一种复方他克莫司乳膏及其制备方法与应用
阅读说明：本技术 一种复方他克莫司乳膏及其制备方法与应用 (Compound tacrolimus cream and preparation method and application thereof ) 是由 孙仁山 刘楠 曾悦 于 2021-08-23 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种复方他克莫司乳膏及其制备方法与应用,该试剂中含有甲硝唑、酮康唑和他克莫司,其中他克莫司含量为0.03～0.1％(质量百分比)。甲硝唑、酮康唑和他克莫司具有极好的协同增效效果,能对皮肤真菌、酵母菌和一些深部真菌起到较好的抑制作用,并提高了对厌氧菌感染的治疗效果,对于股癣、手癣和足癣等反复发作导致的炎症具有针对性和根治性的治疗效果,且三者结合后,使用剂量更低。且不含激素成分,安全性更高,患者接受度更好。(The invention discloses a compound tacrolimus emulsifiable paste as well as a preparation method and an application thereof, wherein the compound tacrolimus emulsifiable paste contains metronidazole, ketoconazole and tacrolimus, and the content of the tacrolimus is 0.03-0.1% (mass percentage). The metronidazole, the ketoconazole and the tacrolimus have excellent synergistic effect, can play a good role in inhibiting dermatophytes, saccharomycetes and some deep fungi, improve the treatment effect on anaerobic bacterial infection, have targeted and radical treatment effect on inflammation caused by repeated attacks of tinea cruris, tinea manuum, tinea pedis and the like, and have lower dosage after the combination of the metronidazole, the ketoconazole and the tacrolimus. And the composition does not contain hormone components, has higher safety and better patient acceptance.)
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种复方他克莫司乳膏及其制备方法与应用。
背景技术
在相关技术中，常用的抗真菌或抗菌消炎复方外用制剂，如皮康霜、皮康王、复方康纳乐霜、复方达克宁乳膏、曲安奈德益康唑乳膏、复方氯倍他索乳膏、益康唑、曲安奈德等，均可以用于皮炎、湿疹、手足癣、体癣、股癣、花斑癣和尿布性皮炎等常见皮肤疾病，但这些复方外用制剂中均或多或少的含有糖皮质激素。糖皮质激素具有抑制免疫反应、抗过敏、抗炎等作用，外用后能减轻充血和水肿，使瘙痒和皮损等临床症状迅速缓解，但其也存在着较大的使用弊端，如反复使用带来的激素使用依赖性，特别是在面部、阴部长期大面积使用较强的激素制剂后，容易引起皮肤萎缩、变薄、毛细血管扩张、色素斑、多毛、皮肤老化等多种不良反应，因此，对这些抗真菌或抗菌消炎复方外用制剂带来了一定的限制性。
因此，开发一种不含激素成分，尤其是不含有糖皮质激素等强效激素的复方外用制剂对于临床上常见皮肤疾病的治疗具有极大的意义。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种复方他克莫司乳膏及其制备方法与应用，其不含任何激素成分，无明显的副作用，能有效治疗湿疹、神经性皮炎、结节性痒疹、扁平苔藓等多种皮肤疾病，具有极高的临床应用价值。
本发明的第一个方面，提供一种组合物，该组合物中含有甲硝唑、酮康唑和他克莫司。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述组合物中的他克莫司含量为0.03～0.1％(质量百分比)。
