炎性疾病的治疗
阅读说明：本技术 炎性疾病的治疗 (Treatment of inflammatory diseases ) 是由 M·弗吕克内斯 R·拉松 P·尼格伦 于 2018-12-19 设计创作，主要内容包括：本发明提供了用于治疗或预防慢性炎性疾病的甲苯达唑,并且具体来说其中所述慢性炎性疾病是自身免疫性疾病,例如结节病、全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、阿尔茨海默氏病和乳糜泻。还提供了一种用于治疗或预防慢性炎性疾病的方法,所述方法包含施用有效量的甲苯达唑或甲苯达唑的药物组合物。还提供了甲苯达唑的用途,用于制备用于治疗慢性炎性疾病的药物。(The present invention provides mebendazole for use in the treatment or prevention of chronic inflammatory diseases, and in particular wherein the chronic inflammatory disease is an autoimmune disease, such as sarcoidosis, Systemic Lupus Erythematosus (SLE), huntington's disease, end stage renal disease, systemic sclerosis (also known as scleroderma), myositis, type 1 diabetes, multiple sclerosis, sjogren's syndrome, rheumatoid arthritis, psoriasis, primary biliary cirrhosis, autoimmune hepatitis, graves 'disease, addison's disease, tuberculosis, crohn's disease, ulcerative colitis, inflammatory bowel disease, alzheimer's disease and celiac disease. Also provided is a method for treating or preventing chronic inflammatory diseases comprising administering an effective amount of mebendazole or a pharmaceutical composition of mebendazole. Also provided is the use of mebendazole for the manufacture of a medicament for the treatment of chronic inflammatory diseases.)
技术领域
本发明涉及慢性炎性疾病(例如自身免疫性疾病)，具体地说结节病和全身性红斑狼疮(SLE)的治疗或预防。本发明的治疗包括向患有慢性炎性疾病的患者施用甲苯达唑(mebendazole)。
背景技术
炎症是对有害刺激(如组织损伤、病原体和刺激物)的正常生物学反应的一部分。慢性炎症可能是由于持续刺激(如刺激物或病原体)或者由于免疫系统功能异常(例如在自身免疫性疾病中)而形成的。
慢性炎性疾病(CID)是以存在慢性炎症为特征的各种病况和病症。CID可能造成重大而长期的痛苦。许多CID是自身免疫性疾病。CID的实例包括皮肌炎、格雷夫氏病(Grave'sdisease)、多发性硬化症、重症肌无力、系统性红斑狼疮(SLE)、结节病、干燥综合征(syndrome)、淀粉样变性病、桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis)、血管炎、类风湿性关节炎、反应性关节炎、多发性肌炎、硬皮病、艾迪生氏病(Addison's disease)、白斑病、恶性贫血、肾小球肾炎、重症腹腔疾病、1型糖尿病、牛皮癣和肺纤维化(《MedlinePlus医学百科全书-自身免疫性疾病(MedlinePlus medical encyclopedia-autoimmunedisorders)》，美国国立卫生研究院(MedlinePlus medical encyclopedia-autoimmunedisorders)；https://medlineplus.gov/ency/article/000816.htm；于2017年5月21日审查；2017年11月24日访问)。
CID的治疗因条件基础而异。结节病是一种导致在人体器官内形成小块红色和肿胀的组织(肉芽肿)的CID。它通常会影响肺部和皮肤。结节病的症状取决于受影响的器官，但通常包括咳嗽、呼吸困难、眼睛发红或疼痛、腺体肿胀、皮疹、关节、肌肉或骨骼疼痛以及面部、手臂和腿部麻木或无力。(信息来自结节病英国网站http://sarcoidosisuk.org/，2017年11月24日访问)。结节病的治疗包括***(Prednisone)、羟氯喹或氯喹以及免疫抑制剂，例如甲氨蝶呤(methotrexate)、硫唑嘌呤(azathioprine)或来氟米特(leflunomide)(信息来自美国国家心脏、肺和血液研究所网站https://www.nhlbi.nih.gov/health/ health-topics/topics/sarc/treatment，2017年11月24日访问)。
全身性红斑狼疮(也称为“SLE”或简称为“Lupus”)是自身免疫性疾病，其特征是机体各种组织的急性和慢性炎症。常见的狼疮症状和体征包括疲劳、低烧、食欲不振、肌肉酸痛、脱发、关节炎、口鼻溃疡、面部皮疹(“蝴蝶皮疹”)、对阳光异常敏感(光敏性)、由周围肺部(胸膜炎)和心脏(心包炎)的内衬炎症引起的胸部疼痛，以及冷暴露时手指和脚趾的血液循环不良(雷诺现象(Raynaud's phenomenon))。SLE的治疗包括非甾体抗炎药(NSAID)、皮质类固醇、免疫抑制剂、羟氯喹和甲氨蝶呤。目前尚无治愈SLE的方法，并且目前的治疗方法中没有一种能完全有效地控制疾病。
对于大多数CID，当前可用的治疗并不完全有效。仍然强烈需要另外的更有效的治疗。具体地说，仍然需要具有可控副作用的安全且耐受良好的治疗。
甲苯达唑是一种抗寄生虫剂，临床上用于治疗各种形式的蠕虫病。甲苯达唑的结构如下：
甲苯达唑在低剂量(
本发明人已经发现，甲苯达唑可用于治疗CID，例如自身免疫性疾病，具体地说由ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活介导的CID(如结节病和SLE)。
发明内容
本发明提供了用于治疗慢性炎性疾病(CID)的甲苯达唑。
例如，CID是自身免疫性疾病。例如，CID选自结节病、亨廷顿氏病(Huntington'sdisease)、牛皮癣、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病(Graves'disease)、克罗恩氏病(Crohn's disease)、溃疡性结肠炎、乳糜泻、艾迪生氏病、干燥综合征、全身性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎。例如，CID是结节病、牛皮癣、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、艾迪生氏病、干燥综合征、系统性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎。例如，CID是结节病和全身性红斑狼疮(SLE)。例如，CID以肉芽肿性炎症为特征。例如，CID是结节病。
此外，例如，CID选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)。例如，CID选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病和结核病。例如，CID选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病和结节病。
本发明进一步提供了用于治疗CID的甲苯达唑，其中施用于患者的甲苯达唑的治疗剂量为1mg至4000mg、10mg至3000mg、10mg至2000mg、10mg至1000mg、10mg至750mg、10mg至500mg、20至400mg、25mg至300mg或30mg至200mg。优选地，所施用的治疗剂量达到的患者体内的甲苯达唑的血浆浓度为1ng/ml至1000ng/ml(例如，1ng/ml至900ng/ml、1ng/ml至800ng/ml、1ng/ml至750ng/ml、1ng/ml至600ng/ml、1ng/ml至500ng/ml、1ng/ml至400ng/ml、1ng/ml至300ng/ml、1ng/ml至200ng/ml、或1ng/ml至100ng/ml；或例如100ng/ml至900ng/ml、100ng/ml至800ng/ml、100ng/ml至750ng/ml、100ng/ml至600ng/ml、100ng/ml至500ng/ml、100ng/ml至400ng/ml、100ng/ml至300ng/ml或100ng/ml至200ng/ml；或例如250ng/ml至900ng/ml、250ng/ml至800ng/ml、250ng/ml至750ng/ml、250ng/ml至600ng/ml或250ng/ml至500ng/ml；或例如100ng/ml至900ng/ml、250ng/ml至900ng/ml、400ng/ml至900ng/ml、400ng/ml ml至800ng/ml，或400ng/ml至700ng/ml或400ng/ml至600ng/ml)
