阅读说明：本技术 一种atp钾离子通道促进剂组合物及其制备方法和应用 (ATP potassium ion channel promoter composition, and preparation method and application thereof ) 是由 不公告发明人 于 2020-11-13 设计创作，主要内容包括：本发明提出了一种ATP钾离子通道促进剂组合物,由以下原料制备而成：式Ⅰ的化合物盐及其生理学上可接受的其他盐、衍生物、溶剂化物、前药和立体异构体、钠钾ATP酶、瑞格列奈；所述式Ⅰ的化合物盐具有如式Ⅰ所示结构；其中,n＝1-5。该组合物具有在用抗精神病药治疗的受治疗者中预防或治疗体重增加、糖尿病或葡萄糖耐量减低的药物中的用途。(The invention provides an ATP potassium ion channel promoter composition, which is prepared from the following raw materials: salts of the compounds of formula (I) and their physiologically acceptable further salts, derivatives, solvates, prodrugs and stereoisomers, sodium potassium ATPase, repaglinide; the compound salt of the formula I has a structure shown in the formula I; wherein n is 1-5. The composition has use in a medicament for preventing or treating weight gain, diabetes, or impaired glucose tolerance in a subject treated with an antipsychotic agent.)

一种ATP钾离子通道促进剂组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种ATP钾离子通道促进剂组合物及其制备方法和应用。

背景技术

ATP敏感性钾(K_ATP)通道通过将细胞代谢与电活动偶联而在多种组织中起重要的作用。已经鉴定K_ATP通道为两种不相关的蛋白质以4∶4的化学计量装配的八聚体复合物：第一个蛋白质是形成孔的亚单位Kir6.x，其形成内向整流K+通道；第二个是ABC(ATP结合盒)转运体，也称为磺酰脲受体(SURx)(Babenko等，Annu.Rev.Physiol.，60：667-687(1998))。所述形成孔的亚单位Kir6.x普遍用于很多类型KATP通道，且具有两个推定的跨膜区(鉴定为TM1和TM2)，其通过孔环(H5)连接。包含SUR受体的亚单位包括多重跨膜区和两个核苷酸结合折叠。

根据它们的组织定位，K_ATP通道以SUR和Kir亚单位以多种组合装配而成的不同的亚型或亚类存在。SUR1与Kir6.x亚单位(SUR1/Kir6.x)的组合通常形成脂细胞和胰腺B-细胞类型K_ATP通道，而SUR2A/Kir6.x和SUR2B/Kir6.x或Kir6.1组合通常分别形成心脏型和平滑肌类型K_ATP通道(Babenko等，Annu.Rev.Physiol，60：667-687(1998))。这也验证了该通道可以包括Kir2.x亚单位。这类钾通道受细胞内ATP抑制，且由细胞内二磷酸核苷激活。这种K_ATP通道使细胞的代谢状态与血浆膜电势相联系，并以该方式在调节细胞活性中起主要的作用。在大多数兴奋神经细胞中，K_ATP通道在正常生理学的条件下关闭，而当组织代谢下降时(例如当(ATP∶ADP)比例下降时)开放。这促进K+外流和细胞超极化，因而预防电压运行的Ca²⁺通道(VOC)开放(Prog.Res Research，(2001)31：77-80)。

钾通道开放剂(PCO或KCO；也称为通道激活剂或通道拮抗剂)是一类结构上不同的不具有明显的共有药效团的化合物，所述药效团与它们拮抗细胞内核苷酸抑制KATP通道的能力有关。二氮嗪是刺激在胰腺β细胞中的K_ATP通道的PCO(参见Trube等，Pfluegers ArchEur J Physiol，407，493-99(1986))。吡那地尔和克洛卡林(chromakalim)是激活细胞膜的PCO(参见Escande等，Biochem Biophys Res Commun，154，620-625(1988)；Babenko等，JBiol Chem，275(2)，717-720(2000))。已显示对二氮嗪的反应性位于SUR1亚单位的第6至第11预测的跨膜区(TMD6-11)和第一核苷酸结合折叠。

