的氨基酸的组合的***瘤病毒L1变体。例如，具有修饰的免疫原性的L1变体可以是在2009年7月24日提交的国际公开No.WO2010120266中描述的重组蛋白，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体包含具有修饰的免疫原性的L1变体(HPV16/31L1衣壳蛋白变体)。
本公开内容的肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体可特异性地靶向癌细胞，并且这样的特异性至少部分地通过病毒衣壳蛋白装配体中的L1蛋白与肿瘤细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)结合来介导。这种过程类似于病毒附着并感染其宿主细胞的过程。肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体不结合或假靶向(pseudo-target)完整的上皮细胞，并且因此是在不影响健康或正常细胞的情况下将抗癌药特异性递送至肿瘤的极佳工具。
本公开内容的肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含与具有抗癌活性的分子(本文中被称为“抗癌分子”)缀合的衣壳蛋白。这样的抗癌分子能够在肿瘤细胞上产生靶向的细胞毒效应和/或在某些情况下可诱导针对肿瘤细胞的免疫。本公开内容的分子的非限制性实例包括：硼替佐米、伊马替尼、塞利西利、阿法替尼(Gilotrif)、阿来替尼(Alecensa)、阿西替尼(Inlyta)、贝利司他(Beleodaq)、硼替佐米(Velcade)、博舒替尼(Bosulif)、卡博替尼(Cabozantinib)(Cometriq)、卡非佐米(Kyprolis)、色瑞替尼(Zykadia)、考比替尼(Cobimetinib)(Cotellic)、克唑替尼(Xalkori)、达拉非尼(Tafinlar)、达沙替尼(Sprycel)、厄洛替尼(Tarceva)、依维莫司(Afinitor)、吉非替尼(Iressa)、依鲁替尼(Imbruvica)、艾代拉利司(Zydelig)、伊马替尼(Gleevec)、艾沙佐米(Ninlaro)、拉帕替尼(Tykerb)、乐伐替尼(Lenvima)、尼洛替尼(Tasigna)、奥拉帕利(Olaparib)(Lynparza)、奥希替尼(Osimertinib)(Tagrisso)、帕博西尼(Palbociclib)(Ibrance)、帕比司他(Panobinostat)(Farydak)、帕唑帕尼(Votrient)、普纳替尼(Ponatinib)(Iclusig)、瑞戈非尼(Stivarga)、鲁索替尼(Jakafi)、Sipuleucel-T(Provenge)、索尼德吉(Sonidegib)(Odomzo)、索拉非尼(Nexavar)、西司他莫司(Torisel)、托法替尼(Tofacitinib)(Xeljanz)、曲美替尼(Mekinist)、凡德他尼(Caprelsa)、维莫非尼(Zelboraf)、维莫德吉(Erivedge)、和伏立诺他(Zolinza)。根据本公开内容，可使用本领域已知的任何抗癌分子。
在一些实施方案中，抗癌分子是光敏分子或光敏剂。“光敏分子”或“光敏剂”是可在吸收光时被激发成激发态的化合物。这种种类迅速攻击其遇到的任何有机化合物，因此具有高度细胞毒性。在一些实施方案中，活化的光敏分子在光激发时重新发射光(例如，荧光团)。在一些实施方案中，在光激发时，活化的光敏分子可变得有毒性，或可产生毒性分子。例如，一类光敏分子可在吸收光时被激发到激发态，并与氧发生系统间交叉以产生单线态氧。
预料不到地，肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子，其一旦被NIR光活化，则不仅诱导肿瘤坏死，而且诱导肿瘤的促免疫原性细胞死亡并激活针对肿瘤的持久的肿瘤抗原特异性T-细胞应答。这样，免疫系统被激活以攻击肿瘤，从而增强了局部(区域)和远距离治疗效力。预料不到的是，这种作用机制不仅减小了现有肿瘤的尺寸，即抑制了肿瘤的生长，而且还防止了小鼠经攻击之后形成新的肿瘤，即防止肿瘤复发。
根据本公开内容使用的光敏分子的实例包括但不限于荧光染料、红外染料、近红外染料、卟啉分子和叶绿素分子。
根据本公开内容使用的荧光染料的实例包括但不限于：吖啶橙(acridineorange)、吖啶黄(acridine yellow)、Alexa Fluor、7-氨基放线菌素D、8-苯胺萘A-1-磺酸、ATTO染料、金胺-罗丹明染色(auramine-rhodamine stain)、苯并蒽酮(benzanthrone)、bimane、9,10-双(苯基乙炔基)蒽、5,12-双(苯基乙炔基)并四苯、双苯甲亚胺、黑光漆、钙黄绿素(calcein)、羧基荧光素、羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯、羧基荧光素琥珀酰亚胺酯、1-氯-9,10-双(苯基乙炔基)蒽、2-氯-9,10-双(苯基乙炔基)蒽、2-氯-9,10-双苯基蒽、香豆素、DAPI、暗猝灭剂、DiOC6、DyLightFluor、Fluo-3、Fluo-4、FluoProbes、荧光素、异硫氰酸荧光素、荧光图像引导手术、fluoro-jade染色、fura-2、fura-2-乙酰氧基甲基酯、GelGreen、GelRed、绿色荧光蛋白、七甲川(heptamethine)染料、印度黄、Indo-1、萤虫黄、萤光素、MCherry、部花青(Merocyanine)、尼罗蓝、尼罗红、荧光增白剂、苝、焰红染料、藻胆素、藻红蛋白、藻红胆素、碘化丙碇、荧光黄染料(pyranine)、罗丹明、罗丹明123、罗丹明6G、RiboGreen、RoGFP、玫瑰红、红荧烯(rubrene)、(E)-二苯乙烯、(Z)-二苯乙烯、磺酰罗丹明101、磺酰罗丹明B、SYBR