在一个实施例中，所施用的治疗剂量达到的患者体内的甲苯达唑的血浆浓度为20ng/ml至100ng/ml(例如20ng/ml至40ng/ml、40ng/ml至60ng/ml、60ng/ml至80ng/ml或80ng/ml至100ng/ml)。在另一个实施例中，所施用的治疗剂量达到的患者体内的甲苯达唑的血浆浓度为50至250ng/ml(例如，50ng/ml至100ng/ml、50ng/ml至150ng/ml、100ng/ml至200ng/ml、150ng/ml至200ng/ml或200ng/ml至250ng/ml)。在另一个实施例中，所施用的治疗剂量达到的患者体内的甲苯达唑的血浆浓度为100ng/ml至500ng/ml(例如100ng/ml至200ng/ml、200ng/ml至300ng/ml、300ng/ml至400ng/ml或400ng/ml至500ng/ml)。在另一个实施例中，所施用的治疗剂量达到的患者体内的甲苯达唑的血浆浓度为250至750ng/ml(例如250ng/ml至400ng/ml、300ng/ml至450ng/ml、350ng/ml至500ng/ml、400ng/ml至550ng/ml或450ng/ml至600ng/ml)。在另一个实施例中，所施用的治疗剂量达到的患者体内的甲苯达唑的血浆浓度为500至1000ng/ml(例如500ng/ml至600ng/ml、600ng/ml至700ng/ml、700ng/ml至800ng/ml、800ng/ml至900ng/ml或900ng/ml至1000ng/ml)。
在另一实施例中，所施用的治疗剂量达到的患者体内的甲苯达唑的血浆浓度为1ng/ml至400ng/ml、1ng/ml至300ng/ml、1ng/ml至200ng/ml、1ng/ml至100ng/ml，优选20ng/ml至40ng/ml、40ng/ml至60ng/ml、60ng/ml至80ng/ml或80ng/ml至100ng/ml。
本发明进一步提供了用于治疗CID例如自身免疫性疾病的包含甲苯达唑的药物组合物。
本发明进一步提供了一种用于治疗或预防CID例如自身免疫性疾病的方法，其包含向患有CID的患者施用有效量或包含甲苯达唑的药物组合物。优选地，患者是人类。
本发明进一步提供了一种药物组合物，其包含甲苯达唑与选自由非甾体抗炎药(NSAID)、皮质类固醇、免疫抑制剂和疾病缓解性抗风湿药(DMARD)组成的组的至少一种附加活性组分的组合。
本发明进一步提供了甲苯达唑的用途，用于制备用于治疗CID例如自身免疫性疾病的药物。
附图说明
图1示出了由甲苯达唑和其他微管蛋白活性剂诱导的基因表达变化(称为“特征标志”)与MEK/ERK抑制剂的相关性。
图2示出了甲苯达唑和其他微管蛋白活性剂对单核细胞样THP-1细胞中磷酸-ERK(p-ERK)的影响。
图3示出了在有和没有MEK/ERK抑制剂U0126的情况下甲苯达唑对单核细胞样THP-1细胞(图3a)和外周血单个核细胞(PBMC)(图3b)中p-ERK的影响。
图4示出了与从正常PBMC分离的CD4+细胞相比，甲苯达唑对从SLE患者的PBMC分离的CD4+T细胞中p-ERK水平的影响。
图5a和5b示出了在暴露于甲苯达唑、芬苯达唑(fenbendazole)或对照物(DMSO)1小时之后，甲苯达唑、芬苯达唑和对照物(DMSO)对THP-1单核细胞(图5a)和PMA分化的THP-1巨噬细胞(图5b)中磷酸-ERK(p-ERK)水平的影响。
图6示出了在施用甲苯达唑之前患有结节病的患者的正电子发射断层扫描(PET)扫描。施用甲苯达唑导致结节病缓解。
图7示出了用媒介物、阳性对照物(甲氨蝶呤(MTX))或者25mg/kg或50mg/kg甲苯达唑(MBZ)治疗前(第14周)、治疗期间(第16周至第24周)以及治疗后直至终止(第30周)，NZBNZWF1小鼠血清中的抗(双链)-DNA抗体水平。
具体实施方式
本发明的发明人惊奇地发现，甲苯达唑具有用于治疗或预防慢性炎性疾病(CID)的特别有益的特性。具体地说，本发明的发明人惊奇地发现，甲苯达唑具有用于治疗或预防CID(具体地说自身免疫性疾病CID)的特别有益的特性，其中CID与ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活有关联，并且优选地其中CID由ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活介导(例如，由其造成或引起)(例如，可以通过增加ERK活性和/或增加ERK信号传导和/或激活ERK来治疗或预防的是CID)。具体地说，本发明的发明人惊奇地发现，甲苯达唑具有用于治疗或预防CID的特别有益的特性，所述CID与有缺陷的ERK信号传导相关联(例如，CID是由ERK信号传导中的缺陷引起的疾病)，和/或与浆细胞样树突状细胞或其他免疫细胞的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加相关联，和/或与p38 MAP激酶信号传导增加相关联。
CID是以慢性炎症为特征的各种疾病和病症。许多CID是自身免疫性疾病。炎症是对有害刺激(如组织损伤、病原体或刺激物)的正常生物学反应的一部分。炎症可分为急性或慢性。急性炎症是对有害刺激的初始保护性反应。慢性炎症可能是由于持续刺激(如刺激物或病原体)或者由于免疫系统功能异常(例如在自身免疫性疾病中)而形成的。
在许多情况下，慢性炎症可能导致人体组织破坏、器官异常生长和/或器官功能改变。慢性炎症包含肉芽肿性、化脓性、浆液性和/或溃疡性炎症。肉芽肿性炎症以肉芽肿的形成为特征。肉芽肿是包含免疫细胞例如巨噬细胞和淋巴细胞(例如自然杀伤细胞、T细胞和B细胞)的肿瘤样肿块。化脓性炎症以包含死细胞、体液和免疫细胞的脓液的积聚为特征。浆液性炎症以浆液性体液的积聚为特征。溃疡性炎症以上皮组织坏死形成溃疡为特征。
炎性反应受细胞内信号传导途径(如有丝***原活化的蛋白激酶(MAPK)途径)的密切调节。MAPK途径包含称为有丝***原活化的蛋白激酶(MAPK)的蛋白。MAPK可以分为三个主要的蛋白家族，即细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N端激酶/应激活化的蛋白激酶(JNK/SAPK)和p-38蛋白。MAPK途径中涉及的其他蛋白质包括Ras、Raf和MEK。
ERK信号传导中的缺陷与慢性炎性疾病有关，例如与结节病、SLE、亨廷顿氏病和终末期肾脏疾病有关(Gorelik G.,Richardson B.,《自身免疫(Autoimmunity)》2010；43:17-22；Sawalha A.H.等人,《基因与免疫(Genes Immun)》2008；9:368-378；Maher P.等人,《人类分子遗传学(Hum Mol Genet)》2010；20:261-270；Huang L.等人,《免疫与衰老(ImmunAgeing)》2017；14:14；和Rastogi R.等人,《美国呼吸与重症监护医学杂志(Am J RespirCrit Care Med)》2011；183:500-510)。
例如，已证明如肼苯哒嗪等药剂对ERK信号传导的抑制可诱发狼疮和类似狼疮的自身免疫性疾病(Gorelik G.,Richardson B.,《自身免疫》2010；43:17-22；Sawalha AH等人.,《基因与免疫》2008；9:368-378)。此外，已经报道了得自患有结节病患者的CD4+T细胞中ERK表达降低(Celada L.J.等人,《美国呼吸与重症监护医学杂志》191；2015:A3747)。MAPK(如ERK)功能异常可能是功能丧失突变、功能获得突变、MAPK表达降低和/或MAPK表达增加的结果。在本发明中，尤其优选将甲苯达唑用于治疗或预防CID，其中CID是由ERK信号传导中的缺陷引起的疾病。
如以下更详细讨论的，本发明人惊奇地发现，甲苯达唑非常显著地提高了单细胞样细胞和巨噬细胞中p-ERK的水平。这尤其令人惊讶，因为其他微管蛋白活性剂，包括其他苯并咪唑，如芬苯达唑，不会显著提高那些细胞中的p-ERK水平。本发明人还惊奇地发现，甲苯达唑增加了外周血单个核细胞(PBMC)和得自患有SLE的患者的CD4+T细胞中的ERK的活性。本发明人还证明了甲苯达唑在治疗患有结节病的患者方面有效，并且在小鼠模型中治疗SLE方面有效。不希望受任何理论的束缚，本发明人相信甲苯达唑增加了ERK的活性，从而减少了患有CID(如SLE、结节病、亨廷顿氏病和终末期肾衰竭)的患者的炎症。如以上详细描述的，已知ERK信号传导中的缺陷与那些疾病有关。因此，优选地，本发明中用于治疗的CID是与有缺陷的ERK信号传导相关联的CID，并且具体地说由ERK信传导中的缺陷引起的CID。
