阅读说明：本技术 一种长效复方泰地罗新注射液及其制备方法 (Long-acting compound tylonolide injection and preparation method thereof ) 是由 方炳虎 谢孟娟 张桂君 梁劲康 于 2020-05-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种长效复方泰地罗新注射液,主要成分为泰地罗新、氟尼辛葡甲胺和青藤碱,为兽医临床提供一种动物专用的既可治疗敏感菌引起的呼吸系统感染性疾病,又可辅助治疗减轻患病动物应激的长效复方注射液,联合用药能够明显改善临床症状,并可以增强抗菌药物活性,减少药物使用量和给药次数,减少动物应激,增强动物顺应性,降低劳动强度,使用方便。(The invention discloses a long-acting compound tylonolide injection, which mainly comprises tylonolide, flunixin meglumine and sinomenine, and provides a long-acting compound injection which is special for animals and can treat respiratory infectious diseases caused by sensitive bacteria and can assist in treating and relieving the stress of sick animals for veterinary clinic.)

一种长效复方泰地罗新注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及兽药领域，特别涉及一种长效复方泰地罗新注射液及其制备方法。

背景技术

近年来，随着养殖业的高度集约化，由胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌以及溶血性曼海姆菌等敏感菌引起的猪、牛的呼吸系统感染性疾病日益严重，多数情况下临床上都伴有发热、疼痛等炎性症状，严重影响动物的健康，并造成严重的经济损失。因此开发一种既可针对病原菌、又可辅助治疗减轻患病动物应激的长效复方注射剂，来满足目前兽医临床上的用药需求，保障和促进养殖业的健康发展。

泰地罗新作为最新动物专用的大环内酯类抗生素，目前已在FDA、EMEA和中国陆续批准上市，对革兰氏阳性菌和阴性菌均具有抗菌活性，用于治疗由细菌、支原体等感染引起的猪、牛的呼吸系统疾病。其药代动力学特征优良，单次肌注或皮下注射给药后，泰地罗新具有吸收快，达峰时间短，肺组织中浓度高，生物利用度高，消除缓慢，药效持久，安全性高，具有非常广阔的应用前景。

氟尼辛葡甲胺是一种非常有效的具有抗炎、解热和镇痛等作用的非甾体类动物专用抗炎药，单独或与抗生素联合用药能够明显改善临床症状，并可以增强抗菌药物活性，该药在临床上得到了广泛的应用。

青藤碱(Sinomenine，SIN)是从中药青风藤的根和茎分离而来的生物碱单体，是青风藤发挥治疗作用的主要活性成分，青藤碱具有独特的药理作用，可以用于炎症、自身免疫疾病的治疗等。近年的研究发现，青藤碱还具有免疫调节和抗炎作用、抗肿瘤作用、对器官损伤后的保护作用、镇痛作用等。

目前，市场上的泰地罗新注射液均为单方制剂，临床治疗猪、牛等呼吸系统感染疾病时，需注射液过多体积的药物，刺激性大，加重了其疼痛和应激反应；虽然氟尼辛葡甲胺吸收迅速，但是***快，消除半衰期短，存在用药频繁增加劳动强度且对患病动物造成多次应激。

1950年美国食品与药品管理局(FDA)首次批准抗生素可作为饲料添加剂，抗生素因此被全面推广应用关于动物养殖业，在预防和治疗动物传染性疾病、促进动物生长及提高饲料转化率等方面发挥了重要作用。而几乎在20世纪40年代第一代青霉素开始使用之时，就出现了细菌对其的耐药性，科学家也意识到抗生素的耐药性问题。随着近年来抗生素耐药性严重危害人类健康，各国科学家们开始致力于发展多种策略来抗击耐药性。这些策略主要包括大力挖掘和筛选新型抗生素及抗菌药物、研究新的作用靶点、研发抗生素佐剂等。其中抗生素佐剂是指一类本身并不具有抗菌作用，但可与抗生素协同作用，促进抗生素对细菌尤其是抗性细菌的杀菌活性的化合物。抗生素佐剂可与抗生素相互作用，相互促进，最大化减少单一抗生素的使用量，提高抗生素的治疗效果，减少临床耐药性的出现。目前长剑的抗生素佐剂主要有益生菌等。在我国，植物源天然产品资料十分丰富，主要包括多糖、萜类、木质素、香豆素、黄酮、生物碱等物质，在抑菌、消炎、抗癌、免疫调节等方面均有加好的效果。寻找植物源天然产物作为新型抗生素佐剂已成为研究热点之一。