Green I、synapto-pHluorin、四苯基丁二烯、三(红菲绕啉二磺酸盐)钌(II)四钠(tetrasodiumtris(bathophenanthroline disulfonate)ruthenium(II))、德克萨斯红、达旦黄、TSQ、伞形花内酯、黄色荧光蛋白和YOYO-1。
根据本公开内容使用的光敏性染料的实例包括但不限于：HpD、卟吩姆钠(Porfimer sodium)(
根据本公开内容使用的光敏性分子的实例包括可用于荧光成像(例如，近红外(NIR)荧光染料)的那些光敏性分子，例如卟啉、叶绿素、二氢卟吩、酞菁、菌绿素、德卟啉、(卟吩姆钠)、
根据本公开内容的多个方面，可将抗癌分子(例如
***瘤病毒的L1蛋白包含大量可用于化学缀合的赖氨酸。因此，大量的光敏分子(或其他抗癌分子)可与本公开内容的一种肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体缀合，即抗癌分子与病毒衣壳蛋白装配体的比例可变化。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体:光敏分子的比例为约1:10至约1:1000、或约1:50至约1:1000。就是说，在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体可包含约10至约1000个光敏分子。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体:光敏分子的比例为1:10、1:15、1:20、1:25、1:50、1:75、1:100、1:150、1:200、1:250、1:500、1:750或1:1000。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体可包含10、15、20、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000个光敏分子。例如，病毒衣壳蛋白装配体可包含10至1000、10至500、100至1000、200至1000、300至1000、400至1000、500至1000、100至500、200至500、300至500、400至500、100至400、200至400、300至400、100至300或200至300个光敏分子。在一些实施方案中，病毒衣壳蛋白装配体可包含多于1000个光敏分子或少于10个抗癌分子。将光敏分子与病毒衣壳蛋白装配体的L1蛋白缀合不包含该装配体的结构完整性或肿瘤靶向性能力，即其选择性结合肿瘤细胞表面上的HSPG的能力。因此，本公开内容的肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的另一个优点是其即使在非常低的分子浓度下也能将大量治疗剂特异性地递送至肿瘤的能力。
在一些实施方案中，肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。在一些实施方案中，光敏分子是
本公开内容的组合物还包含用于治疗癌症的免疫治疗剂。本文中使用的“免疫治疗剂”是指促进使用免疫系统治疗癌症的试剂。这样的免疫治疗剂通常利用以下事实：癌细胞通常在其表面上具有可被免疫系统检测到的分子。在一些实施方案中，免疫治疗剂主动指导免疫系统附着肿瘤细胞。在一些实施方案中，免疫治疗剂增强现有的抗肿瘤应答，例如单克隆抗体、淋巴细胞和细胞因子。在一些实施方案中，免疫治疗剂调节免疫检查点的活性。
“免疫检查点”是增强免疫应答信号(共刺激分子)或降低免疫应答信号的免疫系统中的蛋白质。许多癌症通过利用抑制性免疫检查点蛋白抑制T细胞信号来保护自己免受免疫系统的侵害。这样的抑制性检查点蛋白包括但不限于：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、程序性死亡1受体(PD-1)、T细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域3(TIM3)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)、包含V组结构域的T细胞活化抑制剂1(VTVN1或B7-H4)、分化簇276(CD276或B7-H3)、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)、半乳凝素9(GAL9)、检查点激酶1(Chk1)、腺苷A2A受体(A2aR)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)和T细胞活化的V结构域Ig组抑基因(VISTA)。