此外，许多自身免疫性疾病是由浆细胞样树突状细胞或其他免疫细胞的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加驱动(并可能引起)的。这种反应可以被ERK活化抑制(JanovecV.等人,《免疫学前沿(Front Immunol)》2018；9:364；Yang H-T.等人,《免疫学杂志(JImmunol)》2011；186:1989-1996)。因此，甲苯达唑可用于治疗自身免疫性疾病，并且具体地说与浆细胞样树突状细胞或其他免疫细胞的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加相关联的CID。这类疾病的实例包括全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病和结核病(例如，参见，L.,Eloranta M-L.,《风湿病学近期评述(Curr OpinRheumatol)》2013；25:248-253；Brkic Z.等人,《风湿病年鉴(Ann Rheum Dis)》2016；75:1567-1573；Crow M.K.,《关节炎研究与治疗(Arthritis Res Ther)》2010；12增刊1:S5；Namiki K.等人,《生物化学杂志(J Biol Chem)》2012；287:24228-24238；Toro-DomínguezD.等人,《关节炎研究与治疗》2014；16:325-8；Schett G.等人,《风湿病年鉴》2008；67:909-916；Nestle F.O.等人,《实验医学杂志(J Exp Med)》2005；202:135-143；Yao Y.等人,《公共科学图书馆期刊(PLoS ONE)》2008；3:e2737；Takii Y.等人,《实验室研究(Lab Invest)》2005；85:908-920；Israel J.等人,《沙特胃肠病学杂志(Saudi J Gastroenterol)》2011；17:348-9；Ruiz-Riol M.等人,《自身免疫性杂志(Journal of Autoimmunity)》2011；36:189-200；Krysiak R.等人,《美国医学科学杂志(The American Journal of the MedicalSciences)》2011；341:504-507；和Maertzdorf J.等人,《美国科学学院学报(Proc NatlAcad Sci USA)》2012；109:7853-7858)
还已知P38 MAP激酶信号传导增加是几种自身免疫性疾病中炎症的关键驱动因素(Kumar S.等人,《自然评论药物发现(Nat Rev Drug Discov)》2003；2:717-726)。ERK活化可以通过诱导双重特异性磷酸酶(MKP-1)下调p38 MAP激酶信号传导(Kondoh K.等人,《生物化学与生物物理学学报(Biochim Biophys Acta)2007；1773:1227-1237；以及ToulouseA.,《神经再生研究(Neural Regen Res)》2015；10:1748-1749)。因此，甲苯达唑可用于治疗自身免疫性疾病，并且具体地说与p38 MAP激酶信号传导增加相关联的CID。这类疾病的实例包括克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病(IBD)和阿尔茨海默氏病。(Feng Y.J.,LiY.Y.,《消化疾病杂志(J Dig Dis)》2011；12:327-332；和Waetzig G.H.等人,《免疫学杂志(The Journal of Immunology)》2002；168:5342-5351；Munoz L,Ammit AJ.,《神经药理学(Neuropharmacology)》2010；58:561-568)。
甲苯达唑
自1971年以来，甲苯达唑一直用作驱虫药。已知它是安全的，并且在低剂量下耐受性良好。对6276名受试者进行了低剂量甲苯达唑(Vermox)的安全性评估，这些受试者参加了39项针对胃肠道的单一或混合寄生虫病治疗的临床试验。在这39项临床试验中，在不到1％的甲苯达唑治疗的受试者中发生了相关的不良事件。还已知，用甲苯达唑长期高剂量(≥40mg/kg/天)治疗侵袭性寄生虫侵袭通常具有良好的耐受性，其中短暂的脱发、胃肠道问题、转氨酶升高但可逆以及轻度白细胞减少症和血小板减少症是突出的不良反应事件(Woodtli,W.等人,《美国热带医学与卫生杂志》34:754-760,1985；WHO：人类囊性和肺泡包虫病的治疗指南。《世界卫生组织公报》74:231-242,1996；Davis,A.等人,《世界卫生组织公报》67:503-508,1989)。
甲苯达唑的已确立的良好的耐受性和安全性是使用甲苯达唑治疗CID的另一个优势。
尽管甲苯达唑已被确立用于治疗各种形式的蠕虫病，但尚无其有效对抗与ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活相关联的任何CID的报道。
甲苯达唑具有以下结构：
甲苯达唑的CAS ID为31431-39-7。甲苯达唑作为用于口服的药物组合物以商品名Vermox出售。在Vermox中，甲苯达唑是游离碱形式。用于本发明的方法和治疗中的甲苯达唑也可以是盐、溶剂化物或前药的形式。甲苯达唑具有各种多晶型物。用于本发明的方法和治疗中的甲苯达唑可以呈任何多晶型物形式。优选地，甲苯达唑呈多晶型物形式A和/或B和/或C，并且更优选地甲苯达唑呈多晶型物形式C或多晶型物形式A和/或C。
适用于本发明的甲苯达唑的盐是其中抗衡离子是药学上可接受的那些盐。合适的盐包括用有机或无机酸或碱形成的盐。具体来说，根据本发明用酸形成的合适的盐包括用矿物酸、强有机羧酸(如未被取代或被例如卤素取代的1到4个碳原子的烷羧酸，如饱和或不饱和二羧酸，如羟基羧酸，如氨基酸)或用有机磺酸(如未被取代或被例如卤素取代的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸)形成的那些盐。药学上可接受的酸加成盐包括由以下形成的那些盐：氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、三氟乙酸、丁二酸、高氯酸、富马酸、马来酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、草酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟乙基磺酸、抗坏血酸、苹果酸、邻苯二甲酸、天冬氨酸和谷氨酸、赖氨酸和精胺酸。其他酸虽然本身不是药学上可接受的，但可用作获得本发明化合物及其药学上可接受的酸加成盐的中间体。
甲苯达唑的特定盐包括酸加成盐，如由氢氯酸、氢溴酸、乙酸、对甲苯磺酸、酒石酸、硫酸、丁二酸、磷酸、草酸、硝酸、甲磺酸、苹果酸、马来酸和柠檬酸以及具体地说氢氯酸形成的那些盐。
有机化学领域的技术人员将理解，许多有机化合物可以与溶剂形成络合物，在所述溶剂中其发生反应或从中沉淀或结晶。这些络合物被称为“溶剂化物”。例如，与水的络合物被称为“水合物”。用于本发明的甲苯达唑可以是溶剂化物的形式。
在施用于接受者后能够转化成甲苯达唑或其活性代谢产物或残基的化合物被称为“前药”。前药例如可以在体内例如通过在血液中水解而转化成具有医学作用的活性形式。药学上可接受的前药描述于T.Higuchi和V.Stella,前药作为新颖的递送系统(Prodrugs as Novel Delivery Systems),《A.C.S.专题讨论会系列的第14卷(Vol.14ofthe A.C.S.Symposium Series)》(1976)；“前药的设计(Design of Prodrugs)”编辑H.Bundgaard,《爱思唯尔(Elsevier)》,1985；和Edward B.Roche编,药物设计中的生物可逆载体(Bioreversible Carriers in Drug Design),美国医药协会和佩加蒙出版社(American Pharmaceutical Association and Pergamon Press),1987中，它们通过引用并入本文中。如上所述，用于本发明的实施例的甲苯达唑可以是前药的形式。
用于本发明的实施例的甲苯达唑优选地是药物组合物的形式。根据本发明可用的药物组合物包括适合于口服、肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、静脉内(推注或输注)和关节内)、吸入(包括可通过各种类型的定量剂量加压喷雾剂、喷雾器或吹入器生成的细颗粒粉尘或薄雾)、经直肠、腹膜内和体表(包括皮肤的、口腔的、舌下和眼内)施用的那些药物组合物，但最合适途径可取决于例如接受者的病况和病症。优选地，药物组合物适合于口服施用。
适合于口服施用的本发明的药物组合物可以呈现为离散单位，如各自含有预先确定的量的甲苯达唑的胶囊、扁囊剂或片剂；粉末或颗粒；水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液；或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。甲苯达唑还可以呈现为大丸剂、药糖剂或糊剂。各种药学上可接受的载剂及其调配物描述于标准调配物论述中，例如，E.W.Martin的《雷明登氏药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》。还参见Wang,Y.J.和Hanson,M.A.,《肠胃外科学与技术杂志(Journal of Parenteral Science andTechnology)》,技术报告编号10,增刊.42:2S,1988。
