阅读说明：本技术 粘附连接功能强化剂 (Adhesion bonding functional enhancer ) 是由 柚鸟真里 于 2015-12-22 设计创作，主要内容包括：本发明提供粘附连接功能强化剂、E-钙粘蛋白强化剂、细胞间结合力强化剂、上皮屏障功能强化剂以及抵抗力强化剂,上述制剂含有选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、维生素E及其衍生物、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种。(The present invention provides an adhesion linkage function enhancer, an E-cadherin enhancer, an intercellular cohesion enhancer, an epithelial barrier function enhancer, and a resistance enhancer, wherein the preparation contains at least one selected from the group consisting of ascorbyl phosphate and salts thereof, vitamin E and derivatives thereof, copper chlorophyll and salts thereof, and lysozyme chloride.)

粘附连接功能强化剂

本申请是申请日为2015年12月22日、申请号为201580071316.2、发明名称为“粘附连接功能强化剂”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及粘附连接功能强化剂、E-钙粘蛋白强化剂、细胞间结合力强化剂、上皮屏障功能强化剂、抵抗力强化剂。

背景技术

上皮是指，皮肤表皮、鼻腔、呼吸道、口腔、消化道、泌尿生殖器的粘膜等，覆盖身体的内外表面的细胞层。上皮具备有防止水分蒸发、防止由来自外部的化学性刺激或物理性刺激引起的损伤、病原性微生物侵入体内的屏障功能，对维持生命体起到重要作用。已知上皮的屏障功能会由于压力、紫外线、温度、湿度、传染性微生物等而降低，而上皮的屏障功能的下降与多种疾患的发病有关。因此，出于保持皮肤状态的健康的目的，人们已经在皮肤表皮上尝试了含有皮肤屏障功能改善剂的皮肤外用制剂等(参考专利文献1)。同样地，已知维持肠粘膜屏障功能，对于肥胖引起的胰岛素抵抗性的发病、或者肠炎加重的预防和/或改善很重要，人们在粘膜上也尝试了表皮、上皮屏障功能改善剂的研发(参考专利文献2)。

已知的是，上皮屏障功能是通过上皮细胞间的物理性连接而形成的。这种细胞间连接是通过被称为紧密连接、粘附连接(Adherence junction；下文中也称为“AJ”)或间隙连接的细胞粘附结构而形成的。其中，已知的是，AJ在细胞粘附结构中起关键作用，AJ的形成是形成其它的细胞粘附结构所不可缺少的(参考非专利文献1、2、3)。

关于钙粘蛋白(cadherin)，其家族中现在已知有约20种钙粘蛋白，已知存在于皮肤表皮的钙粘蛋白的种类为E(上皮型)-钙粘蛋白，据报道人上皮组织中也同样表达有E-钙粘蛋白(参考非专利文献4)。

关于E-钙粘蛋白，其是起到维持上皮屏障功能的重要作用的AJ的主要构成成分，根据报道和建议，在伴随有上皮屏障功能丧失的疾病(返流性食道炎、炎症性肠病、过敏性鼻炎、口腔炎、牙周病、口干、口臭等)中，E-钙粘蛋白的表达降低，控制上皮中的E-钙粘蛋白的表达对于疾病的预防和/或治疗很重要。例如，专利文献1中记载了一种皮肤外用制剂，其专注于作为上皮型钙粘蛋白的E-钙粘蛋白，通过促进人皮肤中的E-钙粘蛋白的表达，用以改善皮肤的皱纹、松弛、肌肤纹理结构。

[现有技术文献]

[专利文献]

[专利文献1]日本专利特开2007-001914号公报

[专利文献2]日本专利特开2011-178764号公报

[非专利文献1]Barry Gumbiner等,The Journal of Cell Biology,1988年,第107卷,第1575-1587页

[非专利文献2]Barry M.Gumbiner.Nature Reviews,2005年,第6卷,第622-634页

[非专利文献3]Wim.F.Jongen等,The Journal of Cell Biology,1991年,第114卷,第3期,第545-555页

[非专利文献4]Anne B.Katz等,Journal of Investigative Dermatology,1999年,第112卷,第5期,第818-821页

