阅读说明：本技术 黄酮c-苷类化合物的用途 (Application of flavone C-glycoside compounds ) 是由 陈永轩 翁庆丰 傅耀贤 吴秀娜 杨榕 罗联忠 于 2020-05-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了黄酮C-苷类化合物的用途,具体为黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”’→2”)-glucopyranoside]-7-O-Glucopyranoside以及包括该黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”’→2”)-glucopyranoside]-7-O-Glucopyranoside的组合物在制备降血糖的药物、制备辅助降血糖的保健食品中的用途。本发明的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”’→2”)-glucopyranoside]-7-O-Glucopyranoside由皱瘤海鞘经正丁醇提取纯化而得,其降血糖功效近似于胰岛素及二甲双胍,可用于降血糖及糖尿病的控制,且可口服施用,避免了注射用的胰岛素会因诸多因素影响疗效及因同一区域内注射次数过于频繁而引起注射部位皮下组织的伤害。(The invention discloses an application of a flavone C-glycoside compound, in particular to an application of a flavone C-glycoside compound apigenin6-C- [ arabinopyranosyl- (1 '→ 2 ") -Glucopyranoside ] -7-O-Glucopyranoside and a composition containing the flavone C-glycoside compound apigenin6-C- [ arabinopyranosyl- (1' → 2") -Glucopyranoside ] -7-O-Glucopyranoside in the preparation of a hypoglycemic medicament and a hypoglycemic health food. The flavone C-glycoside compound apigenin6-C- [ arabinopyranosyl- (1' → 2 ") -Glucopyranoside ] -7-O-Glucopyranoside is obtained by extracting and purifying ascidian plicata nodules by n-butyl alcohol, has the blood sugar reducing effect similar to that of insulin and metformin, can be used for controlling blood sugar reduction and diabetes, can be orally administered, and avoids the damage of subcutaneous tissues of injection parts caused by the influence of a plurality of factors on the curative effect and the over-frequent injection times in the same region by the insulin for injection.)

黄酮C-苷类化合物的用途

技术领域

本发明属于天然提取物技术领域，具体涉及了黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside及其组合物在制备降血糖的药物及制备辅助降血糖的保健食品中的用途。

背景技术

目前糖尿病的治疗方法可分为三个部分：规律运动、控制饮食及药物治疗。糖尿病的药物治疗分为口服降血糖药或注射胰岛素。若口服降血糖药治疗后，血糖仍控制不佳时，可能需要改为胰岛素注射治疗。但由于药品作用机制的不同，服药的时间也有所区别：其一，饭前30min服用、饭前立即服用或随餐服用的药品，此类药品多具刺激胰岛素分泌的功能；其二，饭后服用的药品，其用于改善胰岛素抗药性及减少肝脏的葡萄糖输出，但其作用大多在于肠胃道，因此病患于饭后服用可避免肠胃不适的副作用。在使用降血糖药品的副作用中，一般以低血糖为最常见，尤其当病患服用药品时，并未配合饮食时间，或未进食又从事会消耗血糖的活动时更容易发生；其次是肠胃不适；另外还可能引发肝毒性。

注射用的胰岛素与人体内产生的胰岛素相同或几乎相同，目前被广泛使用，对于糖尿病能够达到最有效的治疗，减少血糖控制不良可能导致的问题，如眼睛、肾脏及周边神经的病变等。然而其注射位置、注射深度、运动、剂量皆会影响胰岛素的吸收。为了获得稳定的胰岛素吸收和作用，须注意在同一个注射区内的注射次数不宜过于频繁，故不宜每次皆注射在同一点上，注射点应与上一次的注射点保持三根指头的距离，方能确保胰岛素的稳定吸收，不致延后吸收，以避免因同一区域内注射次数过于频繁而引起注射部位皮下组织的伤害。

皱瘤海鞘(Styela plicata)，又称Sea Squirts，是尾索动物亚门(Urochordata)海鞘纲(Ascidiacea)柄海鞘科的尾索动物。海鞘属动物多数种的成熟机体属底栖性滤食动物，部分种类可为经济型食用，机体富含胶质、牛磺酸、多元不饱和脂肪酸、叶酸、泛酸和胆固醇，具有一定的营养价值。皱瘤海鞘属动物的医疗保健功效近年来逐渐受到关注，但其降血糖的应用仍未曾科研成果报导过，市面上也未见其相应产品。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了黄酮C-苷类化合物的用途，具体为黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside在制备降血糖的药物或制备辅助降血糖的保健食品中的用途。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：

黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside在制备降血糖的药物中的用途。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：

一种包括黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside的组合物在制备降血糖的药物中的用途。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之三是：

黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside在制备辅助降血糖的保健食品中的用途。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之四是：