二氮嗪是具有式7-氯-3-甲基-2H-1，2，4-苯并噻二嗪1，1-二氧化物(经验式C₈H₇C_lN₂O₂S)的非利尿性苯并噻二嗪衍生物，其商品化为三种不同的制剂以治疗两种不同的疾病适应症：(1)高血压急症(2)高胰岛素性低血糖病症。高血压急症的治疗用HyperstatIV，即用氢氧化钠调节至pH＝11.6的用于静脉内使用的二氮嗪水性制剂。施用HyperstatIV作为一次大剂量进入外周静脉以治疗恶性高血压或磺酰脲超剂量。在这种用途中，二氮嗪作用以开放在血管平滑肌中的钾通道，并使膜电势稳定于静息水平，从而导致血管平滑肌松弛。

世界范围内已报道的二氮嗪合成方法有：美国专利2986573采用5-氯-2-硝基苯磺酰胺为起始原料，先经铁粉还原，生成5-氯-2-氨基苯磺酰胺；然后再与原乙酸三乙酯发生环合反应，制得二氮嗪。美国专利3345365以2-氨基苯磺酰胺为起始原料，先与乙酸酐反应，得到2-乙酰胺基-N-乙酰基苯磺酰胺，然后以冰乙酸为溶剂，通入氯气发生氯代反应，生成5-氯-2-乙酰胺基-N-乙酰基苯磺酰胺，再经无溶剂高温环合、重结晶精制得到二氮嗪。上述合成路线均存在较大缺点：美国专利2986573使用铁粉进行还原，劳动强度大、效率低，还会产生了大量难处理的铁泥，对环境造成污染；并且在环合步骤中使用原乙酸三乙酯，反应收率低、副产物多、纯化困难，产品质量不高。美国专利3345365使用乙酸酐/吡啶作为乙酰化试剂，这会产生大量难以回收再利用的的醋酸-吡啶废液；氯化步骤采用直接通氯气氯化的方式，容易污染环境，也不利劳动保护；环合步骤直接采取无溶剂高温环合，产生大量杂质，产品纯度同样不高。

因此，开发一种新型的二氮嗪类化合物，同时具有合成方便、原料来源广、收率高、有效促进钾通道开发且生物相容性高等特点具有显著的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提出一种ATP钾离子通道促进剂组合物及其制备方法和应用，合成方便、原料来源广、收率高、有效促进钾通道开发且生物相容性高。

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供式Ⅰ的化合物盐及其生理学上可接受的其他盐、衍生物、溶剂化物、前药和立体异构体，包括它们所有比例的混合物：

式Ⅰ；

其中，n＝1-5。

作为本发明的进一步改进，所述化合物盐具有以下结构之一：

作为本发明的进一步改进，所述氯离子可以被其他阴离子替代，所述其他阴离子包括乙酸根离子、甲酸根离子、硫酸根离子、磷酸根离子、硝酸根离子、溴离子。

作为本发明的进一步改进，所述钠离子可以被其他阳离子替代，所述其他阳离子包括钾离子、钙离子、钡离子。

作为本发明的进一步改进，所述式Ⅰ的化合物盐中由以下方法制备得到：

S1.将二甲氨基醇、二氯亚砜、NaOH混合反应，生成中间体Ⅰ，结构为n＝1-5；

S2.将中间体Ⅰ、二氮嗪、三乙胺混合反应，生成中间体Ⅱ，结构为

S3.向中间体Ⅱ中加入稀盐酸，混合反应后，加入稀NaOH溶液中和，生成产物式Ⅰ的化合物盐。

作为本发明的进一步改进，所述式Ⅰ的化合物盐的合成方法具体包括：

S1.将二甲氨基醇溶于二氯甲烷中，加入NaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加二氯亚砜的二氯甲烷溶液，反应1-2h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ；

S2.将中间体Ⅰ和三乙胺溶于乙腈中，加热至50-65℃，滴加二氮嗪的乙腈溶液，反应3-5h后，过滤，生成中间体Ⅱ；

S3.将中间体Ⅱ加入热的稀盐酸溶液中，搅拌反应10-30min后，加入过量的热的稀NaOH溶液，反应10-20min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐；

