一种口服给药的奥沙利铂前药、制备方法及其作为抗肿瘤药物的用途
阅读说明：本技术 一种口服给药的奥沙利铂前药、制备方法及其作为抗肿瘤药物的用途 (Oxaliplatin prodrug for oral administration, preparation method and application of oxaliplatin prodrug as antitumor drug ) 是由 高安丽 卿晨 刘伟平 周鹏 姜婧 周宏宇 余娟 张玲 于 2021-10-21 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种口服给药的奥沙利铂前药、制备方法及其作为抗肿瘤药物的用途。该前药属于Pt(Ⅳ)配合物,含有结构独特的有机羧酸α-呋喃甲酸作轴向配体,其分子式为cis,trans,cis-[Pt(1R,2R-diaminocyclohexane)(OH)(α-furancarboxylato)(C-(2)O-(4))],可作为奥沙利铂的前药。它是以奥沙利铂为起始原料,通过轴向氧化、与等摩尔α-呋喃甲酸进行中和反应而合成的。本发明的配合物具有良好的水溶性和水溶液稳定性,且腹腔注射给药和灌胃给药后对小鼠移植瘤S180均表现出很高的抗肿瘤作用,可制成口服剂型,用于恶性肿瘤的治疗。(The invention relates to an oxaliplatin prodrug for oral administration, a preparation method and application thereof as an antitumor drug. The prodrug belongs to a Pt (IV) complex, contains organic carboxylic acid alpha-furancarboxylic acid with a unique structure as an axial ligand, and has a molecular formula of cis, trans, cis- [ Pt (1R,2R-diaminocyclohexane) (OH) (alpha-furcarbaxylonato) (C) 2 O 4 )]Can be used as prodrug of oxaliplatin. It is synthesized by taking oxaliplatin as a starting material and carrying out neutralization reaction with equimolar alpha-furancarboxylic acid through axial oxidation. The complex of the invention has good water solubility and water solution stability, shows high anti-tumor effect on mouse transplantable tumor S180 after intraperitoneal injection administration and gastric lavage administration, can be prepared into oral dosage forms and is used for treating malignant tumors.)
技术领域
本发明涉及一种口服给药的奥沙利铂前药、制备方法及其作为抗肿瘤药物的用途，该前药是一种以α-呋喃甲酸为轴向配体的Pt(Ⅳ)配合物，系奥沙利铂的前药，化学式为顺式,反式,顺式-[Pt(1R,2R-二氨基环已烷)(羟基)(α-呋喃甲酸根)(草酸根)]，即cis,trans,cis-[Pt(1R,2R-diaminocyclohexane)(OH)(α-furancarboxylato)(C2O4)]。本发明的配合物具有很好的体内外抗肿瘤活性，特别是较高的口服抗肿瘤活性，可用于恶性肿瘤的治疗，属于生物制药领域。