在本发明的一些优选实施方式中，所述组合物中的他克莫司含量为0.05％(质量百分比)。
发明人发现，在本发明中，使用0.03％～0.1％的他克莫司制备得到的他克莫司软膏从处方成分构成方面规避了糖皮质激素的副作用，降低了试剂所能带来的潜在副作用，且兼具对皮肤真菌、酵母菌和一些深部真菌的抑制作用以及提高了厌氧菌感染的治疗效果。尤其是当组合物中的他克莫司浓度为0.05％时，疗效最佳。
他克莫司是一种新型免疫抑制剂，主要通过抑制白介素-2的释放，发挥抑制T淋巴细胞的作用。其还是一种特异的Th4抑制剂，不具有糖皮质激素的副作用，不会引起皮肤色素沉着、表皮变薄、血管扩张、毛囊发炎等作用。
发明人发现，在本发明中，甲硝唑、酮康唑和他克莫司的复配具有极好的互补增强效果，在传统用药中，他克莫司仅用于面部等敏感区域的抗炎治疗，而酮康唑和甲硝唑则用于治疗脂溢性皮炎，三者结合后，具有更强的抗真菌和细菌的能力，对于股癣、手癣和足癣等反复发作导致的炎症具有针对性和根治性的治疗效果，且三者结合后，使用剂量更低，安全性更高，患者接受度更好。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述组合物中甲硝唑、酮康唑和他克莫司的质量比为(10～20)：(5～15)：(0.1～1)。
在本发明的一些优选实施方式中，所述组合物中甲硝唑、酮康唑和他克莫司的质量比为(15～20)：(8～12)：(0.3～1)。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述组合物中还含有尿囊素、樟脑和冰片中的至少一种。
在本发明的一些优选实施方式中，所述组合物中还含有尿囊素、樟脑和冰片。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述组合物中还含有辅剂。
在本发明的一些优选实施方式中，所述辅剂包括稳定剂、乳化剂、保湿剂、防腐剂、吸收促进剂和增稠剂中的至少一种。
当然，本领域技术人员可以根据实际使用需求，合理调整辅剂的种类，以实现其治疗效果。
在本发明的一些优选实施方式中，所述吸收促进剂为月桂氮卓酮。
在本发明的一些优选实施方式中，所述稳定剂为十八醇。
在本发明的一些优选实施方式中，所述乳化剂为硬脂酸和三乙醇胺。
在本发明的一些优选实施方式中，所述保湿剂为液状石蜡和甘油。
在本发明的一些优选实施方式中，所述防腐剂为尼泊金乙酯。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，按质量份计，所述组合物中含有15～20份甲硝唑、8～12份酮康唑、0.3～1份他克莫司、8～12份月桂氮卓酮、60～65份十八醇、70～75份硬脂酸、80～90份液状石蜡、3～5份三乙醇胺、140～150份甘油、0.5～1份尼泊金乙酯、1～3份尿囊素、20～25份樟脑和15～20份冰片。
在本发明的一些优选实施方式中，按质量份计，所述组合物中含有15～20份甲硝唑、8～12份酮康唑、0.3～1份他克莫司、10份月桂氮卓酮、65份十八醇、75份硬脂酸、90份液状石蜡、5份三乙醇胺、150份甘油、1份尼泊金乙酯、3份尿囊素、25份樟脑和20份冰片。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述组合物的剂型包括但不限于：粉剂、溶液剂、乳剂和胶囊剂。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物的剂型为乳膏。
本发明的第二个方面，提供本发明第一个方面所述组合物的制备方法，包括如下步骤：
制备油相混合物：75～85℃加热混合十八醇、硬脂酸、月桂氮卓酮和液状石蜡，再加入酮康唑和他克莫司，即得油相混合物；
制备水相混合物：甘油加水混合，然后加入三乙醇胺、尼泊金乙酯和尿囊素，75～85℃加热，加入甲硝唑，即得水相混合物；
混合油相混合物和水相混合物，均质，加入樟脑和冰片，即得。
根据本发明的第二个方面，在本发明的一些实施方式中，所述均质的条件为3900～4100rpm，均质14～16min。
在本发明的一些优选实施方式中，所述均质的条件为4000rpm，均质15min。
在本发明的一些优选实施方式中，所述组合物的制备方法具体为：
(1)取十八醇、硬脂酸、月桂氮卓酮、液状石蜡加热溶化，待温度升至约80℃时，加入酮康唑，搅拌至完全溶解，得到油相混合物。
