西达本胺及其衍生物的用途
阅读说明：本技术 西达本胺及其衍生物的用途 (Application of xidabenamine and derivatives thereof ) 是由 黄旭 鲁先平 潘德思 王绿化 于 2020-10-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及药物技术领域,公开了西达本胺及其衍生物的用途。本发明揭示了西达本胺具有抗肿瘤放射治疗增敏作用,西达本胺联合放射治疗可以更强地抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡,同时抑制肿瘤细胞的干细胞特征,两者联合在动物体内表现出相比单独治疗更强的肿瘤抑制效果。西达本胺不仅可以增强放射治疗的抑瘤活性,同时可以降低肿瘤产生治疗抵抗和复发的风险,西达本胺联合放射治疗可以提供比单一治疗更优的持续疗效。(The invention relates to the technical field of medicines, and discloses application of cidentamine and derivatives thereof. The invention discloses that the cydariamine has the sensitization effect of anti-tumor radiotherapy, the combination of the cydariamine and the radiotherapy can more strongly inhibit the proliferation and the apoptosis of tumor cells and simultaneously inhibit the stem cell characteristics of the tumor cells, and the combination of the cydariamine and the radiotherapy shows stronger tumor inhibition effect in animals compared with the single treatment. The cydarifamid not only can enhance the tumor inhibition activity of radiotherapy, but also can reduce the treatment resistance and recurrence risk of tumors, and the combination of the cydarifamid and the radiotherapy can provide better continuous curative effect than single treatment.)
本申请要求于2019年10月29日提交中国专利局、申请号为201911039341.9、发明名称为“西达本胺及其衍生物的用途”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及药物技术领域，具体涉及西达本胺及其衍生物的用途。
背景技术
放射治疗是临床肿瘤治疗的常用方法，主要是利用放射线(如放射性同位素产生的α、β、γ射线等)对肿瘤进行局部治疗。放射治疗的基本原理是通过射线造成DNA损伤，对于增殖活跃的肿瘤细胞，不能有效完成DNA损伤修复从而造成损伤累积，由此诱发细胞凋亡，达到抗肿瘤的效果。放射治疗的疗效取决于肿瘤对放射线及其造成的损伤的敏感性，不同肿瘤类型和病理阶段都会影响放射治疗的最终疗效。同时，肿瘤还可以通过不同机制规避放射治疗诱发的细胞凋亡，造成治疗抵抗，从而降低放射治疗的持续疗效。增加放射治疗剂量可以促进疗效，但是会带来更多副作用，因此临床上如何更好地实现放射治疗的疗效安全性十分重要，除了更精准的定向治疗，采用其他治疗手段增加肿瘤对放射治疗的敏感性或者降低其抵抗性也是潜在的发展方向。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供西达本胺及其衍生物在制备放疗增敏剂中的应用，使得所述西达本胺及其衍生物在联合放疗时，能够降低肿瘤产生治疗抵抗的风险，增强放疗的抑瘤活性，以及表现出相比单独治疗更强的肿瘤抑制效果。