这些免疫检查点蛋白中的一些需要其相应结合配偶体或配体用于其免疫抑制活性。例如，A2AR是腺苷A2A的受体，并且A2A与A2AR的结合活化了负免疫反馈环。作为另一个实例，PD-1与其两个配体PD-L1和PD-L2缔合，通过防止T细胞活化来下调免疫系统。PD-1促进***中抗原特异性T细胞的程序性细胞死亡并且同时减少抑制型T细胞的程序性细胞死亡，从而实现其免疫抑制功能。作为另一个实例，CTLA4存在于T细胞的表面上，并且当与抗原呈递细胞(APC)表面上的其结合配偶体CD80或CD86结合时，其向T细胞传递抑制信号，从而降低免疫应答。
已知癌细胞利用免疫检查点蛋白来逃避免疫系统的攻击。因此，已经描述了使用免疫检查点抑制剂来增强针对癌症的免疫应答，并且因此治疗癌症。本公开内容的组合物中的免疫治疗剂也可以是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制以下中的任一种或更多种：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、程序性死亡1受体(PD-1)、T细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域3(TIM3)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)、包含V组结构域的T细胞活化抑制剂1(VTVN1或B7-H4)、分化簇276(CD276或B7-H3)、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)、半乳凝素9(GAL9)、检查点激酶1(Chk1)、腺苷A2A受体(A2aR)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)和T细胞活化的V结构域Ig组抑基因(VISTA)。
在一些实施方案中，“抑制”意指防止或减弱免疫检查点蛋白与其相应结合配偶体例如PD-1、CTLA-4或A2aR的结合。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗体。在一些实施方案中，抗体包含抗CTLA-4、抗PD-1、抗PD-L1、抗TIM3、抗LAG3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗BTLA、抗GAL9、抗Chk、抗A2aR、抗IDO、抗KIR、抗LAG3、抗VISTA抗体或前述抗体中任意两种或更多种的组合。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是单克隆抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗PD1、抗PD-L1、抗CTLA-4或前述抗体中的任意两种或更多种的组合。例如，抗PD-1抗体是派姆单抗
本文中公开的包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂的组合物适用于治疗癌症。因此，本公开内容还涵盖向患有肿瘤的对象施用这样的组合物以***的方法。将该组合物以有效减少肿瘤生长和/或预防肿瘤复发的量向对象施用。
“施用”及其变化形式意指以药理学有用的方式向对象提供物质。可使用医学领域普通技术人员已知的常规方法将治疗剂或组合物施用于对象，这取决于待治疗的癌症类型或癌症的部位。该组合物还可通过其他常规途径施用，例如经口、肠胃外、通过吸入喷雾、表面、直肠、鼻腔、口腔、***或通过植入的储库施用。本文中使用的术语“肠胃外”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、膀胱内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。另外，其可通过可注射的储库施用途径施用于对象，例如使用1个月、3个月或6个月储库可注射或可生物降解的材料和方法。在一些实施方案中，组合物可全身施用例如静脉内。在一些实施方案中，该组合物是局部施用的。在一些实施方案中，所述组合物通过植入施用。
在一些实施方案中，可将本公开内容的组合物注射到存在肿瘤生长的靶位点。可根据本公开内容使用的注射方法包括但不限于静脉内注射、病灶内注射、皮下注射、玻璃体内注射、脉络膜上腔注射、腹膜内注射、动脉内注射、肝内注射和膀胱内注射。在使用注射剂的情况下，根据注射面积，使用空心针、涂层针、小针或微针。
在一些实施方案中，本公开内容的癌症治疗方法包括向患有肿瘤的对象施用包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的组合物，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子，以及包含免疫治疗剂的组合物。
在一些实施方案中，肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂同时施用。“同时”意指同时向对象施用两种或更多种材料/试剂(例如肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂)。例如，可在施用之前将包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体或免疫治疗剂的组合物组合/混合。