背景技术
以顺铂(Cisplatin，cis-diamminedichloroplatinum(II))、卡铂(Carboplatin,cis-diammine(1,1-cyclobutanedicarboxylato)platinum(II))和奥沙利铂(Oxaliplatin,(1R,2R-diaminocyclohexane)oxalatoplatinum(II))为代表的铂类抗癌药物系一类非常重要的化疗药物，已列入美国、日本、欧盟、中国等大部分国家和地区的药典中，广泛用于常见多发的恶性肿瘤的临床治疗。然而，与其它细胞毒性药物一样，铂类抗癌药物仍存在毒副反应大和易出现耐药性的问题。同时，目前已批准上市的铂类药物均不具有口服活性，需注射给药，给临床用药带来极大不便。因此，发展高效、低毒和具有口服活性的新型铂类药物仍是目前抗癌药物领域的研究热点之一。
铂类抗癌药物的作用靶点为癌细胞核的DNA，它们与DNA以配位键的方式相结合，破坏DNA的结构和功能，导致癌细胞凋亡。目前已批准上市的铂类药物均是四配位平面几何构型的Pt(II)配合物，归属于配位取代反应动力学活性的种类、稳定性较差，在到达靶点DNA之前，容易与血液和细胞外的其他生物分子发生反应，从而降低了Pt(II)类药物的生物利用度，增加了其毒副反应，同时也影响了其口服活性。而Pt(II)经过轴向氧化后形成的六配位八面体几何构型Pt(Ⅳ)配合物，反应动力学则属于惰性。大量研究已表明：和Pt(II)配合物比较，Pt(Ⅳ)配合物与其他生物大分子的反应速率明显降低，能够在体内环境下维持稳定，具有低的毒性和高的口服活性。并且，肿瘤组织由于血管新生相对不足、细胞普遍处于缺氧状态，属还原性微环境，谷胱甘肽和维生素C的浓度明显高于正常细胞，足以将Pt(Ⅳ)还原成Pt(II)，失去轴向配体，形成对应的Pt(II)抗癌药物。
因此，可以把Pt(Ⅳ)配合物当成Pt(II)抗癌药物的前药(Prodrug)，为Pt(II)抗癌药物肿瘤靶向性输送提供了一种较好的方式。此外，选择合适的轴向配体，可以赋予Pt(Ⅳ)配合物良好的水溶性和脂溶性，使得Pt(Ⅳ)配合物可以采取多种给药途径，尤其是口服给药。
基于这些优点，Pt(Ⅳ)配合物一直是多年来铂类抗癌药物发展的方向。前期已有三个Pt(IV)配合物进入了临床试验，它们分别是Iproplatin，Satraplatin，Tetraplatin(结构式见图2)。其中，Iproplatin和Tetraplatin已经淘汰，前者由于具有很高的神经毒性在I期临床后放弃；后者由于活性不如卡铂在III期临床后淘汰。而Satraplatin已临床试验长达17年，一直未能获准上市，主要原因包括此配合物水溶性低(≈1mg/ml)带来的药代动力学性质差，口服疗效不突出。近年来，化学界通过选择各种各样的有机羧酸作轴向配体，合成出数量庞大、结构越来越复杂的Pt(Ⅳ)配合物，但所报道的抗肿瘤作用，特别是口服活性，普遍不及顺铂、卡铂或奥沙利铂注射给药的药效，迄今为止，尚未有Pt(IV)配合物批准进入临床应用。因此，研制Pt(IV)抗癌药物受到很大的挑战，需要创新的设计思路和方法。
发明内容
α-呋喃甲酸又称2-呋喃甲酸(α-furancarboxylic acid或2-furancarboxylicacid)、糠酸(2-furoic acid)，是一种水溶性和脂溶性均良好的羧酸。α-呋喃甲酸的氢离子解离后，α-呋喃环的5元Π键与羧酸根共轭，形成7元离域大Π键，这种离域Π键是一个良好的电子授体，因此，α-呋喃甲酸是一个很好的配体，能与金属离子形成稳定的配合物。同时，α-呋喃甲酸毒性小且具有抗菌作用，可用作食品防腐剂。所以，发明人认为α-呋喃甲酸是一种结构独特的有机羧酸，以其作为Pt(Ⅳ)配合物的轴向配体，可能会赋予配合物预想不到的抗癌效果。