对于口服施用，甲苯达唑优选以提供于离散单位中的片剂或其他呈递形式的药物组合物形式提供，所述离散单位含有1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、250、500或1000mg的甲苯达唑用于对待治疗患者的剂量进行症状调整。包含甲苯达唑的药物通常含有约10mg至约1000mg的甲苯达唑，优选约10mg至约500mg的甲苯达唑，例如50、100、200、400或500mg的甲苯达唑。在恒定速率输注期间，静脉注射地，最优选的剂量范围为约0.1至约50mg/kg/分钟。甲苯达唑可以以每天单次治疗剂量施用，或者可以以每天两次、三次或四次或更多次作为分剂量施用，以提供每天治疗剂量。优选地，甲苯达唑以每天两次分剂量施用，以提供每天治疗剂量。
用于肠胃外施用的组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，所述溶液可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使组合物与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，所述悬浮液可以包括悬浮剂和增稠剂。组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿瓶和小瓶，并且可以储存在仅需要紧接着在使用之前添加无菌液体载剂(例如盐水或注射用水)的冷冻干燥(冻干)条件下。可以由前述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备临时注射溶液和悬浮液。用于肠胃外施用的示例性组合物包括可注射溶液或悬浮液，所述可注射溶液或悬浮液可以含有例如合适的无毒、肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液(Ringer's solution)、等渗氯化钠溶液)；或其它适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂(包括合成的甘油单酯或甘油二酯)以及脂肪酸(包括油酸或克列莫佛(Cremaphor))。
用于鼻用气雾剂或吸入施用的例性组合物包括盐水中的溶液，所述溶液可以含有例如苄醇或其它合适的防腐剂、用于增强生物利用率的吸收促进剂和/或如本领域已知的其它增溶剂或分散剂。
用于经直肠施用的药物组合物可呈现为具有通常载剂(如可可油、合成甘油酯或聚乙二醇)的栓剂。这类载剂在常温下通常是固体，但在直肠腔中液化和/或溶解以释放药物。
用于在嘴中体表施用(例如经颊或舌下)的组合物包括包含调味基质(如蔗糖和***胶或黄蓍胶)中的甲苯达唑的锭剂，以及包含基质(如明胶和甘油或蔗糖和***胶)中的甲苯达唑的糖锭。用于体表施用的示例性组合物包括体表载剂，如液体石腊和聚乙烯的复合软膏基质(Plastibase)(用聚乙烯胶凝的矿物油)。
优选的单位剂量组合物是含有如上文所述的探索剂量或治疗剂量或其适当分数的甲苯达唑的那些。
应当理解，关于正在讨论的组合物类型，除以上特别提及的成分外，本发明的组合物可以包括本领域中的常规的其它试剂，例如，适合于口服施用的那些组合物可以包括调味剂。
尽管可以将用于本发明的各种实施例的甲苯达唑或其盐用作唯一的活性成分，但是甲苯达唑也可以与一种或多种另外的活性剂组合使用。因此，本发明还提供了根据本发明与另外的活性剂一起用于CID的治疗或用于CID的治疗方法的甲苯达唑，用于同时、顺序或分开施用。这类另外的活性剂可以是可用于治疗CID的试剂或其他药物活性材料，但是优选地是已知用于治疗CID如自身免疫性疾病的试剂。这类试剂是本领域已知的。用于本发明的另外的治疗剂的特定实例包括非甾体抗炎药(NSAID)、皮质类固醇、免疫抑制剂和疾病缓解性抗风湿药(DMARD)，例如羟氯喹、甲氨蝶呤、***、硫唑嘌呤和来氟米特。
当组合使用时，(一种或多种)另外的活性剂的精确剂量将根据给药时间表、所选择的特定剂的口服药效、受试者/患者(通常是哺乳动物或人类；优选人类)的年龄、尺寸、性别和状况、病况的性质和严重程度以及其他相关的医学和物理因素而变化。因此，护理人员或临床医生可以容易地确定精确的药学有效量。适当的量可以通过动物模型和人类临床研究的常规实验确定。对于人类，本领域普通技术人员将已知或以其他方式能够确定有效剂量。
这类组合的各个组分可以在治疗过程中的不同时间分开施用，或者以分开或单一的组合形式同时施用。因此，应将本发明理解为涵盖所有这类同时或交替治疗方案。
当与可用于本发明的化合物组合使用时，上述(一种或多种)另外的活性剂可以例如以《医师桌上参考资料(Physicians'Desk Reference，PDR)》中指明的或由本领域普通技术人员另外确定的那些量使用。
慢性炎性疾病
本发明提供了用于治疗CID的甲苯达唑或其盐。在本发明的一个实施例中，CID选自痤疮、酸返流/胃灼热、年龄相关性黄斑变性(AMD)、过敏、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化症、贫血、阑尾炎、动脉炎、哮喘、动脉粥样硬化、***炎、睑炎、支气管肺大疱性类天疱疮、烧伤、滑囊炎、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、***、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肝硬化(如原发性胆汁性肝硬化)、结肠炎(如溃疡性结肠炎)、充血性心力衰竭、结膜炎、环磷酰胺诱发的膀胱炎、囊性纤维化、膀胱炎、普通感冒、克罗恩氏病、泪腺炎、痴呆、皮炎、皮肌炎、消化系统疾病、湿疹、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子***、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、***、筋膜炎、纤维肌痛、纤维化、纤维组织炎、异物肉芽肿、胃炎、胃肠炎、牙龈炎、肾小球肾炎、舌炎、心脏病、心脏瓣膜功能障碍、肝炎(如自身免疫性肝炎)、化脓性汗腺炎、亨廷顿氏病、高脂血症性胰腺炎、高血压、回肠炎、感染(例如病毒、细菌、真菌)、炎性肠病、炎性心肥大、炎性神经病、炎性肺病、神经病性胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、间质性肾炎、虹膜炎、局部缺血、缺血性心脏病、角膜炎、角膜结膜炎、喉炎、全身性红斑狼疮、狼疮肾炎、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合征(X综合征)、偏头痛、多发性硬化症、脊髓炎、心肌炎、肌炎、神经病症、肾炎、非酒精性脂肪性肝炎、肥胖症、脐炎、***、***、骨软骨炎、骨质减少、骨髓炎、骨质疏松症、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏病(Parkinson's disease)、腮腺炎、***、天疱疮、心包炎、腹膜炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、多囊性肾炎、直肠炎、***炎、牛皮癣、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、肾衰竭、再灌注损伤、视网膜炎、风湿热、输卵管炎、结节病、涎腺炎、痉挛性结肠、狭窄症、口腔炎、中风、外科手术并发症、滑膜炎、肌腱炎、肌腱变性、腱鞘炎、血栓性静脉炎、扁桃体炎、创伤、创伤性脑损伤、移植排斥反应、***炎、结核病、肿瘤、尿道炎、跟腱囊炎、葡萄膜炎、***炎、血管炎和外阴炎。CID也可以选自1型糖尿病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、干燥综合征、类风湿性关节炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病和终末期肾脏疾病。在某些优选的实施例中，CID是以肉芽肿性炎症为特征的CID。
在本发明的一个实施例中，CID选自阿尔茨海默氏病、肝硬化(如原发性胆汁性肝硬化)、结肠炎(如溃疡性结肠炎)、克罗恩氏病、肝炎(如自身免疫性肝炎)、亨廷顿氏病、炎性肠病、全身性红斑狼疮、多发性硬化症、肌炎、牛皮癣、肾衰竭(例如终末期肾脏疾病)、结节病和结核病。CID也可以选自1型糖尿病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、干燥综合征、类风湿性关节炎、格雷夫氏病和艾迪生氏病。
在本发明的一个实施例中，CID选自阿尔茨海默氏病、肝硬化(如原发性胆汁性肝硬化)、结肠炎(如溃疡性结肠炎)、克罗恩氏病、肝炎(如自身免疫性肝炎)、亨廷顿氏病、炎性肠病、全身性红斑狼疮、多发性硬化症、肌炎、牛皮癣、肾衰竭(例如终末期肾脏疾病)、结节病和结核病。CID也可以选自1型糖尿病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、干燥综合征、格雷夫氏病和艾迪生氏病。
在本发明的一个实施例中，CID选自阿尔茨海默氏病、肝硬化(如原发性胆汁性肝硬化)、结肠炎(如溃疡性结肠炎)、克罗恩氏病、肝炎(如自身免疫性肝炎)、亨廷顿氏病、炎性肠病、全身性红斑狼疮、肌炎、肾衰竭(例如终末期肾脏疾病)、结节病和结核病。CID也可以选自1型糖尿病、全身性硬化症(也称为硬皮病)和艾迪生氏病。