在一些实施方案中，依次施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂。“依次”意指一种药剂的施用和另一种药剂的施用在时间上分开(在两个单独的步骤中)。在一些实施方案中，首先施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体，并且然后施用免疫治疗剂(例如检查点抑制剂)。在一些实施方案中，首先施用免疫治疗剂，并且然后施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体。施用步骤的两个步骤之间的时间可以是至少1分钟、至少5分钟、至少30分钟、至少1小时、至少5小时、至少10小时、至少1天、至少1周、或甚至至少一个月。当依次施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫治疗剂时，其也可通过不同途径或在不同位置施用。例如，可将肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体病灶内施用于暴露的肿瘤病灶或皮下施用于对象的皮肤，而免疫治疗剂可全身施用，例如静脉内。
在一些实施方案中，本公开内容的癌症治疗方法包括向正在接受用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体进行治疗的患有肿瘤的对象施用免疫治疗剂，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与病毒衣壳蛋白缀合的分子(例如光敏分子)。
根据分子的类型，本公开内容的光敏分子可被红外、近红外或紫外光活化。例如，在一些实施方案中，可使用红外、近红外或紫外激光来活化肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的光敏分子。激光递送的能量可为5焦耳(J)至约150J，或8J至36J。在一些实施方案中，激光递送的能量为5J、6J、7J、8J、9J、10J、12J、14J、16J、18J、20J、22J、24J、26J、28J、30J、32J、34J、36J、38J、40J、50J、60J、70J、80J、90J、100J、110J、120J、130J、140J或150J。
可将光或激光施加至光敏分子(或肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体)约5秒至约5分钟。例如，在一些实施方案中，将光或激光施加至光敏分子经5、10、15、20、25、30、35、40、45、50或55秒以活化分子。在一些实施方案中，将激光施加至光敏分子经1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5分钟。
在施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体之后约30分钟至约48小时，可将光或激光施加至光敏分子(或肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体)。例如，在一些实施方案中，在施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体之后30、35、40、45、50或55分钟将光或激光施加至光敏分子。在一些实施方案中，在施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时将光或激光施加至光敏分子。在一些实施方案中，在施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体之后36或48小时将光或激光施加至光敏分子。
例如，可将光或激光直接施加至肿瘤部位。
根据本公开内容的癌症治疗方法，可对正在接受用与光敏分子缀合的病毒衣壳蛋白装配体治疗的患有肿瘤的对象进一步施用免疫治疗剂，例如免疫检查点抑制剂。本文中所述的任何免疫治疗剂均适合于施用于对象。应当理解，根据待治疗的肿瘤的类型，可施用不同的免疫治疗剂。本领域技术人员能够确定适当的免疫治疗剂。在一些实施方案中，施用免疫检查点抑制剂，例如抗PD-1、抗PD-L1和/或抗CTLA-4抗体。
可使用本公开内容的组合物和方法治疗的肿瘤类型包括但不限于恶化前肿瘤、恶性肿瘤、转移瘤，或以不受控制的细胞生长为特征使得其被认为是癌性或癌前的任何疾病或病症。癌症可以是原发性或转移癌。癌症包括但不限于：眼癌，胆道癌，膀胱癌，胸膜癌，胃癌，卵巢癌，脑膜癌，肾癌，包括胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤的脑癌，乳腺癌，***，绒毛膜癌，结肠癌，子宫内膜癌，食管癌，胃癌，包括急性淋巴细胞和髓性白血病的血液系统肿瘤(hematological neoplasm)，多发性骨髓瘤，AIDS相关白血病和成体T细胞白血病淋巴瘤，包括鲍恩病(Bowen’s disease)和佩吉特病(Paget’s disease)的上皮内肿瘤，肝癌，肺癌，包括霍奇金病(Hodgkin’s disease)和淋巴细胞性淋巴瘤的淋巴瘤，神经母细胞瘤，包括鳞状细胞癌的口腔癌，包括由上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞产生的那些的卵巢癌，胰腺癌，***癌，直肠癌，包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤的肉瘤，包括黑素瘤、卡波西肉瘤、基底细胞癌和鳞状细胞癌的皮肤癌，包括生殖肿瘤(germinal tumor)例如***瘤、非***瘤、畸胎瘤、绒毛膜癌，间质瘤和生殖细胞肿瘤的睾丸癌，包括甲状腺腺癌和髓样癌的甲状腺癌，以及包括腺癌和肾母细胞瘤(Wilm’stumor)的肾癌。