因此，发明人试验合成了一系列轴向含有1个或2个α-呋喃甲酸根的Pt(Ⅳ)配合物，化学式为：
cis,trans,cis-[PtA2(OH)(α-furancarboxylato)X2]
cis,trans,cis-[PtA2(α-furancarboxylato)2X2]
其中，A2代表已上市的铂类药物的载体基团，为2NH3、1R,2R-二氨基环己烷(1R,2R-diaminocyclohexane)或其他有机二胺类；X2代表已上市的铂类药物的离去基团，为2Cl-、C2O4 2-、1,1-环丁烷二羧酸根、丙二酸根及其衍生物、α-羟基酸根(如乙醇酸根、乳酸根)。通过试验，发明人成功合成出轴向含有1个α-呋喃甲酸根的Pt(Ⅳ)配合物cis,trans,cis-[PtA2(OH)(α-furancarboxylato)X2]，化学结构式为：
在本发明的试验条件下，通过多次尝试，发明人均未能制备出轴向含有2个α-呋喃甲酸根的Pt(Ⅳ)配合物cis,trans,cis-[PtA2(α-furancarboxylato)2X2](见图3)，发明人推测其可能的原因是：α-呋喃甲酸根的空间体积大，如果轴向上下位点同时配位，会在配位内界产生很大的空间位阻，不利于配合物的稳定存在。
在发明人得到的系列Pt(Ⅳ)配合物cis,trans,cis-[PtA2(OH)(α-furancarboxylato)X2]中，基于配合物成药对稳定性和水溶性的要求，发明人筛选出具有足够水溶性和稳定性的3个Pt(Ⅳ)配合物(分别以FPt-1、FPt-2和FPt-3表示)，化学结构式分别为：
其中，FPt-1属于顺铂的前药、FPt-2属于卡铂的前药及FPt-3属于奥沙利铂的前药，室温下，它们在水中的溶解度分别为1.5mg/mL、26.9mg/mL和8.2mg/mL，大于对应的Pt(II)药物(顺铂1.0mg/mL、卡铂17.5mg/mL、奥沙利铂7.8mg/mL)。经1H NMR监测，这3个前药在水溶液中均具有很好的稳定性，能维持稳定至少72小时，满足成药所需条件，明显高于对应的Pt(II)药物。
本发明涉及的Pt(Ⅳ)配合物，是以顺铂、卡铂和奥沙利铂为起始原料，经过氧化氢氧化，和等摩尔的α-呋喃甲酸在水溶液中反应8小时，过滤或减压浓缩至近干、加入大量丙酮反析后过滤，真空干燥得到的，产率在56-89％之间。
采用MTT法，测试本发明的Pt(Ⅳ)配合物FPt-1、FPt-2和FPt-3对人乳腺癌细胞株(MCF-7)、人非小细胞肺癌细胞株(A549)、人结肠癌细胞株(HCT116)的增殖均显示出很高的抑制活性，虽然活性稍弱于对应的Pt(II)药物，但从国内外报道的结果来看，Pt(Ⅳ)配合物的体外抗癌活性一般都会不如对应的Pt(II)药物，原因尚不清楚。而且，值得关注的是，对于人正常细胞株(人脐静脉内皮细胞HUVEC)，FPt-1和FPt-3的细胞毒性则低于对应的顺铂和奥沙利铂，提示FPt-1和FPt-3对肿瘤细胞显示出相当的选择性。
在小鼠移植瘤S180体内模型上，以卡铂作阳性对照药，本发明的3个Pt(Ⅳ)配合物腹腔注射给药后，均显示出明显的抑瘤作用，量效关系较明显。给药后小鼠体重变化可以初步判断药物的毒性，结合抑瘤率和给药后小鼠体重变化来看，FPt-1和FPt-3的疗效(活性和毒性)与卡铂相当、但FPt-2疗效不及卡铂。
基于前面的体内抗肿瘤数据，发明人进一步测试比较了FPt-1和FPt-3与其对应的Pt(II)药物顺铂和奥沙利铂对小鼠移植瘤S180的疗效。等摩尔剂量腹腔注射给药后，FPt-1的疗效稍弱于顺铂(无统计学差异)，FPt-3的抑瘤率为也稍小于奥沙利铂(无统计学差异)，但从FPt-3组和奥沙利铂组小鼠的体重变化来看，给药后，FPt-3对小鼠的生长基本不影响，而奥沙利铂明显延缓小鼠的生长，提示FPt-3的初步毒性明显小于奥沙利铂。
