一种中药复合制剂的质量检测方法及其应用
阅读说明：本技术 一种中药复合制剂的质量检测方法及其应用 (Quality detection method and application of traditional Chinese medicine compound preparation ) 是由 江玉娟 毋立华 陈俊亮 高超 孙桂雪 郝洪慧 龙玉波 张亚欣 于 2021-09-07 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种活血化瘀膏药的质量检测方法及其应用,属于质量评价技术领域。本发明通过研究发现,东方活血膏中的不同产地的中药成分中所含具体多糖类化合物的含量有较为明显的差别,以四川都江堰产的川芎和江西产的川芎为例,产地为四川都江堰的川芎中的多糖类化合物主要以葡萄糖、半乳糖为主,江西产的川芎中多糖类化合物主要以葡萄糖、阿拉伯糖为主,因此可通过对多糖类化合物的检测从而实现对东方活血膏的原料产地控制。因此具有良好的实际应用之价值。(The invention provides a quality detection method of a plaster for promoting blood circulation to remove blood stasis and application thereof, belonging to the technical field of quality evaluation. According to the invention, researches show that the contents of specific polysaccharide compounds in the traditional Chinese medicine components of different producing areas in the oriental blood circulation promoting ointment are obviously different, for example, the ligusticum wallichii produced in the city of Sichuan river and the ligusticum wallichii produced in the west of Jiang, the polysaccharide compounds in the ligusticum wallichii produced in the producing area of the city of Sichuan river mainly comprise glucose and galactose, and the polysaccharide compounds in the ligusticum wallichii produced in the west of Jiang mainly comprise glucose and arabinose, so that the raw material producing area of the oriental blood circulation promoting ointment can be controlled by detecting the polysaccharide compounds. Therefore, it has good practical application value.)
技术领域
本发明属于质量评价技术领域，具体涉及一种中药复合制剂的质量检测方法。
背景技术
公开该
背景技术
部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。东方活血膏由生川乌、生草乌、红花、川芎、元胡、乳香（制）、没药（制）、牛膝、羌活、独活、穿山甲（制）等36味中药组成，收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十六册。其具有祛风散寒、活血化瘀、舒筋活络的功效，用于风寒湿痹所致的肩臂腰腿疼痛、肢体麻木。由于效果良好，经临床验证，疗效显著，在临床上备受患者青睐。
目前对于东方活血膏质量标准仅收载了冰片和血竭的鉴别试验，且无含量测定项，同时也未对东方活血膏中原料进行产地溯源分析。以东方活血膏中使用的川穹为例，其性温，味辛，归肝、心、胆经。具有祛风止痛，活血行气的功效。一般而言，川芎道地产区主要集中在四川都江堰地区，目前是以四川都江堰、彭州、崇州、什邡、新都等地为中心形成了主产区，为著名的川产道地药材。而其他产地药效一般普遍弱于川产道地药材，因此，在进行东方活血膏质量评估时对不同产地的川芎药材进行评估显得尤为重要。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种中药复合制剂的质量检测方法，所述中药复合制剂为东方活血膏。本发明通过研究发现，东方活血膏中的不同产地的中药成分（如川穹等）中所含具体多糖类化合物的含量有较为明显的差异，以四川都江堰产的川芎和江西产的川芎为例，产地为四川都江堰的川芎中的多糖类化合物主要以葡萄糖、半乳糖为主，江西产的川芎中多糖类化合物主要以葡萄糖、阿拉伯糖为主，因此可通过对东方活血膏中多糖类化合物的含量检测从而实现对东方活血膏的原料产地控制。基于上述研究，从而完成本发明。
