阅读说明：本技术 一种锡-中卟啉与青蒿素联合应用在制备抗肿瘤药物中的用途 (Application of tin-mesoporphyrin and artemisinin in preparation of antitumor drugs in combined manner ) 是由 苏畅 曹奕鸥 肖立俊 张淳 于 2020-06-09 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种锡-中卟啉与青蒿素联合应用在制备抗肿瘤药物中的用途。所述锡-中卟啉明显抑制血红素加氧酶-1的表达,增加青蒿素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。本发明利用锡-中卟啉抑制肿瘤细胞血红素加氧酶-1活性的作用,减少了肿瘤细胞内亚铁血红素的代谢,提升了青蒿素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用,提高青蒿素的抗肿瘤效果。本发明将锡-中卟啉与青蒿素联合应用抗肿瘤效果非常显著,具有广阔的应用前景。(The invention discloses an application of tin-mesoporphyrin and artemisinin in preparation of antitumor drugs in a combined manner. The tin-mesoporphyrin obviously inhibits the expression of heme oxygenase-1 and increases the apoptosis induction effect of artemisinin on tumor cells. The invention utilizes the effect of tin-mesoporphyrin on inhibiting the activity of heme oxygenase-1 of tumor cells, reduces the metabolism of heme in the tumor cells, improves the apoptosis induction effect of artemisinin on the tumor cells, and improves the anti-tumor effect of artemisinin. The invention has very obvious anti-tumor effect by combining tin-mesoporphyrin and artemisinin and has wide application prospect.)

一种锡-中卟啉与青蒿素联合应用在制备抗肿瘤药物中的 用途

技术领域

本发明属于抗肿瘤药物领域，具体涉及一种锡-中卟啉与青蒿素联合应用在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

青蒿素及其衍生物具有良好的抑制肺癌、***癌、颈癌等的肿瘤细胞增殖和促进其凋亡的作用，而对正常组织细胞的毒性极低，在抗癌治疗方面具有良好的应用前景。然而，青蒿素类药物并非对所有类型的肿瘤细胞皆能起到很好的抑制作用，甚至同部位肿瘤不同细胞系间青蒿素的敏感性也存在较大差距。青蒿素抗肿瘤作用的直接靶点是细胞内的亚铁血红素，细胞内的亚铁血红素可以介导青蒿素的细胞毒性，增加亚铁血红素合成的前体物质会增强青蒿素作用，而加速细胞内亚铁血红素的代谢亦明显削弱青蒿素的细胞毒作用。血红素加氧酶-1是一种广泛存在于哺乳动物体内的抗氧化防御酶，是降解亚铁血红素重要的限速酶。血红素加氧酶-1在许多肿瘤组织（胃癌、肺癌、乳腺癌及直肠癌等）中表达水平升高，呈异常高表达。血红素加氧酶-1高表达加速了肿瘤细胞内亚铁血红素的代谢，抑制了青蒿素的抗癌作用。锡-中卟啉与血红素结构类似，可与血红素加氧酶-1结合，但自身不被降解，使血红素加氧酶-1与亚铁血红素结合减少，故能抑制血红素加氧酶-1活性，临床上被用于新生儿高胆红素血症、血卟啉症、小儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的治疗的治疗。

发明内容

本发明就是为了解决上述技术问题，所提供一种锡-中卟啉与青蒿素联合应用在制备抗肿瘤药物中的用途。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种锡-中卟啉与青蒿素联合应用在制备抗肿瘤药物中的用途。

进一步的，所述锡-中卟啉明显抑制血红素加氧酶-1的表达，增加青蒿素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。

一种药物组合物，包括锡-中卟啉和青蒿素。

进一步的，所述药物组合物明显抑制血红素加氧酶-1的表达，增加青蒿素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。

本发明的有益效果是：

本发明利用锡-中卟啉抑制肿瘤细胞血红素加氧酶-1活性的作用，减少了肿瘤细胞内亚铁血红素的代谢，提升了青蒿素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用，提高青蒿素的抗肿瘤效果。

