阅读说明：本技术 烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶及其编码基因BtDDC和应用 (Bemisia tabaci MED cryptomorphic dopamine decarboxylase, coding gene BtDDC and application thereof ) 是由 吕志创 申晓娜 冀顺霞 梁林 郭建英 刘万学 万方浩 于 2019-10-26 设计创作，主要内容包括：本发明属于农业生物技术领域,具体涉及烟粉虱MED隐种多巴脱羧酶及其编码基因BtDDC和应用。烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明明确了BtDDC基因在烟粉虱MED隐种中不同温度下的表达模式及该基因对MED隐种的温度耐受性所起的关键作用,可用于破坏烟粉虱温度耐受性,进而用于防治烟粉虱的危害及扩散。(The invention belongs to the technical field of agricultural biology, and particularly relates to bemisia tabaci MED cryptomorphic dopa decarboxylase, a coding gene BtDDC and application thereof. The amino acid sequence of the Bemisia tabaci MED cryptomorphic dopamine decarboxylase is shown as SEQ ID No. 1. The invention defines the expression modes of the BtDDC gene in different temperatures of the Bemisia tabaci MED cryptic species and the key effect of the gene on the temperature tolerance of the MED cryptic species, and can be used for destroying the temperature tolerance of the Bemisia tabaci and further preventing and controlling the harm and the diffusion of the Bemisia tabaci.)

烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶及其编码基因BtDDC和应用

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及烟粉虱MED隐种多巴脱羧酶及其编码基因BtDDC和应用。

背景技术

烟粉虱(Bemisia tabaci(Gennadius))属节肢动物门，昆虫纲，半翅目，粉虱科，小粉虱属，又称棉粉虱或甘薯粉虱。烟粉虱的最适发育温度为26～30℃，发育临界温度在10.8～12.5℃之间，致死高温区在37～42℃之间。17℃和35℃是烟粉虱正常生长发育的最低和最高的温度极限。较强的温度逆境适应能力是烟粉虱在世界范围内广泛分布的原因。随着温室效应的增加，全球气温逐年增高，烟粉虱MED隐种较强的温度逆境适应能力使其在不同地理环境下的成功适应，这已经广泛引起了人们对其入侵机制的理论探讨，对于其温度适应性的分子机制更是近几年来的研究热点之一。

对烟粉虱MED种在中国分布的时间及范围的调查发现，其入侵致我国短短十五年的时间便已扩散至绝大部分省市，其较强的温度适应能力与其体内抗逆物质的含量有着极大关联。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA(doublestrand RNA,dsRNA)导入细胞后能特异性地降解该mRNA，从而产生相应的功能表型缺失。RNAi广泛存在于生物界，通过RNAi技术沉默昆虫体内某些基因，使昆虫的某些能力增强或丧失，也能在特定时间抑制其功能基因表达使昆虫的发育停留在某个阶段，进而达到利用或防治其危害的目的。由于烟粉虱个体体积小，注射dsRNA不易操作、费时等限制，而饲喂dsRNA具有简便、易于操作等特点而在烟粉虱研究中得以应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶。

本发明的再一目的在于提供上述烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶的编码基因BtDDC。

本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组表达载体。

本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组菌株。

本发明的再一目的在于提供上述编码基因的应用。

本发明的再一目的在于提供降低烟粉虱隐种MED温度耐受性的方法。

根据本发明

具体实施方式

的烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶，其氨基酸序列如SEQID NO.1所示：

MEGTVFTPNMEVAEFQDFAKAMIDYISKYMSSIRDRPVLPKLEPGYLRPLIPESAPEEPESWHNVMEDIERVIMPGVTHWHSPRFHAYFPTACSYPAIVADMLSDAIACIGFTWIASPACTELEVVMMDWLGKMLNLPDDFLACGKKGGGGVIQGTASEATLVALLGAKTRAIRRTKEEHPDWTDLEIASKLVAYCSKQAHSSVERAGLLGSVPFRLLPTDDMYRLQGNTLEEAIKKDKADGLVPFYVVATLGTTSCCSFDLLKEIGPVCKNEEVWLHVDAAYAGSAFICPEYQYLLEGVEYAESFNFNPHKWMLINFDCSAMWLKNPDEVVNAFNVDPLYLKHDHQGAAPDYRHWQIPLGRRFRSLKLWFVLRLYGIKNLQTHIRHQIGLAHQFEAYVNEDEEFELFNEVLMGLVCFRVKGSNELNEQVLNRINKKGKIHMVPSKIKDVFFLRFAVCSRFTNAEDVKYSWSEVKATTQEIKKELAKQ

本发明的烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶具有DDC蛋白典型的结构特征：包括吡咯依赖的脱羧酶保守结构域，位于该序列的44-421位，其中包含一个磷酸吡啶连接位点，位于305-326位。