发明内容

发明所解决的课题

已知的是，上皮为分隔生命体的内侧和外侧的组织，对于在维持生命体方面的重要水分或离子的蒸发、或者病原性微生物的入侵，上皮具有物理性屏障功能。人们认为，此种屏障功能的降低会成为多种疾病发病的原因。因此，存在提供强化上皮的屏障功能的新型制剂的潜在需求。

本发明的课题的目的在于提供一种强化上皮屏障功能的制剂。

解决课题的手段

本发明为鉴于上述内容而完成的发明，其发现了抗坏血酸磷酸酯及其盐、维生素E及其衍生物、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶通过强化E-钙粘蛋白的表达而具有强化上皮屏障功能的作用，从而完成了本发明。

本发明提供如下的[1]～[21]。

[1]一种粘附连接功能强化剂，其特征在于，含有选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、维生素E及其衍生物、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种。

[2]根据[1]所述的强化剂，其为粘膜上皮用的强化剂。

[3]根据[1]所述的强化剂，其为口腔粘膜上皮用的强化剂。

[4]根据[1]所述的强化剂，其为牙龈粘膜上皮用的强化剂。

[5]一种E-钙粘蛋白强化剂，其特征在于，含有选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、维生素E及其衍生物、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种。

[6]根据[5]所述的强化剂，其为粘膜上皮用的强化剂。

[7]根据[5]所述的强化剂，其为口腔粘膜上皮用的强化剂。

[8]根据[5]所述的强化剂，其为牙龈粘膜上皮用的强化剂。

[9]一种细胞间结合力强化剂，其特征在于，含有选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、维生素E及其衍生物、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种。

[10]根据[9]所述的强化剂，其为粘膜上皮用的强化剂。

[11]根据[9]所述的强化剂，其为口腔粘膜上皮用的强化剂。

[12]根据[9]所述的强化剂，其为牙龈粘膜上皮用的强化剂。

[13]一种上皮屏障功能强化剂，其特征在于，含有选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、维生素E及其衍生物、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种。

[14]根据[13]所述的强化剂，其为粘膜上皮用的强化剂。

[15]根据[13]所述的强化剂，其为口腔粘膜上皮用的强化剂。

[16]根据[13]所述的强化剂，其为牙龈粘膜上皮用的强化剂。

[17]一种抵抗力强化剂，其特征在于，含有选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、维生素E及其衍生物、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种。

[18]根据[17]所述的强化剂，其为粘膜上皮用的强化剂。

[19]根据[17]所述的强化剂，其为口腔粘膜上皮用的强化剂。

[20]根据[17]所述的强化剂，其为牙龈粘膜上皮用的强化剂。

[21]根据[1]～[20]中任一项所述的强化剂，其还含有选自薄荷酮、香芹酮、桉树脑、柠檬烯、茴香脑、丁子香酚、薄荷醇和肉桂醛中的一种或两种以上。

发明效果

根据本发明，可有效地强化上皮屏障功能。

具体实施方式

本发明的制剂含有选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、维生素E及其衍生物、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种(以下称为“(A)成分”)。

<抗坏血酸磷酸酯及其盐>

作为抗坏血酸磷酸酯及其盐，例如可举出用磷酸将抗坏血酸的2位、3位、5位和6位的各个羟基进行酯化而成的物质。抗坏血酸的酯化部位只要选自上述各个羟基中的一个以上即可。

作为抗坏血酸磷酸酯中的磷酸，没有特别限制，例如可举出磷酸；磷酸的单烷基酯(例如，磷酸所具有的一个氢被选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基和己基等碳原子数为1～6个的烷基中的烷基所取代的磷酸单酯)等磷酸单酯；以及，磷酸的二烷基酯(例如，磷酸所具有的两个氢被选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基和己基等碳原子数为1～6个的烷基中的两个烷基所取代的磷酸的二烷基酯)等磷酸二酯。所述磷酸的二烷基酯中，两个烷基可彼此相同或不同。

