阅读说明：本技术 一种防治脑梗塞的药物组合物 (Pharmaceutical composition for preventing and treating cerebral infarction ) 是由 杨慧 李洪滨 陈伟达 于 2019-10-14 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种药物组合物,其由黄柏碱和芍药苷以及任选的EGCG组成。本发明的药物组合物能够预防或治疗局部及全脑缺血导致的脑组织损伤,具体能够预防或治疗脑出血、脑梗塞、脑血栓等疾病,特别是针对脑梗塞具有非常好的治疗效果,并且安全性高,没有副作用。(The invention relates to a pharmaceutical composition, which consists of phellodendrine, paeoniflorin and optional EGCG. The pharmaceutical composition can prevent or treat brain tissue damage caused by local and whole cerebral ischemia, specifically can prevent or treat diseases such as cerebral hemorrhage, cerebral infarction, cerebral thrombosis and the like, particularly has a very good treatment effect on cerebral infarction, and has high safety and no side effect.)

一种防治脑梗塞的药物组合物

技术领域

本发明涉及药物领域，具体来说，本发明涉及一种包含黄柏碱、芍药苷和任选地EGCG的药物组合物，制备方法，及其用于防治脑梗塞的应用。

背景技术

脑梗塞又被称为缺血性脑卒中，是指因脑部血液供应障碍、缺血、缺氧所导致的局限性脑组织的缺血性坏死或软化。脑梗塞的临床常见类型有脑血栓形成、腔隙性梗死和脑栓塞等，脑梗塞占全部脑卒中的80％；临床表现以猝然昏倒、不省人事、半身不遂、言语障碍、智力障碍为主要特征。脑梗塞不仅给人类健康和生命造成极大威胁，而且给患者、家庭及社会带来极大的痛苦和沉重的负担。

脑梗塞发病后，在多种病理生理机制作用下，引起神经元细胞坏死，最后导致患者神经功能缺损。常规脑梗塞的治疗方案一般只针对脑梗塞病理过程的单一环节或单一因素，而脑梗塞的病理过程极其复杂，理论上多个环节干预将会收到较好的疗效。

我国脑梗塞发病率逐年上升且发病年龄尚有降低趋势，世界卫生组织公布的全球最大的心血管病10年协作研究结果表明，中国脑卒中发病率为250/10万，仅次于西伯利亚地区(为300/10万)，居世界第二位，为我国常见病及多发病，危害人民健康并且给患者家庭带来沉重的精神及经济负担，因此寻找经济有效的治疗方案成为当务之急。

目前治疗脑梗塞的药物较多，特别是中药居多，但治疗效果一般，并且起效慢。例如现有技术CN109731084A公开了一种治疗中风脑梗塞的中药组合物，由以下重量份原料制成：当归12～16份、三七12～18份、全蝎7～13份、桃仁18～22份、葛根7～15份、元胡5～10份、三棱8～12份、黄芪8～12份、牛膝15～25份、水蛭1～9份、荆芥8～12份、枳壳7～13份。

CN108714169A公开了一种治疗急性脑梗塞的药物，由以下重量份的原料制备而成：麝香0.3-0.45份；黄芪120-180份；冰片0.5-0.75份；当归6-9份；赤芍6-9份；桃仁3-4.5份；红花3-4.5份；川芎3-4.5份；地龙3-4.5份。

因此，需要开发出一款能够预防或治疗局部及全脑缺血导致的脑组织损伤，特别能够预防或治疗脑出血、脑梗塞、脑血栓等疾病的药物，并且安全性高，没有副作用。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种药物组合物，该组合物能够预防或治疗局部及全脑缺血导致的脑组织损伤，具体能够预防或治疗脑出血、脑梗塞、脑血栓等疾病，特别是针对脑梗塞具有非常好的治疗效果，并且安全性高，没有副作用。

