治疗椎间盘退行性疾病的组合物、脂质体纳米给药系统及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 治疗椎间盘退行性疾病的组合物、脂质体纳米给药系统及其制备方法和应用 (Composition for treating intervertebral disc degenerative disease, liposome nano drug delivery system, preparation method and application thereof ) 是由 查建林 李晨光 于 2019-04-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种治疗椎间盘退行性疾病的组合物、脂质体纳米给药系统及其制备方法和应用,所述组合物是由齐墩果酸和淫羊藿苷按质量比为1:10～10:1组成。所述脂质体纳米给药系统,是由组合物、表面活性剂TPGS、胆固醇和磷脂制成的纳米脂质体制剂。本发明提供的由齐墩果酸和淫羊藿苷组成的组合物具有益气化瘀补肾的功效,可用于制备治疗椎间盘退行性疾病的药物；尤其是本发明提供的组合物的脂质体纳米给药系统,可有效提高组合物中齐墩果酸和淫羊藿苷的生物利用度,降低组合物的服用剂量和毒性,服用方便、量小高效且具有一定被动靶向性,提高了患者的顺应性,具有推广应用价值。(The invention discloses a composition for treating intervertebral disc degenerative diseases, a liposome nano drug delivery system, a preparation method and application thereof, wherein the composition is composed of oleanolic acid and icariin in a mass ratio of 1: 10-10: 1. The liposome nano drug delivery system is a nano liposome preparation prepared from a composition, a surfactant TPGS, cholesterol and phospholipid. The composition consisting of the oleanolic acid and the icariin has the effects of tonifying qi, removing blood stasis and tonifying the kidney, and can be used for preparing a medicament for treating the intervertebral disc degenerative diseases; particularly, the liposome nano drug delivery system of the composition provided by the invention can effectively improve the bioavailability of oleanolic acid and icariin in the composition, reduce the administration dosage and toxicity of the composition, is convenient to take, small in dosage, high-efficiency and has certain passive targeting property, the compliance of patients is improved, and the liposome nano drug delivery system has popularization and application values.)
技术领域
本发明涉及一种治疗椎间盘退行性疾病的组合物、脂质体纳米给药系统及其制备方法和应用，属于医药技术领域。
背景技术
椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IVDD)是以细胞外基质丢失为典型特征的衰老性疾病。根据王拥军等研究者在《中国中医骨伤科杂志》2000年第3期发表的《椎间盘退变的始动因素、中间环节与结局》一文可知，受供血不良的先天结构影响，软骨终板通路和纤维环外周通路能提供的营养有限。随着年龄的增长，细胞不断衰老，基因表现型发生改变，代谢能力的增加，细胞外基质紊乱，这些因素都进一步加重了IVDD。IVDD所导致的椎间盘突出等病症与腰骶部疼痛密切相关，对人类身心、社会经济造成了很大的影响。
中医药在诊治腰椎间盘退行性疾病时，方法各异，但多不离益气、行气、活血和补肾。上海中医药大学施杞教授遵循“以气为主，以血为先，痰瘀兼顾，肝脾肾同治”的中医辨证论治理论，经过长期临床实践形成益气化瘀补肾方治疗椎间盘退行性疾病，临床疗效显示该方对腰椎间盘突出症疗效尤其显著。但由于该方属于传统中药方剂，医生开方后，患者需将药材带回家中煎煮后服用，耗时耗力且服用不便，难以适应现代人们快节奏的生活方式。因此急需一种服用方便、量小高效的现代中药制剂形式。
齐墩果酸主要提取来源木犀科植物齐墩果olea europaea l.的叶；女贞ligustrum lucidum ait.果实；龙胆科植物青叶胆swertia mileensis t.n.he etw.l.shi全草；川西獐牙菜s.mussotii franch.；伞形科植物大星芹astrantia major l.的叶、根；五加科植物楤木aralia chinensis l.的根皮及茎皮；葫芦科植物大籽雪胆hemsleya macrosperma c.y.wu、可爱雪胆hemsleya amabilis diels、中华雪胆hemsleyachinensis cogn.(金龟莲、罗锅底)的块根。齐墩果酸临床用于治疗传染性急性黄疸型肝炎，具有明显的降低谷丙转氨酶及退黄效果，改善病毒性和慢性迁延性肝炎患者的症状，体征和肝功能；还可用于银屑病，风湿性关节炎，肾炎水肿，肝硬化腹水，急慢性肝炎，胃痛淋浊，血崩，跌打损伤，痈肿，腰膝酸软，胎动不安等症。中国专利CN201510950032.2中提出齐墩果酸可作为α36***受体激活剂用于制备治疗椎间盘退变性疾病的药品。
淫羊藿苷为箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿巫，朝鲜淫羊藿等干燥茎叶提取物，淫羊藿苷能增加心脑血管血流量、促进造血功能、免疫功能及骨代谢，还具有补肾壮阳、抗衰老等功效。
由于齐墩果酸为脂溶性成分，淫羊藿苷为水溶性成分，在注射给药时难以找到一种合适的溶剂同时满足二者的溶解度需求；如将其制备成片剂、胶囊剂等固体制剂，口服给药时会出现生物利用度低，服用剂量大的问题；因此，目前还没有齐墩果酸和淫羊藿苷的组合物用于治疗椎间盘退行性疾病的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗椎间盘退行性疾病的组合物、脂质体纳米给药系统及其制备方法和应用。
一种治疗椎间盘退行性疾病的组合物，是由齐墩果酸和淫羊藿苷按质量比为1:10～10:1组成。
本发明所述组合物的应用，是以所述组合物作为活性成分用于制备治疗椎间盘退行性疾病的药物。
一种治疗椎间盘退行性疾病的组合物的脂质体纳米给药系统，是由上述组合物、表面活性剂TPGS、胆固醇和磷脂制成的纳米脂质体制剂。
进一步的，所述纳米给药系统的粒径为80～200nm，zeta电位为0±30mV，包封率为75～99％，载药量为3～15％。
进一步的，所述脂质体纳米给药系统中，组合物与磷脂的质量比为1:5～1:30，表面活性剂TPGS与磷脂的质量比为1:8～1:50，胆固醇与磷脂的质量比为1:1～1:20。
进一步的，所述磷脂为大豆磷脂(SPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)、维生素E琥珀酸酯聚乙二醇酯(TPGS)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二月桂酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)和二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)中的一种或多种。
本发明所述的脂质体纳米给药系统的制备方法，是将组合物、表面活性剂TPGS、胆固醇和磷脂混合后再采用薄膜分散法制备所述脂质体纳米给药系统。
进一步的，所述脂质体纳米给药系统的制备，包括如下操作：