常见的癌症包括乳腺癌、***癌、肺癌、卵巢癌、结直肠癌和脑癌。在一些实施方案中，肿瘤是黑素瘤、癌、肉瘤或淋巴瘤。
在一些实施方案中，肿瘤已经转移并且其具有皮肤或表面暴露的肿瘤病灶(例如梅克尔(Merkel)细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、基底细胞癌、乳腺癌和转移性乳腺癌、皮肤T细胞淋巴瘤(塞扎里(Sezary)综合征)和肉瘤)。在一些实施方案中，无需外科干预即可进入肿瘤，例如位于头部、颈部、宫颈、喉、食道或皮肤中的肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是癌性或恶性的。在一些实施方案中，通过外科手术或内窥镜干预可进入肿瘤(使光/激光可进入)。在一些实施方案中，肿瘤是转移性的。在一些实施方案中，肿瘤是原发性肿瘤并且已经转移。在一些实施方案中，转移癌具有皮肤或表面暴露的肿瘤病灶。在一些实施方案中，肿瘤具有可被红外激光治疗的病灶。在一些实施方案中，转移性癌症具有在眼中的肿瘤病灶或转移。在一些实施方案中，肿瘤是眼肿瘤并且已经转移至肝脏。当肿瘤是眼肿瘤或已经转移至眼时，眼肿瘤位于玻璃体、脉络膜上腔、虹膜、睫状体、巩膜、中央凹、视网膜、视盘或视神经中。
在一些实施方案中，患有肿瘤的对象是哺乳动物，例如人。
将本公开内容的组合物和/或治疗剂以有效量向对象施用，以减少或阻止癌症的生长。本文中使用的“有效量”是指每种药剂单独或与一种或更多种其他药剂组合赋予对象治疗效果所需的量。如本领域技术人员所认识到的，有效量根据所治疗的具体病症、病症的严重程度、个体对象参数(包括年龄、身体状况、身材大小、性别和体重、治疗持续时间、同时治疗(如果有的话)的性质、具体的施用途径等健康从业者的知识和专长中的相似因素。这些因素是本领域普通技术人员公知的并且仅用常规实验就可解决。通常优选使用最大剂量的单个组分或其组合，即根据合理的医学判断的最高安全剂量。然而，本领域普通技术人员将理解，对象可出于医学原因、心理原因或实际上任何其他原因坚持较低剂量或可耐受剂量。
例如半衰期的经验性考虑通常将有助于确定剂量。例如，可使用与人免疫系统相容的药剂，例如包含来自人源化抗体或完全人抗体的区域的药剂来延长化合物的半衰期并防止化合物被宿主的免疫系统攻击。施用的频率可以在治疗过程中确定和调整，并且通常但不是必须基于疾病的治疗和/或抑制和/或改善和/或延迟。或者，化合物的持续连续释放制剂可能是合适的。本领域中已知用于实现持续释放的多种制剂和装置。
在一些实施方案中，剂量是每天、每隔一天、每三天、每四天、每五天或每六天一次。在一些实施方案中，给药频率是每周一次、每2周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每9周一次或每10周一次；或每月一次、每2个月一次，或每3个月或更长时间一次。这种治疗的过程容易通过常规技术和测定进行监测。给药方案(包括使用的化合物)可随时间变化。
在一些实施方案中，对于正常体重的成年对象，可施用约0.01至1000mg/kg的剂量。在一些实施方案中，剂量为1至200mg。具体的剂量方案，即剂量、时机和重复，将取决于具体对象和对象的病史，以及药剂的特性(例如药剂的半衰期以及本领域其他公认的因素)。
为了本公开内容的目的，如本文中所述的治疗剂的合适剂量将取决于所用的具体药剂(或其组合物)、制剂和施用途径、疾病的类型和严重程度、所述化合物是用于预防还是治疗目的、先前的治疗、对象的临床病史和对拮抗剂的应答以及主治医师的判定。通常来说，临床医师将施用药剂，直至达到实现期望结果的剂量。一种或更多种药剂的施用可以是连续的或间歇的，这取决于例如受体的生理状况、施用的目的是治疗性的还是预防性的以及技术人员已知的其他因素。药剂的施用可以在预选的时间段内基本上连续，或者可以是一系列间隔剂量，例如在疾病发生之前、期间或之后。
本文中使用的术语“治疗”是指向患有疾病、疾病的症状或对疾病有倾向的对象应用或施用药剂或包含药剂的组合物，其目的是治疗、治愈、缓和、减轻、改变、补救、改善、改进或影响疾病、疾病的症状或对疾病的倾向。
减轻疾病包括延迟疾病的发展或进展，或降低疾病严重程度。减轻疾病并不一定需要治疗结果。本文中使用的“延迟”疾病的发展意味着推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定和/或推迟疾病的进展。这种延迟的时间长度可以有所不同，这取决于疾病史和/或正在接受治疗的个体。“延迟”或减轻疾病的发展或延迟疾病发作的方法是，与不使用该方法相比，在给定时间范围内降低发生一种或更多种疾病的症状的可能性和/或在给定的时间范围内降低症状程度的方法。这样的比较通常基于临床研究，使用足以给出统计学显著结果的许多对象来进行。