根据本发明具体实施方式的烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶的编码基因BtDDC，其基因组核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：

TACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTCCCGGCCGCCATGGCGGCCGCGGGAATTCGATTGGATCGCCCTTCTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGTCGTTTTATTTTTTCGTCCACCACCCATTCACCATGGAGGGCACCGTTTTTACCCCAAACATGGAGGTCGCGGAGTTCCAAGACTTTGCAAAGGCGATGATCGATTATATTAGCAAATACATGTCATCAATTCGAGACAGGCCTGTTCTACCTAAATTGGAGCCAGGATACTTGAGACCTTTGATCCCGGAGTCTGCACCAGAGGAACCAGAATCATGGCATAATGTTATGGAAGATATTGAAAGAGTTATTATGCCAGGAGTAACTCACTGGCATTCACCCCGCTTCCATGCATACTTCCCGACAGCCTGCTCTTACCCTGCCATAGTTGCTGACATGTTAAGTGACGCCATTGCTTGCATTGGATTTACCTGGATCGCAAGTCCAGCTTGCACAGAACTCGAGGTTGTGATGATGGACTGGCTCGGTAAGATGCTTAATCTCCCTGATGACTTTTTGGCCTGTGGAAAGAAAGGAGGTGGTGGTGTTATTCAGGGCACTGCTAGTGAGGCAACTCTTGTCGCCCTTCTGGGTGCCAAAACCAGAGCAATCCGCCGAACAAAAGAAGAGCATCCTGATTGGACAGATCTTGAAATCGCCTCCAAATTGGTAGCGTACTGCTCCAAACAAGCCCACTCCTCGGTGGAACGAGCAGGTCTTCTGGGAAGCGTCCCGTTCAGACTCCTACCTACAGACGATATGTACAGATTACAAGGCAACACTTTAGAAGAAGCTATCAAAAAAGACAAAGCTGACGGTCTCGTTCCTTTCTATGTTGTTGCAACTCTAGGAACGACCTCCTGCTGTTCATTTGATCTGCTCAAAGAAATTGGACCAGTGTGTAAAAATGAAGAAGTTTGGCTTCATGTTGATGCTGCGTATGCAGGATCTGCCTTCATTTGTCCCGAGTATCAGTATTTGTTAGAAGGGGTAGAGTACGCTGAGTCATTCAATTTTAATCCTCATAAGTGGATGCTCATAAACTTTGACTGCTCAGCCATGTGGTTAAAAAATCCAGATGAAGTTGTAAATGCATTCAATGTTGATCCTCTTTACCTGAAGCACGACCACCAAGGAGCTGCTCCTGATTATAGGCACTGGCAAATTCCACTCGGCAGGCGATTCCGTTCATTGAAATTGTGGTTTGTTCTGCGATTGTATGGAATAAAGAACCTTCAAACCCACATTCGTCATCAAATTGGACTCGCCCATCAGTTTGAAGCGTACGTCAATGAAGATGAGGAGTTTGAATTATTCAACGAAGTACTCATGGGTCTTGTCTGCTTCAGAGTTAAGGGCTCCAATGAATTGAACGAACAAGTGCTGAACAGGATCAACAAAAAAGGCAAAATCCACATGGTTCCCTCAAAAATCAAGGATGTCTTCTTCCTCCGTTTTGCCGTCTGTTCACGTTTCACAAACGCCGAAGATGTCAAATACTCGTGGAGTGAAGTCAAAGCCACAACCCAAGAAATCAAAAAAGAGCTAGCCAAGCAGTGATTGAAAGTTCCGACAAATATTTAAGTTATTCCACCTCCATGTATTATCTTTGTTAAGTTTTAGTACATTTAATCTCAAGATTCAATGGAAAAGCTCTCTATTTTTAGTAAGTTATTTTTACAGATTGACTATTCAAGCAGCACTAATGTTTTGTGCTCCAGGAGCCAAGCTCAAAGTTTTTAGGAACTCATTGAGTCTCACCCTATCTTGAATAACGAAATGAAAAAACTTAGCATGAAGATGAAATGGATTAAATTAAAATTTCTTCTAAGTGTAATTGAAGAATTGCGTTAAATATATATGCTTTTATTCCTCTCACTGCGAAAAGTATCAAAGACGATTCTCTAATAGCATAACTTCATAATTTCATTATTTAAAAATATTTTATACTTCAACCTCCGAACACCAAAGGGCACAGCCATGTCAACAAATCAACAACTACCAGACGGAGGAATGTATCTTAATTGCACTGTTTCAGTATGCTTGCTAATTTTTTTTCTTTCAAGGAAAACTGTTTTATGAATTTTCTTGAAAACTCTAATGATTTTTCTTTACCTTCGTGAGAAAAGACTCTAAAATTTTCAGATTGATTCGTGCGATGGTTCTTGCATGAAAATATAAAATCTTTCTAAAAACATTGAAACAGTCCAGGCAAGATATGTTCCTTTGTGCAGGAGACGGCAAAATGTCTCATTTCCTAAAAATTCGTTTGAGTGTCTGAAGAATTTGATGGATATTTCATCGTAGGCACTAAATAAAAGTGTAGCATGGCTGTTGGCATCTTCCTTTGATCAAGTGAAATTGTATCCAATAGTTTTGATTGTTAAGTTTGTTGTTTTCAATGCATTGTTCCAGTATTAGCAGAAAATTTATTATTTTACGATTACAATTATTGTTATTTATGGATGTAATTATAATTGTATGTGTAAGTGTAGATTTTAACTTTTTATGACAGGAATTGAATTTTAGACCATTCGTTTTTCAAGGGCCCTCATCCGATGCCCATTTCCTTGATTCTAGACAATTTTAATCAAATCATGATCTGTGAAAAACAAGTTTTATGATGCTTGCCAATGTGGTTTCTTTTTTTTTCTTTTTTTAAACTTATCTCACTCCGTACTTTGTGAATGATGAGCTGTGACATTATATGCTAGTATTTCAAAAATTTAATAATTTTTTGTAAAATTAAGTGTTTCTTATTTTATAGTCTTTTCATCCCTCGAAACACCATCTGTGACACCATTAATTCTTATTCTAATACACCTTAAGATCATCTCCAATTTAATGAAGATTTCATACATTTTGTTTTTTTTATAATATGAAAATTACTAATGTAAAATTTTCTTATCTTTTTGAATTGACTCATTTGCTCAAGCTACTTTTCAAAATAAAAATTCCAATTATTCTGTCAGCCTCAAAAAAAAAAAAAAATCTCAGTCGCTGAGTAGCACATAAATATTTAAAATCCTTGATTGATTGCCTAAAATTTCTAAGCTCATTTCAAAATCTGTATGTTAAATAGAATTCTATAGTCATTTGTATCATTTTGAATTGTCAAATTTTAAAAATTTCAGTCTCCTCACCTGTGTTGTCGGCTATTCTAATTCCCTCCTTAAATGTTCATCATCGGTGTTTAAAGAGCCTCAGGCAAGATTTTATGTTTGAATTGAATTGTTTTTTCAACATTCTACAATTGATATCTAGAGACAATGCATTAAAAGTTTAATGTTTTGTATGAGAAACTTTGTTCAATATTGCGCTAAAGTATTTTAGAAAAGTCAAATACCACACACCCAATCCCCCCCATTTGGATTAAATTATTGCAATCTTGTTCTAGTCTGAAAAGCAGCACAGTTTGAAGGTTTCACCAATGATCGTAAACATAAAAATCCATTTAATTAAAGAATTAACATAGAAAGGTTAGATAAGACTCTTGTAATAAAAGACACAAGACAATATAATGAATAATAATTTATTGTAAAAAGTTTAATTTATTC

烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶的编码基因BtDDC的cDNA序列如SEQ IDNO.3所示:

ATGGAGGGCACCGTTTTTACCCCAAACATGGAGGTCGCGGAGTTCCAAGACTTTGCAAAGGCGATGATCGATTATATTAGCAAATACATGTCATCAATTCGAGACAGGCCTGTTCTACCTAAATTGGAGCCAGGATACTTGAGACCTTTGATCCCGGAGTCTGCACCAGAGGAACCAGAATCATGGCATAATGTTATGGAAGATATTGAAAGAGTTATTATGCCAGGAGTAACTCACTGGCATTCACCCCGCTTCCATGCATACTTCCCGACAGCCTGCTCTTACCCTGCCATAGTTGCTGACATGTTAAGTGACGCCATTGCTTGCATTGGATTTACCTGGATCGCAAGTCCAGCTTGCACAGAACTCGAGGTTGTGATGATGGACTGGCTCGGTAAGATGCTTAATCTCCCTGATGACTTTTTGGCCTGTGGAAAGAAAGGAGGTGGTGGTGTTATTCAGGGCACTGCTAGTGAGGCAACTCTTGTCGCCCTTCTGGGTGCCAAAACCAGAGCAATCCGCCGAACAAAAGAAGAGCATCCTGATTGGACAGATCTTGAAATCGCCTCCAAATTGGTAGCGTACTGCTCCAAACAAGCCCACTCCTCGGTGGAACGAGCAGGTCTTCTGGGAAGCGTCCCGTTCAGACTCCTACCTACAGACGATATGTACAGATTACAAGGCAACACTTTAGAAGAAGCTATCAAAAAAGACAAAGCTGACGGTCTCGTTCCTTTCTATGTTGTTGCAACTCTAGGAACGACCTCCTGCTGTTCATTTGATCTGCTCAAAGAAATTGGACCAGTGTGTAAAAATGAAGAAGTTTGGCTTCATGTTGATGCTGCGTATGCAGGATCTGCCTTCATTTGTCCCGAGTATCAGTATTTGTTAGAAGGGGTAGAGTACGCTGAGTCATTCAATTTTAATCCTCATAAGTGGATGCTCATAAACTTTGACTGCTCAGCCATGTGGTTAAAAAATCCAGATGAAGTTGTAAATGCATTCAATGTTGATCCTCTTTACCTGAAGCACGACCACCAAGGAGCTGCTCCTGATTATAGGCACTGGCAAATTCCACTCGGCAGGCGATTCCGTTCATTGAAATTGTGGTTTGTTCTGCGATTGTATGGAATAAAGAACCTTCAAACCCACATTCGTCATCAAATTGGACTCGCCCATCAGTTTGAAGCGTACGTCAATGAAGATGAGGAGTTTGAATTATTCAACGAAGTACTCATGGGTCTTGTCTGCTTCAGAGTTAAGGGCTCCAATGAATTGAACGAACAAGTGCTGAACAGGATCAACAAAAAAGGCAAAATCCACATGGTTCCCTCAAAAATCAAGGATGTCTTCTTCCTCCGTTTTGCCGTCTGTTCACGTTTCACAAACGCCGAAGATGTCAAATACTCGTGGAGTGAAGTCAAAGCCACAACCCAAGAAATCAAAAAAGAGCTAGCCAAGCAGTGA