一种包括黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside的组合物在制备辅助降血糖的保健食品中的用途。

本发明中的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside来源于皱瘤海鞘萃取物，但并不以此为限。本发明的皱瘤海鞘萃取物以及其他类似用语是指，将皱瘤海鞘的机体全部或部分组织打碎后，由溶剂浸提而制得的混合物。所述的萃取物包含粗萃取物(crude extract)以及经处理、纯化后的精制萃取物(refined extract)或纯化合物(pure compound)。更明确地说，粗萃取物是经简单萃取而得的产物，其中所选的皱瘤海鞘至少部分和至少一种萃取溶剂接触，在可任选的情形中，之后可将所得的粗萃取物进行一种或多种分离及/或纯化处理，以得到精制萃取物或纯化合物。

本发明以黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside作为活性成份，不论其为气体、液体、粉末或固体。本发明中，所述黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside为皱瘤海鞘机体的全部或部分组织经溶剂浸提、纯化而得，所述溶剂优选为正丁醇，所述纯化的方法例如为高速逆流色谱与高效液相色谱。

本发明的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside可以是液体形式(如溶液、浓缩物或蒸馏物)，也可以是去除溶剂的固形物(如膏、颗粒或干燥后的粉末)，且该固形物可进一步溶于水、醇类(如酒精等)、或油类等溶剂中，可使用的油例如但不限于黄豆油或其他食用油。

本发明中所述的组合物是指由两种或两种以上物质组成的混合物或化合物，并包含本发明的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside作为活性成份，不论其为气体、液体、粉末或固体。在一实施例中，本发明的包括黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside的组合物即为皱瘤海鞘的正丁醇萃取物，例如为皱瘤海鞘的正丁醇粗萃取物或该粗萃取物经一种或多种分离及/或纯化处理后的精制萃取物，在此情况下，皱瘤海鞘的正丁醇萃取物可直接用于制备口服药物。

优选地，本发明中所述的组合物中，除包含黄酮C-苷类化合物apigenin6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside外，还可包括胰岛素、二甲双胍等，以得到协同增效的降血糖作用。

本发明中，所述黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside用于降血糖的有效量为1～10mg/kg B.W./day ICR小鼠，成人等效剂量为9～90mg/day。

本发明中所述的有效量(effective amount)是指一药物组合物的用量足以产生期望的治疗结果，其中结果的确切性质根据被治疗的具体疾病而变化。具体的有效量取决于多种因素，如欲治疗的特定状况、患者的生理条件(如，患者体重、年龄或性别)、接受治疗的动物类型、治疗持续时间、投药方式、目前疗法(若有)的本质以及所用的具体配方和化合物或其衍生物的结构。有效量亦指一种化合物或组合物，其治疗利益效果超越其毒性或有害影响。举例来说，可将有效量表示成药物的总重量(譬如以克、毫克或微克为单位)或表示成药物重量与体重的比例(其单位为毫克/公斤(mg/kg))。

本发明的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside或包括该黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside的组合物制备的药物可制备为口服药物制剂，经口投与的药物的具体剂型可为胶囊剂、丸剂(如糖衣丸剂等)、片剂、锭剂(口含锭剂)、散剂、颗粒剂、合剂(口服液)形式，或呈于水溶液或非水性液体中的溶液或悬浮液形式，例如滴剂，或呈水包油或油包水液体乳液形式，例如乳剂，或糖浆剂形式。

在用于经口投与的药物的固体剂型(胶囊剂、丸剂、片剂、锭剂、散剂、颗粒剂及其他口服剂型)中，本发明的药物可用于例如制造保健食品、医药品、工业原料等的用途。

本发明的保健食品，适宜于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的，并且对人体不产生任何急性、亚急性或慢性危害。本发明的保健食品例如包括营养补助食品、健康食品、机能性食品、老人用食品等。

本发明中，所述药物还可包括至少一种药学上可接受的辅料或载体。所述辅料包括但不限于稀释剂、溶剂、赋形剂、吸收剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、乳化剂、助悬剂、表面活性剂、成膜剂、抛射剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、杀菌剂、防腐剂等；所述载体指能够担载化合物，并且具有改变化合物进入人体的方式和在体内的分布，控制释放速度达到控释或缓释，靶向输送至靶器官等作用的体系，包括但不限于脂质体、微球、微囊、固体分散体、胶束、微乳液、凝胶、缓释型载体、控释型载体、靶向型载体、纳米颗粒材料等。