作为抗坏血酸磷酸酯的盐，没有特别限制，例如可举出钠、钾等碱金属盐，镁、钙和钡等碱土金属盐，以及，铝等多价金属盐等各种金属盐；铵、三环己基铵等铵盐；单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、单异丙醇胺、二异丙醇胺、三异丙醇胺等各种链烷醇胺盐等。

作为用于本发明的抗坏血酸磷酸酯及其盐，例如，优选L-抗坏血酸磷酸酯及其钠盐、L-抗坏血酸磷酸酯及其镁盐，更优选L-抗坏血酸磷酸酯镁盐。

抗坏血酸磷酸酯及其盐可采用介由化学合成等人工合成的物质，也可以采用市售品。抗坏血酸磷酸酯及其盐例如可从昭和电工(株)等购入。

本发明中的抗坏血酸磷酸酯及其盐，可仅使用一种，也可组合使用两种以上。

从表现出本发明所期望的效果例如强化上皮屏障功能的效果等的角度出发，以制剂的总质量计，抗坏血酸磷酸酯及其盐的混合量优选为0.01～3质量％，更优选为0.1～1质量％。

<维生素E及其衍生物>

维生素E是一种也可被称为生育酚(tocopherol)的化合物。作为维生素E及其衍生物，没有特别限制，例如可举出dl-α-生育酚、dl-生育酚乙酸酯、dl-α-生育酚烟酸酯、dl-α-生育酚琥珀酸酯等。其中，从表现出本发明所期望的效果的角度出发，优选dl-α-生育酚乙酸酯。dl-α-生育酚乙酸酯例如可从DSM Nutrition Japan(株)等购入。

从表现出本发明所期望的效果的角度出发，以制剂的总质量计，维生素E及其衍生物的混合量优选为0.005～1质量％，更优选为0.01～1质量％。

<叶绿素铜及其盐>

叶绿素铜是指铜叶绿素(copper chlorophyllin)，例如可通过用铜取代植物中的叶绿素分子中的镁，使其稳定化而获得。作为其盐，可举出钠盐、钾盐、钙盐等碱金属盐或碱土金属盐。其中，从表现出本发明所期望的效果的角度出发，优选叶绿素铜钠。叶绿素铜钠例如可从和光纯药工业(株)或关东化学(株)等购入。

从表现出本发明所期望的效果的角度出发，以制剂的总质量计，叶绿素铜及其盐的混合量优选为0.00005～0.1质量％，更优选为0.0001～0.01质量％。

＜氯化溶菌酶＞

作为氯化溶菌酶，可使用通过公知的方法从鸡蛋中获得的日本药典(日本药局方)或妆原基(化妆品原料基准)记载的氯化溶菌酶。氯化溶菌酶可从丘比(株)(kewpiecorporation)等购入。

从表现出本发明所期望的效果的角度出发，以制剂的总质量计，氯化溶菌酶的混合量优选为0.0001～1质量％，更优选为0.001～0.1质量％。

本发明的制剂，在所述(A)成分以外，还可含有(B)成分：选自薄荷酮、香芹酮、桉树脑、柠檬烯、茴香脑、丁子香酚、薄荷醇和肉桂醛中的一种或两种以上。作为(B)成分，可使用从精油中分离出的物质或合成的物质，也可使用含有这些物质的精油。

(B)成分的混合量没有特别限制，从进一步提高本发明所期望的效果的表现的角度出发，以制剂的总质量计，优选为0.00001～5质量％，更优选为0.00001～2质量％。