本发明还提供包含上述烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶基因BtDDC的重组表达载体和重组菌株。

根据本发明具体实施方式的降低烟粉虱隐种MED的温度耐受性的方法，包括饲喂烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶基因BtDDC的dsRNA的步骤，其中，扩增所述dsRNA的引物序列为：

BtDDC-F：5’-TAATACGACTCACTATAGGGCGCAGAACAAACCACAAT-3’；

BtDDC-R：5’-GCCAAAACCAGAGCAATC-3’。

本发明提供了防治烟粉虱的药剂，所述药剂包含烟粉虱MED隐种多巴胺脱羧酶基因BtDDC的dsRNA片段。

本发明的有益效果：

本发明从烟粉虱MED隐种中克隆BtDDC基因的cDNA，荧光定量PCR显示在高温和低温胁迫5h内BtDDC基因表达量均出现显著上调的过程；通过饲喂BtDDC基因dsRNA发现，烟粉虱MED隐种成虫的高温击倒时间显著减少，低温击倒恢复时间增加。

本发明明确了BtDDC基因在烟粉虱MED隐种中不同温度下的表达模式及该基因对MED隐种的温度耐受性所起的关键作用，BtDDC基因可用于破坏烟粉虱温度耐受性，进而用于防治烟粉虱的危害及扩散。

附图说明

图1显示BtDDC基因在烟粉虱MED隐种中梯度温度下的表达模式分析结果；

图2显示饲喂BtDDC基因dsRNA、dsEGFP和饲喂10％蔗糖溶液三个处理的BtDDC基因表达量变化情况；

图3显示饲喂BtDDC基因dsRNA、dsEGFP和饲喂10％蔗糖溶液3h后烟粉虱MED隐种成虫高温击倒时间；

图4显示饲喂BtDDC基因dsRNA、dsEGFP和饲喂10％蔗糖溶液3h后烟粉虱MED隐种成虫低温击倒恢复时间。

具体实施方式

实施例1烟粉虱MED隐种BtDDC基因全长cDNA序列克隆

1.1总RNA提取及cDNA合成

分别取不同温度胁迫条件下烟粉虱成虫200头，放入1.5mL的离心管，液氮冷冻后利用研磨棒将其研成粉末，然后提取RNA，-80℃保存以备用。

根据Transgen公司的反转录试剂盒(Super Script First-StrandSynthesisSystem)说明，反转录合成cDNA。

1.2PCR扩增烟粉虱MED隐种BtDDC基因

基因的中间片段

(1)设计PCR扩增烟粉虱MED隐种BtDDC基因的中间片段引物：

BtDDC-F：AGCATTTTTTGTTTGAGC，

BtDDC-R：ATGAGTGAGCCTGGTCCG。

(2)以cDNA为模板，利用(1)所设引物，PCR扩增烟粉虱MED隐种BtDDC基因的中间片段。

(3)回收目的片段，并测序。

1.3烟粉虱MED隐种BtDDC基因5’RACE和3’RACE获得

(1)根据步骤(2)所获得的烟粉虱MED隐种BtDDC基因的中间片段序列，设计5’RACE和3’RACE特异性引物，PCR扩增BtDDC基因的5’和3’端序列：

5’RACE Inner Primer:CGGCAGGCGATTCCGTTCATTGA，

5’RACE Outer Primer:CGCCCATCAGTTTGAAGCGTACATC；

3’RACE Inner Primer:GGGCGAGTCCAATTTGATGACGA，

3’RACE Outer Primer:GGAGCCCTTAACTCTGAAGCAGAC。

(2)采用SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit(Clonetch)试剂盒，获得BtDDC基因的cDNA序列全长，具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，得到BtDDC的基因组序列3655bp；编码487个氨基酸，该基因所编码的酶具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