发明内容

为了满足临床需求和克服现有技术不足，本发明提供了一种含泰地罗新、氟尼辛葡甲胺和青藤碱的长效复方注射液及其制备方法，该长效复方注射液质量稳定，延缓药物释放的同时减少动物应激，降低劳动强度，使用方便，生物相容性好且抗生素泰地罗新剂量低，可有效改善细菌耐药性的发生，从而为兽医临床提供一种动物专用的既可治疗敏感菌引起的呼吸系统感染性疾病，又可辅助治疗减轻患病动物应激的长效复方注射液。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种长效复方泰地罗新注射液，包括泰地罗新、氟尼辛葡甲胺包合物、青藤碱、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆和溶媒；每100ml注射液含有：泰地罗新2～10g、氟尼辛葡甲胺2～6g、青藤碱0.02～0.2g、聚乙烯吡咯烷酮1～20g、泊洛沙姆1～20g，余量为溶媒；其中，氟尼辛葡甲胺和青藤碱以包合物的形式加入。

青藤碱作为一种生物碱，其药理作用包括免疫调节和抗炎作用、抗肿瘤作用、对器官损伤后的保护作用、镇痛作用。本发明提供的长效复方泰地罗新注射液中，加入了包合物形态下的青藤碱，使得青藤碱能够持久缓慢释放。在长效复方泰地罗新注射液中，青藤碱作为抗生素佐剂，与抗生素泰地罗新发生协同作用，大大提升了泰地罗新的抗菌活性，相同抑菌效果情况下，大大降低抗生素泰地罗新的使用量，延缓细菌耐药性的发生，抑菌效果高于使用单一抗生素，使得抑菌过程安全、高效。

优选的，每100ml注射液中包括如下组分：泰地罗新4～9g、氟尼辛葡甲胺3-5g、青藤碱0.05～0.1g、聚乙烯吡咯烷酮3～8g、泊洛沙姆5～15g，余量为溶媒。

优选的，所述聚乙烯吡咯烷酮为聚乙烯吡咯烷酮K10、聚乙烯吡咯烷酮K15、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K30中的任意一种；更优选的，所述聚乙烯吡咯烷酮为聚乙烯吡咯烷酮K30。

优选的，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆338、泊洛沙姆407中的任意一种；更优选的，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆407。

优选的，所述溶媒为丙二醇或丙二醇与以下溶剂中的一种或几种的混合液：乙醇、聚乙二醇和甘油缩甲醛。

优选的，所述溶媒为丙二醇、聚乙二醇和甘油缩甲醛的混合溶液，所述丙二醇、聚乙二醇和甘油缩甲醛的体积比为(4～10):(0.8～1.0)：1。

优选的，所述聚乙二醇包括聚乙二醇300或聚乙二醇600。

优选的，氟尼辛葡甲胺和青藤碱以环糊精包合物的形式加入，其中环糊精优选为β-环糊精或羟丙基-β-环糊精，所述环糊精包合物的制备方法为：将氟尼辛葡甲胺与青藤碱混合均匀，得到混合物a；将环糊精与混合物a按物质的量比(1.1～2):1加入到70％乙醇水溶液中，搅拌反应4-6小时，得到澄清透明的包合物溶液，喷雾干燥得到氟尼辛葡甲胺和青藤碱的环糊精包合物。

优选的，氟尼辛葡甲胺和青藤碱的环糊精包合物的制备方法为：将氟尼辛葡甲胺与青藤碱溶于少量70％乙醇水溶液中，取氟尼辛葡甲胺和青藤碱物质的量的1.1～2倍量的β-环糊精或羟丙基-β-环糊精，将β-环糊精或羟丙基-β-环糊精加入到70％乙醇水溶液中，将两份溶液混合，50℃下搅拌反应4-6小时，至包合反应进行完全，喷雾干燥得到氟尼辛葡甲胺和青藤碱的环糊精包合物。

氟尼辛葡甲胺和青藤碱以混合物的形式进行环糊精包合，相较于分别对氟尼辛葡甲胺和青藤碱单独进行环糊精包合后再物理混合，混合均匀度更高，使得氟尼辛葡甲胺与青藤碱包合物的分散更加均匀，后续制剂使用时，氟尼辛葡甲胺与青藤碱的溶出及释放均匀而持久。

本发明的另一目的是提供所述的一种长效复方泰地罗新注射液及其制备方法，包括以下步骤：

1)将聚乙烯比咯烷酮、泊洛沙姆和50～70％处方量的溶媒混合至溶解后，加入泰地罗新搅拌，得到溶液A；

2)将10％～20％处方量的溶媒和氟尼辛葡甲胺、青藤碱混合搅拌，得到溶液B；

3)将所述步骤1)的溶液A和所述步骤2)的溶液B混合后，在与余量的溶媒混合后过滤，备用；半成品检验，检验合格后，充氮气灌封，在100～121℃灭菌15～20min，得到长效复方泰地罗新注射液；