疾病的“发展”或“进展”意指疾病的初始表现和/或随后的进展。可以使用本领域熟知的标准临床技术检测和评估疾病的发展。然而，发生也是指可无法检出的进展。出于本公开内容的目的，发生或进展是指症状的生物学过程。“发展”包括发生、复发和发作。本文中使用的疾病的“发作”或“发生”包括初始发作和/或复发。
本公开内容还涵盖以下编号的段落：
1.方法，其包括
(a)向患有肿瘤的对象施用包含肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体的组合物，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与所述装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子；和
(b)向患有肿瘤的对象施用包含免疫检查点抑制剂的组合物。
2.段落1所述的方法，其中病毒衣壳蛋白是人***瘤病毒衣壳蛋白。
3.段落1所述的方法，其中病毒衣壳蛋白是非人***瘤病毒衣壳蛋白。
4.段落3所述的方法，其中非人***瘤病毒衣壳蛋白是牛***瘤病毒衣壳蛋白或棉尾兔***瘤病毒蛋白。
5.段落1至4中任一项所述的方法，其中病毒衣壳蛋白包含***瘤病毒L1衣壳蛋白，或者***瘤病毒L1衣壳蛋白与***瘤病毒L2衣壳蛋白的组合。
6.段落1至5中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是壳粒或病毒样颗粒。
7.段落1至6中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含10至1000个光敏分子，任选地其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含200至500个光敏分子。
8.段落1至7中任一项所述的方法，其中光敏分子包含荧光染料、红外(infrared，IR)染料、近红外(near infrared，NIR)染料、卟啉、叶绿素、二氢卟酚、酞菁、菌绿素、德卟啉、卟吩姆钠、维替泊芬、替莫泊芬、他拉泊芬、亚甲蓝、氨基乙酰丙酸，或其组合。
9.段落1至8中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是病毒样颗粒，其包含72个由变体或经修饰HPV 16/31L1衣壳蛋白和野生型HPV L2衣壳蛋白装配的壳粒，并且其中光敏分子包含IRdye700DX。
10.段落1至9中任一项所述的方法，其中免疫检查点抑制剂抑制CTLA-4、PD-1、PD-L1、TIM3、LAG3、B7-H3、B7-H4、BTLA、GAL9、Chk1或A2aR与相应结合配偶体的结合。
11.段落10所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是抗体。
12.段落11所述的方法，其中抗体是单克隆抗体。
13.段落1至12中任一项所述的方法，其中抗体选自抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM3抗体、抗LAG3抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗BTLA抗体、抗GAL9抗体、抗Chk1抗体、抗A2aR抗体，以及任意两种或更多种前述抗体的组合。
14.段落13所述的方法，其中抗体选自派姆单抗、纳武单抗、伊匹单抗以及两种或更多种前述抗体的任意组合。
15.段落1至14中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫检查点抑制剂是同时施用的。
16.段落1至14中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和免疫检查点抑制剂是依次施用的。
17.段落16所述的方法，其中在向对象施用免疫检查点抑制剂之前，向对象施用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体。
18.段落16和17所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体局部施用于肿瘤或肿瘤病灶，并且其中免疫检查点抑制剂是全身施用的。
19.段落1至18中任一项所述的方法，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体和/或免疫检查点抑制剂通过注射施用、表面施用或通过植入施用。
20.段落19所述的方法，其中注射是病灶内注射、皮下注射、玻璃体内注射、脉络膜上腔注射、腹膜内注射、动脉内注射、肝内注射、膀胱内注射，或其任意组合。
21.段落1至20中任一项所述的方法，其进一步包括使用红外激光、近红外激光或紫外激光来活化光敏分子。
22.段落1至21中任一项所述的方法，其中肿瘤是癌性的。
23.段落23所述的方法，其中肿瘤是转移性的。
24.段落1至23中任一项所述的方法，其中肿瘤是黑素瘤、癌、肉瘤或淋巴瘤。
25.段落1至24中任一项所述的方法，其中肿瘤具有可用红外激光治疗的病灶。
