阅读说明：本技术 用于治疗脑缺血的药物组合物及其应用 (Pharmaceutical composition for treating cerebral ischemia and application thereof ) 是由 董超 侯谦 张世岩 苏彤 董楠 于 2019-10-14 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种新型的治疗脑缺血的药物组合物,其包括如下组分鼠尾草素A和ALDH2激活剂,所述ALDH2激活剂为包含3,4-二羟基苯取代基的取代酚类化合物；实验结果显示,鼠尾草素A和所述ALDH2激活剂的联用在治疗脑缺血的过程中产生了很好的增效作用,且用药剂量小,副作用潜在风险小,具有很强的临床应用前景。(The invention provides a novel pharmaceutical composition for treating cerebral ischemia, which comprises the following components of salvinorin A and an ALDH2 activator, wherein the ALDH2 activator is a substituted phenolic compound containing a 3, 4-dihydroxy benzene substituent; the experimental result shows that the combined use of the salvinorin A and the ALDH2 activator produces good synergistic effect in the process of treating cerebral ischemia, and has the advantages of small dosage, small potential risk of side effect and strong clinical application prospect.)

用于治疗脑缺血的药物组合物及其应用

技术领域

本发明涉及药学领域，具体涉及一种用于治疗脑缺血的药物组合物及其应用。

背景技术

缺血性脑血管病(Ischemic cerebrovascular disease)为临床常见病之一，是由多种原因导致的脑部供血不足而引起相应神经系统症状的疾病，其中慢性脑缺血作为一种常见的病理状态，伴发于血管性痴呆(vascular dementia，VD)、老年性痴呆(Alzheimer'sdisease，AD)等多种神经系统疾病的进程中，其主要包括慢性脑供血不足(chroniccerebral circulation insufficiency，CCCI)、缺血导致的脑白质损害或皮质下动脉硬化性脑病及脑萎缩。缺血后的病理损伤机制复杂，尤其是长期病理损伤可能导致进展性或持久性认知功能及神经功能障碍。脑缺血的发病率随年龄的增长呈直线上升，为世界各国成年人死亡和致残的主要原因之一。目前，随着我国人口结构日益老龄化，脑血管疾病发病数明显增加。因此，对脑缺血的防治为全社会所关注，如何预防和治疗脑缺血疾病及其导致的脑损伤，已引起国内外有关学者的广泛关注。

目前，在治疗脑缺血药物研究方面，主要基于两种策略，其一，以改善供血为目的进行的针对血管功能的研究，希望通过溶栓、扩张血管或血管重构以恢复脑缺血区血液供应。其中改善供血的药物为目前临床较为常用的；例如t-PA，其具有极佳的溶栓作用，较短时间内即可恢复脑缺血患者的血供，但是t-PA应用具有严格时间窗限制，这是因为缺血区域如果时间过长，一旦恢复血供会导致缺血再灌注损伤，从而加速患者死亡。

其二，以保护神经细胞功能为目的进行的神经保护剂的开发，旨在通过药物阻断神经细胞死亡的级联反应以保护和恢复缺血区神经功能。神经保护剂的干预可以阻断脑缺血瀑布反应的不同环节，保护仍有活力的神经元，延长脑细胞缺血耐受时间和治疗窗，逆转半暗带，减小梗死体积。由于神经保护剂是基于对细胞病理生化级联的干预，可以通过降低细胞内钙超载、拮抗兴奋性氨基酸毒性、清除氧自由基以及抑制炎症反应等途径减轻缺血性脑损伤，促进神经功能的恢复。

鼠尾草素A(salvinorin A)为墨西哥鼠尾草(Salvia divinorum)的活性组分，墨西哥鼠尾草是墨西哥本土的唇形(薄荷)科的多年生草本植物。研究已显示，鼠尾草素A为最高度有效的、天然产生的非肽，且为唯一的非含氮κ类***受体(KOR)激动剂。不同于其他KOR激动剂，鼠尾草素A不产生明显的幻觉效应，也没有令人烦躁不安的作用，且具有快速起效、短小和没有呼吸抑制等。