本发明中，优选在含有(A)成分的同时含有(B)成分。通过将(A)成分和(B)成分一起使用，进一步提高本发明所期望的效果的表现。将(A)成分和(B)成分一起使用时，(A)成分的质量相对(B)成分的质量的比(A/B)优选为以下的范围。(A)抗坏血酸磷酸酯及其盐的质量相对(B)成分的质量的比(A/B)优选为0.002～300000，更优选为0.01～300000，进一步优选为0.05～300000。(A)维生素E及其衍生物的质量相对(B)成分的质量的比(A/B)优选为0.001～100000，更优选为0.01～100000，进一步优选为0.05～100000。(A)叶绿素铜及其盐的质量相对(B)成分的质量的比(A/B)优选为0.00001～10000，更优选为0.00002～10000，进一步优选为0.00005～10000。(A)氯化溶菌酶的质量相对(B)成分的质量的比(A/B)优选为0.00002～100000，更优选为0.001～100000，进一步优选为0.005～100000。若将(A)成分的质量相对(B)成分的质量的比(A/B)定在如所上述的范围，则将进一步提高本发明所期望的效果的表现。

本发明的制剂中，在上述各成分以外，可在不损害本发明的效果的范围内，适当混合本发明领域内公知的各种药用成分和添加成分。

本发明的制剂的形态以及剂型没有特别限制，例如可调制为液体型(液体、液状、浆状)、固体型(固体、固态)等各种形态。其中，本发明的制剂优选制备为适用于口腔的组合物，更优选制备为适用于牙龈的组合物。

本发明的制剂也可以直接进行施予。此外，也可在饮料·食品(特别是功能性食品)、口腔用组合物、医药组合物中，为赋予本发明所期望的效果而进行添加。

可添加本发明的制剂的饮料·食品或组合物没有特别限制，例如可举出饮料(清凉饮料、碳酸饮料、营养饮料、粉末饮料、果实饮料、乳饮料、冻胶饮料等)、食品类(口香糖(gum)、糖果、片剂(tablet)、橡皮糖(gummi)、膜剂(film)、锭剂(troche)、饼干、冻胶(jelly))等。

本发明的制剂具有强化上皮屏障功能的效果。上皮的屏障功能也可称之为上皮的抵抗力。已知的是，上皮的屏障功能是通过上皮细胞间的物理性连接而形成的。该细胞间连接主要是通过紧密连接以及称为AJ的细胞粘附结构而形成。据报道，在上皮之中的粘膜上皮中，AJ在屏障功能维持方面的贡献度很大，进一步在牙龈粘膜上皮中其贡献度更大。由于E-钙粘蛋白是构成AJ的主要蛋白质，因此本发明的制剂优选在粘膜上皮中、更优选在口腔粘膜上皮、进一步优选在牙龈粘膜上皮中可显著地强化上皮屏障功能的同时，还可显著地强化上皮抵抗力、细胞间结合力、AJ功能以及E-钙粘蛋白。

对本发明的制剂的作用进行说明。

<上皮屏障功能强化>

上皮屏障功能强化是指，强化上皮所具有的针对水分和挥发成分的蒸发的、针对病原性微生物和有害物质的附着和/或入侵的屏障功能，强化上皮所具有的针对水分和挥发成分的蒸发的、针对病原性微生物和有害物质的附着和/或入侵的抵抗力。屏障功能强化是指提高屏障功能的效果、抑制屏障功能降低的效果、改善和/或恢复降低的屏障功能的效果。即，上皮屏障功能强化也可称为抑制屏障功能降低、改善和/或恢复屏障功能，屏障功能也可换成抵抗力。在本发明的上皮屏障功能强化剂的适用方面，优选为粘膜上皮用，更优选为口腔粘膜上皮用，特别优选为牙龈粘膜上皮用。

<细胞间结合力强化>

细胞间结合力意指连接两个细胞之间的结合力，上皮所具有的屏障功能及抵抗力是通过其细胞之间的物理性连接而形成的。细胞间结合力强化是指提高细胞间结合力的效果、抑制细胞间结合力降低的效果、改善和/或恢复细胞间结合力的效果。即，细胞间结合力强化也可称为抑制细胞间结合力降低、改善和/或恢复细胞间结合力。在本发明的细胞间结合力强化剂的适用方面，优选为粘膜上皮用，更优选为口腔粘膜上皮用，进一步优选为牙龈粘膜上皮用。