26.段落25所述的方法，其中肿瘤是梅克尔细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、转移性乳腺癌、皮肤T细胞淋巴瘤或肉瘤。
27.段落1至25中任一项所述的方法，其中肿瘤是原发性肿瘤并且已经转移。
28.段落1至27中任一项所述的方法，其中肿瘤位于以下中和/或已经转移至以下：肝、膀胱、眼、头、颈、宫颈、喉、皮肤、肺、胸膜、胰、胃、食管、结肠、乳腺、卵巢、***、睾丸、脑、脑膜、肾。
29.段落1至27中任一项所述的方法，其中对象是人。
30.方法，其包括向正在接受用肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体进行治疗的患有肿瘤的对象施用免疫检查点抑制剂，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与所述装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。
31.组合物，其包含免疫检查点抑制剂和肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体，所述病毒衣壳蛋白装配体包含与所述装配体的病毒衣壳蛋白缀合的光敏分子。
32.段落31所述的组合物，其中病毒衣壳蛋白是人***瘤病毒衣壳蛋白。33.段落31所述的组合物，其中病毒衣壳蛋白是非人***瘤病毒衣壳蛋白。
34.段落33所述的组合物，其中非人***瘤病毒衣壳蛋白是牛***瘤病毒衣壳蛋白或棉尾兔***瘤病毒蛋白。
35.段落31至34中任一项所述的组合物，其中病毒衣壳蛋白包含***瘤病毒L1衣壳蛋白，或者***瘤病毒L1衣壳蛋白与***瘤病毒L2衣壳蛋白的组合。
36.段落31至35中任一项所述的组合物，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是壳粒或病毒样颗粒。
37.段落31至36中任一项所述的组合物，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体包含10至1000个光敏分子。
38.段落31至37中任一项所述的组合物，其中光敏分子包含荧光染料、红外(IR)染料、近红外(NIR)染料、卟啉、叶绿素、二氢卟酚、酞菁、菌绿素、德卟啉、卟吩姆钠、维替泊芬、替莫泊芬、他拉泊芬、亚甲蓝、氨基乙酰丙酸，或其组合。
39.段落31至38中任一项所述的组合物，其中肿瘤靶向性病毒衣壳蛋白装配体是病毒样颗粒，其包含72个由变体或经修饰HPV 16/31L1衣壳蛋白和野生型HPV L2衣壳蛋白装配的壳粒，并且其中光敏分子包含IRdye700DX。
40.段落31至39中任一项所述的组合物，其中免疫检查点抑制剂抑制CTLA-4、PD-1、PD-L1、TIM3、LAG3、B7-H3、B7-H4、BTLA、GAL9、Chk1或A2aR与相应结合配偶体的结合。
41.段落40所述的组合物，其中免疫检查点抑制剂是抗体。
42.段落41所述的组合物，其中抗体是单克隆抗体。
43.段落31至42中任一项所述的组合物，其中抗体选自抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM3抗体、抗LAG3抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗BTLA抗体、抗GAL9抗体、抗Chk1抗体、抗A2aR抗体，以及任意两种或更多种前述抗体的组合。
44.段落43的组合物，其中抗体选自派姆单抗、纳武单抗、伊匹单抗以及两种或更多种前述抗体的任意组合。
通过以下实施例进一步说明本公开内容，这些实施例决不应解释为进一步限制。
实施例
实施例1：使用静脉内施用的VLP缀合物的抗肿瘤免疫应答的效力和诱导
方法。向白化病C57Bl/6小鼠皮下注射5×105TC-1细胞，作为肺癌模型的一部分。当肿瘤达到约100至300mm3时，指定为第0天，通过静脉内注射，向动物施用25μg VLP缀合物(与
结果。与PBS处理的动物相比，VLP缀合物/光处理的动物的存活总体显著提高，所有对照动物在第21天均被安乐死，中位存活为11天。VLP缀合物/光处理的动物中位存活24天，并且两种处理的动物展示出完全的肿瘤消退(图3和表2)。在这些相同的两种处理的动物中检测到肿瘤特异性CD8+T细胞(E7肽刺激之后E7四聚体阳性和IFN-γ分泌)，表明VLP缀合物能够引发针对新肿瘤抗原的抗肿瘤免疫(图4)。肿瘤较小的动物控制肿瘤生长，并在第17天检测到E7特异性免疫应答。在治疗时，肿瘤负荷高于典型实验，并且两种处理的有应答的动物在治疗开始时也具有最小的肿瘤，表明可能存在治疗阈值。单独的光治疗被证明是无效的(图5)。因此，在侵袭性肺癌的动物模型(可免疫型)中，组合治疗显示出良好的效力(两种完全应答)。四聚体染色和响应于E7肽刺激的细胞因子分泌证明了抗肿瘤免疫的启动。
表1.TC-1模型中的中位存活
实施例2：在新的制剂缓冲剂中使用IV施用的VLP缀合物的抗肿瘤免疫应答的效力和诱导
方法。向白化病C57Bl/6小鼠皮下注射5×105TC-1细胞，作为肺癌模型的一部分。当肿瘤达到约50mm3时，指定为第0天，通过静脉内注射，向动物施用100μg VLP缀合物或PBS，随后在12和24小时之后进行肿瘤靶向性近红外光治疗(50J/cm2；690nm)。包含两个另外的臂，其不进行治疗以及在没有光的情况下施用VLP缀合物。在第3天重复该方案。在第0和17天抽血以测量肿瘤特异性T细胞应答。当肿瘤尺寸达到>1500mm3时，对动物实施安乐死。
