一种具有抗蓝光作用的组合物
阅读说明：本技术 一种具有抗蓝光作用的组合物 (Composition with blue light resisting effect ) 是由 熊丽丹 肖青 唐洁 李利 于 2021-10-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种具有抗蓝光作用的组合物,其组成包括叶黄素和叶绿素盐,所述叶黄素与叶绿素盐的质量百分比为1～4：1。本发明组合物,通过叶黄素/叶绿素铜钠盐复配,获得优异的抗蓝光(400-500nm)的作用,显著优于单独使用叶黄素和叶绿素铜钠盐,具有协同增效、使得所抗波段蓝移而作用于危害程度更大的短波蓝光(400-450nm)。同时,利用该抗蓝光复配,制备成的眼贴膜、面膜等化妆品,可保护眼周、面部皮肤的蓝光损伤,减少相应部位的氧化应激、色素沉着,减少黑眼圈、细纹,且粘附性强,不易脱落,在活动时间也能方便使用。(The invention discloses a composition with a blue light resisting effect, which comprises lutein and chlorophyll salt, wherein the mass percentage of the lutein to the chlorophyll salt is (1-4): 1. the composition obtains excellent blue light resistance (400 + 500nm) effect through lutein/sodium copper chlorophyllin complex formulation, is obviously superior to the effect of singly using lutein and sodium copper chlorophyllin, has synergistic interaction, and enables the blue shift of the resistant waveband to act on the short-wave blue light (400 + 450nm) with larger harm degree. Meanwhile, cosmetics such as eye masks and facial masks prepared by the blue light resistant compound can protect blue light damage of skin around eyes and faces, reduce oxidative stress and pigmentation of corresponding parts, reduce black eye circles and fine lines, have strong adhesion, are not easy to fall off, and can be conveniently used during activity time.)
技术领域
本发明具体涉及一种具有抗蓝光作用的组合物。
背景技术
可见光约占太阳辐射的50％，其中的三分之一是自然蓝光。蓝光比UVA射线能更深地穿透皮肤，后者仅占阳光的5％。蓝光尤其是短波蓝光(400-450nm)会引发氧化应激反应，从而加速皮肤衰老并增加色素沉着，尤其是眼周的皮肤。短波蓝光还会引发DNA损伤。人眼睛周围的皮肤很薄，仅是脸颊皮肤厚度的1/4，皮脂腺与汗腺分布很少，同时也缺乏丰厚的肌肉层，更容易受到蓝光的伤害，容易出现细纹、黑眼圈等问题。
叶黄素是一种抗氧化剂，具有强大的抗氧化功能，保护眼睛及皮肤避免自由基的伤害。除此之外叶黄素更能有效过滤伤害视网膜最严重的短波蓝光，吸收紫外线后将之驱散，抑制光氧化所造成的衰退现象，保护视网膜内的黄斑部组织不受损害。研究显示叶黄素可以减低发生老年性视网膜黄斑区病变的危险率，近几年更被建议使用在预防白内障产生，保护心脏及皮肤的健康。本发明在前期通过380～500nm波长下进行全扫描发现，叶黄素吸收峰范围为440～500nm，波长460nm处时有其最大吸收峰，而短波蓝光的波长却在400-450nm，可见单独使用叶黄素有效过滤短波蓝光的波长范围窄，限制了叶黄素抗蓝光效果的发挥，因此还有待发掘扩大叶黄素抗蓝光波长范围的方法，以提高叶黄素抗短波蓝光效果，但目前还没有关于增强叶黄素抗短波蓝光作用的研究报道，更没有预防短波蓝光效果更好的叶黄素产品的问世。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了叶黄素联合叶绿素盐在制备具有抗蓝光作用的联合用组合物中的用途。
进一步地，所述叶黄素与叶绿素盐的质量比为1～4：1，优选2：1。