本发明的目的之一，在于提供一种药物组合物，其特征在于：其由黄柏碱和芍药苷组成，黄柏碱和芍药苷的重量比为0.1-1:1-10。

优选地，黄柏碱和芍药苷的重量比为0.5-1:1-5，优选为1:5。

优选地，所述药物组合物还包括EGCG。

优选地，黄柏碱、芍药苷和EGCG的重量比为0.1-3:1-10:0.5-5。

优选地，黄柏碱、芍药苷和EGCG的重量比为0.5-2:3-6:0.5-3，优选为1:5:1。

黄柏碱，是芸香科植物黄柏的特征性成分和重要活性成分之一，其药理活性显著，现代药理表明其在降血压、抗肾炎、抑制细胞免疫反应、中枢神经抑制等方面均具有显著效果，由其进一步合成的叔胺衍生物昔罗匹林不仅可以引起显著的降压作用，还具有较强的抗肾上腺素的作用，此外，其在抑制细胞免疫方面的显著效果。

芍药苷，亦称芍药花素，是从中药赤芍，白芍中分离的一种蒎烷单萜苦味甙。为吸湿性无定形粉末。存在于毛茛科植物芍药、牡丹、紫牡丹等芍药属植物的根。具有镇静、镇痛、抗炎。解热.解痉作用，对心血管系统具有扩张冠状动脉.增加冠脉流量。对抗急性心肌缺血，抑制血小板凝及降低血压等作用。特别具有保护脑缺血的作用，芍药苷对脑缺血后再灌注期间血脑屏障及脑缺血神经病理改变症状、脑血流量的影响。发现芍药苷对脑缺血后脑水肿、血脑屏障、大脑局部血流量具有保护作用。局灶性脑缺血动物应用芍药苷可以明显减轻脑水肿程度，降低脑梗塞范围，改善神经行为学症状、血脑屏障通透性，增加大脑局部血流量。

EGCG(Epigallocatechin gallate)即表没食子儿茶素没食子酸酯，是绿茶茶多酚的主要组成成分，是从茶叶中分离得到的儿茶素类单体，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗动脉硬化、抗血栓形成、抗血管增生、抗炎以及抗肿瘤作用。

优选地，所述组合物还任选包含药学上可接受的载体。

药学上可接受的载体是指药学上可接受的材料、组合物或运载体，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如，润滑剂、滑石镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌，或硬脂酸)或溶剂包封材料，参与将主题化合物从一个器官或身体的一部分运送或运输到另一个器官或身体的一部分。在与配制品的其他成分相容并且对患者无害的意义上，每种载体必须是“可接受的”。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10)二醇类，如丙二醇；(11)多醇类，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯，聚碳酸酯和/或聚酸酐；和(22)药物配制品中使用的其他无毒相容物质。

本发明的目的之二，在于提供一种所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：按照重量比例将黄柏碱、芍药苷和任选地EGCG以及任选地药学上可接受的载体混合均匀后，制得所述组合物。

本发明的目的之三，在于所述的药物组合物用于制备预防或治疗局部及全脑缺血导致的脑组织损伤药物的用途。

优选地，所述药物组合物用于制备预防或治疗脑出血、脑梗塞、脑血栓药物的用途。

优选地，所述药物组合物用于制备预防或治疗脑梗塞药物的用途。

在用于口服、舌下给药、皮下给药、肌肉给药、静脉内给药、透皮给药、局部给药或直肠给药的药物组合物中，单独使用或与其他活性成分一起使用的活性成分可以与传统的药物载体混合，以给药单位剂型的形式给动物或人给药。适当的给药单位剂型包括口服的形式，如片剂、胶囊剂、丸剂、粉末剂、颗粒剂、口香糖剂型和口服溶液或悬浮液、局部给药的形式、透皮给药的形式、皮下给药的形式、肌肉给药的形式、静脉内给药的形式或眼内和直肠给药的形式。