<粘附连接功能强化>

粘附连接(AJ)是指上皮用以发挥细胞间结合力的细胞粘附结构。AJ功能强化是指提高AJ功能的效果、抑制AJ功能降低的效果、改善和/或恢复降低的AJ功能的效果。即，AJ功能强化也可称为抑制AJ功能降低、改善和/或恢复AJ功能。在本发明的AJ功能强化剂的适用方面，优选为粘膜上皮用，更优选为口腔粘膜上皮用，进一步优选为牙龈粘膜上皮用。

<E-钙粘蛋白强化>

如上所述，E-钙粘蛋白为上皮型的钙粘蛋白。E-钙粘蛋白强化是指增强E-钙粘蛋白的表达的效果、抑制E-钙粘蛋白的表达降低的效果、改善和/或恢复降低的E-钙粘蛋白的表达的效果。即，E-钙粘蛋白强化也可称为抑制E-钙粘蛋白降低、改善和/或恢复E-钙粘蛋白表达。在本发明的E-钙粘蛋白强化剂的适用方面，优选为粘膜上皮用，更优选为口腔粘膜上皮用，进一步优选为牙龈粘膜上皮用。

本发明的上皮屏障功能强化剂、抵抗力强化剂、细胞间结合力强化剂、粘附连接功能强化剂和E-钙粘蛋白强化剂既可用以防止正常状态变为异常状态，也可用以使异常状态恢复为正常状态。

此外，本发明的制剂由于具有上皮屏障功能强化作用、抵抗力强化作用、细胞间结合力强化作用、粘附连接功能强化作用、E-钙粘蛋白强化作用，因此在保持或恢复皮肤、眼粘膜、鼻粘膜、肠胃粘膜、口腔粘膜的健康状态方面有用，特别是在保持粘膜上皮的健康状态方面有用。本发明的制剂更优选在口腔粘膜上皮中有用，进一步优选在牙龈粘膜上皮中有用。

实施例

下文中结合实施例对本发明进行更为详细的说明，但本发明不受这些实施例的实施方式的限定。

[评价试验例1]E-钙粘蛋白强化效果的评价

在96孔板上接种人牙龈上皮细胞，采用培养基Humedia-KG2(仓敷纺绩(kurabo)株式会社)培养至细胞汇合，制作表现出上皮屏障功能的上皮细胞膜。然后，采用Humedia-KG2(同时添加有：0.01质量％的源自牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，Pg菌)的脂多糖(Pg-LPS)或0.01质量％的源自大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli菌)的LPS(E.coli-LPS)；以及，按照表中所记载的量的选自(A)成分(选自生育酚乙酸酯、叶绿素铜钠、氯化溶菌酶和抗坏血酸磷酸酯的镁盐中的一种以上)、(B)成分(选自薄荷酮、香芹酮、桉树脑、柠檬烯、茴香脑、丁子香酚、薄荷醇和肉桂醛中的一种以上)以及表5所记载的比较化合物(选自抗坏血酸钠、透明质酸钠、薁磺酸钠和薄荷醇中的一种以上)的一种以上)，培养三天，制作评价样品。此处，Pg-LPS为来源于据报道可影响牙龈上皮和全身上皮的Pg菌的LPS，E.coli-LPS为来源于据报道可影响肠粘膜上皮的E.coli菌的LPS，已知这些LPS为来源于细菌的病原性物质，具有促进E-钙粘蛋白的破坏的作用。

对于所得的各评价样品，对在人牙龈上皮细胞中表达的E-钙粘蛋白进行免疫荧光染色，以健康正常的屏障样本(未处理)的荧光强度为100％，计算各评价样品中的荧光强度，作为E-钙粘蛋白表达率。此外，在健康正常的屏障样本中加入Humedia-KG2、0.01质量％的Pg-LPS或0.01质量％的E.coli-LPS，培养三天，以使E-钙粘蛋白的表达降低的细胞作为对照组(LPS单独处理时)，通过下式(1)求出E-钙粘蛋白表达降低的抑制率，表示在表1～表5中。