进一步地，所述叶绿素盐为叶绿素铜钠盐、叶绿素镁钠盐、叶绿素铜钾盐和/或叶绿素锌钠盐，优选叶绿素铜钠盐。
本发明还提供了一种具有抗蓝光作用的联合用药物组合物，它含有用于同时或者分别给药的叶黄素与叶绿素盐，所述叶黄素与叶绿素盐的质量比为1～4：1。
进一步地，所述叶黄素与叶绿素盐的质量比为2：1。
更进一步地，所述叶绿素盐为叶绿素铜钠盐、叶绿素镁钠盐、叶绿素铜钾盐和/或叶绿素锌钠盐，优选叶绿素铜钠盐。
本发明还提供了一种具有抗蓝光作用的组合物，其组成包括叶黄素和叶绿素盐，所述叶黄素与叶绿素盐的质量比为1～4：1。
进一步地，所述叶黄素与叶绿素盐的质量比为2：1。
进一步地，所述叶绿素盐为叶绿素铜钠盐、叶绿素镁钠盐、叶绿素铜钾盐和/或叶绿素锌钠盐，优先叶绿素铜钠盐。
更进一步地，它是以叶黄素和叶绿素盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的外用制剂。
更进一步地，所述外用制剂为颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂或溶液剂，优选微胶囊。
更进一步地，所述微胶囊是由如下重量配比的原料制备而成：
叶黄素/叶绿素铜钠盐1～5份，明胶1～5份，卡拉胶1～5份，甘油1～3份。
更进一步地，所述微胶囊是由如下重量配比的原料制备而成：
叶黄素/叶绿素铜钠盐1份，明胶1份，卡拉胶1份，甘油1～3份。
本发明还提供了一种制备前述组合物的方法，它包括以下步骤：
(1)按照配比称取原料；
(2)取叶黄素/叶绿素铜钠盐，加入含明胶和卡拉胶的水溶液中，450r/min，40℃搅拌30min，调pH至4，再搅拌15min，加甘油，调pH至7，300r/min，4℃搅拌30min，冷冻干燥即得。
本发明还提供了一种前述组合物在制备具有抗蓝光作用的药品或护肤品中的用途。
本发明还提供了一种具有抗蓝光作用的护肤品，它是由包括如下重量配比的原料制备而成：
前述组合物1～2％、卡拉胶0.5～1％、羟甲基纤维素0.5～1％、壳聚糖0.5～1％，其余为水。
进一步地，它是由包括如下重量配比的原料制备而成：
前述组合物1.5％、卡拉胶0.5％、羟甲基纤维素0.5％、壳聚糖0.5％，其余为水。
本发明最后提供了一种制备前述护肤品的方法，它包括如下步骤：
a、按照配比称取原料；
b、取卡拉胶、羟甲基纤维素、壳聚糖和水混合，450r/min，40℃搅拌3h，再加权利要求1所述组合物搅拌1h，过滤，即得
本发明组合物，通过叶黄素/叶绿素铜钠盐复配，获得优异的抗蓝光(400-500nm)的作用，显著优于单独使用叶黄素和叶绿素铜钠盐，具有协同增效、使得所抗波段蓝移而作用于危害程度更大的短波蓝光(400-450nm)。同时，利用该抗蓝光复配，制备成的眼贴膜、面膜等化妆品，可保护眼周、面部皮肤的蓝光损伤，减少相应部位的氧化应激、色素沉着，减少黑眼圈、细纹，且粘附性强，不易脱落，在活动时间也能方便使用，具备实际推广应用价值。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的
具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1 380～500nm波长全扫描图
图2微胶囊显微图和粒径分布
图3不同条件下微胶囊稳定性
图4叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊细胞毒理学
图5负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶的实物图与扫描电镜图
图6负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶对细胞存活率的影响
图7负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶透皮情况
图8负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊对蓝光诱导ROS的影响
图9负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶对蓝光引起色素沉着的影响
图10负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶对蓝光引起成纤维细胞老化的影响
图11负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶使用典型效果图
具体实施方式
实施例1、本发明叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的制备
配方：叶黄素/叶绿素铜钠盐(质量比2：1)0.25g，明胶0.25g，卡拉胶0.25g，甘油0.25g。
