一种药物组合物及用于制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物的用途
阅读说明：本技术 一种药物组合物及用于制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物的用途 (Pharmaceutical composition and application thereof in preparing medicines for improving insulin resistance and reducing blood sugar ) 是由 杨华 李萍 郑祖国 余玲玲 高雯 王可可 于 2020-12-31 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种药物组合物及用于制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物的用途。本发明发现,质量比为3:1的盐酸小檗碱和异甘草素具有协同降血糖、协同改善胰岛素抵抗的活性,实现1+1＞2的效果,二者形成的组合物可以用于制备降血糖、改善胰岛素抵抗的药物。(The invention discloses a pharmaceutical composition and application thereof in preparing a medicament for improving insulin resistance and reducing blood sugar. The invention discovers that berberine hydrochloride and isoliquiritigenin with the mass ratio of 3:1 have the activity of synergistically reducing blood sugar and synergistically improving insulin resistance, and the effect that 1+1 is more than 2 is realized, and the composition formed by the berberine hydrochloride and the isoliquiritigenin can be used for preparing the medicines for reducing blood sugar and improving insulin resistance.)
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一种药物组合物及其医药用途，具体涉及一种药物组合物及用于制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物的用途。
背景技术
胰岛素抵抗(IR)是指在正常剂量的胰岛素作用下，靶组织发生的生物学效应较健康人偏低的情况，也有“胰素敏感性下降”之称。IR是2型糖尿病(T2DM)主要的病理生理特征之一，广泛存在于肥胖、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、高血压、高脂血症、多囊卵巢综合征(PCOS)等代谢性疾病中。胰岛素主要作用于外周组织(肌肉、脂肪)和肝脏，在外周能促进骨骼肌和脂肪组织摄取、利用葡萄糖；在肝脏主要促进糖原合成，抑制肝糖异生。流行病学研究表明，超过80％的T2DM患者存在IR(肖娟等，胰岛素抵抗与胰岛素信号通路异常研究进展，现代医药卫生2020年11月第36卷第21期)。
小檗碱和异甘草素为两种非常常见的天然产物，二者具有多种生物活性。贺云等研究发现，小檗碱可以通过改善胰岛素抵抗(小檗碱治疗2型糖尿病作用机制研究进展，中医研究.，2020年12期)。LeeYoungmi等研究发现，异甘草素也具有改善胰岛素抵抗的作用(Dietary Isoliquiritigenin at a Low Dose Ameliorates Insulin Resistance andNAFLD in Diet-Induced Obesity in C57BL/6JMice.International JournalofMolecular Sciences.2018)。
但是，目前没有小檗碱和异甘草素具有协同改善胰岛素抵抗的报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种药物组合物及用于制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物的用途。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