4)优选的，所述步骤1)中搅拌的转速为50～70r/min，搅拌的时间为15～25min。

5)优选的，所述步骤2)中搅拌的转速为50～70r/min，搅拌的时间为15～25min。

6)优选的，所述过滤用滤膜的孔径为0.20～0.24μm。

本发明提供的长效复方泰地罗新注射液在兽药领域中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1)本发明提供了一种长效复方泰地罗新注射液主要成分为泰地罗新、氟尼辛葡甲胺和青藤碱，为兽医临床提供一种动物专用的既可治疗敏感菌引起的呼吸系统感染性疾病，又可辅助治疗减轻患病动物应激的长效复方注射液，联合用药能够明显改善临床症状，并可以增强抗菌药物活性。

2)本发明提供的长效复方泰地罗新注射液中，氟尼辛葡甲胺和青藤碱以环糊精包合物的形式加入，缓释效果好，生物利用度显著提高，青藤碱组分的加入，作为抗生素佐剂，使得泰地罗新的抗菌活性大大增强，在低剂量下即可达到优异的抗菌效果，有效改善细菌耐药性。

3)本发明提供的长效复方泰地罗新注射剂使用的溶媒能与水较好的互溶，在注射给药后部分药物会立即释放，吸收，快速起效。

4)本发明所使用的高分子化合物聚乙烯比咯烷酮K30和泊洛沙姆407，在该制剂体系中主要起长效缓释、助溶剂和稳定剂等作用，使得药物在注射部位缓慢释放，药效更加持久，质量稳定性更高，生物相容性好。

5)本发明提供的注射液可减少药物使用量和给药次数，减少动物应激，增强动物顺应性，降低劳动强度，使用方便。

6)本发明的长效复方泰地罗新注射液的制备方法，工艺简单，操作方便，适合大规模工业化生产。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

在本实施例中使用的试剂在市场上均可购得。

实施例1

原料：泰地罗新4g、聚乙烯吡咯烷酮K10 3g、泊洛沙姆237 15g、3g氟尼辛葡甲胺与0.02g青藤碱、β-环糊精10g。

将氟尼辛葡甲胺与青藤碱溶于10ml 70％乙醇水溶液中，将β-环糊精加入到2L的70％乙醇溶液中，将两份溶液混合，50℃下搅拌反应4-6小时，至包合反应进行完全，喷雾干燥得到氟尼辛葡甲胺和青藤碱的环糊精包合物。

将聚乙烯吡咯烷酮K10、泊洛沙姆237与50ml的丙二醇混合至溶解后，加入泰地罗新以60r/min的转速搅拌15min，得到溶液A。将15ml的聚乙二醇300、15ml甘油甲缩醛、氟尼辛葡甲胺和青藤碱的环糊精包合物混合以55r/min的转速搅拌15min，得到溶液B。将溶液A和溶液B混合后，再用丙二醇定容至100ml，0.22μm滤膜过滤，半成品检验，检验合格后，充氮气灌封，在100℃灭菌15min，得到长效复方泰地罗新注射液。

实施例2

原料：泰地罗新9g、5g聚乙烯吡咯烷酮K15、泊洛沙姆338 10g、5g氟尼辛葡甲胺与0.1g青藤碱、β-环糊精15g。

将氟尼辛葡甲胺与青藤碱溶于10ml 70％乙醇水溶液中，将β-环糊精加入到2L的70％乙醇溶液中，将两份溶液混合，50℃下搅拌反应4-6小时，至包合反应进行完全，喷雾干燥得到氟尼辛葡甲胺和青藤碱的环糊精包合物。

将聚乙烯吡咯烷酮K15、泊洛沙姆338与60ml的丙二醇混合至溶解后，加入泰地罗新以65r/min的转速搅拌20min，得到溶液A。将10ml的聚乙二醇300、10ml甘油甲缩醛、氟尼辛葡甲胺和青藤碱的环糊精包合物混合以60r/min的转速搅拌20min，得到溶液B。将溶液A和溶液B混合后，再用丙二醇定容至100ml，0.22μm滤膜过滤，半成品检验，检验合格后，充氮气灌封，在121℃灭菌20min，得到长效复方泰地罗新注射液。

实施例3

原料：泰地罗新6g、聚乙烯吡咯烷酮K30 4g、泊洛沙姆407 5g、4g氟尼辛葡甲胺与0.2g青藤碱、羟丙基-β-环糊精30g。

将氟尼辛葡甲胺与青藤碱溶于10ml 70％乙醇水溶液中，将羟丙基-β-环糊精加入到2L的70％乙醇溶液中，将两份溶液混合，50℃下搅拌反应4-6小时，至包合反应进行完全，喷雾干燥得到氟尼辛葡甲胺和青藤碱的环糊精包合物。

