一种具有肾脏保护作用的药物组合物
阅读说明：本技术 一种具有肾脏保护作用的药物组合物 (Pharmaceutical composition with kidney protection effect ) 是由 段洪伟 白洁 张磊 陈光亮 徐希平 于 2019-08-28 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种具有肾脏保护作用的药物组合物。该药物组合物由一种内皮素抑制剂、依那普利、叶酸类物质及药剂学上可接受的载体组成,内皮素抑制剂包括阿曲生坦。本发明提供了该药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓慢性肾脏疾病和糖尿病性肾病的药物中的用途。通过本发明的实施,提供给患者该药物组合物,可以提高疗效,增加治疗依从性,降低医药费用。(The invention relates to a pharmaceutical composition with kidney protection effect. The medicine composition consists of an endothelin inhibitor, enalapril, folic acid substances and a carrier acceptable in pharmaceutics, wherein the endothelin inhibitor comprises atrasentan. The invention provides application of the pharmaceutical composition in preparing a medicament for preventing, treating or delaying chronic kidney diseases and diabetic nephropathy. Through the implementation of the invention, the pharmaceutical composition is provided for patients, the curative effect can be improved, the treatment compliance is increased, and the medical cost is reduced.)
技术领域
本发明涉及内皮素抑制剂、依那普利、叶酸类物质联合应用的药物组合物及其用途，属于药学领域。
背景技术
慢性肾脏病(Chronic kidney disease，简称CKD)是由各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍，据估算全球约有5亿人存在不同程度的肾脏病变，因此CKD已经成为一个全球性的健康问题。CKD患者医疗服务费用是非慢性肾脏疾病人群的1.8倍，透析患者的平均医疗服务费用是非慢性肾脏疾病人群的10.3倍，这给患者带来巨大的经济负担，严重影响患者的生活质量。另外，CKD患者心血管疾病的发病率、病死率明显高于普通人群，且出现早、进展快，是慢性肾脏病致死、致残的首要原因。
糖尿病肾病(Diabetic kidney disease，简称DKD)是指糖尿病微血管病变导致的肾小球硬化，是糖尿病最常见的微血管慢性并发症之一，也是导致糖尿病患者心血管事件和死亡的主要原因之一。根据流行病学统计研究，预计到2030年，世界范围内的糖尿病患者将达到3.66亿，而糖尿病肾病患者将超过1亿。在我国，糖尿病肾病已经成为导致终末期肾功能衰竭的第二大病因，仅次于肾小球肾炎。。
研究表明，补充叶酸总体上能够使脑卒中风险下降18％。分层分析发现，用于一级预防时，脑卒中风险降低25％；应用于未接受食品中添加叶酸的人群时，脑卒中风险降低25％【Wang X,Qin X,Demirtas H,et al.Efficacy of folic acid supplementation instroke prevention:a meta-analysis.Lancet 2007；369:1876-1882】；另外，依那普利叶酸治疗与单用依那普利相比【Xin Xu,Xianhui Qin.et al.Efficacy of Folic AcidTherapy on the Progressionof Chronic Kidney Disease.TAMA Inter Med.2016；176:1443-1450】，可使高血压患者CKD进展降低56％，肾功能快速下降降低33％，复合终点事件降低35％。显著延缓了轻、中度CKD患者的CKD进展。长期补充叶酸还可以显著降低血管内膜中膜厚度进展，在慢性肾病人群或心血管疾病高危人群疗效更佳【Qin X,Xu M,Zhang Y,etal.Effect of folic acid supplementation on the progression of carotid intima-media thickness:A meta-analysis of randomized controlledtrials.Atherosclerosis,2012；222:307-313】。