ALDH2是存在于线粒体的一种酶，参与乙醇的代谢过程，促进毒性中间产物乙醛(乙醇经脱氢酶催化产生)转化为乙酸，从而发挥酒精解毒作用。除了乙醛，ALDH2对于机体内产生的其他有毒醛类，包括4-羟基-2-壬烯醛(4-HNE)，都有明确地解毒作用。研究表明，增加ALDH2含量或活力，可减轻缺血性脑损伤，其机制可能通过清除脑内过量产生的毒性代谢醛类4-HNE等，发挥神经保护作用。因此，ALDH2激活剂的开发有助于防治心脑缺血性损伤，还有助于防治与ALDH2相关的其他疾病。原儿茶醛、丹参素、丹酚酸B和丹酚酸A属于丹酚酸类化合物。

申请人通过长期的研究，惊喜地发现，神经类药物鼠尾草素A和丹酚酸类化合物的ALDH2激活剂联用，对于治疗脑缺血疾病表现出极好的增效活性，用药剂量小，副作用潜在风险小，有望成为临床上一类有效的治疗脑缺血的新药。

本发明的目的就是为了解决以上技术问题。

发明内容

本发明的目的之一，在于基于现有技术，提供一种新型的治疗脑缺血的药物组合物，用药剂量小，副作用潜在风险小，治疗效果好。为了达到这个目的，本发明提供一种药物组合物，其包括如下组分鼠尾草素A和ALDH2激活剂，所述ALDH2激活剂为包含3,4-二羟基苯取代基的取代酚类化合物。

进一步地，所述ALDH2激活剂优选为丹参素、丹酚酸A、丹酚酸B或原儿茶醛，或者其组合；特别优选为丹参素。

在进一步的实施方案中，所述鼠尾草素A和ALDH2激活剂的摩尔比为1:3-5，优选为1:3-4。

更进一步地，所述的药物组合物还包含竹叶黄酮，所述鼠尾草素A、ALDH2激活剂和竹叶黄酮的摩尔比为1:3-5:0.2-1，优选为1:3-4:0.5-0.8。

在另一实施方案中，所述药物组合物还包含药学上接受的辅料，例如，所述辅料可选自以下一种或多种组合：纤维素衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、甘露醇、木糖醇、淀粉、环糊精、硬脂酸镁、对羟基苯甲酸乙酯；特别优选为纤维素衍生物，所述纤维素衍生物的例子包括微晶纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠等。

进一步地，所述药物组合物制备成为口服剂型或注射剂型；优选为口服剂型，例如片剂、丸剂、胶囊、口服液等，优选为片剂、胶囊。

本发明的另一目的在于提供所述的药物组合物用于制备治疗脑缺血的药物的应用。

上述所述的医药用途中，根据动物病情以及用药部位可以将药物组合物制备成合适的药物制剂以方便用药，对于本发明药物组合物的给药时间和给药次数需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠的治疗方案应用于人身上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。

具体实施方式

尽管在本申请中示出和描述了本发明优选的实施方案，但是对本领域技术人员而言明显的是，该实施方案仅以实例的方式提供。本领域技术人员将想起大量的变更、变换和置换，这些均在本发明范围内。应理解的是，在实践本发明中，可以使用本申请所述的本发明实施方案的各种备选方案。意在所附权利要求限定了本发明范围并且由此覆盖了在这些权利要求范围内的方法和结构及它们的等同形式。

除非另外定义，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员通常所理解相同的含义。将本申请提及的所有专利和出版物通过引用的方式并入本文。

实施例1药物组合物对神经细胞的缺氧缺糖模型的保护作用

1.实验材料

培养的PC-12细胞，甲氮甲唑蓝(MTT)购自广州化学试剂厂；酶标仪购自Thermo公司；LDH测定试剂盒：南京建成生物工程研究所产品。

2.实验方法

2.1实验分为模型组，用不同的药物组合物、鼠尾草素A、丹参素，尼莫地平阳性对照组和正常组，制作细胞氧糖剥夺再灌注模型组：PC-12细胞于培养第3d换以无糖Earle’s平衡盐溶液充分冲洗若干次，使葡萄糖终浓度小于1mol/L，加入EBSS液，并放入缺氧盒内，持续缓慢通入含有N₂的混合气体4h，取出并吸弃平衡盐缓冲液，换以完全培养基置入CO₂培养箱孵育，模拟体内缺血再灌注的过程，孵育24h；换以无糖EBSS液建立缺糖缺氧模型，在再灌注时间点前分别加入不同药物，其他处理同氧糖剥夺再灌注模型组；尼莫地平阳性对照组：换以无糖EBSS液以建立氧糖剥夺模型，在再灌注时间点前加入尼莫地平，其他处理同氧糖剥夺再灌注模型组；正常组：对细胞不做任何处理。