所述二甲氨基醇、二氯亚砜和NaOH的物质的量之比为1:(2-3)：(4-7)；

所述中间体Ⅰ、二氮嗪、三乙胺的物质的量之比为1：(1.1-1.3)：(3-5)；

所述热的稀盐酸和热的稀NaOH溶液的温度为80-90℃，所述稀盐酸的物质的量浓度为0.1-0.5mol/L,所述稀NaOH溶液的物质的量浓度为0.2-1mol/L。

本发明进一步保护一种ATP钾离子通道促进剂组合物，由以下原料按重量份制备而成：式Ⅰ的化合物盐及其生理学上可接受的其他盐、衍生物、溶剂化物、前药和立体异构体1-5份、钠钾ATP酶0.2-0.5份、瑞格列奈1-3份。

作为本发明的进一步改进，由以下原料按重量份制备而成：式Ⅰ的化合物盐及其生理学上可接受的其他盐、衍生物、溶剂化物、前药和立体异构体3份、钠钾ATP酶0.3份、瑞格列奈2份。

本发明进一步保护一种上述ATP钾离子通道促进剂组合物的方法，包括以下步骤：将式Ⅰ的化合物盐及其生理学上可接受的其他盐、衍生物、溶剂化物、前药和立体异构体、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

本发明进一步保护一种上述ATP钾离子通道促进剂组合物用于在用抗精神病药治疗的受治疗者中预防或治疗体重增加、糖尿病或葡萄糖耐量减低的药物中的用途。

本发明具有如下有益效果：本发明合成的新型二氮嗪类化合物(式Ⅰ的化合物盐)是二氮嗪的一种新型结晶盐组分，具有良好的水溶性、生物相容性且合成方法简单，收率高，同时，通过添加明胶制备成缓控释药物组合物，从而增加药物的利用率和吸收率；

本发明采用新型二氮嗪类化合物和降糖药瑞格列奈复配，形成一种有效的ATP钾离子通道促进剂，其效果具有协同增效的作用，降糖药瑞格列奈，促进胰岛素分泌从而降低血糖含量，调节体重，在本发明中，组合物用量并不大，但具有显著的药用效果。钠钾ATP酶能有效促进ATP分解成ADP，从而释放能量，降低血糖，控制体重。

本发明ATP钾离子通道促进剂组合物可经口或不经过口给药，给药量因药物不同而各有不同，对成人来说，每天1-100mg较合适。经口服给药时，首先使化合物与常规的药用辅剂如赋形剂、解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式给药：非经口给药时可以注射液、输液剂或栓剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明测试例1中各组小鼠的葡萄糖含量对比图；

图2为本发明测试例2中各组大鼠血液二氮嗪的均值药-时曲线图。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1式Ⅰ的化合物盐的合成

合成路线：

S1.将1mol 2-(二甲氨基)乙醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入4mol NaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和3mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至50℃，滴加1.1mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应3h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入80℃0.1mol/L稀盐酸溶液中，搅拌反应10min后，加入过量的80℃0.2mol/LNaOH溶液，反应10min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为95％。

核磁结果：1H NMR(600MHz，MeOD)δ7.86(s,1H)，7.52(d，1H)，7.31(d，1H)，3.26(t，2H)，2.62(t，2H)，2.27(s，6H)，0.92(s，3H)。从核磁检测结果能够看出，与预测结构一致。

实施例2式Ⅰ的化合物盐的合成

合成路线：

S1.将1mol 6-(二甲氨基)-1-己醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入7molNaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加3mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应2h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和5mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至65℃，滴加1.3mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应5h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入90℃0.5mol/L稀盐酸溶液中，搅拌反应30min后，加入过量的90℃1mol/LNaOH溶液，反应20min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为85％。

核磁结果：1H NMR(600MHz，MeOD)δ7.86(s,1H)，7.52(d，1H)，7.31(d，1H)，3.26(t，2H)，2.62(t，2H)，2.55(t，2H)，2.43(t，2H)，2.35(t，2H)，2.32(t，2H)，2.27(s，6H)，0.92(s，3H)。从核磁检测结果能够看出，与预测结构一致。