实施例2BtDDC基因的表达特性分析

2.1分析烟粉虱MED隐种在不同温度下的表达模式

选取初羽化的烟粉虱MED隐种成虫，分别在0、12、26、35、40℃下对烟粉虱成虫进行胁迫处理。各3个生物学重复，共3000头成虫，胁迫结束后立即置于液氮中冷冻3分钟后-80℃保存。按照实施例1的方法提取RNA并反转录成cDNA。

2.2荧光定量PCR检测不同组织表达量：

(1)设计荧光定量PCR的BtDDC基因和两个内参基因(EF1-α、β-tublin)的引物：

BtDDC-F:CAGACAAGGGTGACAAATGGGA，

BtDDC-R:TACTGGGGTAAGAACTAGCGGC；

EF1-α-F:TAGCCTTGTGCCAATTTCCG，

EF1-α-R:CCTTCAGCATTACCGTCC；

β-tublin-F：TGTCAGGAGTAACGACGTGTTTG，

β-tublin-R：TTCGGGAACGGTAAGTGCTC。

用2^-ΔΔCt方法计算基因相对表达量。采用SPSS 16.0统计软件分析。表达量的比较采用Fisher’s least significant difference(平均数±标准误(Means±SE)表示数据，P<0.05。

结果如图1所示，对BtDDC进行不同温度胁迫下表达模式的分析，实时荧光定量PCR结果表明，BtDDC在高温和低温胁迫5h内表达量均出现显著上调的过程。

2.3BtDDC基因的dsRNA处理对烟粉虱MED隐种耐热性的影响

1、dsRNA模板的制备：

(1)设计合成加上T7启动子(下划线所示序列)的引物序列：

T7+BtDDC-F：

5’-TAATACGACTCACTATAGGGCGCAGAACAAACCACAAT-3’；

BtDDC-R：5’-GCCAAAACCAGAGCAATC-3’。

(2)总RNA提取及cDNA合成：同实施例1。

(3)T7引物PCR扩增、产物纯化，纯化所得的PCR产物即为合成dsRNA的模板。

2、dsRNA的合成与纯化

使用RNAi Kit试剂盒合成和纯化dsRNA，按照试剂盒说明书进行操作。

3、dsRNA饲喂

Parafilm膜预先用DEPC水处理以去除RNA酶。在浓度为10％的蔗糖液中加入dsRNA，浓度为0.3～0.5μg/μL。根据实验需求，对Parafilm膜夹营养液法做了相应的改进：取初羽化烟粉虱成虫约200头，放入两端通透的玻璃管中，用双层Parafilm覆盖玻璃管上端，在两膜之间加入浓度为10％的蔗糖溶液200μL，并加入dsRNA，并使其终浓度为0.3-0.5μg/μL，玻璃管下端用纱布覆上，保持通风透气。玻璃管周围及下端用黑色塑料包裹，使烟粉虱向顶端Paraflim膜聚集更好的取食dsRNA，将装置放入人工气候箱，温度26±0.5℃，24h光照，相对湿度为60-70％，饲喂3h BtDDC基因的dsRNA后，将烟粉虱收集于指型管中，一组放入预热的高温水浴锅进行热击倒，并开始记录至烟粉虱不能直立站立的时间，处理温度为45℃。另一组放入低温水浴锅中进行冷击倒十分钟后取出记录击倒后恢复时间，处理温度为-5℃。以饲喂dsEGFP且灭菌处理过的10％的蔗糖溶液的烟粉虱作为阳性对照，和饲喂不含dsRNA且灭菌处理过的10％的蔗糖溶液的烟粉虱作为阴性对照，每组3个重复。

分析饲喂不同溶液后烟粉虱MED隐种的BtDDC基因表达量变化、高温击倒时间以及冷击倒时间。

结果如图2所示，饲喂BtDDC基因dsRNA的烟粉虱MED隐种的BtDDC基因的表达量显著低于饲喂dsEGFP组和蔗糖组的表达量。

结果如图3所示，饲喂BtDDC基因dsRNA的烟粉虱MED隐种的热击倒时间显著低于饲喂dsEGFP组和蔗糖组的热击倒时间(P<0.05)。

结果如图4所示，饲喂BtDDC基因dsRNA的烟粉虱MED隐种的冷击倒恢复时间显著高于饲喂dsEGFP组和蔗糖组的冷击倒恢复时间。

因此，说明本发明的BtDDC基因在烟粉虱MED隐种高温及低温耐受性中均起着关键作用。

序列表

<110> 中国农业科学院植物保护研究所

<120> 烟粉虱MED 隐种多巴胺脱羧酶及其编码基因BtDDC和应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 488