本发明通过体外细胞模型和实验动物模型证实，西达本胺联合放射治疗可以进一步抑制肿瘤细胞培养物的体外生长和促进其细胞凋亡；同时，西达本胺单独或者联合放射治疗可以降低肿瘤细胞的干细胞特征，而放射治疗单独处理没有影响；在接种肿瘤的动物模型中，西达本胺联合放射治疗可以产生比两个单独治疗更强的抗肿瘤药效。因此，本发明提出了上述西达本胺及其衍生物在制备放疗增敏剂中的应用。同时，本发明还提供了西达本胺及其衍生物联合放疗在治疗肿瘤的应用或制备治疗肿瘤的产品中的应用，所述产品包括但不限于药物。
其中，本发明所述西达本胺及其衍生物包括但不限于西达本胺及其无定型、晶型、立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐、前药，以及包含这些物质的组合物。
作为优选，所述肿瘤包括但不限于肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、白血病、结肠癌、直肠癌、肾癌、胰腺癌、食道癌、子宫癌、阴道癌、前列腺癌、黑色素瘤、尿路上皮癌和肉瘤。
此外，本发明还提供了一种治疗肿瘤的方法，具体为将西达本胺及其衍生物与放射治疗联合使用。其中，所述放射治疗与西达本胺及其衍生物同时进行、或者以任何次序按序进行。
由以上技术方案可知，本发明揭示了西达本胺具有抗肿瘤放射治疗增敏作用，西达本胺联合放射治疗可以更强地抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡，同时抑制肿瘤细胞的干细胞特征，两者联合在动物体内表现出相比单独治疗更强的肿瘤抑制效果。西达本胺不仅可以增强放射治疗的抑瘤活性，同时可以降低肿瘤产生治疗抵抗和复发的风险，西达本胺联合放射治疗可以提供比单一治疗更优的持续疗效。
附图说明
图1所示为不同处理条件下两种模型细胞的相对增殖率比较结果；其中，*表示联合处理相比放射治疗处理的差异P<0.05；**表示联合处理相比放射治疗处理的差异P<0.01；
图2所示为不同处理条件下两种模型细胞的细胞凋亡情况比较结果；其中，**表示西达本胺或放射治疗处理相比溶剂对照的差异P<0.01；##表示联合处理相比西达本胺或放射治疗单独处理的差异P<0.01；###表示联合处理相比西达本胺或放射治疗单独处理的差异P<0.001；
图3所示为不同处理条件下模型细胞形成克隆细胞团情况比较；
图4所示为不同处理条件下模型细胞形成克隆细胞团数量比较；其中，**表示西达本胺处理相比溶剂对照的差异P<0.01；##表示联合处理相比放射治疗单独处理的差异P<0.01；###表示联合处理相比放射治疗单独处理的差异P<0.001；
图5所示为不同处理条件下模型细胞形成克隆细胞团平均大小(直径)比较；其中，**表示西达本胺处理相比溶剂对照的差异P<0.01；##表示联合处理相比放射治疗单独处理的差异P<0.01；
图6所示为不同处理条件下乳酸脱氢酶阳性干细胞样肿瘤细胞比例比较；其中，**表示西达本胺处理相比溶剂对照的差异P<0.01；***表示西达本胺处理相比溶剂对照的差异P<0.001；##表示联合处理相比放射治疗单独处理的差异P<0.01；###表示联合处理相比放射治疗单独处理的差异P<0.001；
图7所示为移植瘤动物模型不同处理组不同时间点的肿瘤体积变化；其中，**表示西达本胺或放射治疗处理相比对照处理的肿瘤体积差异P<0.01；*表示联合处理组相比西达本胺或放射治疗单独处理的肿瘤体积差异P<0.05；
图8所示为移植瘤动物模型肿瘤生长实验结束后不同处理组肿瘤重量比较；其中，*表示两组之间差异P<0.05；**表示两组之间差异P<0.01。
具体实施方式
本发明公开了西达本胺及其衍生物的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述用途已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述用途进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
具体实施方式中，在体外培养的肿瘤细胞系和接种肿瘤细胞的动物模型上，比较了西达本胺联合放射治疗相比两个单独治疗在抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤干细胞特性、以及动物体内抗肿瘤药效上的活性差异。通过这些试验证实西达本胺可以增强放射治疗的抗肿瘤活性，提供了其用于抗肿瘤放射治疗增敏的用途。在这些试验中，本发明选择的西达本胺剂量为300纳摩尔或20mg/公斤体重，放疗的剂量为1-4戈瑞。
以下就本发明所提供的西达本胺及其衍生物的用途做进一步说明。