实施例3式Ⅰ的化合物盐的合成

S1.将1mol 2-(二甲氨基)乙醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入5mol NaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2.2mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1.5h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和3.5mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至52℃，滴加1.15mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应3.5h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入82℃0.2mol/L稀盐酸溶液中，搅拌反应15min后，加入过量的82℃0.4mol/LNaOH溶液，反应12min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为90％。

实施例4式Ⅰ的化合物盐的合成

S1.将1mol 2-(二甲氨基)乙醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入6mol NaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2.8mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1.5h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和4.5mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至62℃，滴加1.25mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应4.5h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入88℃0.4mol/L稀溴酸溶液中，搅拌反应25min后，加入过量的88℃0.8mol/L NaOH溶液，反应18min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为94％。

化合物E具有如下结构：

实施例5式Ⅰ的化合物盐的合成

合成路线：

S1.将1mol 4-(二甲氨基)-1-丁醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入5.5molNaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2.5mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1.5h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和4mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至58℃，滴加1.2mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应4h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入85℃0.3mol/L稀盐酸溶液中，搅拌反应20min后，加入过量的85℃0.6mol/LNaOH溶液，反应15min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为93％。

核磁结果：1H NMR(600MHz，MeOD)δ7.86(s,1H)，7.52(d，1H)，7.32(d，1H)，3.26(t，2H)，2.62(t，2H)，2.52(t，2H)，2.44(t，2H)，2.30(s，6H)，0.91(s，3H)。从核磁检测结果能够看出，与预测结构一致。

实施例6式Ⅰ的化合物盐的合成

S1.将1mol 2-(二甲氨基)乙醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入6mol NaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2.8mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1.5h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和4.5mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至62℃，滴加1.25mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应4.5h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入85℃0.2mol/L稀硝酸溶液中，搅拌反应25min后，加入过量的88℃0.8mol/L NaOH溶液，反应18min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为94％。

化合物E具有如下结构：

实施例7式Ⅰ的化合物盐的合成

S1.将1mol 2-(二甲氨基)乙醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入6mol NaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2.8mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1.5h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和4.5mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至62℃，滴加1.25mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应4.5h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入85℃0.2mol/L稀硝酸溶液中，搅拌反应25min后，加入过量的85℃0.5mol/L KOH溶液，反应18min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为94％。

化合物E具有如下结构：

实施例8式Ⅰ的化合物盐的合成

S1.将1mol 2-(二甲氨基)乙醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入6mol NaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2.8mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1.5h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和4.5mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至62℃，滴加1.25mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应4.5h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入85℃0.5mol/L稀盐酸溶液中，搅拌反应25min后，加入过量的85℃0.5mol/L Ba(OH)₂溶液，反应18min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为94％。

化合物E具有如下结构：

实施例9式Ⅰ的化合物盐的合成

合成路线：

S1.将1mol 5-(二甲氨基)-1-戊醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入5.5molNaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2.5mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1.5h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和4mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至58℃，滴加1.2mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应4h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入85℃0.3mol/L稀盐酸溶液中，搅拌反应20min后，加入过量的85℃0.6mol/LNaOH溶液，反应15min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为93％。

核磁结果：1H NMR(600MHz，MeOD)δ7.87(s,1H)，7.52(d，1H)，7.32(d，1H)，3.26(t，2H)，2.60(t，2H)，2.51(t，2H),2.47(t，2H)，2.39(t，2H)，2.32(s，6H)，0.92(s，3H)。从核磁检测结果能够看出，与预测结构一致。

实施例10式Ⅰ的化合物盐的合成

合成路线：

S1.将1mol 3-(二甲氨基)-1-丙醇(化合物A)溶于100mL二氯甲烷中，加入5.5molNaOH固体，置于冰浴中，边搅拌边滴加2.5mol二氯亚砜的二氯甲烷溶液20mL，反应1.5h后，过滤，减压除去过量的二氯亚砜和二氯甲烷，生成中间体Ⅰ(化合物B)；