内皮素(endothelin，ET)来源于内皮细胞，具有强效而持久的血管收缩功能。病理生理学研究表明ET-1在各种组织中是由内皮素受体ETA和ETB两种亚型所介导，参与各种心血管疾病的生理和病理过程。在平滑肌细胞ETA和ETB均能促使血管收缩，然而内皮细胞ETB受体可以清除ET-1，它通过调控一氧化氮偶联，促血管舒张和抗细胞增殖，起到血管保护作用。研究表明【魏臻,等.新型血管紧张素Ⅱ受体和内皮素受体双重拮抗剂研究进展.药学进展.2006,30(5):193-199】，内皮素有血管紧张素(Ang)转换酶样活性，能促进AngⅠ转化为AngⅡ，应用ET受体拮抗剂能降低AngⅡ，而AngⅡ能促进ET的表达和释放，其机制可能为心血管系统存在一个区域化的ET-AngⅡ相互作用系统，参与局部循环稳态的调节【LaplanteM A,et al.Endothelin mediates superoxide production in angiotensinⅡ-inducedhypertension in rats.Free RadicBiol Med,2005,38(5):589-596.】。
阿曲生坦为一种口服高效、高选择性(对ETA的亲和力是ETB的1860倍)ETA受体拮抗剂，能逆转或阻断ET-1对于细胞增殖、血管生成、骨质重塑的促进作用及其对血流动力学的影响。有研究表明，阿曲生坦可减少糖尿病肾病和慢性肾病患者的蛋白尿水平，并且作为选择性内皮素受体拮抗剂，治疗过程中不良事件很少。
发明内容
本发明的目的是针对慢性肾脏疾病或糖尿病肾病提供一种疗效显著的药物组合物。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种药物组合物，组成是：
(1)药用剂量的内皮素抑制剂；
(2)药用剂量的依那普利；
(3)药用剂量的叶酸类物质；
(4)药剂学上可接受的载体。
在本发明提供的药物组合物中，内皮素抑制剂主要指阿曲生坦，阿曲生坦可以盐类、脂类、活性代谢产物或药用前体形式存在。本发明提供的阿曲生坦作为主要药用成分，其盐类、脂类、活性代谢产物或药用前体形式也在本申请的保护范围内，阿曲生坦的药用剂量为0.375～1.5mg，阿曲生坦的脂类、活性代谢产物或药用前体形式的药用剂量可以进行相应换算。
在本发明提供的药物组合物中，依那普利可以盐类、脂类、活性代谢产物或药用前体形式存在。本发明提供的依那普利作为药物成分，依那普利的盐类、酯类、活性代谢产物或药用前体等存在形式也在本申请保护的范围内，依那普利的药物剂量为2.5～10mg且其各种形式的药用剂量可以进行相互换算。
在本发明提供的药物组合物中所述叶酸类物质包括叶酸、甲酰四氢叶酸钙、5-甲基四氢叶酸(L-甲基叶酸)、叶酸盐、叶酸或叶酸盐的活性代谢物和可在体内释放/生成叶酸的物质。叶酸类物质的药用剂量是0.4～1.6mg，优选0.4～0.8mg，且其各种形式的药用剂量可以进行相互换算。
在本发明中，组合物有效成分的药用剂量是指该药药效成分在该组合物中与其他药效成分组合后使组合物发挥药效的剂量范围。组合物有效成分所选的剂量范围也为最佳剂量范围，可以让患者获得更多的受益。
通过研究，本发明的药物组合物：
作为一种优选，本发明提供的药物组合物的组成是0.75mg阿西生坦、10mg依那普利和0.4mg叶酸。
作为另外一种优选，本发明提供的药物组合物的组成是0.75mg阿西生坦、10mg依那普利和0.8mg叶酸。
作为另外一种优选，本发明提供的药物组合物的组成是1mg阿西生坦、10mg依那普利和0.4mg叶酸。
作为另外一种优选，本发明提供的药物组合物的组成是1mg阿西生坦、10mg依那普利和0.8mg叶酸。
本发明所述的药物组合物还包含药剂学可接受的载体，可制成普通口服制剂，包括普通片剂、普通胶囊、颗粒剂等，制成片剂时所述可药用载体包括有助于将活性化合物配制成药用制剂的赋形剂，如预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、乳糖、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮等的一种或几种物质的组合物，属于本领域常识。