将聚乙烯吡咯烷酮K30、泊洛沙姆407与70ml的丙二醇混合至溶解后，加入泰地罗新以70r/min的转速搅拌25min，得到溶液A。将10ml的聚乙二醇600、10ml甘油甲缩醛、氟尼辛葡甲胺、青藤碱包合物混合以65r/min的转速搅拌20min，得到溶液B。将溶液A和溶液B混合后，再用丙二醇定容至100ml，0.22μm滤膜过滤，半成品检验，检验合格后，充氮气灌封，在121℃灭菌25min，得到长效复方泰地罗新注射液。

对比例1

原料：泰地罗新6g、聚乙烯吡咯烷酮K30 4g、泊洛沙姆407 5g、4g氟尼辛葡甲胺、羟丙基-β-环糊精30g。

将氟尼辛葡甲胺溶于10ml 70％乙醇水溶液中，将羟丙基-β-环糊精加入到2L的70％乙醇溶液中，将两份溶液混合，50℃下搅拌反应4-6小时，至包合反应进行完全，喷雾干燥得到氟尼辛葡甲胺包合物。

将聚乙烯吡咯烷酮K30、泊洛沙姆407与70ml的丙二醇混合至溶解后，加入泰地罗新以70r/min的转速搅拌25min，得到溶液A。将10ml的聚乙二醇600、10ml甘油甲缩醛、氟尼辛葡甲胺包合物混合以65r/min的转速搅拌20min，得到溶液B。将溶液A和溶液B混合后，再用丙二醇定容至100ml，0.22μm滤膜过滤，半成品检验，检验合格后，充氮气灌封，在121℃灭菌25min，得到长效复方泰地罗新注射液。

对比例2

原料：泰地罗新18g、聚乙烯吡咯烷酮K30 4g、泊洛沙姆407 5g、4g氟尼辛葡甲胺、羟丙基-β-环糊精30g。

将氟尼辛葡甲胺溶于10ml 70％乙醇水溶液中，将羟丙基-β-环糊精加入到2L的70％乙醇溶液中，将两份溶液混合，50℃下搅拌反应4-6小时，至包合反应进行完全，喷雾干燥得到氟尼辛葡甲胺的环糊精包合物。

将聚乙烯吡咯烷酮K30、泊洛沙姆407与70ml的丙二醇混合至溶解后，加入泰地罗新以70r/min的转速搅拌25min，得到溶液A。将10ml的聚乙二醇600、10ml甘油甲缩醛、氟尼辛葡甲胺混合以65r/min的转速搅拌20min，得到溶液B。将溶液A和溶液B混合后，再用丙二醇定容至100ml，0.22μm滤膜过滤，半成品检验，检验合格后，充氮气灌封，在121℃灭菌25min，得到长效复方泰地罗新注射液。

性能测试

长效复方泰地罗新注射液的药物稳定性试验：

根据《中华人民共和国兽药典》2015版一部附录中《兽药稳定性试验指导原则》，将上述实施例1～3长效复方泰地罗新注射液样品放置于温度40℃±2℃、RH75％±5％条件下，进行6个月加速试验。在试验期间第0、1、2、3、6个月末取样，考察性状、pH、有关物质及含量，结果如表1所示。

由加速试验结果可知，由实施例1、实施例2、实施例3制得的三批样品在40℃±2℃、RH75％±5％条件下放置6个月，样品的外观色泽变化不明显，pH、有关物质均符合规定，含量变化不显著，表明该发明制得的一种长效复方泰地罗新注射液质量稳定。

抗菌性能

采用微量肉汤西释放测定本发明实施例及对照例中复方泰地罗新注射液制剂的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。试验菌株：胸膜肺炎放线杆菌CVCC262、猪链球菌ATCC43765、副猪嗜血杆菌BNCC130940；试剂：无菌脱纤维马血(岑溪鸿泉生物科技有限公司)、猪血清(今品化学技术(上海)有限公司)、0.1％的NAD、PH6.0和PH8.0的PBS溶液。培养基：MH肉汤、TSA、TSB(均为广东环凯微生物科技有限公司)。

表1：复方泰地罗新注射液对菌株的体外最小抑菌浓度

表2：复方泰地罗新注射液对菌株的体外最小杀菌浓度

从以上抗菌活性试验结果可以发现，本发明提供的复方泰地罗新注射液中由于抗生素佐剂青藤碱的加入，与不含青藤碱的同等剂量的复方泰地罗新注射液(对比例1)相比，抗菌活性大大提升，与同等抗菌效果的复方泰地罗新注射液(对比例2)相比，抗生素泰地罗新的剂量大大降低。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。