将组合物中的齐墩果酸、表面活性剂TPGS、胆固醇和磷脂溶于有机溶剂，减压旋转蒸发，除去有机试剂，得有机相；将组合物中的淫羊藿苷溶于水化介质中，加入有机相，水浴搅拌30分钟～1小时，超声波细胞粉碎机超声2～6分钟，膜过滤即得脂质体纳米给药系统。
进一步的，所述水化介质为pH5～8，浓度为1～20mmol/ml的磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)。
进一步的，所述纳米给药系统的剂型为注射剂或者冻干粉针剂。
更进一步的，所述冻干粉针剂中所用的冻干保护剂为乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇中的一种或几种，其用量占该纳米给药系统质量的2-10％。
本发明所述的脂质体纳米给药系统的应用，是指用于制备治疗椎间盘退行性疾病的药物。
与现有技术相比，本发明具有如下显著性有益效果：
本发明的提供的由齐墩果酸和淫羊藿苷组成的组合物具有益气化瘀补肾的功效，可用于制备治疗椎间盘退行性疾病的药物；尤其是本发明提供的组合物的脂质体纳米给药系统，可以将组合物包封于类脂质双分子层内而形成微型泡囊体，其中的双分子层结构具有亲酯端和亲水端，能够同时包封脂溶性和水溶性成分，同时双分子层结构与皮肤细胞膜结构相同，易于与细胞膜融合，能够提高药物的生物利用度，并且脂质体进入体内即被巨噬细胞作为异物吞噬，具有一定的天然靶向作用，可进一步提高组合物中齐墩果酸和淫羊藿苷的生物利用度，降低组合物的服用剂量和毒性，服用方便、量小高效且具有一定被动靶向性，提高了患者的顺应性，具有推广应用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1：治疗椎间盘退行性疾病的组合物的脂质体纳米给药系统的制备
本实施例中，齐墩果酸与淫羊藿苷质量比为1:10，齐墩果酸和二硬脂酰磷脂酰胆碱质量比为1:5，表面活性剂TPGS和二硬脂酰磷脂酰胆碱质量比为1:8，胆固醇和二硬脂酰磷脂酰胆碱质量比为1:1；
将齐墩果酸、表面活性剂TPGS、胆固醇和二硬脂酰磷脂酰胆碱溶于三氯甲烷/乙醇溶液中，然后减压旋转蒸发，除去有机试剂，得有机相；将淫羊藿苷溶解于3ml磷酸缓冲盐溶液缓冲液(pH6.5，浓度10mmol/ml)中，加入有机相，60℃下水浴搅拌30分钟，超声波细胞粉碎机超声2分钟，过0.22μm滤膜，即得所述脂质体纳米给药系统，所制得的脂质体纳米给药系统的粒径为80～200nm，zeta为0±30mV，包封率为75.0±5.1％，载药量为3.0±0.1％。
实施例2：治疗椎间盘退行性疾病的组合物的脂质体纳米给药系统的制备
本实施例中，齐墩果酸与淫羊藿苷质量比为1:1，齐墩果酸和大豆磷脂质量比为1:17.5，表面活性剂TPGS和大豆磷脂质量比为1:29，胆固醇和大豆磷脂质量比为1:10；
将齐墩果酸、表面活性剂TPGS、胆固醇和大豆磷脂溶于三氯甲烷/乙醇溶液中，然后减压旋转蒸发，除去有机试剂，得有机相；将淫羊藿苷溶解于3ml磷酸缓冲盐溶液缓冲液(pH6.5，浓度10mmol/ml)中，加入有机相，60℃下水浴搅拌45分钟，超声波细胞粉碎机超声4分钟，过0.22μm滤膜，即得所述脂质体纳米给药系统，所制得的脂质体纳米给药系统的粒径为80～200nm，zeta为0±30mV，包封率为85.0±2.9％，载药量为9.2±0.01％。
实施例3：治疗椎间盘退行性疾病的组合物的脂质体纳米给药系统的制备
本实施例中，齐墩果酸与淫羊藿苷质量比为10:1，齐墩果酸和二棕榈酰磷脂酰胆碱质量比为1:30，表面活性剂TPGS和二棕榈酰磷脂酰胆碱质量比为1:50，胆固醇和二棕榈酰磷脂酰胆碱质量比为1:20；
将齐墩果酸、表面活性剂TPGS、胆固醇和二棕榈酰磷脂酰胆碱溶于三氯甲烷/乙醇溶液中，然后减压旋转蒸发，除去有机试剂，得有机相；将淫羊藿苷溶解于3ml磷酸缓冲盐溶液缓冲液(pH6.5，浓度10mmol/ml)中，加入有机相，60℃下水浴搅拌1小时，超声波细胞粉碎机超声6分钟，过0.22μm滤膜，即得所述脂质体纳米给药系统，所制得的脂质体纳米给药系统的粒径为80～200nm，zeta为0±30mV，包封率为99.0±0.9％，载药量为15.0±0.01％。
最后需要在此指出的是：以上仅是本发明的部分优选实施例，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。