本发明所涉及的设备、试剂、工艺、参数等，除有特别说明外，均为常规设备、试剂、工艺、参数等，不再作实施例。

本发明所列举的所有范围包括该范围内的所有点值。

本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：

1.本发明提供了黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside及其组合物在制备降血糖、糖尿病控制的药物及保健食品中的应用，其降血糖的功效近似于现有技术中被广泛使用且最有效的降血糖药物如胰岛素、二甲双胍，并具保肝功能。

2.本发明的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside可口服施用，避免了注射用的胰岛素会因诸多因素影响疗效及因同一区域内注射次数过于频繁而引起注射部位皮下组织的伤害。

3.本发明的萃取物来源于皱瘤海鞘，原料易得，且该药物的开发可对目前大量的养殖副产物皱瘤海鞘进行充分回收利用，避免资源浪费。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

图1为本发明的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside化合物的结构式。

图2为本发明的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside化合物的¹H谱谱图。

图3为本发明的黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside化合物的¹³C谱谱图。

图4为本发明实施例2中检测黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside对离体培养的肝细胞株FL83B细胞的促进葡萄糖吸收检测结果。

图5为本发明实施例2中检测黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside对糖尿病ICR小鼠给予口服葡萄糖耐受试验造成血糖变化的反应曲线图。

图6为本发明实施例2中换算图1曲线下面积(area under the curve，AUC)，比较黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside试验各组对糖尿病ICR小鼠造成血糖变化的柱状图。

具体实施方式

下面通过实施例具体说明本发明的内容：

实施例1皱瘤海鞘萃取物中黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside的制备

1)将湿重10Kg皱瘤海鞘(尾索动物亚门(Urochordata)海鞘纲中的柄海鞘科)冻干后，切成碎片以粉碎机打碎置于5000mL烧杯中，以正丁醇浸泡后用超声波加速其抽提，浸提液以旋转蒸发仪抽干溶剂，重复该层溶剂抽提步骤至浸提液颜色变淡，合并浸提液抽干溶剂后的剩余部分，得到正丁醇层粗提物(qb)。

2)取步骤1)得到的正丁醇层粗提物(qb)，用高速逆流液相色谱(HSCCC)(TBE-300B)分离切段成4组分；具体地：

取步骤1)得到的粗提物(qb)52g，用75mL 50％(体积浓度)甲醇水溶解，使之浓度为693mg/mL，用高速逆流液相色谱分离，重复实验5次，每次上样体积为15mL。

高速逆流液相色谱系统为TBE-300B；溶剂体系为乙酸乙酯：甲醇：水＝5:1:5(V/V)，按比例将四种溶剂混合配制好，摇匀，超声30min使其充分混合，静置过夜使上下相充分饱和平衡，分层，分离上相与下相；

开主机；以上相为固定相，以下相为流动相，用40mL/min的流速将固定相泵满聚四氟乙烯管，调节转速为850r/min，恒温水浴35℃，以3mL/min的流速向柱中泵入流动相，当流动相从主机出口稳定流出时，证明体系已经达到流体动力学平衡；计算分配系数K值为52.02％；

取上述用50％甲醇水溶解的粗提物，以上相为固定相，以下相为流动相，流速3mL/min泵入柱中，仪器为正接正转，转速850r/min；温度35℃；柱口流出物通过紫外检测器在210nm下连续监测；收集57～81min出峰对应的流出物为第一组份，收集81～102min出峰对应的流出物为第二组份，收集102～282min出峰对应的流出物为第三组份；然后改为以下相为固定相，以上相为流动相，流速3mL/min泵入柱中，仪器为反接正转，转速850r/min，温度35℃，收集282～392min出峰对应的流出物为第四组份；分离完成后，停止主机，用空气将柱内溶剂推出，吹干；第一组份、第二组份、第三组份、第四组分分别旋转蒸发得到qb-1、qb-2、qb-3、qb-4。

3)取步骤2)中57～81min出峰对应的第一组份(qb-1)(48.5262g)，用反相制备液相色谱分离：

反相制备液相色谱为4250，带有DAC-50动态轴向压缩柱系统；固定相：YMC-Triart C18(50×250mm，粒径10μm)；流动相：甲醇-水混合液；梯度洗脱2h，流动相中甲醇浓度从5％均匀递增到100％；流速60mL/min；柱温25℃；检测波长200nm、254nm、310nm。

4)收集步骤3)中流动相中甲醇浓度为15％～24％时对应的组份(qb-1-3)(1198mg)，用反相制备液相色谱分离：

反相制备液相色谱为4250，带有DAC-50动态轴向压缩柱系统；固定相：YMC-Triart C18(50×250mm，粒径10μm)；流动相：甲醇-水＝32％:68％混合液；等度洗脱2h；流速60mL/min；柱温25℃；检测波长210nm、270nm、335nm。