当制备片状固体组合物的时候，可以在微粉化或未微粉化的活性成分中加入润湿剂，比如月桂基硫酸钠，并将它们与可药用赋形剂，比如二氧化硅、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石粉或类似物质进行混合。可以用蔗糖、各种聚合物或其他适当的物质给片剂包衣，或者对其进行处理，使之具有延长或者缓释的活性，以及连续地释放预定量的活性成分。

通过把一种或几种活性成分与稀释剂，比如乙二醇或甘油酯混合，然后将得到的混合物加入到软胶囊或硬胶囊中可得到胶囊制剂。

呈糖浆或醑剂形式的制剂可含有一种或多种活性成分，同时添加甜味剂，优选是不产生热量的甜味剂、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂，以及增味剂和适当的着色剂。

可以分散在水中的粉末或颗粒可含有一种或多种活性成分，同时混有分散剂或润湿剂，或者悬浮剂，比如聚乙烯基吡咯烷酮，或者混有甜味剂或味道调节剂。

本发明的药物组合物能够预防或治疗局部及全脑缺血导致的脑组织损伤，具体能够预防或治疗脑出血、脑梗塞、脑血栓等疾病，特别是针对脑梗塞具有非常好的治疗效果，并且安全性高，没有副作用。

具体实施方式

实施例详细说明本发明，下面的实施例仅作为例子。

应当理解的是，在说明书和权利要求书中使用的术语或词语不应当理解为具有在字典中限定的含义，而应理解为在以下原则的基础上具有与其在本发明上下文中的含义一致的含义：术语的概念可以适当地由发明人为了对本发明的最佳说明而限定。

实施例1药物组合物对神经细胞的缺氧缺糖模型的保护作用

细胞培养：取冻存PC12细胞株复苏于离心管中，离心取上清后，用含有10％FBS的RPMI1640培养基混悬，接种于培养皿中，用孵箱进行培养传代，在对数生长期时收获细胞，用培养基混悬调整浓度至1×10⁴个/ml铺于24孔板中，用于后续试验。

实验分组：正常对照组，持续通以95％O₂和5％CO₂的混合气；第二组为缺糖缺氧(OGD)模型组：PC12细胞移去正常培养液，换入不含葡萄糖的HBSS溶液(140mM NaCl，3.5mMKCl，12mM MgSO₄，5mM NaHCO₃,1.7mM CaCl₂,0.4mM KH₂PO₄，10mM Hepes)，放入专用的缺氧罐，通以95％N₂和5％CO₂的混合气，缺糖缺氧6h；治疗组，细胞用包含不同药物组合物的DMEM液预处理3h后，细胞再经上述OGD模型6h。

检测指标：

1、采用MTT方法测定各组细胞存活率，细胞存活率＝(对照组OD值-其他组OD值)/对照组OD值×100％。

2、采用金正均q值法进行协同作用判定，q值由以下的公式求得：q＝P_A+B/(P_A+P_B-P_A×P_B)。式中P_A、P_B和P_A+B分别为A药组、B药组和两药联用组治疗率。q＜1说明两药合用后产生拮抗作用；q＞1，说明两药合用后产生协同作用，q＝1说明两药合用后产生相加作用。