S2.将1mol中间体Ⅰ(化合物B)和4mol三乙胺溶于100mL乙腈中，加热至58℃，滴加1.2mol二氮嗪(化合物C)的乙腈溶液20mL，反应4h后，过滤，生成中间体Ⅱ(化合物D)；

S3.将中间体Ⅱ(化合物D)加入85℃0.3mol/L稀盐酸溶液中，搅拌反应20min后，加入过量的85℃0.6mol/LNaOH溶液，反应15min，冷却，过滤，蒸馏水洗涤固体，得到产物式Ⅰ的化合物盐(化合物E)，总收率为93％。

核磁结果：1H NMR(600MHz，MeOD)δ7.86(s,1H)，7.52(d，1H)，7.31(d，1H)，3.26(t，2H)，2.60(t，2H)，2.49(t，2H)，0.95(s，3H)。从核磁检测结果能够看出，与预测结构一致。

实施例11 ATP钾离子通道促进剂组合物

原料组成(重量份)：实施例2制备的新型二氮嗪类化合物1份、钠钾ATP酶0.2份、瑞格列奈1份。

制备方法：

将新型二氮嗪类化合物、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

实施例12 ATP钾离子通道促进剂组合物

原料组成(重量份)：实施例4制备的新型二氮嗪类化合物5份、钠钾ATP酶0.5份、瑞格列奈3份。

制备方法：

将新型二氮嗪类化合物、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

实施例13ATP钾离子通道促进剂组合物

原料组成(重量份)：实施例5制备的新型二氮嗪类化合物2份、钠钾ATP酶0.2份、瑞格列奈1.2份。

制备方法：

将新型二氮嗪类化合物、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

实施例14ATP钾离子通道促进剂组合物

原料组成(重量份)：实施例6制备的新型二氮嗪类化合物4份、钠钾ATP酶0.4份、瑞格列奈2.5份。

制备方法：

将新型二氮嗪类化合物、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

实施例15ATP钾离子通道促进剂组合物

原料组成(重量份)：实施例7制备的新型二氮嗪类化合物3份、钠钾ATP酶0.3份、瑞格列奈2份。

制备方法：

将新型二氮嗪类化合物、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

实施例16ATP钾离子通道促进剂组合物

原料组成(重量份)：实施例8制备的新型二氮嗪类化合物3份、钠钾ATP酶0.3份、瑞格列奈2份。

制备方法：

将新型二氮嗪类化合物、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

对比例1

与实施例16相比，未添加实施例8制备的新型二氮嗪类化合物，其他条件均不改变。

原料组成(重量份)：钠钾ATP酶0.3份、瑞格列奈5份。

制备方法：

将钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

对比例2

与实施例16相比，未添加瑞格列奈，其他条件均不改变。

原料组成(重量份)：实施例8制备的新型二氮嗪类化合物5份、钠钾ATP酶0.3份。

制备方法：

将新型二氮嗪类化合物、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

对比例3

与实施例16相比，采用市售二氮嗪(Proglycem提供)代替实施例8制备的新型二氮嗪类化合物

原料组成(重量份)：二氮嗪3份、钠钾ATP酶0.3份、瑞格列奈2份。

制备方法：

将二氮嗪、钠钾ATP酶溶于去离子水中，搅拌混合均匀后，加入瑞格列奈，边搅拌边混合均匀，冷冻干燥，得到的固体粉碎，制得ATP钾离子通道促进剂组合物。

测试例1体内肥胖症试验