对初始小鼠和展示出肿瘤消退的小鼠在其相对的侧面和肿瘤负荷上用5×105TC-1细胞进行皮下攻击，并测量一个月。用TC-1细胞进行重新攻击的动物在重新攻击之后没有表现出肿瘤生长，而所有进行重新攻击的对照动物都具有肿瘤生长。
结果。与侵袭性肺癌动物模型(可免疫型)中的所有其他臂相比，VLP缀合物/光组动物的存活总体显著提高(图2和表2)。未经治疗组中的一只动物展示出自发的消退。两只VLP缀合物/光小鼠展示出完全消退，并且一只小鼠显示出受控的生长，因为肿瘤的尺寸缩小并且没有生长或清除。因此，组合治疗显示出良好的效力。产生的抗肿瘤应答能够阻止在攻击之后新的肿瘤生长。
在两种处理的动物中可检测到E7四聚体染色和IFN-γ分泌。但是，背景染色高，因此可能掩盖了低阳性值。其余四只小鼠随后与三只初始小鼠一起受到TC-1肿瘤攻击。到了由于肿瘤负荷而不得不对初始小鼠实施安乐死的时候，3/4受攻击的小鼠仍然没有肿瘤。唯一不能幸免于肿瘤攻击的动物是展示出肿瘤控制能力(无生长)的小鼠。攻击性肿瘤没有生长；然而，原发性肿瘤已不再受控制并开始再次生长。这些数据表明产生了免疫学应答并且不仅能够去除原发性肿瘤，而且能够预防以后的肿瘤的发生。VLP缀合物缓冲剂的改变可能导致IV注射之后稳定性下降，从而导致更少的应答者。
表2.TC-1模型中的中位存活
实施例3：将VLP缀合物与现有的癌症治疗组合以增强肿瘤特异性T细胞的产生
背景。数类癌症治疗驱使肿瘤细胞发生凋亡性死亡，其通常被宿主免疫应答忽略。另外，许多肿瘤已经进化以逃避宿主的免疫识别。鉴于此，已经引入了新一代的免疫调节剂/检查点抑制剂。即针对T细胞和肿瘤细胞表面抗原的抗体，其阻断细胞之间传递的抑制性信号(例如PD-1、PD-L1、CTLA-4)(Melero,2015年)。数据表明，VLP缀合物能够诱导抗肿瘤免疫，其可能是由于急性坏死性死亡。将其与增强T细胞/肿瘤相互作用的治疗形式组合显著提高了其针对原发性肿瘤的效力，并导致全身抗肿瘤免疫，从而潜在地靶向未确定的远端转移并预防疾病复发。
方法。使用TC-1肿瘤模型，将VLP缀合物/光治疗与抗PD-1、抗PD-L1和/或抗CTLA-4(或其他适当分子)组合。对照臂包括只接受这些抗体或VLP缀合物的动物。VLP缀合物/光治疗在治疗之后立即对肿瘤微环境具有高度破坏性。这与估计需要两周以产生肿瘤特异性T细胞应答的知识组合，意味着在VLP缀合物/光治疗之前和/或之后应用免疫检查点抑制剂以评价对肿瘤应答的协同效应。读数是治疗之后每两周一次的循环中肿瘤特异性T细胞的存活和测量。当与作为单个治疗的相同检查点抑制剂或VLP缀合物相比，VLP缀合物加上检查点抑制剂治疗在控制肿瘤生长和诱导抗肿瘤免疫方面更有效(图6)。
实施例4：皮下模型
小鼠将被植入TC-1(肺)或MB49(膀胱)癌细胞(1-5×105)。当肿瘤达到约50mm3时(约10天)，其将接受i.p.100μg抗体(αCTLA-4、αPD-L1或αPD-1和相应的同种型对照)；i.v.100至200μg肿瘤靶向性病毒样颗粒(VLP)，其光敏分子(
抗体将再施用两次，相隔两天。
24小时之后将重复药物和690nm的光暴露。
可在一周之后施用第二轮药物/光和抗体治疗。
抗体-i.p.递送100μg；来源于BioXCell
αCTLA-4-克隆9D9
αPD-L1-克隆10F.9G2
αPD-1-克隆RMP1-14
同种型对照
参考文献
Feltkamp MC，Smits HL，Vierboom MP，Minnaar RP，de Jongh BM，Drijfhout JW，ter Schegget J，Melief CJ，Kast WM.Vaccination with cytotoxic T lymphocyteepitope-containing peptide protects against a tumor induced by humanpapillomavirus type 16-transformed cells.Eur J Immunol.1993 Sep；23(9)：2242-9.
Lin KY，Guarnieri FG，Staveley-O′Carroll KF，Levitsky HI，August JT，Pardoll DM，Wu TC.Treatment of established tumors with a novel vaccine thatenhances major histocompatibility class II presentation of tumorantigen.Cancer Res.1996 Jan 1；56(1)：21-6.
Melero I，Berman DM，Aznar MA，Korman AJ，Pérez Gracia JL，HaanenJ.Evolving synergistic combinations of targeted immunotherapies to combatcancer.Nat Rev Cancer.2015Aug；15(8)：457-72.
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