在本发明的一个实施例中，CID选自阿尔茨海默氏病、肝硬化(如原发性胆汁性肝硬化)、结肠炎(如溃疡性结肠炎)、克罗恩氏病、肝炎(如自身免疫性肝炎)、亨廷顿氏病、炎性肠病、肌炎、肾衰竭(例如终末期肾脏疾病)、结节病和结核病。CID也可以选自1型糖尿病、全身性硬化症(也称为硬皮病)和艾迪生氏病。
在本发明的一个实施例中，CID是与ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活相关联的疾病(并且更优选地，CID是由ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活介导的疾病(例如CID是可以通过增加ERK活性和/或增加ERK信号传导和/或活化ERK来治疗或预防的疾病))；和/或CID与有缺陷的ERK信号传导相关联(例如，CID是由ERK信号传导中的缺陷引起的)，和/或与浆细胞样树突状细胞或其他免疫细胞的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加相关联，和/或与p38 MAP激酶信号传导增加相关联。这类CID的实例包括全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病。
在本发明的一个实施例中，CID是由ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活引起的疾病(例如，CID是可以通过增加ERK活性和/或增加ERK信号传导和/或活化ERK来治疗或预防的疾病))；和/或CID与有缺陷的ERK信号传导相关联(例如，CID是由ERK信号传导中的缺陷引起的)，和/或与浆细胞样树突状细胞或其他免疫细胞的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加相关联，和/或与p38 MAP激酶信号传导增加相关联。这类CID的实例包括全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病。
在某些优选的实施例中，CID是与ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活相关联的疾病(并且更优选地，CID是由ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活介导的疾病(例如，CID是可以通过增加ERK活性和/或增加ERK信号传导和/或活化ERK来治疗或预防的疾病))；和/或CID与有缺陷的ERK信号传导相关联(例如，CID是由ERK信号传导中的缺陷引起的)，和/或与浆细胞样树突状细胞或其他免疫细胞的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加相关联，和/或与p38 MAP激酶信号传导增加相关联，并且CID选自由以下组成的组：
全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病；或
全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病；或
全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎症肠病和阿尔茨海默氏病；或
亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病。
在某些优选的实施例中，CID是与ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活相关联的疾病(并且更优选地，CID是由ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活介导的疾病(例如，CID是可以通过增加ERK活性和/或增加ERK信号传导和/或活化ERK来治疗或预防的疾病))；和/或CID与有缺陷的ERK信号传导相关联(例如，CID是由ERK信号传导中的缺陷引起的)，和/或与浆细胞样树突状细胞或其他免疫细胞的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加相关联，并且CID选自由以下组成的组：
全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病和结核病；或
全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病和结核病；或
全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、艾迪生氏病和结核病；或
亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、艾迪生氏病和结核病。
在某些优选的实施例中，CID是与ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活相关联的疾病(并且更优选地，CID是由ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活介导的疾病(例如，CID是可以通过增加ERK活性和/或增加ERK信号传导和/或活化ERK来治疗或预防的疾病))；和/或CID与有缺陷的ERK信号传导相关联(例如，CID是由ERK信号传导中的缺陷引起的)，并且CID选自由以下组成的组：
全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病和结节病；或
亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病和结节病；或
自身免疫性疾病
在本发明的实施例中，CID是自身免疫性疾病。例如，CID是选自以下的自身免疫性疾病：皮肌炎、格雷夫氏病、多发性硬化症、重症肌无力、全身性红斑狼疮(SLE)、结节病、干燥综合征、淀粉样变性病、桥本甲状腺炎、血管炎、类风湿性关节炎、反应性关节炎、硬皮病(也称为全身性硬化症)、艾迪生氏病、白斑病、恶性贫血、肾小球肾炎、重症腹腔疾病、肺纤维化、亨廷顿氏病、克罗恩氏病和原发性胆汁性肝硬化。例如，CID是选自以下的自身免疫性疾病：格雷夫氏病、多发性硬化症、全身性红斑狼疮(SLE)、结节病、干燥综合征、类风湿性关节炎、硬皮病(也称为全身性硬化症)、艾迪生氏病、亨廷顿氏病、克罗恩氏病和原发性胆汁性肝硬化。优选地，自身免疫性疾病选自全身性红斑狼疮和结节病。
在本发明的一个实施例中，CID是自身免疫性疾病，并且例如选自结节病、亨廷顿氏病、牛皮癣、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、艾迪生氏病、干燥综合征、全身性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎。例如，CID是自身免疫性疾病，并且是结节病、牛皮癣、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、艾迪生病、干燥综合征、全身性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎。例如，CID是自身免疫性疾病，并且是结节病和全身性红斑狼疮(SLE)。例如，CID是以肉芽肿性炎症为特征的自身免疫性疾病。例如，CID是自身免疫性疾病结节病。
在另一个实施例中，CID是自身免疫性疾病，并且例如选自结节病、亨廷顿氏病、牛皮癣、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、艾迪生氏病、干燥综合征和全身性红斑狼疮(SLE)。例如，CID是自身免疫性疾病，并且是结节病、牛皮癣、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、艾迪生氏病、干燥综合征和全身性红斑狼疮(SLE)。例如，CID是自身免疫性疾病，并且是结节病和全身性红斑狼疮(SLE)。例如，CID是以肉芽肿性炎症为特征的自身免疫性疾病。例如，CID是自身免疫性疾病结节病。
在另一个实施例中，CID是自身免疫性疾病，并且例如选自结节病、亨廷顿氏病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、艾迪生氏病和全身性红斑狼疮(SLE)。例如，CID是自身免疫性疾病，并且是结节病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、艾迪生氏病和全身性红斑狼疮(SLE)。例如，CID是结节病和全身性红斑狼疮(SLE)。例如，CID是以肉芽肿性炎症为特征的自身免疫性疾病。例如，CID是自身免疫性疾病结节病。
在另一个实施例中，CID是自身免疫性疾病，并且例如选自结节病、亨廷顿氏病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和艾迪生氏病。例如，CID是自身免疫性疾病，并且是结节病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和艾迪生氏病。例如，CID是以肉芽肿性炎症为特征的自身免疫性疾病。例如，CID是自身免疫性疾病结节病。