附图说明

图1是本发明高表达血红素加氧酶-1肿瘤细胞亚铁血红素含量与正常组织对比图；

图2是本发明锡-中卟啉明显抑制血红素加氧酶-1的表达及增加青蒿素对肿瘤细胞的诱导凋亡结果图；

图3是本发明锡-中卟啉的作用原理图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明技术方案，下面结合说明书附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。

实施例1

收集大肠癌组织及癌旁5CM以上正常大肠组织标本，术前未经任何其他治疗。所取标本部分迅速浸入液氮，-80℃冰箱保存，留待血红素含量检测，部分用甲醛固定，常规石蜡包埋，制备4μm切片。

HO-1的免疫组化染色：HO-1兔抗人多克隆抗体，按1：200稀释后作为一抗；采用免疫组化S-ABC法，染色步骤严格按照DAB显色试剂盒说明书进行。以已知阳性反应片作为阳性对照，以兔抗无关血清代替一抗作为阴性对照。用显微镜对染色组织切片进行镜下观察，先根据染色强度进行定量评定：淡黄色为1分，即弱阳性；棕黄色为2分，即阳性；棕褐色为3分，即强阳性。再将每例组织于高倍镜下(400x)随机取4个视野，视野性细胞所占视野细胞的比例按如下标准评分：阳性表达率<1%为0分，2%~24%为1分，25%~49%为2分，50%~74%为3分，≥75%为4分。染色强度与阳性细胞的百分率的乘积>2分为免疫组化阳性(+)，否则计为免疫组化阴性(-)。

荧光法检测肿瘤细胞血红素和卟啉浓度：由经验丰富的医师选取组织标本,清洗,去除脂肪和坏死组织,无菌条件下细切成糊状；经细胞分散素37℃摇床消化0.5～1．5小时，308μm滤网过滤收集细胞（1x10⁵），于4℃，12 000 r/min离心5 min后得到细胞沉淀，水洗后加入1.5 ml琥珀色离心管：向离心管加入500μl 20mmol/L的草酸，于4℃暗室过夜静置16h，在各离心管中加入500μl 2mmol/L的草酸，取一半样品 （用于卟啉浓度检测）于常温下反应作为实验对照组，另—半样品（用于卟啉和血红素总浓度检测）于95℃水浴中加热30mim； 自然冷却后12000 r/min离心5 min,取200μl于黑色96孔板，进行荧光位检测（激发波长为400nm,发射波长为620nm），两组差值即为待测血红素浓度。

Spearman等级相关分析结肠癌肿瘤组织HO-1表达量和血红素含量之间的相关关系。

实验结果显示（图1）：大肠癌肿瘤细胞高表达血红素加氧酶-1，而亚铁血红素含量较正常组织明显下降。

实施例2

取对数生长期人结肠癌细胞系Lovo细胞接种于96孔培养板中，每孔细胞数2x10³培养12h后分为诱导组（CoPP）、阻断组（SnMP）及对照组（control）。诱导组与HO-1特异性诱导剂终浓度50mmol/L钴卟啉 CoPP共培养36h；阻断组与50mmol/L CoPP及50mmol/LHO-1特异性阻滞剂锡-中卟啉（SnMP）共培养36h；对照组不作特殊处理。

离心并去除培养基，用新鲜培养基重悬，以5x 10³个／孔接种于96孔板。 培养24h后，移除培养基．每孔加入20μl新配置的含5mg/ml MTT的无血清培养基，37℃孵育4h后，3000r／min 离心15min，去除上清，加入200μ1 DMSO，轻度振荡10min，用酶标仪在570nm检测波长，无参比波长的条件下测定OD值。

调整细胞密度至10⁶/ml，取100μl细胞悬液，冷PBS洗2次后，按Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒说明书加入Annexin V-PE及7-AAD，设三个复孔，并设PBS阴性对照孔，流式细胞仪检测细胞散点分布情况，对细胞凋亡进行定量分析。

实验结果显示（图2）：肿瘤细胞培养环境中加入锡-中卟啉（SnMP）可明显抑制血红素加氧酶-1（HO-1）的表达，同时增加青蒿素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用；反之，加入钴卟啉（CoPP）则会提高肿瘤细胞血红素加氧酶-1的表达，同时削弱青蒿素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。

申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。