伊快霉素在制备抗关节炎药物中的应用
阅读说明：本技术 伊快霉素在制备抗关节炎药物中的应用 (Application of ixabelmycin in preparation of anti-arthritis medicine ) 是由 谭艳辉 谭小辉 李智超 罗小卫 黄文婧 于 2020-12-01 设计创作，主要内容包括：本发明公开了伊快霉素在制备抗关节炎药物中的应用,所述伊快霉素的含量大于等于0.1μM。以伊快霉素为原料制备的得到的透皮吸收制剂对于角叉菜胶诱导的急性关节炎具有直接而显著地抑制作用特点,治疗效果好,能有效减缓小鼠足肿胀,可用于关节炎等相关疾病的治疗。而且该制剂还能有效抑制炎症因子IL-1,IL-6以及TNF-α的表达,降低血清中的炎症因子含量,减少炎症的发生。该制剂外用直接涂敷于患处,使用方便,有极高的使用价值。(The invention discloses application of ixabelmycin in preparing an anti-arthritis medicament, wherein the content of the ixabelmycin is more than or equal to 0.1 mu M. The transdermal absorption preparation prepared by taking the ixomycin as the raw material has the characteristic of directly and obviously inhibiting the acute arthritis induced by the carrageenan, has good treatment effect, can effectively slow down the foot swelling of mice, and can be used for treating related diseases such as arthritis. In addition, the preparation can effectively inhibit the expression of inflammatory factors IL-1, IL-6 and TNF-alpha, reduce the content of the inflammatory factors in serum and reduce the occurrence of inflammation. The preparation can be directly applied to affected part, and has convenient application and high use value.)
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及伊快霉素在制备抗关节炎药物中的应用。
背景技术
关节炎是一种常见的慢性病，患病者数量多，发病率可达13％，平均每10人就有1人患病。关节炎是泛指发生在人体关节及其周围组织，由炎症、感染、退化、创伤或其他因素引起的炎性疾病，可分为骨性、类风湿性、强直性、反应性、痛风性、风湿性、化脓性等数十种。关节炎危害巨大，其致残率可高达53％，危害性极大。关节炎引发疼痛和功能障碍的危害严重程度，可以相当甚至大于心脑血管病，而且，目前并没有稳定安全有效的抗关节炎类药物，目前用于治疗关节炎的药物仍存在许多问题，如选择性较差、会引起胃肠道不适、肾功能衰竭等副作用，因此，继续研究安全有效的抗关节炎的药物显得尤为迫切。
伊快霉素(Equisetin，尹奎色亭)最早发现于陆生真菌，具有抗菌、抗艾滋病、以及抗癌等诸多活性。凭借特异的化学结构和显著的生物活性，Equisetin及其类似物引起了化学及医药研究者的广泛关注，目前Equisetin主要被用作抗菌剂，抑制革兰氏阳性细菌。但是，目前并未发现伊快霉素在其他病症或相关方面的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供伊快霉素在制备治疗关节炎的药物中的应用；
本发明的另一目的在于提供一种治疗关节炎的药物；
本发明的另一目的在于提供上述药物在制备抗关节炎透皮吸收剂中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供：
伊快霉素在制备治疗关节炎的药物中的应用。