本发明所述的药物组合物可以变通的以“组合药盒”形式使用。上述“组合药盒”是一种盒状容器，内置多种剂量形式的药物组合，及其服用说明书。“组合药盒”更适用于个体化用药。
本发明的有益效果是：所述药物组合物适用于CKD和糖尿病肾病，可显著改善患者肾功能。本发明提供的药物组合物其有效成分为阿曲生坦、依那普利和叶酸类物质，阿曲生坦为高选择性内皮素抑制剂，能逆转或阻断ET-1对于细胞增殖、血管生成、骨质重塑的促进作用及其对血流动力学的影响，减少糖尿病肾病和慢性肾病患者的蛋白尿水平。依那普利为血管紧张素转换酶抑制剂，与叶酸合用可有效保护肾脏，还可降低心脑血管疾病发生风险，三者联用可协同改善肾脏功能，对高血压患者还有降压作用，因而本发明提供的药物组合物更加适用于治疗伴有肾功能损害的高血压患者。本发明提供的药物组合物的协同改善作用是单药或两两联用所不能显而易见的。本发明提供的药物组合物还具有用药剂量较低，副作用少的特点。另外，本发明还可以使患者服药方便，提高患者依从性，降低医疗费用，具有较好的市场前景。
下面结合
具体实施方式
对本发明做进一步说明，应当理解，实施例中所选剂量并非对本发明的限定，凡依照本发明内容进行的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。
具体实施方式
实施例1-6.阿曲生坦+依那普利+叶酸片(1000片量)
制备工艺：
将阿曲生坦、依那普利、叶酸混合，加入羧甲淀粉钠、十二烷基硫酸钠混合，再加入微晶纤维素、预胶化淀粉混合均匀，用适量的10％聚维酮乙醇溶液制成软材，制粒、干燥、整粒，将含水量为3％左右的颗粒与适量的硬脂酸镁混合均匀，压片制成1000片即得。
实施例7-12.阿曲生坦+依那普利+叶酸胶囊(1000粒量)
制备工艺：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取阿曲生坦、依那普利、叶酸混合均匀，加入乳糖晶体、聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，均匀混合，用微粉硅胶制成软材，20目筛制粒，60℃干燥约2h，20目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与适量的1％硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，装入空心胶囊，即得1000粒胶囊。制备过程中注意避光。成品检验合格后铝塑泡罩包装，避光保存。
实施例13：阿曲生坦+依那普利叶酸组合物对慢性肾病大鼠的肾脏保护作用。
(一)造模：
成年Wistar大鼠，雄性，体重200-220g，普通饲料喂养、检疫7天后，剔除体重偏差超过10％的动物，随机选择10只大鼠作为正常对照组，采用普通饲料继续喂养至实验结束。造模组动物造模前12h禁食不禁水，采用阿霉素(7.9mg/kg)单次尾静脉注射，造模2h后恢复正常饮食饮水。4w后检测所有动物的24h尿蛋白水平，选取24h尿蛋白≥20mg的成模动物进入后续试验。
(二)分组及给药：
正常对照组大鼠10只，造模成功的动物随机分为7组，模型组，阿曲生坦0.15mg/kg组，依那普利叶酸(简称依叶)1.08mg/kg组，阿曲生坦+依叶(0.05+0.54)mg/kg组，阿曲生坦+依叶(0.075+1.08)mg/kg组，阿曲生坦+依叶(0.1+1.08)mg/kg组，阿曲生坦+依叶(0.15+2.16)mg/kg组。每组12只动物，灌胃给药，给药体积为10ml/kg。每日一次，连续给药12周后检测生化指标。
【注】给药剂量描述中，依叶1.08mg/kg表示依那普利1mg/kg+叶酸0.08mg/kg，依叶0.54mg/kg表示依那普利0.5mg/kg+叶酸0.04mg/kg，依叶2.16mg/kg表示依那普利2mg/kg+叶酸0.16mg/kg。
(三)检测指标：
1.尿液指标：给药12周将大鼠转入代谢笼内，然后收集24小时尿液并记录尿量。将收集的24小时尿液混匀，取尿液，3000r/min离心10分钟，取上清，用考马斯亮蓝法测定尿蛋白浓度；乘以动物24h尿量，计算出24小时尿蛋白量。
2.血液指标：给药结束时，动物采用戊巴比妥钠麻醉后行腹主动脉取血，血样静置2-4h，3000r/min离心10分钟，取上清，利用生化分析仪测定血肌酐、血尿素氮水平。
(四)实验结果：
表1阿曲生坦+依叶对慢性肾病大鼠的生化指标的影响(n＝10-12)
注：与正常组比较，*P<0.05,**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；与阿曲生坦组相比，△P<0.05,△△P<0.01。与依叶组相比，▲P<0.05,▲▲P<0.01.