<212> PRT

<213> 烟粉虱(Bemisia tabaci Gennadius)

<400> 1

Met Glu Gly Thr Val Phe Thr Pro Asn Met Glu Val Ala Glu Phe Gln

1 5 10 15

Asp Phe Ala Lys Ala Met Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Tyr Met Ser Ser

20 25 30

Ile Arg Asp Arg Pro Val Leu Pro Lys Leu Glu Pro Gly Tyr Leu Arg

35 40 45

Pro Leu Ile Pro Glu Ser Ala Pro Glu Glu Pro Glu Ser Trp His Asn

50 55 60

Val Met Glu Asp Ile Glu Arg Val Ile Met Pro Gly Val Thr His Trp

65 70 75 80

His Ser Pro Arg Phe His Ala Tyr Phe Pro Thr Ala Cys Ser Tyr Pro

85 90 95

Ala Ile Val Ala Asp Met Leu Ser Asp Ala Ile Ala Cys Ile Gly Phe

100 105 110

Thr Trp Ile Ala Ser Pro Ala Cys Thr Glu Leu Glu Val Val Met Met

115 120 125

Asp Trp Leu Gly Lys Met Leu Asn Leu Pro Asp Asp Phe Leu Ala Cys

130 135 140

Gly Lys Lys Gly Gly Gly Gly Val Ile Gln Gly Thr Ala Ser Glu Ala

145 150 155 160

Thr Leu Val Ala Leu Leu Gly Ala Lys Thr Arg Ala Ile Arg Arg Thr

165 170 175

Lys Glu Glu His Pro Asp Trp Thr Asp Leu Glu Ile Ala Ser Lys Leu

180 185 190

Val Ala Tyr Cys Ser Lys Gln Ala His Ser Ser Val Glu Arg Ala Gly

195 200 205

Leu Leu Gly Ser Val Pro Phe Arg Leu Leu Pro Thr Asp Asp Met Tyr

210 215 220

Arg Leu Gln Gly Asn Thr Leu Glu Glu Ala Ile Lys Lys Asp Lys Ala

225 230 235 240

Asp Gly Leu Val Pro Phe Tyr Val Val Ala Thr Leu Gly Thr Thr Ser

245 250 255

Cys Cys Ser Phe Asp Leu Leu Lys Glu Ile Gly Pro Val Cys Lys Asn

260 265 270

Glu Glu Val Trp Leu His Val Asp Ala Ala Tyr Ala Gly Ser Ala Phe

275 280 285

Ile Cys Pro Glu Tyr Gln Tyr Leu Leu Glu Gly Val Glu Tyr Ala Glu

290 295 300

Ser Phe Asn Phe Asn Pro His Lys Trp Met Leu Ile Asn Phe Asp Cys

305 310 315 320

Ser Ala Met Trp Leu Lys Asn Pro Asp Glu Val Val Asn Ala Phe Asn

325 330 335

Val Asp Pro Leu Tyr Leu Lys His Asp His Gln Gly Ala Ala Pro Asp

340 345 350

Tyr Arg His Trp Gln Ile Pro Leu Gly Arg Arg Phe Arg Ser Leu Lys

355 360 365

Leu Trp Phe Val Leu Arg Leu Tyr Gly Ile Lys Asn Leu Gln Thr His

370 375 380

Ile Arg His Gln Ile Gly Leu Ala His Gln Phe Glu Ala Tyr Val Asn

385 390 395 400

Glu Asp Glu Glu Phe Glu Leu Phe Asn Glu Val Leu Met Gly Leu Val

405 410 415

Cys Phe Arg Val Lys Gly Ser Asn Glu Leu Asn Glu Gln Val Leu Asn

420 425 430

Arg Ile Asn Lys Lys Gly Lys Ile His Met Val Pro Ser Lys Ile Lys

435 440 445

Asp Val Phe Phe Leu Arg Phe Ala Val Cys Ser Arg Phe Thr Asn Ala

450 455 460

Glu Asp Val Lys Tyr Ser Trp Ser Glu Val Lys Ala Thr Thr Gln Glu

465 470 475 480

Ile Lys Lys Glu Leu Ala Lys Gln

485

<210> 2

<211> 3655

<212> DNA

<213> 烟粉虱(Bemisia tabaci Gennadius)