(2)取甘油，加水混合均匀，然后加入三乙醇胺、尼泊金乙酯和尿囊素，加热至约80℃，再加入甲硝唑，搅拌至完全溶解，得到水相混合物。
(3)将步骤(2)中制备得到的水相混合物缓缓加入至步骤(1)中制备得到的油相混合物中，边加边搅拌，然后用均质乳化机乳化(均质的条件为4000rpm，均质15min)，再用搅拌机缓缓搅拌(200rpm)至温度上升至约45℃时，加入樟脑、冰片，混合均匀后冷却，即得。
本发明的第三个方面，提供本发明第一个方面所述组合物或本发明第二个方面所述的制备方法制备得到的组合物在制备皮肤抗菌消炎药物中的应用。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述皮肤抗菌消炎药物中的他克莫司含量为0.03～0.1％(质量百分比)。
在本发明的一些优选实施方式中，所述皮肤抗菌消炎药物中的他克莫司含量为0.05％(质量百分比)。
发明人发现，在本发明中，使用0.03％～0.1％的他克莫司制备得到的他克莫司软膏从处方成分构成方面规避了糖皮质激素的副作用，降低了试剂所能带来的潜在副作用，且兼具对皮肤真菌、酵母菌和一些深部真菌的抑制作用以及提高了厌氧菌感染的治疗效果。尤其是当组合物中的他克莫司浓度为0.05％时，疗效最佳。
根据本发明的第三个方面，在本发明的一些实施方式中，所述皮肤抗菌消炎药物的适应症包括：湿疹、神经性皮炎、虫咬皮炎、异位性皮炎、手足癣、褶烂或脂溢性皮炎。
本发明的有益效果是：
1.本发明中的组合物中含有甲硝唑、酮康唑和他克莫司，具有极好的协同增效效果，能对皮肤真菌、酵母菌和一些深部真菌起到较好的抑制作用，并提高了对厌氧菌感染的治疗效果，对于股癣、手癣和足癣等反复发作导致的炎症具有针对性和根治性的治疗效果，且三者结合后，使用剂量更低，安全性更高，患者接受度更好。
2.本发明中的组合物不含任何激素成分，克服了传统用药中对于治疗本发明适应症相关疾病往往需要附加激素的问题，规避了激素带来的副作用影响，具有极高的安全性和稳定性。
附图说明
图1为本发明实施例2中的复方他克莫司乳膏针对于他克莫司的色谱图；
图2为本发明实施例2中的复方他克莫司乳膏针对于酮康唑的色谱图。A为对照品，B为实验品；
图3为使用本发明实施例1～3中的复方他克莫司乳膏后12～48小时后的小鼠照片；
图4为使用本发明实施例2中的复方他克莫司乳膏治疗前后的对比图；
图5为使用不含酮康唑的乳膏治疗前后的对比图；
图6为使用不含他克莫司的乳膏治疗前后的对比图。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明。
所使用的实验材料和试剂，若无特别说明，均为常规可从商业途径所获得的耗材和试剂。
实施例1
一种复方他克莫司乳膏，由如下组分制备得到：甲硝唑、酮康唑、他克莫司、月桂氮卓酮、十八醇、硬脂酸、液状石蜡、三乙醇胺、甘油、尼泊金乙酯、尿囊素、水、樟脑和冰片。
其制备方法为：
(1)取十八醇、硬脂酸、月桂氮卓酮、液状石蜡加热溶化，待温度升至80℃时，加入酮康唑和他克莫司，搅拌至完全溶解，得到油相混合物。
(2)取甘油，加水混合均匀，然后加入三乙醇胺、尼泊金乙酯和尿囊素，加热至80℃，再加入甲硝唑，搅拌至完全溶解，得到水相混合物。
(3)将步骤(2)中制备得到的水相混合物缓缓加入至步骤(1)中制备得到的油相混合物中，边加边搅拌，然后用均质乳化机(均质的条件为4000rpm，均质15min)乳化，再用搅拌机缓缓搅拌(200rpm)至温度上升至约45℃时，加入樟脑、冰片，混合均匀后冷却，即得。
本实施例中的复方他克莫司乳膏各组分含量如表1所示。
实施例2
一种复方他克莫司乳膏，由如下组分制备得到：甲硝唑、酮康唑、他克莫司、月桂氮卓酮、十八醇、硬脂酸、液状石蜡、三乙醇胺、甘油、尼泊金乙酯、尿囊素、水、樟脑和冰片。
其制备方法为：
(1)取十八醇、硬脂酸、月桂氮卓酮、液状石蜡加热溶化，待温度升至80℃时，加入酮康唑和他克莫司，搅拌至完全溶解，得到油相混合物。
(2)取甘油，加水混合均匀，然后加入三乙醇胺、尼泊金乙酯和尿囊素，加热至80℃，再加入甲硝唑，搅拌至完全溶解，得到水相混合物。
(3)将步骤(2)中制备得到的水相混合物缓缓加入至步骤(1)中制备得到的油相混合物中，边加边搅拌，然后用均质乳化机(均质的条件为4000rpm，均质15min)乳化，再用搅拌机缓缓搅拌(200rpm)至温度上升至约45℃时，加入樟脑、冰片，混合均匀后冷却，即得。
本实施例中的复方他克莫司乳膏各组分含量如表1所示。
实施例3