一种药物组合物，由盐酸小檗碱和异甘草素组成。
优选地，盐酸小檗碱和异甘草素的质量比为3:1。
上述药物组合物用于制备改善胰岛素抵抗的药物的用途。
上述药物组合物用于制备降血糖的药物的用途。
有益效果：
本发明基于本领域常用的高脂饮食构建高糖、胰岛素抵抗疾病模型，发现盐酸小檗碱和异甘草素组合物(质量比为3:1)可以有效降血糖、改善胰岛素抵抗。本领域技术人员知道，在盐酸小檗碱或异甘草素单体和组合物给药总剂量一致的前提下，盐酸小檗碱和异甘草素组合物(质量比为3:1)的药效显著优于盐酸小檗碱或异甘草素单体，说明盐酸小檗碱和异甘草素必然存在协同作用；否则，组合物的药效应该介于两种单体药效值之间(相加)，或大于两种单体各自的药效(拮抗)。由此可见，质量比为3:1的盐酸小檗碱和异甘草素具有协同降血糖、协同改善胰岛素抵抗的活性，实现1+1＞2的效果，二者形成的组合物可以用于制备降血糖、改善胰岛素抵抗的药物。
附图说明
图1为各组小鼠体重与饮食量值。
图2为各组小鼠禁食血糖值；注：ns代表差异不显著，*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表p<0.001，****代表p<0.0001。
图3为小鼠葡萄糖耐受实验；注：ns代表差异不显著，*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表p<0.001，****代表p<0.0001。
图4为小鼠胰岛素耐受实验；注：ns代表差异不显著，*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表p<0.001，****代表p<0.0001。
具体实施方式
下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
一、实验材料
1、实验动物
雄性C57BL/6J小鼠，7-8周龄，体重约为18-22g，来源：浙江维通利华实验动物技术有限公司(SCXK(浙)2019-0001)。
2、实验试剂
盐酸小檗碱(成都曼斯特生物科技有限公司，货号A0151，纯度≥98％，Lot#MUST-20073011)；异甘草素(成都曼斯特生物科技有限公司，货号A0463，纯度≥98％，Lot#MUST-20031903)；二甲双胍(MCE公司，货号HY-17471A，Lot#29902)；D-Glucose(美国Amresco公司，货号0188-1Kg，Lot#3277C100)；牛胰岛素粉末(Biosharp，货号BS901，Lot#69116301)，氯化钠注射液(双鹤药业)。高脂饲料(美国Research Diets，货号D12492，脂肪含量60％)。
3、实验仪器
欧姆龙血糖仪(HGM-114)及配套试纸(AS1)
分析天平(sartorius)
电子秤(长协电子)
恒温水浴锅(昆山禾创)
涡旋仪(其林贝尔仪器)
二、实验方法
1、溶液配制
(1)动物用药配制：
分别称取盐酸小檗碱180mg，异甘草素180mg，二甲双胍600mg，盐酸小檗碱135mg及异甘草素45mg入4个50mL离心管中，加入氯化钠注射液定容至30mL，涡旋混匀，25℃水浴超声约2h，配制成6mg·mL-1的盐酸小檗碱混悬液或异甘草素混悬液，20mg·mL-1的二甲双胍溶液和6mg·mL-1的盐酸小檗碱/异甘草素混合液，4℃保存，每两周配制一次。
(2)葡萄糖溶液的配制：
称取D-葡萄糖4g，溶于20mL纯水中，涡旋以充分溶解，配制成0.2g·mL-1的溶液，用于小鼠糖耐量测试。
(3)胰岛素母液的配制：
称取1mg牛胰岛素粉末，溶于1mL纯水中，涡旋混匀，于冰上水浴超声约10min，配制成1mg·mL-1的胰岛素母液，分装保存于-20℃备用。
(4)胰岛素使用液配制：
使用前，取1mg·mL-1的胰岛素母液40μL加入21.56mL氯化钠注射液，稀释540倍，得0.05u·mL-1胰岛素稀释液，用于小鼠胰岛素耐量测试。
2、动物饲养
实验小鼠饲养于中国药科大学实验动物中心，控制环境条件，保持12小时光照/12小时黑暗周期，温度23±3℃，相对湿度55±15％，自由获取食物和水，每三天更换饮用水及垫料。
3、动物分组、造模及给药
小鼠适应环境一周后，按照体重分笼，随机分成6组，每组8-14只。六组分别为：空白对照组(ND)；模型组(HFD)；二甲双胍200mg·kg-1给药组(Met)；盐酸小檗碱60mg·kg-1给药组(BBR)；异甘草素60mg·kg-1给药组(ISL)；盐酸小檗碱/异甘草素60mg·kg-1联合给药组(B+I(3:1))。六组的饮食及给药方案如下：