<400> 2

tactataggg cgaattgggc ccgacgtcgc atgctcccgg ccgccatggc ggccgcggga 60

attcgattgg atcgcccttc taatacgact cactataggg caagcagtgg tatcaacgca 120

gagtactttt tttttttttt tttttttttt ttttttcgtc gttttatttt ttcgtccacc 180

acccattcac catggagggc accgttttta ccccaaacat ggaggtcgcg gagttccaag 240

actttgcaaa ggcgatgatc gattatatta gcaaatacat gtcatcaatt cgagacaggc 300

ctgttctacc taaattggag ccaggatact tgagaccttt gatcccggag tctgcaccag 360

aggaaccaga atcatggcat aatgttatgg aagatattga aagagttatt atgccaggag 420

taactcactg gcattcaccc cgcttccatg catacttccc gacagcctgc tcttaccctg 480

ccatagttgc tgacatgtta agtgacgcca ttgcttgcat tggatttacc tggatcgcaa 540

gtccagcttg cacagaactc gaggttgtga tgatggactg gctcggtaag atgcttaatc 600

tccctgatga ctttttggcc tgtggaaaga aaggaggtgg tggtgttatt cagggcactg 660

ctagtgaggc aactcttgtc gcccttctgg gtgccaaaac cagagcaatc cgccgaacaa 720

aagaagagca tcctgattgg acagatcttg aaatcgcctc caaattggta gcgtactgct 780

ccaaacaagc ccactcctcg gtggaacgag caggtcttct gggaagcgtc ccgttcagac 840

tcctacctac agacgatatg tacagattac aaggcaacac tttagaagaa gctatcaaaa 900

aagacaaagc tgacggtctc gttcctttct atgttgttgc aactctagga acgacctcct 960

gctgttcatt tgatctgctc aaagaaattg gaccagtgtg taaaaatgaa gaagtttggc 1020

ttcatgttga tgctgcgtat gcaggatctg ccttcatttg tcccgagtat cagtatttgt 1080

tagaaggggt agagtacgct gagtcattca attttaatcc tcataagtgg atgctcataa 1140

actttgactg ctcagccatg tggttaaaaa atccagatga agttgtaaat gcattcaatg 1200

ttgatcctct ttacctgaag cacgaccacc aaggagctgc tcctgattat aggcactggc 1260

aaattccact cggcaggcga ttccgttcat tgaaattgtg gtttgttctg cgattgtatg 1320

gaataaagaa ccttcaaacc cacattcgtc atcaaattgg actcgcccat cagtttgaag 1380

cgtacgtcaa tgaagatgag gagtttgaat tattcaacga agtactcatg ggtcttgtct 1440

gcttcagagt taagggctcc aatgaattga acgaacaagt gctgaacagg atcaacaaaa 1500

aaggcaaaat ccacatggtt ccctcaaaaa tcaaggatgt cttcttcctc cgttttgccg 1560

tctgttcacg tttcacaaac gccgaagatg tcaaatactc gtggagtgaa gtcaaagcca 1620

caacccaaga aatcaaaaaa gagctagcca agcagtgatt gaaagttccg acaaatattt 1680

aagttattcc acctccatgt attatctttg ttaagtttta gtacatttaa tctcaagatt 1740

caatggaaaa gctctctatt tttagtaagt tatttttaca gattgactat tcaagcagca 1800

ctaatgtttt gtgctccagg agccaagctc aaagttttta ggaactcatt gagtctcacc 1860

ctatcttgaa taacgaaatg aaaaaactta gcatgaagat gaaatggatt aaattaaaat 1920

ttcttctaag tgtaattgaa gaattgcgtt aaatatatat gcttttattc ctctcactgc 1980

gaaaagtatc aaagacgatt ctctaatagc ataacttcat aatttcatta tttaaaaata 2040

ttttatactt caacctccga acaccaaagg gcacagccat gtcaacaaat caacaactac 2100

cagacggagg aatgtatctt aattgcactg tttcagtatg cttgctaatt ttttttcttt 2160

caaggaaaac tgttttatga attttcttga aaactctaat gatttttctt taccttcgtg 2220

agaaaagact ctaaaatttt cagattgatt cgtgcgatgg ttcttgcatg aaaatataaa 2280

atctttctaa aaacattgaa acagtccagg caagatatgt tcctttgtgc aggagacggc 2340

aaaatgtctc atttcctaaa aattcgtttg agtgtctgaa gaatttgatg gatatttcat 2400

cgtaggcact aaataaaagt gtagcatggc tgttggcatc ttcctttgat caagtgaaat 2460

tgtatccaat agttttgatt gttaagtttg ttgttttcaa tgcattgttc cagtattagc 2520

agaaaattta ttattttacg attacaatta ttgttattta tggatgtaat tataattgta 2580