在一个尤其优选的实施例中，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病。更优选地，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、类风湿性关节炎、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生病和结核病。甚至更优选地，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病和结节病。例如，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)和结节病。
在另一个尤其优选的实施例中，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病。更优选地，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、多发性硬化症、干燥综合征、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病和结核病。甚至更优选地，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病和结节病。例如，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)和结节病。
在另一尤其优选的实施例中，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病。更优选地，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、艾迪生氏病和结核病。甚至更优选地，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病和结节病。例如，CID是自身免疫性疾病，并且选自全身性红斑狼疮(SLE)和结节病。
在另一尤其优选的实施例中，CID是自身免疫性疾病，并且选自亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、艾迪生氏病、结核病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和阿尔茨海默氏病。更优选地，CID是自身免疫性疾病，并且选自亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病、结节病、全身性硬化症(也称为硬皮病)、肌炎、1型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、格雷夫氏病、艾迪生氏病和结核病。甚至更优选地，CID是自身免疫性疾病，并且选自亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病和结节病。例如，CID是自身免疫性疾病结节病。
炎症类型
在本发明的实施例中，CID以肉芽肿性、化脓性、浆液性和/或溃疡性炎症的存在为特征。优选地，CID以肉芽肿性炎症的存在为特征。可能以肉芽肿性炎症的存在为特征的CID包括结节病、结核病、克罗恩氏病、肝肉芽肿性疾病、组织细胞增多病、口面部肉芽肿病、布劳氏综合征(Blau's syndrome)和异物肉芽肿如铍肉芽肿、锆肉芽肿、二氧化硅肉芽肿和滑石肉芽肿。例如，CID是结节病或结核病，并且尤其是结节病。
在某些优选的实施例中，CID是与ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活相关联的疾病(并且更优选地，CID是由ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活介导的疾病(例如CID是可以通过增加ERK活性和/或增加ERK信号传导和/或活化ERK来治疗或预防的疾病))；和/或CID与浆细胞样树突状细胞或其他免疫细胞的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加相关联，和/或与p38 MAP激酶信号传导增加相关联，并且CID以肉芽肿性、化脓性、浆液性和/或溃疡性炎症的存在为特征。优选地，其以肉芽肿性炎症的存在为特征。例如，CID是结节病、结核病或克罗恩氏病，并且尤其是结节病。
甲苯达唑治疗剂量
在本发明的某些实施例中，甲苯达唑的用途包含向患者施用治疗剂量的甲苯达唑。优选地，患者是人类。取决于患者和要治疗的CID的类型，可以重复地，例如每天、每二天或每三天、每周、每二周、每三周或每四周或甚至作为高的单次治疗剂量施用治疗剂量的甲苯达唑。治疗剂量的甲苯达唑可以在短期或长期内重复地施用。例如，治疗剂量可以在几天、几周、几个月或几年的时间内重复地施用。
达到治疗效果所需的甲苯达唑的量将随特定的施用途径和所治疗患者的特征而变化，例如物种、年龄、体重、性别、医学状况、特定疾病及其严重程度，以及其他相关的医学和物理因素。普通技术人员可以容易地确定和施用治疗或预防CID所需的甲苯达唑的有效量。
优选地，甲苯达唑的治疗剂量为1mg至4000mg，优选10mg至3000mg，更优选10mg至2000mg。优选地，甲苯达唑的治疗剂量可以为10mg至1000mg、10mg至750mg、10mg至500mg、20至400mg、25mg至300mg或30mg至200mg。替代地，甲苯达唑的治疗剂量可以为50mg至150mg、250mg至350mg、350mg至450mg、450mg至550mg、500mg至1000mg、1000mg至1500mg、1500mg至2000mg、2000至3000mg或3000至4000mg。例如甲苯达唑的治疗剂量可以为例如10、20、25、30、24、50、60、70、75、80、90、95、100、105、110、120、125、130、140、150、160、170、175、180、190、200、210、220、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、600、700、750、800、900、1000、1100、1200、1250、1300、1400、1500、1750、2000、2250、2500、2750、3000、3250、3500、3750或4000mg。优选50、100、200、300、400或500mg。最优选200mg或400mg。
在某些实施例中，治疗剂量的甲苯达唑在一天中以单次剂量施用。例如，对于100mg的治疗剂量，施用单次100mg剂量。在某些实施例中，治疗剂量的甲苯达唑在一天中以两次或更多次分剂量施用。例如，对于200mg的治疗剂量，可以在一天中施用两次100mg剂量或四次50mg剂量。作为另一实例，对于400mg的治疗剂量，可以在一天中施用两次200mg剂量或四次100mg剂量。治疗剂量可以以在一天中两次或更多次分剂量施用，例如在一天中2次、3次、4次、5次或6次分剂量，在一天中三次或更多次分剂量，在一天中四次或更多次分剂量，在一天中五次或更多次分剂量，或在一天中6次或更多次分剂量。治疗剂量可以以在一天中最多8次分剂量或在一天中最多7次分剂量、在一天中最多6次分剂量、在一天中最多4次分剂量、在一天中3次分剂量或在一天中两次分剂量施用。在优选的实施例中，治疗剂量的甲苯达唑可以在一天中以两次分剂量施用。
在其中在一天中以两次或更多次分剂量施用治疗剂量的甲苯达唑的实施例中，每个分开的治疗剂量中施用的剂量可以是相同的，例如对于100mg的治疗剂量，两次50mg剂量。替代地，每个分开的治疗剂量可以是不同的，例如对于150mg的治疗剂量，一次50mg剂量和一次100mg剂量。优选地，每个分开的治疗剂量中施用的剂量是相同的。
本发明的某些实施例包含向患者施用治疗剂量的甲苯达唑，其中该剂量足以达到一定的甲苯达唑的血浆浓度。
该剂量可能足以达到1ng/ml至1000ng/ml的甲苯达唑的血浆浓度(例如1ng/ml至900ng/ml、1ng/ml至800ng/ml、1ng/ml至750ng/ml、1ng/ml至600ng/ml、1ng/ml至500ng/ml、1ng/ml至400ng/ml、1ng/ml至300ng/ml、1ng/ml至200ng/ml、或1ng/ml至100ng/ml；或例如100ng/ml至900ng/ml、100ng/ml至800ng/ml、100ng/ml至750ng/ml、100ng/ml至600ng/ml、100ng/ml至500ng/ml、100ng/ml至400ng/ml、100ng/ml至300ng/ml或100ng/ml至200ng/ml；或例如250ng/ml至900ng/ml、250ng/ml至800ng/ml、250ng/ml至750ng/ml、250ng/ml至600ng/ml或250ng/ml至500ng/ml；或例如100ng/ml至900ng/ml、250ng/ml至900ng/ml、400ng/ml至900ng/ml、400ng/ml至800ng/ml或400ng/ml至700ng/ml或400ng/ml至600ng/ml)。