为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一个方面，提供一种中药复合制剂的质量检测方法，其中，所述中药复合制剂为东方活血膏，所述质量检测方法包括：
（1）供试品溶液的制备：取东方活血膏，提取并纯化其中的多糖类化合物，将得到的多糖类化合物用超纯水定容，用微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液；
（2）混合对照品溶液制备：精密称取葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖5种对照品，加入超纯水配置成混合对照品溶液；
（3）测定：分别精密量取步骤（1）制备得到的供试品溶液和步骤（2）制备得到的对照品溶液，基于HPLC进行检测。
当葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖与鼠李糖的质量比为1~3:5~10：1~4:1~2:0.1~0.5时，表明东方活血膏中选用药材为道地药材。
本发明基于前期的研究发现，以四川都江堰产的川芎和江西产的川芎为例，产地为四川都江堰的川芎中的多糖类化合物主要以葡萄糖、半乳糖为主，江西产的川芎中多糖类化合物主要以葡萄糖、阿拉伯糖为主，可见不同产地川芎的多糖类化合物种类和数量不同，而基于整体分析，并以此提出以多糖类化合物为对照品的东方活血膏的质量检测方法。
本发明的第二个方面，提供所述质量检测方法在东方活血膏原料产地溯源追踪中的应用。
所述一个或多个技术方案的有益技术效果：
本发明基于前期的研究发现，以四川都江堰产的川芎和江西产的川芎为例，产地为四川都江堰的川芎中的多糖类化合物主要以葡萄糖、半乳糖为主，江西产的川芎中多糖类化合物主要以葡萄糖、阿拉伯糖为主，可见不同产地川芎的多糖类化合物种类和数量不同，基于此提出以多糖类化合物为对照品的东方活血膏指纹图谱鉴定方法。
本发明中以葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖5种多糖类化合物为对照品，覆盖面广，代表性强，具有快捷、稳定、精密度高、重现性强等优点，能够用于该类制剂的质量控制；
本发明
具体实施方式
中对多糖类化合物的提取纯化方法能够使得其中的有效成分更好得溶出，使得检测结果更加精确。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
本发明的一个典型具体实施方式中，提供一种中药复合制剂的质量检测方法，其中，所述中药复合制剂为东方活血膏，所述质量检测方法包括：
（1）供试品溶液的制备：取东方活血膏，提取纯化其中的多糖类化合物，将得到的多糖类化合物用超纯水定容，用微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液；
（2）混合对照品溶液制备：精密称取葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖5种对照品，加入超纯水配置成混合对照品溶液；
（3）测定：分别精密量取步骤（1）制备得到的供试品溶液和步骤（2）制备得到的对照品溶液，基于HPLC进行检测。
取东方活血膏，加入石油醚回流去除脂质；将滤渣干燥后加入超纯水使用水蒸气进行蒸馏，将滤液凝缩后加入氯仿和正丁醇的混合溶液去除其中的蛋白质，浓缩后加入无水乙醇进行醇沉，洗涤后得到多糖；
将得到的多糖转移至容量瓶中，用超纯水定容至刻度，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
进一步优选的，石油醚回流的条件为：70-90℃回流2-3 h，回流次数为2-3次；
进一步优选的，水蒸气蒸馏的条件为：蒸馏3-4次，每次4-5小时；
优选的，加入氯仿和正丁醇的混合溶液去除蛋白质的操作进行多次，直到无蛋白质为止；氯仿和正丁醇的混合溶液中氯仿和正丁醇的体积比为4-6:1；
本发明实施方式中多糖化合物的提取和纯化方法可以最大程度地将药剂中的多糖化合物提取出来，并且可以将药剂中的脂质和蛋白质类化合物去除，减少脂质和蛋白类化合物对后续检测的干扰，使得后续的高效液相色谱分析能够出峰更加明显，使检测结果更加精确。
在本发明的实施方式中，高效液相色谱检测采用的检测器为：蒸发光散射检测器（ELSD）；