2.2不同药物对缺糖缺氧再灌注损伤PC-12细胞的细胞活力影响：给予不同药物处理的细胞经氧糖剥夺恢复氧糖正常培养24h后，再加入5mg/mL MTT溶液20μL，继续孵育4h后终止培养。小心吸弃上清液，每孔加入150μL二甲基亚砜DMSO混匀，选择490nm波长测定各孔光吸收值，记录结果。细胞活力(％)＝实验组光吸收值/对照组光吸收值×100％。

2.3采用LDH试剂盒对各孔上清液进行LDH含量检测。

3结果：

表1：不同药物对氧糖剥夺后PC-12细胞的存活率的影响

由表1的结果可见，本发明所述的鼠尾草素A和选自丹参素、丹酚酸A、丹酚酸B或原儿茶醛的ALDH2激活剂的联用显著降低了氧糖剥夺再灌注后对PC-12细胞的损伤率，相较于上述药物的单独使用，明显取得了协同作用。

表2：采用LDH生化试剂盒检测各组细胞上清液中LDH含量

实施例2药物组合物对大鼠MCAO模型的保护作用

模型制备

实验前一天，将大鼠(200-250g)禁食过夜，仅可饮水。实验当天用异氟烷气体麻醉，仰卧位固定，沿颈正中线切开皮肤，暴露右侧颈总动脉，小心分离颈总动脉分叉至颅底部的血管周围的神经及筋膜，分离颈外动脉分支枕动脉、甲状腺上动脉、舌动脉和上颚上颌动脉，对上述动脉进行结扎后剪断。从颈外动脉游离端***直径为0.2mm的丝线，从颈外动脉远心端将尼龙线导入到颈内动脉，插至Willis环大脑中动脉处，以有效阻断大脑中动脉，***的尼龙线长度距颈总动脉分叉处18～20mm。然后将颈外动脉游离端连同腔内尼龙线一并结扎，以防出血。逐层缝合皮下筋膜和皮肤，肌肉注射青霉素防止感染。正常组动物仅分离出颈内动脉。大鼠苏醒10min后进行神经缺陷评分，有明显神经功能缺陷者(>8分)为造型成功。

分组及给药：具体分为正常组、模型组及给药组。造模1小时后，采用尾静脉输注给药的方式给药，给药体积以最大给药体积计算，即均定容成1.0ml/100g(大鼠体重)，输注时间35min。正常组和模型组给予等量生理盐水，造模24h后处死大鼠进行相关检测。

1、死亡率和TTC梗死面积检测：处死各组大鼠前，统计各组死亡率，并用骨钳将鼠脑取出，沿冠状面切成2mm厚的切片，间隔取上述一半脑片放入2％TTC染液中，避光37℃温孵10min进行染色，采用计算机的图象分析软件测量梗死区和全脑面积，计算脑梗死范围(梗死区面积占全脑面积百分比)，具体结果如下：

表3：不同药物对大鼠MCAO模型的保护效果

由表3结果可见，本发明所述的鼠尾草素A和ALDH2激活剂的联用显著降低了大鼠脑梗死面积和大鼠的死亡率，相较于上述药物的单独使用，明显取得了协同作用。

表4：采用ELISA检测方法检测各组大鼠血清中LDH、VEGF和TNF-a含量

实施例3-6本发明药物组合物的片剂制备

按照下表质量称取各组分的药物和除了硬脂酸镁以外的辅料，研细混匀，以70％乙醇制粒过筛，再添加硬脂酸镁混匀，压片即得。

制备包含以下成分(以mg计)的片剂：

表5：本发明药物组合物片剂组分实例

	实施例3	实施例4	实施例5	实施例6
					鼠尾草素A	1	1	1	1
丹参素	3	-	-	-
					单酚酸A	-	3.5	-	-
丹酚酸B	-	-	4	-
					原儿茶醛	-	-		5
甘露醇	55	62	59	60
					微晶纤维素	25	18	22	10
羟甲基纤维素	6	10.5	8	16
					硬脂酸镁	10	5	6	8

实施例7本发明药物组合物的注射剂的制备

称取0.1g鼠尾草素A、0.4g丹参酸/0.3g丹酚酸A/0.3g丹酚酸B/0.4g原儿茶醛、0.7～1.0g聚乙二醇和0.6～0.9g NaCl，加注射用水1L，加热溶解，调pH值至7～7.5，灭菌灌装即得。

本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。