制备方法：取明胶，卡拉胶溶解于水制成50mL溶液，加入叶黄素和叶绿素铜钠盐，450r/min，40℃搅拌30min。调节pH至4，继续搅拌15min。加入甘油，调节pH至7，300r/min，4℃搅拌30min。冷冻干燥，即得。
实施例2、本发明叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的制备
配方：叶黄素/叶绿素铜钠盐(质量比2：1)0.25g，明胶0.25g，卡拉胶0.25g，甘油0.75g。
制备方法：同实施例1
实施例3、本发明叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的制备
配方：叶黄素/叶绿素铜钠盐(质量比2：1)0.5g，明胶0.25g，卡拉胶0.25g，甘油0.3g。
制备方法：同实施例1
实施例4、本发明叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的制备
配方：叶黄素/叶绿素铜钠盐(质量比2：1)0.5g，明胶0.5g，卡拉胶0.25g，甘油0.1g。
制备方法：同实施例1
实施例5、本发明眼部凝胶贴膜的制备
配方：实施例1制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊1.5％、卡拉胶0.5％、羟甲基纤维素0.5％、壳聚糖0.5％，其余为去离子水；
制备方法：
a、按照配比称取原料；
b、取卡拉胶、羟甲基纤维素、壳聚糖和水混合，450r/min，40℃搅拌3h，再加入叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊继续搅拌1h，半透膜过滤，即得凝胶贴膜。
实施例6、本发明眼部凝胶贴膜的制备
配方：实施例1制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊1％、卡拉胶0.5％、羟甲基纤维素0.5％、壳聚糖0.5％，其余为去离子水；
制备方法：同实施例5
实施例7、本发明眼部凝胶贴膜的制备
配方：实施例1制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊1％、卡拉胶1％、羟甲基纤维素1％、壳聚糖1％，其余为去离子水；
制备方法：同实施例5
实施例8、本发明眼部凝胶贴膜的制备
配方：实施例1制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊2％、卡拉胶1％、羟甲基纤维素1％、壳聚糖1％，其余为去离子水；
制备方法：同实施例5
实施例9、本发明眼部凝胶贴膜的制备
配方：实施例1制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊2％、卡拉胶0.5％、羟甲基纤维素0.5％、壳聚糖0.5％，其余为去离子水；
制备方法：同实施例5
以下通过试验例来说明本发明的有益效果。
试验例1本发明抗蓝光研究
1、叶黄素/叶绿素铜钠盐复配
用DMSO分别溶解叶黄素、叶绿素铜钠盐和叶黄素/叶绿素铜钠盐复配物，通过在380～500nm波长下进行全扫描，叶黄素吸收峰范围为440～500nm，波长460nm处时有其最大吸收峰；叶绿素铜钠盐最大吸收峰范围为405～420nm，波长420nm处时有其最大吸收峰；当叶黄素与叶绿素铜钠盐按照1：1至4：1配比，特别是比例为2：1的复配后，吸收峰发生了蓝移，移动至380～500nm，且在相同浓度(25μg/mL)下，吸收峰增加明显，吸收强度提高了3-10倍。详见图1。
2、叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的制备
通过筛选实验确定了制备叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的最佳条件工艺为：
0.25g明胶，0.25g卡拉胶溶解于水制备成50mL溶液，加入0.25g叶黄素和叶绿素铜钠盐，450r/min，40℃搅拌30min。调节PH至4，继续搅拌15min。加入0.25g甘油，调节pH至7，300r/min，4℃搅拌30min。冷冻干燥，即得；
制得的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的形态特征见图2，从图2可见：微胶囊形态规则，分布均匀，粒径大小为5μm。包封率为48.21％。
3、微胶囊稳定性：
①相对湿度：将质量比2：1的叶黄素/叶绿素铜钠盐的混合物及上述制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊分别在不同相对湿度(30％、80％)下避光恒温保存，每隔十天测试叶黄素/叶绿素铜钠盐含量。在30％湿度相对稳定，随着湿度增加，未处理为微胶囊的叶黄素/叶绿素铜钠盐含量快速下降，而经处理后含量下降慢。