在本发明的实施方式中，高效液相色谱检测采用的色谱柱为：TSKgel ODS-140HTP（2.1 mmIDX10 cm，2.3μm）；
在本发明的实施方式中，流动相：A：乙腈，B水；
在本发明的实施方式中，梯度洗脱条件为：0～15 min，10％～50％A；15～30 min，50～80％A；30～45 min，80～10％A；45～60 min，10～5％A。
在本发明的实施方式中，流动相流速为1.0 ml/min；柱温为30℃；进样量10 μl。
本发明基于前期的研究发现，以四川都江堰产的川芎和江西产的川芎为例，产地为四川都江堰的川芎中的多糖类化合物主要以葡萄糖、半乳糖为主，江西产的川芎中多糖类化合物主要以葡萄糖、阿拉伯糖为主，可见不同产地川芎的多糖类化合物种类和数量不同，基于此提出以多糖类化合物为对照品的东方活血膏的质量检测方法。
进一步的，本发明研究发现，当检测出的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖与鼠李糖的质量比为1~3:5~10：1~4:1~2:0.1~0.5时，表明东方活血膏中选用药材候选为道地药材。否则，不候选为道地药材。
本发明的又一具体实施方式中，提供所述质量检测方法在东方活血膏原料产地溯源追踪中的应用。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。其中，实施例1-3中东方活血膏选取药材均为道地药材。实验例中川芎选自江西产地。
实施例1
（1）对照品溶液的制备：称取葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖各适量，精密称定，加超纯水制成每1 ml含320 μg阿魏酸的溶液，作为对照品溶液；
（2）供试品溶液制备：将同一批次除去布衬的东方活血膏精密称定，加入石油醚90℃下回流2.5 h去除脂质，回流3次；过滤将滤渣干燥后加入超纯水使用水蒸气进行蒸馏，蒸馏3次，每次5小时，将滤液凝缩后加入体积比为4:1的氯仿和正丁醇的混合溶液去除其中的蛋白质，去除蛋白质的操作进行多次，直到无蛋白质为止，浓缩后加入无水乙醇进行醇沉，洗涤后得到川芎多糖；将得到的川芎多糖转移至容量瓶中，用超纯水定容至刻度，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
（3）高效液相色谱法测定
将按步骤（1）和（2）方法制备得到的供试品溶液和混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，色谱条件为：以 TSKgel ODS-140HTP（2.1 mmIDX10 cm,2.3μm）为色谱柱；以乙腈-水溶液为流动相，按下表进行梯度洗脱，流动相流速1.0 ml/min，柱温为30℃；进样量10μl；
时间（min）
乙腈（%）
水（%）
0
10
90
15
50
50
30
80
20
45
10
90
60
5
95
以外标法进行东方活血膏中五种糖类成分进行定量分析，以已知浓度的糖类的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，对提取液进行测定，测得检出提取液中五种糖类成分的色谱峰面积，代入标准曲线，求得样品中葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖和鼠李糖的含量。实验结果如表1所示。
表1样品中糖类的测定结果(n=5)
方法学考察
以东方活血膏中各糖类成分的保留时间和峰面积为考察指标，对该方法的精密度、重复性和稳定性分别进行了考察。精密度试验表明，各糖类成分保留时间的RSD值均低于0.96%，峰面积的RSD值均低于1.4%，结果表明仪器精密度良好。同时，通过采用6次重复性试验表明，各环糖类成分保留时间的RSD值均低于1.323%，峰面积的RSD值均低于5%，结果表明方法的重复性良好。24 h内稳定性试验表明，各糖类成分保留时间的RSD值在0.06%～0.53%，峰面积的RSD值在0.82%～1.63%，表明供试品溶液在24h内稳定。以上结果说明，本发明采用的方法具有较好的精密度、稳定性和重现性，可以用于东方活血膏中糖类成分的准确测定。
实施例2
选用另一批次东方活血膏进行检测，实验结果如表2所示。
表2样品中糖类的测定结果(n=5)
实施例3
选用另一批次东方活血膏进行检测，实验结果如表3所示。
表3样品中糖类的测定结果(n=5)
实验例1
选用非道地药材制成的东方活血膏进行检测，实验结果如表4所示。
表4样品中糖类的测定结果(n=5)
实验例2
选用非道地药材制成的东方活血膏进行检测，实验结果如表5所示。
表5样品中糖类的测定结果(n=5)
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。