将4周龄B6雄性小鼠圈养在有12小时光照、12小时黑暗交替周期的温度可控的(22℃)房间中，5只/笼子。高脂肪(HF)和低脂肪(LF)试验饮食分别包含58％和11％的脂肪卡路里。一组小鼠在研究的前4周被喂养HF饮食；剩余的45只小鼠被喂养LF饮食。指定用LF饮食的小鼠在整个研究中保持这种饮食，作为瘦对照小鼠的参照组。在第四周，将所有喂养HF的小鼠再分为9组小鼠。第一组在整个研究中保持HF饮食，作为肥胖的对照组。剩余8组小鼠被喂养HF饮食且同时施用实施例11-实施例16、对比例1-2制备的ATP钾离子通道促进剂组合物，其作为单剂量以每kg每天约150mg活性成分通过口服管饲法施用。每周称重那些动物，且每周两次测量每个笼子中的食物消耗直至第4周饮食改变，因而每天检测体重和食物摄取。以每个笼子的量计算喂养效率(消耗每卡路里所增加的体重克数)。在第24天(饮食改变前的第4天)、第32天(饮食改变后的第4天)采集用于分析胰岛素、葡萄糖和瘦素的样品，此后每两周一次。所有的例子中，在采集样品之前将食物移开8小时。通过葡萄糖氧化酶方法，分析葡萄糖，通过双抗体RIA检测胰岛素和瘦素浓度。胰岛素测定是基于大鼠标准，而瘦素测定使用小鼠标准。在研究结束时，采集餐后的血浆样品，并分析其中的甘油三酯和未酯化的脂肪酸浓度。药物治疗的4周后，处死每组中10只动物的亚组。移开、修剪并称重附睾的白脂肪组织(EWAT)、腹膜后(RP)的脂肪、肩胛间棕色脂肪组织(IBAT)和腓肠肌。从附睾的脂肪垫的重量评估百分比体重脂肪。对每组中5只动物的亚组i.p.注射0.5g/kg葡萄糖。注射后30分钟，采集血浆样品，并通过葡萄糖氧化酶法分析其葡萄糖含量。结果见表1和图1。

表1

组别	百分比体重脂肪(％)
		实施例11	24.5±2.6<sup>**##</sup>
实施例12	27.9±3.0<sup>**##</sup>
		实施例13	26.2±2.9<sup>**##</sup>
实施例14	25.5±3.1<sup>**##</sup>
		实施例15	24.5±3.4<sup>**##</sup>
实施例16	25.6±4.5<sup>**##</sup>
		对比例1	44.5±3.4
对比例2	40.6±4.5<sup>*#</sup>
		模型组	45.2±4.5<sup>**</sup>
空白组	22.4±2.12

注释：*为与空白组相比，P<0.05，**为P<0.01，#为与模型组相比，P<0.05，##为P<0.01。

本发明制得的ATP钾离子通道促进剂组合物具有显著降低肥胖小鼠百分比体重脂肪的效果，同时有助于血糖恢复，可以预防或治疗体重增加、糖尿病或葡萄糖耐量减低的药物中的用途。

对比例1和对比例2分别未添加新型二氮嗪类化合物或瑞格列奈，其对于小鼠体重调节，血糖恢复等方面的效果明显下降，其中对比例1与空白组和模型组相比，均不具有显著性。可见，新型二氮嗪类化合物或瑞格列奈的添加具有协同增效的作用。

测试例2药代动力学

1.试药

二氮嗪对照品，四川大学华西药学院药物化学教研室提供,批号20180205；实施例16和对比例3制得的ATP钾离子通道促进剂组合物；二氮嗪,Proglycem提供，50mg/mL。

2.材料

健康大鼠18只(四川大学基础医学院动物中心提供),体重190-230g,雌雄各半,随机分为实施例16、对比例3组和二氮嗪组,每组6只。

3.动物试验模型及给药方式的选择

理想的动物试验模型应以大鼠灌胃给药后进行药动学研究。本试验采用大鼠灌胃给药,旨在考察药物在大鼠体内的血药参数,进一步研究液体组合物与贺普丁口服溶液在大鼠体内的代谢过程有无显著性差异。本试验采用灌胃的方式。一般大鼠灌胃体积约为2mL,根据文献报道以及预试结果,给药量约为1.06mg/kg时可获得较好的检测灵敏度和分析结果。按此计算,一只约200g大鼠的给药量约为0.212mg。

4.试验方法

大鼠在试验前适应性喂养4天,全程不禁饮水；称取体重,以1.06mg/kg计算,分别于灌胃给药后30min、45min、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h自断尾创面处取血,血样经肝素钠抗凝后分取血浆。置-24℃冰箱中保存待测。