伊快霉素(Equisetin，尹奎色亭，FE1)是镰刀霉(Fusariumequiseti)分泌的代谢产物，具有抗菌作用。
伊快霉素的化学结构式如式(I)所示：
发明人发现，伊快霉素能有效抑制小鼠血清中炎症因子IL-1，IL-6以及TNF-α表达，从而缓解关节炎引起的关节肿胀，抑制关节炎的进一步发展。
进一步地，上述伊快霉素含量大于等于0.1μM。
更进一步地，上述伊快霉素含量为0.1-4μM。
发明人发现，0.1μM伊快霉素即可发挥抑制炎症的作用，而当浓度提高到1μM即可产生显著抑制效果，且其效果可以与5μM BAY相当。
进一步地，上述关节炎包括非侵蚀性关节炎、侵蚀性关节炎、退行性关节炎和代谢性关节炎。
更进一步地，上述组合物或上述药物可作为糖皮质激素或甲氨蝶呤等抗关节炎类药物的有效替代物，以用于治疗与糖皮质激素或甲氨蝶呤作为抗关节炎类药物时相同适应症中的关节炎。
在本发明实施例中，上述关节炎采用角叉菜胶诱导的小鼠关节炎模型作为示例。角叉菜胶能使小鼠出现局部毛细血管扩张、血管通透性增高、渗出、水肿等一系列类似于人体急性炎症的反应，是本领域常见的关节炎诱导模型，被广泛用于各类炎症相关新药的评价试验中。
进一步地，上述抗关节炎制剂的剂型包括溶液、洗剂、乳剂、粉剂、软膏或糊剂。
进一步地，上述抗关节炎制剂的剂型为软膏。
本发明实施例中的抗关节炎制剂采用的是外用透皮吸收制剂(软膏)，通过涂敷于患处发挥功效，当然，本领域技术人员也可以根据实际需求，通过合理修改抗关节炎制剂配方中的非活性成分得到其他剂型的制剂。
本发明的第二个方面，提供：
一种药物，该药物含有伊快霉素，该伊快霉素含量大于等于0.1μM。
进一步地，上述伊快霉素含量为0.1-4μM。
更进一步地，上述药物还含有其他药学上可接受的辅剂。
更进一步地，上述其他药学上可接受的辅剂包括石蜡、凡士林和丙二醇。
更进一步地，上述石蜡包括液体石蜡。
更进一步地，上述石蜡为液体石蜡。
液体石蜡，又指矿物油，液体石蜡不溶于水、乙醇，溶于挥发油，混溶于多数非挥发性油。本发明中的液体石蜡可以有效促进上述的组合物与凡士林、丙二醇的混合，以避免出现混合不均匀的情况发生。
更进一步地，上述药物中各组分含量如下：伊快霉素10-15mg，石蜡800-1200mg，凡士林90-135mg，丙二醇100-150mg。
更进一步地，上述药物中各组分含量如下：伊快霉素10mg，石蜡800mg，凡士林90mg，丙二醇100mg。
本发明的第三个方面，提供：
上述药物的制备方法，包括以下步骤：
将伊快霉素与石蜡混合，加入凡士林和丙二醇，即得。
伊快霉素需先置于乳钵中研磨至均匀细腻糊状，再与石蜡混合，以加速混合过程，提高混合均匀度。
凡士林和丙二醇需分次递加至伊快霉素石蜡混合物中(等量递增法混合)，以保证混合均匀。
本发明的第四个方面，提供：
上述药物在制备抗关节炎透皮吸收剂中的应用。
本发明的有益效果是：
1.本发明中的含有伊快霉素的组合物、药物及其相关制剂，对于角叉菜胶诱导的急性关节炎具有直接而显著地抑制作用特点，治疗效果好，能有效减缓小鼠足肿胀，可用于关节炎等相关疾病的治疗。
2.本发明中的含有伊快霉素的组合物、药物及其相关制剂能有效抑制炎症因子IL-1，IL-6以及TNF-α的表达，降低血清中的炎症因子含量，减少炎症的发生。
3.本发明实施例中的含有伊快霉素的组合物、药物及其相关制剂采用的是外用剂型，直接涂敷于患处，使用方便。
附图说明
图1为伊快霉素透皮吸收制剂对RANKL诱导的NF-κB的影响，其中，与RANKL组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，n＝3；
图2为各实验组对角叉菜胶诱导的急性关节炎小鼠的治疗效果示意图，其中FE1表示伊快霉素组；
图3为各实验组对角叉菜胶诱导的急性关节炎小鼠的治疗作用的结果统计图，A为各实验组中足厚度差统计图(mm)，B为各实验组中足重差统计图(g)；
图4为各实验组对角叉菜胶诱导的急性关节炎小鼠的足组织形态学变化(倍数：x200)，其中FE1表示伊快霉素组；
图5为伊快霉素透皮吸收制剂对小鼠血清中炎症因子IL-1(A)，IL-6(B)以及TNF-α(C)的抑制效果。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明。
所使用的实验材料和试剂，若无特别说明，均为常规可从商业途径所获得的耗材和试剂。
伊快霉素药物有效量测试
本实施例通过NF-κB的激活来判断伊快霉素药物有效量，其原理为：