3、LDH和SOD活性测定，采用南京建成生物工程研究所的生化试剂盒在全自动生化仪上进行测定，具体检测参照试剂盒说明书。

具体结果如下：

1、采用MTT方法测定各组细胞存活率及q值情况

经Oneway-ANOVA检验，##代表与正常对照组相比，p<0.01；**代表与模型组相比p<0.01。

2、LDH和SOD活性测定

从上述结果可以看出，黄柏碱和芍药苷的药物组合物对神经细胞的缺氧缺糖模型产生非常好的保护作用，并且产生了协同效应，加入EGCG后会进一步提升药物组合物的效果。

实施例2：药物对大鼠脑缺血再灌注模型的影响

试验材料

动物：健康Wistar大鼠，在动物饲养室驯养3天以上，全部为雄性，体重180～220g，共80只。

试验方法

使用麻醉器Wistar大鼠在异氟烷麻醉下(导入时为3％、维持时为2％)通过正中切开来剥离右颈动脉，在总颈动脉和外颈动脉系上线后，暂时阻断总颈动脉和外颈动脉的血流。从外颈动脉***塞栓子，切断外颈动脉后，从外颈动脉和内颈动脉的分叉部向内颈动脉***10.5mm，封闭中大脑动脉的起始部后闭合了手术创伤。在制作脑梗塞时的手术中使用加热垫，保持小鼠的直肠温度在36.5～37.5℃。将缺血中的小鼠放回笼中自由饲养。梗塞30分钟后，在麻醉下拔下塞栓子，闭合了切口。

动物分组与给药实验：动物随机分为8组，每组10只，总体分为假手术组、模型组和药物组。受试物质的给予在缺血再灌流的6和24小时后共计给予2次。将给药溶液填充在1mL的注射器中，使用27G的注射针从尾静脉给予0.2mL的液量。假手术组和模型组分别注射等容积的生理盐水。

脑梗塞区域的测定：

于缺血再灌流的2天后将小鼠在麻醉下切断腹主动脉放血致死，采集脑。使用小鼠用脑切片机将所采集的脑从大脑和小脑的边界起制作成4片厚2mm的大脑横断切片。将它们用1％的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在37℃下染色30分钟。使用显微镜拍摄脑切片，关于梗塞灶的大小，使用图像分析软件求出各脑切片的左侧脑面积、右侧脑非障碍(损伤)面积和右侧脑障碍面积。脑整体面积如下计算：脑整体面积＝左侧脑面积×2。

脑梗塞的体积根据平截头体的体积的求出方法通过下式进行计算：

[s+S+√(sS)]×h/3(式中，s：切片1的面积；S：切片2的面积；h：切片间的距离)。

求出相邻的各切片间的3个部位的体积进行总计，算出脑梗塞体积的百分比：

脑梗塞体积(％)＝脑梗塞体积/脑整体体积×100％。

统计处理：

测定值以平均值和标准误差(mean±SEM)表示。使用表计算软件通过单因素方差分析(一元配置的分散分析)对测定值进行统计分析，在p＜0.05的情况下认为存在显著差异。

神经缺陷评分，按照Longa 5分制评分标准于再灌注后24h进行行为学评分。

0分：正常，无神经功能损伤；1分：左侧前爪不能完全伸展，轻度神经功能缺损；2分：行走时，大鼠向左侧(瘫痪侧)转圈，中度神经功能损伤；3分：行走时，大鼠身体向左侧(瘫痪侧)倾倒。重度神经功能损伤；4分：不能自发行走，有意识丧失。

试验结果

实施例3：本发明药物组合物片剂

称取黄柏碱8g、芍药苷16g、混合均匀，加入羟甲基纤维素钠160g、糊精50g，过16目筛制湿颗粒，将湿颗粒于50～60℃烘干，干颗粒用20目筛整粒，加2％硬酯酸镁，混匀，压片，片重0.2g/片。

实施例4：本发明药物组合物滴丸剂

称取黄柏碱4g、芍药苷8g、EGCG4g，与聚乙二醇-4000 20g、聚乙二醇-6000 4g水浴加热至熔融，冷却剂为药用二甲基硅油，料液温度为70℃，滴制成丸，干燥，制成25mg/丸滴丸。

实施例5：本发明药物组合物粉针剂

称取黄柏碱4g、芍药苷8g、EGCG4g，与乳糖10g混匀，加注射用水100mL，80℃加热成混悬液，备用；另称取甘露醇20g，加注射用水100mL，80℃搅拌条件下，将混悬液缓缓加入，加入0.05％注射用活性炭在80℃搅拌30min，微孔滤膜滤过，滤液定容至300mL，分装，装量3mL/支，冷冻干燥即得。

以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。