实施例1：比较西达本胺联合放射治疗相比两个单独治疗对体外培养的肿瘤细胞系的增殖和细胞凋亡的影响
试验设计：在不同的体外培养的肿瘤细胞系上分别采用西达本胺单药、不同剂量放射治疗、以及两者联合处理，考察不同处理方法对细胞增殖和细胞凋亡的影响。
试验过程：人肺癌细胞系NCI-H2170和NCI-H226按照推荐的培养条件进行体外培养，分别加入对照溶剂二甲基亚砜(1/1000)、西达本胺300纳摩尔、放射治疗不同剂量1戈瑞、2戈瑞、4戈瑞、或者西达本胺和不同剂量放射治疗同时处理。处理24小时后，采用常规的CCK-8试剂盒(上海宏叶)检测存活细胞数量，与对照溶剂处理相比，计算各处理组的相对细胞增殖率。结果如图1所示。
NCI-H2170和NCI-H226按照推荐的培养条件进行体外培养，分别加入对照溶剂二甲基亚砜(1/1000)、西达本胺300纳摩尔、放射治疗单剂量2戈瑞或者西达本胺和放射治疗同时处理。处理24小时后，收集细胞样品进行Annexin V和propidium iodide(PI)染色，采用流式细胞仪(碧迪公司)检测不同处理组的细胞染色情况，其中Annexin V单染的细胞是凋亡早期的细胞，如果是双染的细胞则是凋亡后期的，统计比较不同处理下的凋亡细胞类型及比例。结果如图2所示。
试验结果：如图1所示，西达本胺在300纳摩尔浓度下单一处理对两个肿瘤细胞系的体外生长仅有轻微的抑制作用，联合不同剂量的放射治疗后相比于放射治疗单一处理明显抑制模型细胞的相对增殖率，显示出体外联合的促抑制作用。
如图2所示，西达本胺在300纳摩尔浓度下以及2戈瑞剂量的放射治疗处理对于模型细胞的早期细胞凋亡还是晚期细胞凋亡均有一定的促进作用。两种处理联合应用时，相比各自的单独处理，无论是早期还是晚期细胞凋亡，则有更为显著的促进作用。
图1和图2结果显示，西达本胺具有抗肿瘤放射治疗增敏作用，西达本胺联合放射治疗相比单独处理更为显著地抑制肿瘤细胞的体外增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。
实施例2：西达本胺联合放射治疗相比两个单独处理对肿瘤干细胞特性的影响
试验设计：肿瘤产生治疗抵抗(包括放射治疗、化疗、靶向治疗或免疫治疗等)或者复发的重要原因之一是肿瘤细胞的干细胞特性，少数甚至单个的具有干细胞特征的肿瘤细胞可以自我更新和增殖并重新形成新的肿瘤。肿瘤干细胞特性可以通过单个肿瘤细胞体外形成克隆样(细胞团)生长来评价。本实验在体外培养条件下，考察不同处理对肿瘤细胞克隆(细胞团)形成能力的影响。
试验过程：肿瘤细胞系NCI-H2170和NCI-H226采用低吸附培养板进行悬浮培养，采用不同的处理条件，包括溶剂对照(二甲基亚砜1/1000)、西达本胺300纳摩尔、放射治疗处理单剂量2戈瑞、以及西达本胺300纳摩尔和放射治疗2戈瑞联合处理，连续培养14天后，观察形成的克隆细胞团的数量、直径、以及干细胞样肿瘤细胞比例等，并比较不同处理之间的差异。结果如图3-6所示。
试验结果：如图3、4、5所示，与对照处理，西达本胺在300纳摩尔剂量下显著减少肿瘤克隆细胞团的数量和直径大小，相比之下，放射治疗处理对上述指标没有影响，西达本胺联合放射处理同样可以显著降低上述指标。乳酸脱氢酶阳性肿瘤细胞被认为具有肿瘤干细胞特性，即可以自我更新并形成克隆样生长，如图6所示，西达本胺可以显著降低乳酸脱氢酶阳性肿瘤细胞比例，而放射治疗处理相比对照处理没有明显影响，西达本胺联合放射治疗处理同样可以显著抑制干细胞样肿瘤细胞比例。综上，西达本胺可以显著抑制肿瘤细胞的干细胞样特征和克隆生长，具有抗肿瘤放射治疗增敏作用，联合放射治疗可以降低肿瘤抵抗和治疗后复发的风险，提高持续疗效。
实施例3：西达本胺联合放射治疗相对两个单独处理对移植瘤动物模型肿瘤生长的影响比较
试验设计：人源肿瘤细胞接种于裸鼠可以形成肿瘤样生长，采用不同实验处理用于评价其对肿瘤体内生长的影响。
试验过程：人肿瘤细胞系NCI-H2170接种于BALB/c裸鼠两侧皮下，14天后可见肿瘤形成并进行随机分组，分别给予西达本胺(20毫克/每公斤体重，每天一次，混悬液灌胃)、放射治疗(2戈瑞剂量，每周一次)、西达本胺联合放射治疗、或者灌胃液溶剂对照。持续测量模型小鼠体重和肿瘤体积，六周后结束试验，分离肿瘤称重。实验主要考察不同实验处理对肿瘤大小和重量的影响。结果如图7-8所示。
试验结果：如图7、8所示，西达本胺或放射治疗单独处理对肿瘤生长(肿瘤体积、重量)均有轻微抑制作用，而两者联合显示出比两个单独处理更为显著的抑瘤作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。