ND组：普通饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃氯化钠注射液。
HFD组：高脂饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃氯化钠注射液。
BBR组：高脂饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃盐酸小檗碱混悬液，剂量为60mg·kg-1。
ISL组：高脂饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃异甘草素混悬液，剂量为60mg·kg-1。
B+I(3:1)组：高脂饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃盐酸小檗碱/异甘草素混合液，剂量为60mg·kg-1。
给药期间每周记录各组小鼠的体重、摄食量，用作后期数据统计。
4、小鼠空腹血糖(FBG)测定
实验前小鼠禁食约15h，正常饮水，每组随机选取4-14只小鼠进行检测，检测前每只小鼠用马克笔做好标记，用剪刀剪切鼠尾尖约1-2mm，用手从近心端开始轻柔往尾尖捋，将提前插好试纸的血糖仪靠近尾尖的血滴，试纸自动吸取血滴，并显示读数，记录每只小鼠的空腹血糖。检测过程中保持安静。
5、小鼠口服糖耐量(OGTT)测定
实验前小鼠禁食约15h，正常饮水，每组随机选取6只小鼠进行检测，检测前每只小鼠标记、称重。先测定空腹血糖(同上所述)，记录每只小鼠的空腹血糖。然后用0.2g·mL-1的葡萄糖溶液灌胃，剂量为2g·kg-1，从第一只鼠灌胃结束后开始计时，匀速灌完所有小鼠，约20s/只，在开始计时后的15，30，60，90，120min时间点用血糖仪按灌胃的时间间隔测定每只小鼠的血糖值，确保时间点精确，并记录。检测过程中保持安静。
6、小鼠胰岛素耐量测定
实验前小鼠禁食约4h，正常饮水，每组随机选取6-9只小鼠进行检测，检测前每只小鼠标记、称重。先测定空腹血糖(同上所述)，记录每只小鼠的空腹血糖。然后用0.05u·mL-1的胰岛素溶液腹腔注射，剂量为0.5u·kg-1，从第一只鼠注射结束后开始计时，匀速注射完所有小鼠，约20s/只，在开始计时后的15，30，60，90，120min时间点用血糖仪按注射的时间间隔测定每只小鼠的血糖值，确保时间点精确，并记录。检测过程中保持安静。
7、数据处理
所有作图及统计都通过GraphPad Prism8.0进行，数据均表示为平均值标准误差(SE)。通过t检验进行统计学分析，p<0.05的差异被认为具有统计学意义(*,p<0.05；**,p<0.01；***,p<0.001；****,p<0.0001；ns,无显著性)。
三、实验结果
1、小鼠体重与摄食量
如图1所示，小鼠高脂饮食后摄食量明显低于正常组小鼠，但高脂饮食后小鼠的体重较正常组高；与高脂模型组相比，单给药和联合给药对小鼠体重及摄食量没有明显影响。
2、小鼠空腹血糖
如表1和图2所示，从表1和图2可以看出，小鼠高脂饮食4周、6周后，空腹血糖即可显著升高，并且二甲双胍可以显著降低空腹血糖，BBR和ISL在第4周没有明显药效，但第6周即可显著降低空腹血糖，联合给药组在第4周即可显著降低空腹血糖，在第6周联合给药组降低空腹血糖的效果较单给药组更明显。
表1
3、小鼠口服糖耐量
如表2和图3所示，从表2和图3可以看出，小鼠高脂饮食6周后，模型组OGTT-AUC显著升高，即糖耐量明显下降，二甲双胍和单给药组及联合给药组都能显著改善糖耐量，且以3:1组效果最好，并且联合用药组药效显著优于单给药组。
表2
4、小鼠胰岛素耐量
如表3和图4所示，从表3和图4可以看出，小鼠高脂饮食6周后，模型组ITT-AUC显著升高，即胰岛素耐量明显下降，二甲双胍和单给药组及联合给药组都能显著改善糖耐量，且以3:1组效果最好，并且联合用药组药效显著优于单给药组。
表3
综上可见，本发明基于本领域常用的高脂饮食构建高糖、胰岛素抵抗疾病模型，发现盐酸小檗碱和异甘草素组合物(质量比为3:1)可以有效降血糖、改善胰岛素抵抗。本领域技术人员知道，在盐酸小檗碱或异甘草素单体和组合物给药总剂量一致的前提下，盐酸小檗碱和异甘草素组合物(质量比为3:1)的药效显著优于盐酸小檗碱或异甘草素单体，说明盐酸小檗碱和异甘草素必然存在协同作用；否则，组合物的药效应该介于两种单体药效值之间(相加)，或大于两种单体各自的药效(拮抗)。由此可见，质量比为3:1的盐酸小檗碱和异甘草素具有协同降血糖、协同改善胰岛素抵抗的活性，实现1+1＞2的效果，二者形成的组合物可以用于制备降血糖、改善胰岛素抵抗的药物。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。