当机体发生炎症反应会启动天然免疫应答，而天然免疫应答细胞能够释放炎症因子(如白细胞介素IL-1、IL-6、IL-8、活性氧类、环加氧酶-2、一氧化氮合酶和生长因子等)，这些细胞因子的转录则依赖于NF-κB通道的激活，因此，只需要检测NF-κB通道的激活与否，即可判读是否存在炎症反应。
具体步骤为：
采用NF-κB-luc稳转的RAW264.7细胞株，RANKL(核因子κB受体活化因子配体)刺激，同时加入0.1-4μM不同浓度的伊快霉素和阳性对照药物(5μM BAY，CAS号为1803274-65-8)，8小时后通过检测荧光素酶的表达，观察药物对细胞内NF-κB转录表达的影响，结果如图1。
结果发现，0.1μM伊快霉素即可发挥抑制炎症的作用，而当浓度提高到1μM即可产生显著抑制效果，且其效果可以与5μM BAY相当。
其中，1μM伊快霉素即约为0.373mg/mL的伊快霉素。
伊快霉素透皮吸收制剂的制备
伊快霉素透皮吸收制剂的配方如下：
伊快霉素10mg，液体石蜡800mg，凡士林90mg，丙二醇100mg。
制备步骤为：
按照上述配方含量，取伊快霉素和液体石蜡置于乳钵中研磨，少量多次研磨至均匀细腻糊状，再分次递加凡士林和丙二醇至全量，研匀即得。
其中，伊快霉素应与液体石蜡先充分混合，以利于后续加入凡士林后能保证混合均匀。混合时应采用等量递增法混合，以保证混合均匀。
角叉菜胶诱导的急性关节炎小鼠模型的制备
(1)1％角叉菜胶诱导剂的配制
取一个高压灭菌过的小研钵，将角叉菜胶倒入小研钵，先用少量的无菌0.9％生理盐水研磨，然后再慢慢少量多次加余留的生理盐水。
需要注意的是，角叉菜胶诱导剂可在实验前24小时配置，在4度冰箱放置过夜即可。
角叉菜胶诱导剂使用时需边研磨边使用。
(2)角叉菜胶诱导小鼠急性关节炎
取6周左右大小的雌性C57BL/6小鼠，放置于干净动物房使其适应环境一周，然后将小鼠进行随机分组(空白组(Blank)、模型组(Model)、伊快霉素组(FE1)和阳性药组(Positive))，每组6只。
空白组不涂抹任何物质；
模型组涂抹溶剂膏剂(不含伊快霉素)；
伊快霉素组涂抹1％上述实施例中制备得到的伊快霉素透皮吸收制剂；
阳性药组涂抹扶他林乳胶剂。
按照分组，在小鼠的左右后肢同时涂抹对应物质，每隔10min涂药1次，连续6次。给药30min后，在小鼠右后足跖皮下注射1％角叉菜胶诱导剂30μL致炎。注射5h后摘眼球取血，脱颈椎处死小鼠，然后测量小鼠左右足趾厚度，并从踝关节处对称剪下鼠足，称重，以左、右足重量差作为评价小鼠足肿胀度程度。随后将左右足趾用10％甲醛固定72h，10％EDTA脱钙2个星期，常规切片处理，HE染色，显微镜下观察组织学变化。
需要注意的是，脚趾注射是炎症模型造模的关键，待小鼠用乙醚麻醉后，取趴位，用胰岛素注射器从小鼠的右后肢远心端进针，沿着足中线水平进针2mm注射。注射过程中可看到极薄的皮下鼓起，出针时需旋转针头。
小鼠眼球取血的血液样本进行离心，取上清，用ELISA试剂盒检测血清中炎症相关因子IL-1，IL-6以及TNF-α的表达。
各实验组小鼠涂药后的结果如图2所示，模型组小鼠在注射角叉菜胶后出现明显的急性关节肿胀，涂抹1％伊快霉素透皮吸收制剂的实验组小鼠跟阳性药(扶他林)对照组小鼠的足趾厚度、左右足重量差与模型组小鼠相比有统计学差异，且涂抹1％伊快霉素的抗小鼠足肿胀的效果优于同等剂量的扶他林。小鼠左右足趾厚度差，左右足重量差的统计结果以及HE染色结果进一步验证了FE1对关节肿胀的抑制作用，结果统计见图3。
图3中，伊快霉素组小鼠的左右足趾厚度差和左右足重量差均明显低于模型组，说明伊快霉素能发挥出显著的治疗效果。而且从图中还可以看出，伊快霉素组的治疗效果相比阳性药组更强，说明其具有作为治疗急性关节炎候选成分的潜力。
图4为各实验组对角叉菜胶诱导的急性关节炎小鼠的足组织形态学变化，从图中可以看出，模型组HE染色可见明显炎性细胞浸润，而阳性药物组与伊快霉素组炎性细胞浸润较模型组显著减少。
上述实施例制备的伊快霉素透皮吸收制剂对小鼠血清中炎症因子IL-1，IL-6以及TNF-α表达的抑制作用如图5所示，涂抹上述实施例制备的伊快霉素透皮吸收制剂后，小鼠血清中炎症因子IL-1，IL-6以及TNF-α相比模型组得到了显著的控制，其抑制效果与阳性药(扶他林)相当。
综上所述，含有伊快霉素的透皮吸收制剂能够显著抑制角叉菜胶诱导的急性关节炎，减轻关节肿胀，并可以抑制IL-1，IL-6以及TNF-α的表达。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
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