在另外一组体内疗效试验中，同样以小鼠移植瘤S180为模型，采用灌胃途径给药，FPt-3仍具有明显的抑瘤活性，7.6μmol/kg剂量时抑瘤率达到65％，而等摩尔剂量奥沙利铂的抑瘤率只有23％，提示本发明的FPt-3具有很高的口服抗肿瘤活性。
综上所述，本发明的Pt(Ⅳ)配合物FPt-3水溶性好、稳定性高、体内抗肿瘤疗效好、且具有高的口服抗肿瘤活性，可作为奥沙利铂的前药，采用口服给药途径，用于恶性肿瘤的治疗。
附图说明
图1：顺铂、卡铂和奥沙利铂的化学结构式。
图2：进入临床研究的三个Pt(IV)配合物的化学结构式。
图3：cis,trans,cis-[PtA2(α-furancarboxylato)2X2]的化学结构式。
图4：本发明的系列Pt(Ⅳ)配合物FPt-1的化学结构式。
图5：本发明的系列Pt(Ⅳ)配合物FPt-2的化学结构式。
图6：本发明的系列Pt(Ⅳ)配合物FPt-3的化学结构式。
具体实施方式
实施例1，cis,trans,cis-[Pt(NH3)2(OH)(α-furancarboxylato)Cl2](FPt-1)的合成
称取2.004克(6.00mmol)cis,trans,cis-[Pt(NH3)2(OH)2Cl2],加入20mL水中，加入0.685克(6.12mmol)α-呋喃甲酸，在60℃水浴中搅拌反应8小时，溶液逐渐变澄清，随后又逐渐析出土黄色的cis,trans,cis-[Pt(NH3)2(OH)(α-furancarboxylato)Cl2]沉淀，冷却后过滤收集沉淀产品，并依次用少量水和无水乙醇洗涤2次，然后60℃下真空干燥4小时，得1.45克产品，产率为56％。其化学结构式如图4所示。
结构特征参数：<1>元素分析：测定值Pt 44.91％、C 14.00％、H 2.37％、N 6.51％(计算值Pt 45.56％、C 14.02％、H 2.34％、N 6.54％)；<2>1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ7.76(dt,1H,CH-furyl),6.99(m,1H,CH-furyl),6.57(m,1H,CH-furyl),5.84(m,6H,2NH3),5.07(s,1H,OH),3.41(s,H2O),2.50(m,solvent))；13C NMR(DMSO-d6,126MHz):δ165.22(t,1C,ax-COO-),145.87(s,1C,CH-furyl),145.21(m,1C,C-furyl),115.70(m,1C,CH-furyl),111.56(m,1C,CH-furyl),39.52(dp,solvent)；<3>IR(cm-1,KBr)：3263(s,ν(NH3))、1477(s,νas(COO-))、1391(s,νs(COO-))、595(w,ν(Pt-N)、482(w,ν(Pt-O)、443(w,ν(Pt-Cl)；<4>ESI-MS m/z 413[M-OH-]+、359[M-2Cl-]2+。
实施例2，cis,trans,cis-[Pt(NH3)2(OH)(α-furancarboxylato)(CBDCA)](FPt-2)的合成
称取1.805克(4.46mmol)cis,trans,cis-[Pt(NH3)2(OH)2(CBDCA)]，溶于20mL水中，加入0.510克(4.55mmol)α-呋喃甲酸，在50℃水浴中搅拌，溶液立即变成浅黄色澄清溶液，反应8小时后，冷却至室温，膜滤除去微量黑色不溶物，滤液在50℃下减压浓缩至近干，得到黄色油状物，加入约50ml丙酮，析出白色固体，过滤，固体在50℃下真空干燥4小时，得到1.97克产品，产率为89％。其化学结构式如图5所示。