tgtgtaagtg tagattttaa ctttttatga caggaattga attttagacc attcgttttt 2640

caagggccct catccgatgc ccatttcctt gattctagac aattttaatc aaatcatgat 2700

ctgtgaaaaa caagttttat gatgcttgcc aatgtggttt cttttttttt ctttttttaa 2760

acttatctca ctccgtactt tgtgaatgat gagctgtgac attatatgct agtatttcaa 2820

aaatttaata attttttgta aaattaagtg tttcttattt tatagtcttt tcatccctcg 2880

aaacaccatc tgtgacacca ttaattctta ttctaataca ccttaagatc atctccaatt 2940

taatgaagat ttcatacatt ttgttttttt tataatatga aaattactaa tgtaaaattt 3000

tcttatcttt ttgaattgac tcatttgctc aagctacttt tcaaaataaa aattccaatt 3060

attctgtcag cctcaaaaaa aaaaaaaaat ctcagtcgct gagtagcaca taaatattta 3120

aaatccttga ttgattgcct aaaatttcta agctcatttc aaaatctgta tgttaaatag 3180

aattctatag tcatttgtat cattttgaat tgtcaaattt taaaaatttc agtctcctca 3240

cctgtgttgt cggctattct aattccctcc ttaaatgttc atcatcggtg tttaaagagc 3300

ctcaggcaag attttatgtt tgaattgaat tgttttttca acattctaca attgatatct 3360

agagacaatg cattaaaagt ttaatgtttt gtatgagaaa ctttgttcaa tattgcgcta 3420

aagtatttta gaaaagtcaa ataccacaca cccaatcccc cccatttgga ttaaattatt 3480

gcaatcttgt tctagtctga aaagcagcac agtttgaagg tttcaccaat gatcgtaaac 3540

ataaaaatcc atttaattaa agaattaaca tagaaaggtt agataagact cttgtaataa 3600

aagacacaag acaatataat gaataataat ttattgtaaa aagtttaatt tattc 3655

<210> 3

<211> 1467

<212> DNA

<213> 烟粉虱(Bemisia tabaci Gennadius)

<400> 3

atggagggca ccgtttttac cccaaacatg gaggtcgcgg agttccaaga ctttgcaaag 60

gcgatgatcg attatattag caaatacatg tcatcaattc gagacaggcc tgttctacct 120

aaattggagc caggatactt gagacctttg atcccggagt ctgcaccaga ggaaccagaa 180

tcatggcata atgttatgga agatattgaa agagttatta tgccaggagt aactcactgg 240

cattcacccc gcttccatgc atacttcccg acagcctgct cttaccctgc catagttgct 300

gacatgttaa gtgacgccat tgcttgcatt ggatttacct ggatcgcaag tccagcttgc 360

acagaactcg aggttgtgat gatggactgg ctcggtaaga tgcttaatct ccctgatgac 420

tttttggcct gtggaaagaa aggaggtggt ggtgttattc agggcactgc tagtgaggca 480

actcttgtcg cccttctggg tgccaaaacc agagcaatcc gccgaacaaa agaagagcat 540

cctgattgga cagatcttga aatcgcctcc aaattggtag cgtactgctc caaacaagcc 600

cactcctcgg tggaacgagc aggtcttctg ggaagcgtcc cgttcagact cctacctaca 660

gacgatatgt acagattaca aggcaacact ttagaagaag ctatcaaaaa agacaaagct 720

gacggtctcg ttcctttcta tgttgttgca actctaggaa cgacctcctg ctgttcattt 780

gatctgctca aagaaattgg accagtgtgt aaaaatgaag aagtttggct tcatgttgat 840

gctgcgtatg caggatctgc cttcatttgt cccgagtatc agtatttgtt agaaggggta 900

gagtacgctg agtcattcaa ttttaatcct cataagtgga tgctcataaa ctttgactgc 960

tcagccatgt ggttaaaaaa tccagatgaa gttgtaaatg cattcaatgt tgatcctctt 1020

tacctgaagc acgaccacca aggagctgct cctgattata ggcactggca aattccactc 1080

ggcaggcgat tccgttcatt gaaattgtgg tttgttctgc gattgtatgg aataaagaac 1140

cttcaaaccc acattcgtca tcaaattgga ctcgcccatc agtttgaagc gtacgtcaat 1200

gaagatgagg agtttgaatt attcaacgaa gtactcatgg gtcttgtctg cttcagagtt 1260

aagggctcca atgaattgaa cgaacaagtg ctgaacagga tcaacaaaaa aggcaaaatc 1320

cacatggttc cctcaaaaat caaggatgtc ttcttcctcc gttttgccgt ctgttcacgt 1380

ttcacaaacg ccgaagatgt caaatactcg tggagtgaag tcaaagccac aacccaagaa 1440

atcaaaaaag agctagccaa gcagtga 1467