[数1]

E-钙粘蛋白表达降低的抑制率＝{(各评价样品的E-钙粘蛋白表达率)-(LPS单独处理时的E-钙粘蛋白表达率)/(无处理时的E-钙粘蛋白表达率)-(LPS单独处理时的E-钙粘蛋白表达率)}×100 式(1)

另外，在对使用Pg-LPS作为LPS的评价样品计算E-钙粘蛋白表达降低的抑制率时，使用单独添加Pg-LPS时的对照组的E-钙粘蛋白表达率；在对使用E.coli-LPS作为LPS的评价样品计算E-钙粘蛋白表达降低的抑制率时，使用单独添加E.coli-LPS的对照组的E-钙粘蛋白表达率。

表1～表4的添加成分一栏中记载了各处理例中使用的添加成分及其添加量。具体地，添加成分一栏中，同时表示了LPS的种类和量、作为(A)成分使用的化合物及其在样品中的浓度(质量％)以及作为(B)成分使用的化合物及其在样品中的浓度(质量％)，表5的添加成分一栏中表示了LPS的种类和量、代替(A)成分和(B)成分使用的比较化合物(抗坏血酸钠、透明质酸钠、薁磺酸钠和薄荷醇)及其在样品中的浓度(质量％)。

[评价试验例2]屏障功能评价试验

在培养插件(Millipore)的上层接种人牙龈上皮细胞株，采用基础培养基Humedia-KG2培养至汇合，制作表现出上皮屏障功能的上皮细胞膜，然后除去培养基，分别采用单独添加了0.01质量％的Pg-LPS培养基、和在0.01质量％的Pg-LPS以外还添加了按照表中所记载的量的选自(A)成分(选自生育酚乙酸酯、叶绿素铜钠、氯化溶菌酶和抗坏血酸磷酸酯的镁盐中的一种以上)、(B)成分(选自薄荷酮、香芹酮、桉树脑、柠檬烯、茴香脑、丁子香酚、薄荷醇和肉桂醛中的一种以上)以及表5所记载的比较化合物(选自抗坏血酸钠、透明质酸钠、薁磺酸钠和薄荷醇中的一种以上)的一种以上的培养基，培养三天。培养后，除去·清洗上层和下层的培养基，进行上皮细胞膜的屏障功能评价。作为屏障功能评价，进行源自细菌的毒素LPS(P.g-LPS)的透过实验、菌(温和链球菌(Streptcoccus mitis)(S.m菌))的透过实验、上皮细胞膜的电阻值(TER)测定实验。

此处，已知的是，LPS为源自细菌的病原性物质，在水溶液中形成胶体，作为巨大分子存在。已知的是，S.m菌为常居于口腔粘膜中的细菌，已知其通常病原性低，但在上皮屏障功能降低时会引发化脓性炎症。已知的是，TER与细胞层的屏障功能具有很强的相关性，主要是与水分或离子的透过性的关联紧密，在化妆品领域，据报道如果TER的值增高的话，皮肤的湿润的感觉提高等。

(Pg-LPS的透过实验)

对于培养三天后的上皮细胞膜，分别在上层添加0.2mL的添加Pg-LPS并将其调整为0.01％的Humedia-KG2，在下层添加0.9mL的Humedia-KG2。4小时后，采用Pyrochrome(生化学工业)对下层中的P.g-LPS浓度进行定量，使用该定量值通过下式(2)计算屏障功能，结果表示在表1～5中(下层中LPS浓度、对LPS的屏障功能)。

(S.m菌的透过实验)