在一个实施例中，该剂量可能足以达到20ng/ml至100ng/ml的甲苯达唑的血浆浓度(例如20ng/ml至40ng/ml、40ng/ml至60ng/ml、60ng/ml至80ng/ml或80ng/ml至100ng/ml)。在另一个实施例中，该剂量可能足以达到50至250ng/ml的甲苯达唑的血浆浓度(例如50ng/ml至100ng/ml、50ng/ml至150ng/ml、100ng/ml至200ng/ml、150ng/ml至200ng/ml或200ng/ml至250ng/ml)。在另一个实施例中，该剂量可能足以达到100ng/ml至500ng/ml的甲苯达唑的血浆浓度(例如100ng/ml至200ng/ml、200ng/ml至300ng/ml、300ng/ml至400ng/ml或400ng/ml至500ng/ml)。在另一个实施例中，该剂量可能足以达到250至750ng/ml的甲苯达唑的血浆浓度(例如250ng/ml至400ng/ml、300ng/ml至450ng/ml、350ng/ml至500ng/ml、400ng/ml至550ng/ml或450ng/ml至600ng/ml)。在另一个实施例中，该剂量可能足以达到500至1000ng/ml的甲苯达唑的血浆浓度(例如500ng/ml至600ng/ml、600ng/ml至700ng/ml、700ng/ml至800ng/ml、800ng/ml至900ng/ml或900ng/ml至1000ng/ml)。
在一个实施例中，该剂量可能足以达到以下的甲苯达唑的血浆浓度：1ng/ml至400ng/ml，优选1ng/ml至300ng/ml，优选1ng/ml至200ng/ml，更优选1ng/ml至100ng/ml。例如，甲苯达唑的血浆浓度为1ng/ml至20ng/ml，优选20ng/ml至40ng/ml，优选40ng/ml至60ng/ml，优选60ng/ml至80ng/ml，优选80ng/ml至100ng/ml。最优选60ng/ml至80ng/ml。
本发明的某些实施例包含向患者施用治疗剂量的甲苯达唑，其中该剂量足以达到一定的甲苯达唑的稳态最大血浆浓度。
该剂量可能足以达到1ng/ml至1000ng/ml的甲苯达唑的稳态最大血浆浓度(例如1ng/ml至900ng/ml、1ng/ml至800ng/ml、1ng/ml至750ng/ml、1ng/ml至600ng/ml、1ng/ml至500ng/ml、1ng/ml至400ng/ml、1ng/ml至300ng/ml、1ng/ml至200ng/ml或1ng/ml至100ng/ml；或例如100ng/ml至900ng/ml、100ng/ml至800ng/ml、100ng/ml至750ng/ml、100ng/ml至600ng/ml、100ng/ml至500ng/ml、100ng/ml至400ng/ml、100ng/ml至300ng/ml或100ng/ml至200ng/ml；或例如250ng/ml至900ng/ml、250ng/ml至800ng/ml、250ng/ml至750ng/ml、250ng/ml至600ng/ml或250ng/ml至500ng/ml；或例如100ng/ml至900ng/ml、250ng/ml至900ng/ml、400ng/ml至900ng/ml、400ng/ml至800ng/ml或400ng/ml至700ng/ml或400ng/ml至600ng/ml)。
在一个实施例中，该剂量可能足以达到20ng/ml至100ng/ml的甲苯达唑的稳态最大血浆浓度(例如20ng/ml至40ng/ml、40ng/ml至60ng/ml、60ng/ml至80ng/ml或80ng/ml至100ng/ml)。在另一个实施例中，该剂量可能足以达到50至250ng/ml的甲苯达唑的稳态最大血浆浓度(例如50ng/ml至100ng/ml、50ng/ml至150ng/ml、100ng/ml至200ng/ml、150ng/ml至200ng/ml或200ng/ml至250ng/ml)。在另一个实施例中，该剂量可能足以达到100ng/ml至500ng/ml的甲苯达唑的稳态最大血浆浓度(例如100ng/ml至200ng/ml、200ng/ml至300ng/ml、300ng/ml至400ng/ml或400ng/ml至500ng/ml)。在另一个实施例中，该剂量可能足以达到250至750ng/ml的甲苯达唑的稳态最大血浆浓度(例如250ng/ml至400ng/ml、300ng/ml至450ng/ml、350ng/ml至500ng/ml、400ng/ml至550ng/ml或450ng/ml至600ng/ml)。在另一个实施例中，该剂量可能足以达到500至1000ng/ml的甲苯达唑的稳态最大血浆浓度(例如500ng/ml至600ng/ml、600ng/ml至700ng/ml、700ng/ml至800ng/ml、800ng/ml至900ng/ml或900ng/ml至1000ng/ml)。
在一个实施例中，该剂量可能足以达到以下的甲苯达唑的稳态最大血浆浓度：1ng/ml至400ng/ml，优选1ng/ml至300ng/ml，优选1ng/ml至200ng/ml，更优选1ng/ml至100ng/ml。例如，甲苯达唑的血浆浓度为1ng/ml至20ng/ml，优选20ng/ml至40ng/ml，优选40ng/ml至60ng/ml，优选60ng/ml至80ng/ml，优选80ng/ml至100ng/ml。最优选60ng/ml至80ng/ml。
在下面的实例2至7中证明了甲苯达唑治疗或预防慢性炎性疾病的有效性，其描述了甲苯达唑增加ERK信号传导、有效治疗患有结节病的患者并有效治疗SLE小鼠模型的活性。许多CID中都包含有缺陷的ERK信号传导。此外，ERK活化可以抑制自身免疫性疾病的其他驱动因素，如浆细胞样树突状细胞(或其他免疫细胞)的1型干扰素(干扰素α和/或β)应答增加和P38 MAP激酶信号传导增加。这样，数据表明，可以预期本发明将有效地治疗各种CID，并且具体地说与上述途径相关联的那些CID，并且更一般地与ERK活性受损和/或ERK信号传导降低和/或ERK失活相关联的(并且优选由其介导的)那些CID(例如，可以通过增加ERK活性和/或增加ERK信号传导和/或活化ERK来治疗或预防的CID)。具体地说，这类CID包括结节病、SLE、亨廷顿氏病、终末期肾脏疾病和类风湿性关节炎；例如结节病、SLE、亨廷顿氏病和终末期肾脏疾病。
实例
实例1至5
材料
甲苯达唑、阿苯达唑(albendazole)、芬苯达唑、奥苯达唑(oxibendazole)、噻苯达唑(thiabendazole)、长春花碱(vinblastine)和PMA购自密苏里州圣路易斯的西格玛(Sigma,St.Louis,MO.)。长春新碱(vincristine)和多西他赛(docetaxel)购自Selleckchem(德克萨斯州休斯顿(Houston,TX))。将化合物以10mM储备溶液形式保存在二甲亚砜(DMSO，密苏里州圣路易斯的西格玛)或无菌水中，并根据需要用培养基进一步稀释。
细胞培养方法
通过1.077g/ml Ficoll-Paque离心分离来自健康供体的外周血单个核细胞(PBMC)，并按照Larsson等人(《国际癌症杂志(Int J Cancer)1992；50:177-185)描述冷冻保存。通过锥虫蓝排除测试确定细胞活力。SLE PBMC是在冷冻保存的小瓶(1000万个细胞)中从美国华盛顿州的Astarte Biologics(Astarte Biologics,WA,USA)(目录号1035，批次3429DE16)获得的。随后根据制造商的描述和Gorelik等人(《免疫杂志(J.Immunol.)》2007；179(8):5553-5563)描述的方法，用
从ATCC(维吉尼亚州马纳萨斯(Manassas,VA))获得单核细胞样THP-1细胞，并在RPMI-1640培养基中培养，所述培养基中补充了10％热灭活的胎牛血清(HIFBS)、2mM L-谷氨酰胺、100U/100mg/mL青霉素(penicillin)/链霉素(streptomycin)和0.05mM 2-巯基乙醇(均来自密苏里州圣路易斯的西格玛)。所有细胞系均在37℃下在含5％CO2的潮湿气氛中培养。
磷酸-ERK 1/2(p-ERK)的测量
根据制造商的说明，使用针对ERK 1/2的Bioplex Pro细胞信号传导检定试剂盒(伯乐(Biorad))和Luminex
实例1.使用LINCS连接图(Connectivity Map，CMap)数据库，与MEK/ERK抑制剂的基因表达特征标志比较的甲苯达唑的基因表达特征标志。
使用公共LINCS连接图(CMap)数据库(www.clue.io)研究了甲苯达唑的药物诱导的基因表达扰动，所述数据库包含来自暴露于大量的小分子和遗传扰动信息(perturbagens)的在单层中生长的细胞的成千上万个L1000基因表达谱的集合(www.clue.io)。由于数据库中存在甲苯达唑，因此可以将基因表达与其他药物和扰动信息(pertubargens)进行比较。
使用LINCS CMap数据库，输入甲苯达唑特征标志作为查询，以识别诱导相似或相反基因表达特征标志的化合物。对于每个化合物查询，数据库基于代表不同药理学类别的化合物集的柯尔莫哥罗夫-斯米尔诺夫(Kormogorov Smirnov)统计信息(Lamb J等人，《科学(Science)》2006；313:1929-35)提供富集(相关)评分。对于甲苯达唑，一组9种MEK抑制剂，观察到的负富集得分为-99.05：PD-198306(ID 7950)、MEK 1/2抑制剂(ID 4279)、U-0126(ID 7490)、U0126(ID 9449)、司美替尼(Selumetinib)(ID 0016)、PD-98059(ID0658)、PD-0325901(ID 5102)、AS-703026(ID 4967)和PD-184352(ID 4563)。这种富集是甲苯达唑特有的，其他苯并咪唑或微管蛋白抑制剂则没有这种富集。这些结果表明甲苯达唑强烈诱导MEK/ERK活化。