在给予阿霉素造模之后，造模组动物体重下降，活动减少，推断为阿霉素造模所致的应激反应，注射3周后体重开始稳定增加，正常对照组动物体重在实验期间一直保持增长，模型组动物体重平均值低于正常组动物体重，但没有显著性差异。整个实验期间，所有组动物均没有发现死亡或其他异常情况。
动物连续给药12周，与正常组大鼠比较，模型组大鼠血肌酐升高、BUN升高、尿蛋白升高，表明大鼠出现慢性肾病的症状。经给药治疗后，各给药组血肌酐显著降低、尿蛋白降低均达到显著性差异；但是阿曲生坦或者依叶的单独治疗仍不能达到非常好的治疗效果。从上表的数据意外地发现，与单药相比，阿曲生坦+依叶在(0.075+1.08)和(0.1+1.08)mg/kg剂量水平下，两者表现出明显的协同增效作用，进一步增大剂量并未表现出更好的疗效，但相应的副作用却会增加。
实施例14：阿曲生坦+依那普利叶酸组合物对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用。
(一)造模：
成年Wistar大鼠，雄性，体重200-220g，普通日粮饲料喂养检疫7天后，剔除体重偏差超过10％的动物，随机选择12只大鼠作为假手术对照组，采用普通饲料继续喂养至实验结束。造模组动物喂饲高脂高糖饲料3周，所有动物禁食不禁水12h，采用戊巴比妥钠麻醉后行左肾结扎手术，假手术组动物仅打开腹腔，找到左肾的操作，并不结扎，术后3天内给予10万单位的青霉素预防感染。手术后4w动物恢复。所有动物禁食不禁水12h，采用腹腔一次性注射STZ溶液35mg/kg进行造模手术，分别于注射后3d、7d、14d检测所有动物的血糖，给药后14d测动物24h尿蛋白水平，选取空腹血糖(FBG)≥16.7mmol/L且24h尿蛋白≥20mg的成模动物进入后续试验。造模动物在整个实验期间一直给予高脂高糖饲料喂养，直至实验结束。
(二)分组及给药：
假手术对照组大鼠保留，共12只，造模成功的动物随机分为6组，模型组，阿曲生坦0.1mg/kg组，依那普利叶酸(简称依叶)1.04mg/kg组，阿曲生坦+依叶0.075+1.04mg/kg组，阿曲生坦+依叶0.1+1.04mg/kg组，阿曲生坦+依叶0.15+2.08mg/kg组。每组14只动物，灌胃给药，给药体积为10ml/kg。每日一次，连续给药12周后检测生化指标。
(三)检测指标：
1.大鼠空腹血糖
2.尿液指标：给药12周将大鼠转入代谢笼内，然后收集24小时尿液并记录尿量。将收集的24小时尿液混匀，取尿液，3000r/min离心10分钟，取上清，用考马斯亮蓝法测定尿蛋白浓度；乘以动物24h尿量，计算出24h尿蛋白量。
3.血液指标：给药结束时，动物采用戊巴比妥钠麻醉后行腹主动脉取血，血样静置2-4h，3000r/min离心10分钟，取上清，利用生化分析仪测定血肌酐、血尿素氮水平。
(四)实验结果：
造模组动物在给予高脂饲料喂养期间体重增加比对照组大鼠快，但两组动物的体重平均值之间不具有显著性差异。造模组动物经STZ造模及手术结扎肾脏后开始出现三多症状：多饮多食多尿，由于STZ毒性和手术的应激损伤，造模动物体重增长速度减慢，给药治疗之后，模型动物的“三多”情况有明显改善。实验结束时，模型及给药组动物平均体重均低于对照组动物平均体重，但不存在显著性差异。在整个实验期间，模型组动物在给药治疗1周后发现一只大鼠死亡，解剖后发现，结扎肾脏组织萎缩变硬，其他组织没有发现明显的病变，其余组动物没有发现死亡和异常情况。
连续给药12周，与假手术组大鼠比较，模型组大鼠血糖升高，饮食饮水量增加，尿量增多，表明大鼠出现了明显的糖尿病症状；模型组大鼠血肌酐升高，BUN升高，尿蛋白升高，表明大鼠出现了明显的糖尿病肾病的病理特征。经给药治疗后，各给药组大鼠尿量减少，血糖无明显变化，血肌酐显著降低，尿蛋白显著降低，均达到显著性差异。从表2的数据意外地发现，与单药相比，阿曲生坦+依叶在(0.075+1.04)和(0.1+1.04)mg/kg剂量水平下，两者表现出明显的协同增效作用，进一步增大剂量并未表现出更好的疗效，但相应的副作用却会增加。
表2阿曲生坦+依叶对糖尿病肾病大鼠的生化指标的影响(n＝12-14)
注：与假手术组比较，*P<0.05,**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；与阿曲生坦组相比，△P<0.05,△△P<0.01。与依叶组相比，▲P<0.05,▲▲P<0.01；
由实施例13-14可见，阿曲生坦和依叶均能明显改善慢性肾病大鼠或糖尿病肾病大鼠的肾功能，但是单独应用仍不足以使肾功能达到一个较好的水平，因此选择两者联用，在实验中意外地发现二者联合使用，只有在(0.075+1.04～1.08)和(0.1+1.04～1.08)mg/kg剂量水平下两者表现出最佳的协同增效的作用，肾功能较单药明显改善。临床上，慢性肾病患者有不同程度的水肿症状，阿曲生坦剂量过高时，会加重慢性肾病患者的水肿而导致停药(并非阿曲生坦本身引起的严重副作用)。
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