一种复方他克莫司乳膏，由如下组分制备得到：甲硝唑、酮康唑、他克莫司、月桂氮卓酮、十八醇、硬脂酸、液状石蜡、三乙醇胺、甘油、尼泊金乙酯、水、尿囊素、樟脑和冰片。
其制备方法为：
(1)取十八醇、硬脂酸、月桂氮卓酮、液状石蜡加热溶化，待温度升至80℃时，加入酮康唑和他克莫司，搅拌至完全溶解，得到油相混合物。
(2)取甘油，加水混合均匀，然后加入三乙醇胺、尼泊金乙酯和尿囊素，加热至80℃，再加入甲硝唑，搅拌至完全溶解，得到水相混合物。
(3)将步骤(2)中制备得到的水相混合物缓缓加入至步骤(1)中制备得到的油相混合物中，边加边搅拌，然后用均质乳化机(均质的条件为4000rpm，均质15min)乳化，再用搅拌机缓缓搅拌(200rpm)至温度上升至约45℃时，加入樟脑、冰片，混合均匀后冷却，即得。
本实施例中的复方他克莫司乳膏各组分含量如表1所示。
表1实施例1～3中的复方他克莫司乳膏组分含量表
效果验证试验
(1)基础性质检测：
①药物剂型和性状检测：
根据《中国药典》2005年版二部附录乳膏剂项下有关的各项规定检测实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏的药物剂型和性状是否符合标准。
结果表明，上述实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏外表呈现乳剂型基质的白色乳膏，且各项检测结果均符合《中国药典》2005年版二部附录乳膏剂项下有关的各项规定标准。
②他克莫司含量检测：
使用高效液相色谱法(按外标法以峰面积计算)检测实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏中的他克莫司含量，其中，色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为0.05mol/L磷酸氢钠溶液(用85％磷酸调节pH至2.5)∶乙腈∶甲醇体积比为425∶475∶100的混合液，检测波长为240nm，理论板数不少于2000，进样量为20μL。
以他克莫司标准品作为对照，其中，他克莫司对照的处理方法为：
取他克莫司标准品，加入甲醇稀释至他克莫司终浓度为25μg/mL。
他克莫司检测样品的处理方法为：
取实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏(约2.5mg)，加入70mL甲醇，80℃水浴加热并充分振摇使其溶解，冷却至室温后再次加入甲醇使其定容至100mL，摇匀，冰浴放置2h，过滤，滤液即为他克莫司检测样品。
结果如图1所示。
从图1中可以发现，以实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏作为测试对象，其主峰的保留时间与对照品的保留时间一致，说明实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏中的他克莫司含量约为25μg/mL。
③酮康唑含量检测：
使用高效液相色谱法(按外标法以峰面积计算)检测实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏中的酮康唑含量，其中，色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇，检测波长为239nm，理论板数不少于2000，进样量为20μL。
以酮康唑标准品作为对照，其中，酮康唑对照的处理方法为：
取经80℃减压干燥至恒重的酮康唑标准品，加入甲醇得到终浓度为0.1mg/mL酮康唑对照品溶液。
酮康唑检测样品的处理方法为：
取实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏(约0.5mg)，加入适量甲醇，80℃水浴加热使其溶解，冷却至室温后再次加入甲醇使其定容至100mL，摇匀，冰浴放置2h，过滤，滤液即为酮康唑检测样品。
同时，利用显色反应再次定性验证实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏是否含有酮康唑，具体方法为：
取适量的实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏，加入氯仿中，混匀离心后取氯仿层液体，置于水浴上蒸干液体，加入0.1mol/L盐酸溶液10mL，水浴加热，使酮康唑充分溶解，过滤，除去滤渣，加入数滴碘化铋钾，观察溶液是否出现橙红色沉淀。
结果如图2所示。