对于培养三天后的上皮细胞膜，分别在上层添加0.2mL的在从Humedia-KG2培养基中除去抗生素后的培养基中悬浊有S.m菌并将其调整为10⁷细胞/mL而成的培养基，在下层添加0.9mL的不含S.m菌的培养基。4小时后，从下层中采样20μL，进行适当稀释，接种到大豆胰蛋白酶(tryptic soy)琼脂培养基中。将接种后的培养基在37℃有氧条件下培养48小时，基于培养基的菌落数和稀释率算出下层中的菌浓度(CFU/mL)，并表示在表1～表5中。进一步地，采用该下层中的菌浓度，通过下式(2)计算对细菌的屏障功能，并表示在表1～表5中。

(TER测定)

使用Millicell-ERS伏特欧姆计测得的值(Ω)乘以细胞层面积(cm²)，算出TER(Ω·cm²)。进一步地，使用该TER值通过下式(2)计算对离子·水分的屏障功能，结果表示在表1～表5中。

[数2]

各屏障功能＝{(Pg-LPS单独处理时的值)-(评价样品处理时的值)/(Pg-LPS单独处理时的值)-(无处理时的值)}×100 式(2)

另外，虽然本评价试验例的评价样品的制作方法与评价试验例1不同，但因为培养基中添加的添加成分及其量与评价试验例1的添加成分相对应，故而对于与评价试验例1的添加成分相同的评价试验例，在对应的处理例处一并记载有本评价试验例的结果。

[表1]

[表2]

[表3]

[表4]

[表5]

表5

[结果与考察]

(关于钙粘蛋白表达率)

如表中所示，相比仅添加有LPS的样品，含有(A)成分(选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、生育酚乙酸酯、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种)作为添加成分的处理例1～76中，E-钙粘蛋白表达率较高，E-钙粘蛋白表达降低的抑制率为9.1％以上。特别地，在(A)成分以外还进一步含有(B)成分的处理例6～17、19、25～36、38、44～55、57、63～74、76中，E-钙粘蛋白表达率为90％以上，E-钙粘蛋白表达降低的抑制率为69.7％以上。

另一方面，相比仅添加有LPS的样品，采用不含(A)成分的添加成分进行处理的处理例77～80中，E-钙粘蛋白表达率降低，E-钙粘蛋白表达降低的抑制率为负值，不能抑制表达降低。

由上可知，依据本发明，由于提高了E-钙粘蛋白表达率，可表现出E-钙粘蛋白强化效果。此外可知，在含有(A)成分的同时还含有(B)成分的例子中，因为E-钙粘蛋白表达率变高，在表现E-钙粘蛋白强化效果的方面更为优选。

(关于屏障功能)

如表中所示：

相比无处理的样品，含有(A)成分(选自抗坏血酸磷酸酯及其盐、生育酚乙酸酯、叶绿素铜及其盐以及氯化溶菌酶中的至少一种)作为添加成分的处理例1～76中，对细菌、离子、水分的屏障功能较高。特别地，在(A)成分以外还进一步含有(B)成分的处理例6～17、19、25～36、38、44～55、57、63～74、76中，对LPS、细菌、离子·水分的屏障功能高。

另一方面，相比完全无处理的样品，采用不含(A)成分的添加成分进行处理的处理例77～80中，对LPS、细菌、离子·水分的屏障功能较低。

由上可知，依据本发明，对LPS、细菌、离子、水分的屏障功能高。此外可知，在含有(A)成分的同时还含有(B)成分的处理例中，对LPS、细菌、离子、水分的屏障功能尤其高，因而优选。

[配方例]

在如下所示的配方中，也确认到与实施例相同的屏障功能的强化效果。

配方例1

(1)皮肤用(质量％)

配方例2

(2)皮肤用(质量％)

配方例3

(3)粘膜上皮用(质量％)

配方例4

(4)粘膜上皮用(质量％)

配方例5

(5)口腔上皮用(质量％)

配方例6

(6)口腔上皮用(质量％)

配方例7

(7)牙龈上皮用(质量％)

配方例8

(8)牙龈上皮用(质量％)

配方例9

(9)牙龈上皮用(质量％)