②光照：将质量比2：1的叶黄素/叶绿素铜钠盐的混合物及上述制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊分别置于透明瓶和棕色瓶里恒温保存，每隔十天测试叶黄素/叶绿素铜钠盐含量。在避光条件下相对稳定，光照条件下未处理为微胶囊的叶黄素/叶绿素铜钠盐含量快速下降，而经处理后含量下降慢。
③温度：将质量比2：1的叶黄素/叶绿素铜钠盐的混合物及上述制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊分别在不同相对温度(5℃、25℃、45℃)下避光保存，每隔十天测试叶黄素/叶绿素铜钠盐含量。在5℃条件下相对稳定，25℃条件下未处理较处理组含量下降快，45℃未处理较处理组含量进一步快速降低。具体见图3。
4.叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊毒理学
在96孔板中按照4×103个/孔的密度接种角质形成细胞和黑素细胞，待细胞完全贴壁后加入不同浓度的叶黄素/叶绿素铜钠盐(质量比2：1)溶液(0、12.5、25、50、10uM)进行干预，每组有5个复孔，同时设置空白对照组(不加细胞，仅有培养基)和阴性对照组。干预24h后用排枪加入CCK-8溶液，体积为10ul/孔，37℃避光孵育1-2小时，酶标仪检测450nm处OD值。导出数据，细胞增殖率％＝(OD450实验组-OD450空白对照组)/(OD450阴性对照组-OD450空白对照组)×100％上述制备的的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊浓度至100μg/mL对角质形成细胞和黑素细胞无细胞毒性，细胞存活率大于90％。详见图4。
5.制备粘附凝胶贴膜
0.5-1％卡拉胶，0.5-1％羟甲基纤维素，0.5-1％壳聚糖，450r/min，40℃搅拌3h，加入1-2％上述制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊继续搅拌1h，半透膜过滤制备成具备粘附力的凝胶。所制备的凝胶贴膜，具备良好的粘性，在普通活动状态下不会脱落。扫描电镜图显示表面平滑，形态良好。详见图5。
6.凝胶贴膜抗蓝光作用
①细胞存活率
分别取把角质形成细胞和黑素细胞按每孔3×105个细胞接种于6孔板中，在37℃、5％CO2培养箱中培养过夜。当细胞密度长到皿底70％时，分别用锡伯纸遮盖、100J/cm2的蓝光照射、不含叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的空白凝胶遮盖、上述制备的负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶遮盖处理细胞，去除废液后，PBS清洗一遍，加入CCK-8溶液，体积为10ul/孔，37℃避光孵育1-2小时，酶标仪检测450nm处OD值。导出数据，计算细胞存活率。
在细胞层面上，100J/cm2的蓝光造成角质形成细胞和黑素细胞死亡50％左右，而以负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶可以抗蓝光至细胞存活率90％左右，效果明显。详见图6。
②释放率
负叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶可以在皮肤中缓慢释放，微胶囊接荧光切片观察，使用10min后药物穿过角质层，30min进入表皮层，60min穿过表皮基底层进入真皮层。详见图7。
③抗蓝光引起的自由基
分别取把角质形成细胞和黑素细胞按每孔3×104个细胞接种于24孔板中，在37℃、5％CO2培养箱中培养过夜。当细胞密度长到皿底70％时，分别用锡伯纸遮盖、100J/cm2的蓝光照射、不含叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的空白凝胶遮盖、上述制备的负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶遮盖处理细胞，去除废液后，PBS清洗一遍，加入DCFH-DA染液，37℃避光孵育30min，PBS清洗一遍，荧光显微镜下观察拍照。
100J/cm2的蓝光造成角质形成细胞ROS增加，而以负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊可以抗蓝光引起的ROS，效果明显。详见图8。
④抗蓝光引起的色素沉着