结构特征参数：<1>元素分析：测定值Pt 38.76％、C 26.22％、H 3.48％、N 5.47％(计算值Pt 39.08％、C 26.45％、H 3.21％、N 5.61％)；<2>1H NMR(DMSO-d6,500MHz):δ7.76(m,1H,CH-furyl),6.98(m,1H,CH-furyl),6.55(m,1H,CH-furyl),6.02(m,6H,2NH3),3.54(s,H2O),2.59(ddd,J＝29.7,20.4,12.2Hz,2H,CH2-cyclobutane),2.50(dt,J＝3.6,1.8Hz,solvent),2.28(dd,J＝18.4,10.6Hz,2H,CH2-cyclobutane),1.78(m,2H,CH2-cyclobutane)；13C NMR(DMSO-d6,126MHz):δ176.64(s,1C,eq-COO-),175.36(d,1C,J＝69.5Hz,eq-COO-),165.36(d,J＝18.7Hz,1C,ax-COO-),147.43(d,J＝10.7Hz,1C,CH-furyl),145.26(dt,J＝31.6,28.3Hz,1C,C-furyl),115.59(dd,J＝68.3,28.4Hz,1C,CH-furyl),111.50(m,1C,CH-furyl),55.47(d,J＝66.4Hz,1C,CH2-cyclobutane),39.52(dp,solvent),33.48(d,J＝234.9Hz,1C,CH2-cyclobutane),28.15(d,J＝181.8Hz,1C,CH2-cyclobutane),15.69(d,J＝38.3Hz,1C,CH2-cyclobutane)；<3>IR(cm-1,KBr)：3219(s,ν(NH3))、1477(s,νas(COO-))、1390(s,νs(COO-))、595(w,ν(Pt-N)、474(w,ν(Pt-O)。<4>ESI-MSm/z 499[M]+、357[M-C6H6O4 2-]2+。
实施例3，cis,trans,cis-[Pt(1R,2R-diaminocyclohexane)(OH)(α-furancarboxylato)(C2O4)](FPt-3)的合成
称取1.384克(3.21mmol)cis,trans,cis-[Pt(1R,2R-diaminocyclohexane)(OH)2(C2O4)]溶于20mL水中，加入0.366克(3.27mmol)的α-呋喃甲酸，在50℃水浴中搅拌反应8小时后，加入140mL水至固体几乎溶解，膜滤除去微量不溶渣，50℃下减压浓缩至近干，加入约50ml丙酮，析出大量白色固体，过滤收集固体，50℃下真空干燥4小时，得到1.27克产品，产率为75％。其化学结构式如图6所示。
结构特征参数：<1>元素分析：测定值Pt 36.78％、C 29.55％、H 3.76％、N 5.18％(计算值Pt 37.14％、C 29.71％、H 3.42％、N 5.33％)；<2>1H NMR(DMSO-d6,500MHz):δ8.25(m,2H,-NH2),7.97(d,J＝6.1Hz,1H,-NH2),7.77(dd,J＝1.7,0.9Hz,1H,CH-furyl),7.21(m,1H,-NH2),6.92(m,1H,CH-furyl),6.55(dt,J＝5.0,2.5Hz,1H,CH-furyl),3.37(s,H2O),2.61(s,2H,CH-cyclohexane),2.50(dt,J＝3.5,1.7Hz,solvent),2.08(m,2H,CH2-cyclohexane),1.78(m,4H,2CH2-cyclohexane),1.09(m,2H,CH2-cyclohexane),；13C