5.血药浓度的测定

血浆样品测定取上述采集的血浆样品，与对照品二氮嗪溶液(10μg/mL)进行液相色谱检测，判断二氮嗪的吸收峰位置，根据吸收峰面积与对照品相比，得出血浆样品中二氮嗪的含量，四组大鼠的二氮嗪经时血药浓度数据分别见表2,均值药-时曲线分别见图2。

表2

从均值血药浓度-时间曲线(图2)可知,灌胃给予实施例16ATP钾离子通道促进剂组合物后,二氮嗪达峰时间约为45min,在约30分钟时就能达到较高血药浓度,且在6小时后血浆中的二氮嗪已几乎完全消除,由此可知,本发明实施例16制得的ATP钾离子通道促进剂组合物经灌胃给药后,吸收快,达峰时间短，且有效药量高。明显优于普通二氮嗪片以及对比例3。

测试例3人肥胖症的治疗

可以在肥胖的人中检验如本文所述的制备的实施例16、对比例1-3和普通二氮嗪(由Proglycem提供)制得的ATP钾离子通道促进剂组合物的效力，如由Alemzadeh(Alemzadeh等，J Clin Endocr Metab，83：1911-1915(1998))描述。受治疗者由体重指数(BMI)大于或等于30kg/m²的中度至病态的肥胖的成人组成。每位受治疗者在评价初期进行完全的身体检查，在标准电子秤上测量体重、通过DEXA测量机体组成。

在研究开始前，在1周的导入期内所有受治疗者接受低热量饮食。设计这个方案以排除不可能适应的患者，并且以确保治疗前稳定的体重。以药物的每个剂量检验高达75位受治疗者。将日剂量设定为100、200和300mg/天。将日剂量分成2次剂量施用。在每次施用时以一粒、两粒和三粒50mg胶囊或片剂施用剂量。受治疗者每天用药，持续达12个月。每周检查、称重受治疗者，并询问他们任何副作用或并发的疾病。

从每位受治疗者获得24小时饮食回顾。使用标准的计算机软件程序，分析所述的饮食回顾。所有受治疗者接受低热量饮食，鼓励他们参与定期的锻炼。研究开始之前和完成之后，获得下述的实验室检验：空腹葡萄糖、空腹胰岛素、NEFA和血清钠(Na)、钾(K)和肌酐水平。

使用双抗体试剂盒，通过RIA检测胰岛素浓度。通过酶法测量胆固醇和甘油三酯浓度。通过酶比色法检测血浆NEFA。在相应的24小时内采集尿液，这用于测量在研究前和后的总氮测量和检测底物使用。

结果见表3。

表3受治疗者的空腹葡萄糖、空腹胰岛素、非酯化脂肪酸(NEFA)、血清钠(Na)、钾(K)和肌酐(n＝15)

所有其他临床实验室检验(包括血液学、临床血清化学和尿化学)都在肥胖受治疗者的正常范围内。

与现有技术相比，本发明合成的新型二氮嗪类化合物(式Ⅰ的化合物盐)是二氮嗪的一种新型结晶盐组分，具有良好的水溶性、生物相容性且合成方法简单，收率高，同时，通过添加明胶制备成缓控释药物组合物，从而增加药物的利用率和吸收率；

本发明采用新型二氮嗪类化合物和降糖药瑞格列奈复配，形成一种有效的ATP钾离子通道促进剂，其效果具有协同增效的作用，降糖药瑞格列奈，促进胰岛素分泌从而降低血糖含量，调节体重，在本发明中，组合物用量并不大，但具有显著的药用效果。钠钾ATP酶能有效促进ATP分解成ADP，从而释放能量，降低血糖，控制体重。

本发明ATP钾离子通道促进剂组合物可经口或不经过口给药，给药量因药物不同而各有不同，对成人来说，每天1-100mg较合适。经口服给药时，首先使化合物与常规的药用辅剂如赋形剂、解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式给药：非经口给药时可以注射液、输液剂或栓剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。