结果如图2所示，在加入碘化铋钾后，待测溶液中出现橙红色沉淀，说明实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏中含有酮康唑，而且，根据色谱图显示，以实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏作为测试对象，其主峰的保留时间与对照品的保留时间一致，说明实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏中的酮康唑含量约为0.1mg/mL。
(2)药物刺激性检测：
为了验证实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏是否具有皮肤刺激性，采用动物实验进行检测。
随机选择健康小鼠3只，在每只小鼠背部中线两侧各选一处剃毛，剃毛面积为2cm×3cm。采用自身对照试验法，在一侧剃毛处涂覆实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏，另一侧涂覆乳剂基质(不含任何药用成分)，观察并记录12、24、48h后的皮肤反应。
结果如图3所示。
在涂覆实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏后，各涂药部位均无红肿、红斑、水疱、湿疹等现象，与空白基质一侧比较无差异，因此，可以表明实施例1～3中制备得到的复方他克莫司乳膏无刺激性，外用安全。
(3)产品稳定性检测：
①振荡稳定性：
按照实施例1～3中的方法制备若干复方他克莫司乳膏，随机抽取3批各10g作为检测样品。将检测样品装入带刻度的离心管中离心15min(4000r/min)，观察其是否出现破乳分层现象。
②极端条件稳定性：
随机抽取3批各20g作为检测样品。将检测样品装入密闭塑料盒内，分别置于55℃烘箱恒温烘烤6h，以及置于-15℃冰箱内冷藏24h，观察其是否出现破乳分层现象。
③持久稳定性：
随机抽取各批次样品留样观察1、3、6、12个月。
结果显示，实施例1～3中的方法制备若干复方他克莫司乳膏在离心后无破乳分层现象，振荡稳定性良好。且在高温及低温极端环境下保存后，同样无破乳分层现象，说明实施例1～3中的方法制备若干复方他克莫司乳膏极端条件稳定性强。而各批次样品留样观察1、3、6、12个月后均无显著变化，外观色泽良好，各项检查符合标准规定，表明该产品具有持久稳定性。
实际效果检测
使用实施例2中的复方他克莫司乳膏作为检测样品，采用实质临床实验验证其有效性。
随机选择348例皮肤病患者作为对象，统计发现共包括湿疹156例，神经性皮炎87例，虫咬皮炎69例，其它36例(包括异位性皮炎、手足癣和脂溢性皮炎等)。其中，男性患者196例，女性患者152例，年龄分布为19～69岁，平均年龄34.5±0.65岁。
使用方法为：将实施例2中的复方他克莫司乳膏涂于患处，2次/d，疗程2周。
疗效标准为：观察患者皮疹情况。
痊愈：皮损全部消退，且痒感消失。
显效：皮损消退75％以上，且痒感明显减轻。
好转：皮损消退35％以上，且痒感有所减轻。
无效：连续用药4d后任一项症状无改变。
以不添加酮康唑和不添加他克莫司的乳膏作为对照，其他组分的含量和制备方法同实施例2。
结果如图4～6和表2所示。
表2复方他克莫司乳膏治疗湿疹皮炎临床疗效
结果发现，在上述348个病例中，痊愈252例，显效60例，好转36例，治愈率达到了72.4％，而总有效率达到100％。而且在回访病人中未见皮肤萎缩、毛细血管扩张等不良反应，说明实施例2中的复方他克莫司乳膏具有极好的治疗效果。
综上所述，在使用0.03％～0.1％的他克莫司制备得到的实施例1～3中的他克莫司软膏从处方成分构成方面规避了糖皮质激素的副作用，降低了试剂所能带来的潜在副作用。而且，在实际使用中，0.05％他克莫司浓度疗效良好，在加入咪唑类抗真菌药酮康唑后，加强了对皮肤真菌、酵母菌和一些深部真菌的抑制作用。此外，复配的甲硝唑则提高了厌氧菌感染的治疗效果，使其可进一步应用于足趾缝等皱褶部位的皮炎湿疹，扩大了该复方制剂的适应症。该复配组合避免了“本应该用抗真菌药物的，用了糖皮质激素；该用皮炎湿疹药物的，用了达克宁”的问题，也在另一方面显示出了多种组分间的复配效果，证实了其在治疗湿疹、神经性皮炎和手足癣等皮肤病方面起效快、疗效显著的特点。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
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