5)将步骤4)中收集的63～66min对应的组分(qb-1-3-5)(265mg)，干燥后可得皱瘤海鞘萃取物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside(C₃₂H₃₉O₁₉，分子量为727.2086，结构式如图1所示，¹H谱谱图如图2，¹³C谱谱图如图3)。该皱瘤海鞘萃取物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside在使用前以2mg/mL的浓度溶于黄豆油中。

实施例2测试实施例1制得的皱瘤海鞘萃取物中黄酮C-苷类化合物apigenin6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside的降血糖效果

(一)实验过程：

细胞实验：

在离体培养肝脏细胞株(FL83B)的细胞葡萄糖吸收实验结果，检测加入胰岛素(10^-7M)与0～10μg/mL不同浓度的皱瘤海鞘萃取物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside对于培养的肝脏细胞的促进葡萄糖吸收功效。

动物实验：

在晚间23:00开始将高油饲料诱导糖尿病ICR小鼠(饥饿血糖>130mg/dL)断水断食10h。隔天早上9:00先测定初始血糖值后，每只灌胃0.2mL的皱瘤海鞘萃取物apigenin6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside(50g ICR小鼠投予4～8mg/kg B.W./day；若换算为人类则等效剂量为9～90mg/day(按60kg计)，例如75mg/60kg B.W./day即具备降血糖功效)，其次再给予4g/kg葡萄糖，并开始计时，每隔30min使用Accu-chek(机型Instant)血糖机由小鼠尾静脉扎针测定血糖一次，共测定0、30、60、90、120min五个时间点。本实验以给予糖尿病ICR小鼠4g/kg葡萄糖前仅喂食0.2mL灭菌水作为对照组；以给予糖尿病ICR小鼠4g/kg葡萄糖前不喂食皱瘤海鞘萃取物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside，且进行皮下注射20pM胰岛素(insulin)或灌胃给予5mg/kg二甲双胍(临床用药)作为二个阳性对照组。

(二)实验结果：

以下依据图4，图5与图6阐述本实验的结果。本实验的资料是以平均值±标准误差(SE)显示，使用图凯(Tukey’s)测试的单向ANOVA进行显著分析，以确定实验组与对照组的处理结果的差异，以GraphPad Prism 7.04(La Jolla，CA，USA)构建数据柱状图。*(p<0.05)、**(p<0.01)、***(p<0.001)和****(p<0.0001)是统计学显著性水平。

如图4所示，为离体培养肝脏细胞株(FL83B)的细胞葡萄糖吸收实验结果，检测加入胰岛素(10^-7M)与0～10μg/mL不同浓度的皱瘤海鞘萃取物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside(图中以qb-1-3-5表示)对于培养的肝脏细胞的促进葡萄糖吸收功效。加入胰岛素(10^-7M)与不同浓度的皱瘤海鞘萃取物apigenin6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside 90分钟后，分析培养细胞对于培养基中葡萄糖的吸收状况。胰岛素能促进肝脏细胞吸收葡萄糖而达到降低血糖的功效，单独给药2μg/mL皱瘤海鞘萃取物apigenin6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside即可达到与胰岛素(10^-7M)同样的促进肝细胞吸收葡萄糖的作用。且在已加入胰岛素(10^-7M)的条件下，加入0.1μg/mL的皱瘤海鞘萃取物apigenin6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside可提高胰岛素(10^-7M)近1倍功效，表明皱瘤海鞘萃取物物中黄酮C-苷类化合物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside或许与胰岛素产生协同增效。

如图5所示，仅给予4g/kg葡萄糖的糖尿病ICR小鼠的血糖值在30min后上升至最高，且高于任一实验组或对照组，其后续血糖值降低的状况则明显地较缓慢。进行皮下注射胰岛素、喂食二甲双胍、皱瘤海鞘萃取物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside(图中以qb-1-3-5表示)的糖尿病ICR小鼠在30min后的血糖值相对于空白对照组则皆上升较慢，且其后续血糖值降低的状况相对于空白对照组则皆有明显较快速的趋势。由此可知，皱瘤海鞘萃取物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside具有降血糖的功效，且其效果与常见的降血糖药物胰岛素及二甲双胍相近。

如图6所示，换算图5的数据，转换为柱状图后，能够更明确地比较不同处理方式对于血糖变化的影响。分析可知，皱瘤海鞘萃取物apigenin 6-C-[arabinopyranosyl-(1”'→2”)-glucopyranoside]-7-O-glucopyranoside(图中以qb-1-3-5表示)在其给药浓度低于胰岛素、二甲双胍的情况下即具有降血糖功效，等同给药剂量时其降血糖效果几乎等同于皮下注射胰岛素的效果，且其降血糖功效胜过二甲双胍。

以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。