实例2.甲苯达唑和其他微管蛋白活性剂对单核细胞样THP-1细胞中p-ERK的影响。
上游MAPK蛋白(如MEK)将ERK磷酸化导致ERK活化。细胞中p-ERK水平的测量值被用作ERK信号传导的指标。使用针对ERK 1/2的Bioplex Pro细胞信号传导检定试剂盒针对(伯乐)和Luminex系统测量了单核细胞样THP-1细胞中p-ERK的水平。检定基于感兴趣的靶标经由抗体与磁珠的结合。使用生物素化抗体和荧光报告子检测靶标。根据制造商的说明进行检定。
图2示出了甲苯达唑和其他微管蛋白活性剂对THP-1细胞中的p-ERK水平的影响。甲苯达唑显著提高了THP-1细胞中p-ERK的水平。测试的其他微管蛋白活性剂并未提高THP-1细胞中的p-ERK水平。
实例3.在MEK/ERK抑制剂U0126的存在下，甲苯达唑对单核细胞样THP-1细胞和外周血单个核细胞(PBMC)中p-ERK的影响。
使用针对ERK 1/2的Bioplex Pro细胞信号传导检定试剂盒(伯乐)和Luminex系统测量了单核细胞样THP-1细胞和PBMC细胞中p-ERK的水平。检定基于感兴趣的靶标经由抗体与磁珠的结合。使用生物素化抗体和荧光报告子检测靶标。根据制造商的说明进行检定。
图3示出了甲苯达唑对用和不用MEK/ERK抑制剂U0126处理的THP-1细胞(图3a)以及用和不用MEK/ERK抑制剂U0126处理的PBMC细胞(图3b)中p-ERK水平的影响。在未用U0126处理的THP-1细胞中，p-ERK的水平随着甲苯达唑剂量的增加而提高。在1μm甲苯达唑下，荧光读数约为500arb单位，并且在30μM甲苯达唑下，荧光读数增加至约1200arb单位。在用U0126处理的THP-1细胞中，仅检测到低水平的p-ERK，记录的近似荧光读数约为5至15arb单位。这些数据表明，甲苯达唑提高了THP-1细胞中的p-ERK水平以及进而ERK活性，并且在U0126存在下，这种活化被消除了。在PMBC中观察到了类似的结果，其中p-ERK水平随甲苯达唑剂量的增加而提高。
实例4.与从正常PBMC分离的CD4+细胞相比，甲苯达唑对从SLE患者的PBMC分离的CD4+T细胞中p-ERK的影响。
使用Gorelik等人(《免疫杂志》2007；179(8):5553-5563)中描述的方法，从获自健康供体和患有SLE的患者的静脉血的PBMC中分离CD4+T细胞。使用针对ERK 1/2的BioplexPro细胞信号传导检定试剂盒(伯乐)和Luminex
如图4所示，对CD4+T细胞施用10μM和30μM的甲苯达唑可使p-ERK的活性至少恢复到与获自健康供体的CD4+T细胞中观察到的水平相同的水平。该数据表明，甲苯达唑能够恢复获自患有因p-ERK活性缺陷引起的CID的患者的CD4+T细胞中的p-ERK活性。
实例5.甲苯达唑和芬苯达唑在单核细胞样THP-1细胞和PMA分化的THP-1巨噬细胞中对磷酸化-ERK(p-ERK)活性的影响
上游MAPK蛋白(如MEK)将ERK磷酸化导致ERK活化。细胞中p-ERK水平的测量值被用作ERK信号传导的指标。因此，在该实例中，研究了在暴露于任一化合物之后，甲苯达唑和芬苯达唑对单核细胞样THP-1细胞和PMA分化的THP-1巨噬细胞中p-ERK水平的影响。
使用上述Luminex系统和市售试剂盒(伯乐，加利福尼亚州赫拉克勒斯(Hercules,CA))测量在单核细胞样THP-1细胞和PMA分化的THP-1巨噬细胞中，在暴露于甲苯达唑(10μM)、芬苯达唑(10μM)或对照物(DMSO)1小时之后，细胞裂解液中的磷蛋白磷酸-ERK(p-ERK)的水平。检定基于感兴趣的靶标经由抗体与磁珠的结合。使用生物素化抗体和荧光报告子检测靶标。根据制造商的说明进行检定。简单来说，首先使用Micro-BCA方法(赛默飞世尔科技(ThermoFischer Scientific)，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆(Waltham,MA,USA))测定细胞裂解液中的蛋白浓度，以确保检定中样品的量相等，然后通过将细胞裂解液样品与珠粒、然后与检测抗体、并且最后与链霉亲和素-PE一起孵育来进行测量。使用MAGPIX仪器(伯乐)测量荧光，并通过拟合标准曲线来确定浓度水平。
图5a和5b示出了在暴露于甲苯达唑、芬苯达唑或对照物(DMSO)1小时之后，甲苯达唑(10μM)、芬苯达唑(10μM)和对照物(DMSO)对单核细胞样THP-1细胞(图5a)和PMA分化的THP-1巨噬细胞(图5b)中p-ERK水平的影响。甲苯达唑显著提高了两种THP-1细胞类型中p-ERK的水平。芬苯达唑并未提高两种类型的THP-1细胞中的p-ERK水平。
实例6.用甲苯达唑治疗结节病患者
患者为男性，他接受结肠癌手术的年龄为56岁。一年后，患者患有肝转移复发。他拒绝接受化学疗法的标准治疗，而是开始用甲苯达唑进行实验性治疗。连续六天每天施用200mg甲苯达唑(以2×100mg给药)。那时，进行了PET/CT检查，除了已知的肝转移，还示出肺门增大和纵隔***，与结节病的放射学诊断兼容的FDG信号升高(涉及的组织用箭头表示；图6中左图)。癌症手术时先前的CT扫描也提示了这种诊断。
甲苯达唑剂量增加至每天400mg(2×200mg)，并且六周后进行新的PET扫描，其示出肺门和纵隔结的FDG信号和尺寸的消失/减小(图6中右图，与左图中相同区域相比)，其中结节病的放射学诊断处于缓解。此时的血清甲苯达唑浓度为71ng/ml。总之，已表明甲苯达唑有效减小患有结节病的患者的肉样瘤组织的尺寸。
实例7.小鼠中全身性红斑狼疮(SLE)的体内功效研究
材料和设备
杜尔贝科(Dulbecco)的磷酸盐缓冲盐水和山羊抗小鼠IgG-HRP均获自生命技术(Life Technologies)。甲氨蝶呤、小牛胸腺DNA、聚L-细胞溶解酶和TMB溶液获自西格玛。4％的多聚甲醛和吐温20获自默克(Merck)。小牛胸腺Sm/RNP获自根威生物科技(GenWayBiotech)。胎牛血清获自柏楉(Biochrom)。
用于尿液测试的Combur试纸条获自Swevet。Costar 3590ELISA板和V底孔稀释板获自VWR。微管获自VWR和艾本德(Eppendorf)。Microvette 500Z-Gel和10ml试管获自莎斯特(Sarstedt)。0.6×2.5mm针获自Terumo Neolus。1ml注射器获自Codan。
甲氨蝶呤获自西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)(密苏里州圣路易斯)。
甲苯达唑获自Recipharm(瑞典(Sweden))。对于口服施用，将其溶于芝麻油/PBS1:1混合物(体积)中。芝麻油获自西格玛奥德里奇。这样，用于对照的媒介物是芝麻油/PBS1:1混合物(体积)
方法与结果
NZBNZWF1小鼠自发发展为自身免疫性综合征，与人全身性红斑狼疮(SLE)具有明显相似性，因此该类型的小鼠可用作SLE的模型。
在实验开始前，40只雌性NZBNZWF1小鼠(Envigo Europe)随意喂食和供水并使其适应环境约1周。在实验开始时，小鼠年龄为14周，并且开始治疗为16周。在实验开始时，将小鼠分为4组，每组10只。
1.媒介物对照：仅用媒介物治疗
2.阳性对照：用甲氨蝶呤(15mg/kg)治疗
3.用低剂量的甲苯达唑治疗(25mg/kg)
4.用高剂量的甲苯达唑(50mg/kg)治疗
将治疗组混合在笼子之间以避免笼效应。笼子里养了2到10只小鼠。
每周连续5天每天口服施用(p.o)媒介物对照治疗以及低剂量和高剂量甲苯达唑治疗，持续8周(小鼠年龄16-24周)。每周3次腹膜内施用15mg/kg甲氨蝶呤的阳性对照治疗，持续8周(小鼠年龄16-24周)。表1含有治疗组的全部详细信息。
表1治疗组的汇总
从实验中除去伤口没愈合的小鼠(连续3天以上被确定为“湿伤口”)。从实验中除去健康状况不佳(脱水和后凸姿势)或表现出因药物施用引起的其他严重不良影响的小鼠。
在治疗期间每周测量小鼠的体重。在研究终止时，确定所有动物的脾脏重量。前8周每月进行一次尿液采样，然后每隔一周进行一次尿液采样直至终止。在实验开始时(小鼠年龄14周)、治疗开始时(小鼠年龄16周)以及治疗期间每两周(小鼠年龄18、20、22和24周)、治疗之后(小鼠年龄26和28周)和终止时(小鼠年龄为30周)，从所有的小鼠中收集血清。分析血清样品中针对双链DNA(dsDNA)的抗体(抗ds-DNA抗体)的水平。抗(双链)-DNA抗体是人SLE和NZBNZWF1小鼠的自身免疫性综合征的高度特异性标记。抗(双链)-DNA抗体经常在患有各种全身性风湿病(包括SLE)的患者中以及在NZBNZWF1小鼠中的自身免疫性综合征中以很高的水平被发现。
在治疗期间和之后采集的血清样品的抗ds-DNA抗体的分析结果示于图7中。从图7可以看出，用甲苯达唑(MBZ)治疗的组示出血清样品中抗dsDNA抗体的浓度低于媒介物对照组或甲氨蝶呤(MTX)阳性对照组，表明在用甲苯达唑治疗的组中，SLE的疾病活性较低。此外，用较高剂量(50mg/kg)的甲苯达唑治疗的组示出抗dsDNA抗体浓度低于用较低剂量(25mg/kg)治疗的组，表明较高剂量的甲苯达唑在治疗SLE方面更有效。
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