NMR(DMSO-d6,126MHz):δ166.37(s,1C,eq-COO-),164.40(m,1C,ax-COO-),163.84(d,J＝3.5Hz,1C,eq-COO-),147.23(s,1C,CH-furyl),145.58(s,1C,C-furyl),115.98(s,1C,CH-furyl),111.67(m,1C,CH-furyl),60.85(d,J＝161.6Hz,2C,CH-cyclohexane),39.52(dp,solvent),30.77(d,J＝28.8Hz,2C,CH2-cyclohexane),23.66(d,J＝10.5Hz,2C,CH2-cyclohexane)；<3>IR(cm-1,KBr)：3138(s,ν(NH3))、1575(s,νas(COO-))、1476(s,νs(COO-)、597(w,ν(Pt-N)、481(w,ν(Pt-O)。<4>ESI-MS m/z 417[M-α-C5H3O3 -]+。
实施例4，本发明Pt(Ⅳ)配合物体外对肿瘤细胞增殖的抑制活性
阳性对照样品顺铂(批号：S20200205)、卡铂(批号：C20200506)以及奥沙利铂(批号：L20200428)购自昆明贵研药业有限公司；肿瘤细胞株购自中国科学院上海生命科学研究院细胞库。
顺铂和FPt-1用生理盐水(NS)配制，其它受试样品用5％的葡萄糖注射液(GS)配制，采用MTT法测定它们对人非小细胞肺癌细胞株(A549)、人乳腺癌细胞株(MCF-7)、人结肠癌细胞株(HCT116)、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的抑制作用，作用时间为72h。根据各浓度抑制率，运用SPSS软件计算半数抑制浓度IC50，结果见表1。
表1.受试Pt(IV)配合物对不同细胞株增殖的影响
如表1结果所示，3种Pt(IV)配合物，特别是FPt-1和FPt-3，对人乳腺癌细胞株(MCF-7)、人非小细胞肺癌细胞株(A549)、人结肠癌细胞株(HCT116)的增殖均显示出明显的抑制活性。其中，FPt-1的半数抑制浓度IC50与顺铂处于同一数量级，FPt-3的IC50稍大于奥沙利铂的对应值，而FPt-2对MCF-7和A549癌细胞株的抑制则强于卡铂。在测试时，发明人还设置了人正常细胞株(人脐静脉内皮细胞HUVEC)作比较，以评价试验配合物对正常细胞的毒性，结果表明：FPt-1和FPt-3对该正常细胞株生长的抑制浓度IC50分别大于对应的顺铂和奥沙利铂，提示FPt-1和FPt-3对肿瘤细胞具有一定的选择性。
实施例5，本发明Pt(Ⅳ)配合物的体内抗肿瘤活性
昆明种(KM)小鼠，23-28克，雌性，购自湖南斯莱克实验动物有限公司；小鼠肉瘤S180瘤株引自中科院上海药物研究所；阳性对照药顺铂(批号：S20200205)、卡铂(批号：C20200506)以及奥沙利铂(批号：L20200428)购自昆明贵研药业有限公司。FPt-1和顺铂用NS配成所需的浓度，其它测试样品用5％GS配制成所需浓度。
取接种5-8天后生长良好的腹水型小鼠S180细胞，用NS调细胞浓度1.0×107/ml，接种于小鼠右侧腋部皮下，0.2m1/只，接种24h后分组给药。共66只雌性小鼠，6只/组；按溶媒对照组、卡铂对照组、高/中/低剂量组随机分组，采用腹腔注射给药，1次/天，连续13天。末次给药24h后处死小鼠，处死前12h禁食禁水。取出肿瘤称重，计算抑瘤率＝(对照组平均瘤重－治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重×100％)，数据以均数±标准差表示，采用SPSS统计学软件处理分析P值。结果见表2。
表2.受试Pt(IV)配合物腹腔注射给药对小鼠移植瘤S180生长的影响