黑素细胞按每孔3×105个细胞接种于6孔板中，在37℃、5％CO2培养箱中培养过夜。当细胞密度长到皿底70％时，分别用锡伯纸遮盖、100J/cm2的蓝光照射、不含叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的空白凝胶遮盖、上述制备的负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶遮盖处理细胞，去除废液后，PBS清洗一遍，用0.25％胰酶37℃消化细胞，加入含FBS的培养基终止消化，轻吹打下所有的贴壁细胞，收集到1.5mL离心管内。1000rpm离心3min收集细胞后去上清。加入1mL PBS混匀后清洗一遍，观察拍照。去除PBS后，每管加入350uL 1MNaOH溶液，80℃水浴30min至黑色素完全溶解，酶标仪检测405nm处OD值，计算黑素含量。100J/cm2的蓝光造成黑素细胞黑素含量增加，而以负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊可以抗蓝光引起的黑素含量增加，效果明显。详见图9。
⑤抗蓝光引起的细胞老化
成纤维细胞按每孔3×105个细胞接种于6孔板中，在37℃、5％CO2培养箱中培养过夜。当细胞密度长到皿底70％时，分别用锡伯纸遮盖、100J/cm2的蓝光照射、不含叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊的空白凝胶遮盖、上述制备的叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶遮盖处理细胞，去除废液后，PBS清洗一遍，加入1mLβ-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。吸除细胞固定液，PBS洗涤细胞3次，每孔加入1mL染色工作液。37℃孵育过夜，parafilm膜封住6孔板防止蒸发。普通光学显微镜下观察。
100J/cm2的蓝光造成成纤维细胞β-半乳糖苷酶含量增加，代表老化产生，而以负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊可以抗蓝光引起的老化增加，效果明显。详见图10。
7.凝胶贴膜人体功效验证
①眼贴膜对眼周问题作用
挑选60名25--40岁色素型黑眼圈女性受试者，随机分为三组，分别为空白组：不用任何眼周护理产品；对照组：使用空白胶，按实施例5制备的不含有负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶；实验组：使用按实施例5制备的负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶。
每天早晚各一次，每次10分钟，持续进行120天。实验时尽量降低其他因素对测试结果的影响(例如要求受试者每天睡眠时间保持8小时左右)
经试验，受试者在使用前，使用后60天和使用后120天相同环境下拍摄面部照片，经Adobe photoshop CC统一校色后，ImageJ软件获取下眼睑黑眼圈区域的CIEL*a*b*色度学空间颜色数据(CIE国际照明委员会)评价使用凝胶贴膜治疗眼周问题的疗效，结果显示负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶对改善黑眼圈有效，且无刺激性。见图11、表1。
表1负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶使用前后黑眼圈数据变化
主观测试：通过医师评估的方式，请医师对问题进行打分，每项最高为5分，每组取平均值,每周打分一次。
表2眼部使用负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶前后主观测试变化
②面贴膜对面部问题作用
挑选60名35--60岁皮肤暗沉、有轻度细纹女性受试者，随机分为三组，分别为空白组：不用任何眼周护理产品；对照组：使用空白胶，实施例5制备不含有负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊；实验组：使用实施例5制备负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶。
主观测试：通过医师评估的方式，请医师对问题进行打分，每项最高为5分，每组取平均值,每周打分一次。
表3面部使用负载叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶前后主观测试变化
从表3可见：相对不使用眼周护理品及不含叶黄素/叶绿素铜钠盐的微胶囊凝胶，本发明叶黄素/叶绿素铜钠盐微胶囊凝胶能显著改善面部暗沉、减少皱纹数量，减轻皱纹深度。
综上，本发明组合物，通过叶黄素/叶绿素铜钠盐复配，获得优异的抗蓝光(400-500nm)的作用，使得所抗波段蓝移而作用于危害程度更大的短波蓝光(400-450nm)。同时，利用该抗蓝光复配，制备成的眼贴膜、面膜等化妆品，可保护眼周、面部皮肤的蓝光损伤，减少相应部位的氧化应激、色素沉着，减少黑眼圈、细纹，且粘附性强，不易脱落，在活动时间也能方便使用，具备实际推广应用价值。
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