注：a.与溶媒对照组比较，P<0.05；b.与溶媒对照组比较，P<0.01；c.与溶媒对照组比较，P<0.001；d.FPt-1组与卡铂组比较，P<0.001；e.FPt-2组与卡铂组比较，P<0.01。
实验结果表明，与溶媒对照组、卡铂对照组相比，FPt-1中、高剂量组抑瘤效果显著，抑制率分别达到87％和94％；FPt-2高剂量组具有抑瘤效果，但效果不显著；FPt-3低、中、高剂量组均具有显著抑瘤效果，抑制率分别达到69％、74％和86％。但是，FPt-1高剂量组和FPt-2高剂量组实验后小鼠体重下降较大，显示出明显的毒性反应，而FPt-3各剂量组体重较接种之前却均有不同程度的增加。综合考虑抑瘤率大小和给药后小鼠体重变化，在等摩尔剂量下，FPt-1和FPt-3的疗效(活性和毒性)与卡铂相当，而FPt-2疗效不及卡铂。
为了进一步验证实验结果的可靠性，基于第一次动物实验结果，筛选和设置了溶媒对照组、顺铂/奥沙利铂对照组、中剂量的FPt-1/FPt-3组，进行重复试验，结果见表3。
表3.受试Pt(IV)配合物腹腔注射给药对小鼠移植瘤S180生长的影响
注：a.与溶媒对照组比较，P<0.01；b.与溶媒对照组比较，P<0.001；c.FPt-3与奥沙利铂比较，P<0.01。
第二次动物实验结果显示，与溶媒对照组相比，3.3μmol/kg腹腔注射给药后，顺铂及其前药FPt-1的抑瘤率分别为60.36％、51.77％；7.6μmol/kg腹腔注射给药后，奥沙利铂及其前药FPt-3的抑瘤率分别为61.91％、53.02％，提示这4种受试配合物均能明显抑制肿瘤生长，且与溶媒对照组相比均具有显著差异，P<0.01；实验结束时，注射这4种配合物的荷瘤小鼠体重依次平均增加了4.1g、3.77g、1.97g和7.14g，提示顺铂、FPt-1及奥沙利铂组小鼠体重明显降低，与溶媒对照组相比，统计学分析其差异具有显著性，提示其毒性的存在；而FPt-3组小鼠体重无明显变化，增加值与溶媒对照组相似，而又比奥沙利铂对照组明显增加，统计学分析其差异具有显著性，表明轴向α-呋喃甲酸的引入明显降低了奥沙利铂的毒性。
实施例6，本发明FPt-3配合物口服抗肿瘤活性
昆明种(KM)小鼠，23-28克，雌性，购自湖南斯莱克实验动物有限公司；小鼠肉瘤S180瘤株引自中科院上海药物研究所；阳性对照样品奥沙利铂购自昆明贵研药业有限公司，批号：L20200428。所测试样品均用5％葡萄糖注射液配制而成。
取接种5-8天后生长良好的腹水型小鼠S180细胞，用NS调细胞浓度1.0×107/ml，接种于昆明小鼠右侧腋部皮下，0.2m1/只，接种24h后分组给药。共18只雌性小鼠，6只/组；按溶媒对照组、奥沙利铂对照组、FPt-3组随机分组，采用灌胃给药，1次/天，连续11天。末次给药24h后处死小鼠，处死小鼠前12h禁食禁水。取出肿瘤称重，计算抑瘤率＝(对照组平均瘤重－治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重×100％)，评价体内抗肿瘤活性。数据以均数±标准差表示，采用SPSS统计学软件处理分析P值。结果见表4。
表4.FPt-3配合物灌胃给药对小鼠移植瘤S180生长的影响
注：与溶媒对照组比较：**，P<0.01；***，P<0.001。
以上结果显示，FPt-3灌胃给药后对小鼠移植瘤S180仍具有明显的抑瘤活性，7.6μmol/kg剂量的抑瘤率达65％，而等摩尔剂量奥沙利铂的抑瘤率仅为23％，提示本发明的FPt-3具有显著的口服抗肿瘤活性。与溶媒对照组相比，FPt-3和奥沙利铂给药后荷瘤小鼠的体重均有一定程度的降低，但与其对肿瘤生长的抑制作用相比，其对小鼠体重的影响尚不明显。因此，灌胃给予FPt-3对小鼠移植瘤S180具有明显疗效，而奥沙利铂疗效不明显。
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