一种纳米硬脂酸及其制备方法和用途
阅读说明：本技术 一种纳米硬脂酸及其制备方法和用途 (Nano stearic acid and preparation method and application thereof ) 是由 萧湘 于 2020-05-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种纳米硬脂酸及其制备方法和用途,所述纳米硬脂酸作为活性成分在用于制备药物、食品、食品添加剂或饲料添加剂中的用途。所述药物用于治疗和/或预防与脂类代谢相关的疾病,所述疾病是肥胖症、阿尔茨海默病或帕金森病。本发明的纳米硬脂酸作为活性成分应用于制备药物、食品、食品添加剂或饲料添加剂,改善了哺乳动物的健康,不仅可以减少肥胖症,还可以提高AD患者的记忆和认知,改善PD患者的健康状态,为肥胖症、阿尔茨海默病(AD)或帕金森病的治疗提供了新方法、新途径和新药物,扩大了纳米硬脂酸的用途。(The invention discloses nano stearic acid and a preparation method and application thereof, and the application of the nano stearic acid as an active ingredient in preparation of medicines, foods, food additives or feed additives. The medicament is used for treating and/or preventing diseases related to lipid metabolism, wherein the diseases are obesity, Alzheimer disease or Parkinson disease. The nano stearic acid is used as an active ingredient to be applied to preparation of medicines, foods, food additives or feed additives, improves the health of mammals, can reduce obesity, can improve the memory and cognition of AD patients, improves the health state of PD patients, provides a new method, a new way and a new medicine for treating obesity, Alzheimer Disease (AD) or Parkinson disease, and expands the application of the nano stearic acid.)
技术领域
本发明涉及纳米硬脂酸的制备和应用技术领域，具体涉及一种纳米硬脂酸及其制备方法以及在制备用于治疗和/或预防与脂类代谢相关疾病的药物中的用途。
技术背景
日前，来自英国的研究者们对吸烟与帕金森病（PD）之间的关系进行了探索，其论文发表在Neurology杂志上。研究者们与一般的看法与建议相反，他们证明了当前吸烟对PD风险的因果保护作用，这可能为PD的病因学提供了新的洞见。
此前，有“曾经吸烟与患阿尔茨海默病的影响关系-Meta分析”的论文 ，研究者对中国以外发表的24篇有关吸烟与AD关系的文献进行了综合定量分析，得出的结论也与一般的看法与建议相反：曾经吸烟可以减少老年人患AD的风险。（医学信息 2011年 第14期DOI:10.3969/j.issn.1006-1959.2011.07.400）
2013年8月29日，发表在PLoS One上的论文显示，，多数吸烟者在戒烟后会发胖。一年内,其平均体重都会增加4~5kg,其主要原因是由于戒烟后饮食量增大；而另一方面,有科学家调查发现,很多人在戒烟后卡路里摄取量减少,但体重仍有增加。（Smoking CessationInduces Profound Changes in the Composition of the Intestinal Microbiota doi:10.1371/journal.pone.0059260）
肥胖与阿尔茨海默病本有内在的关系，研究文章不可胜数。吸烟，将其联系在一起很好理解。
如今年5月19日发表在Obesity上的论文表明，肥胖或体重超标的人海马体比体重正常的人小，而且即使那些过去患肥胖症或体重超标而目前脂肪量正常的人，其海马体也比那些一直保持正常体重的人小。
第一作者说，“随着年龄的增长，海马体是少数几个能够继续形成新细胞的区域之一，通常也是大脑中第一个受到阿尔茨海默病影响的区域。”（Ananthan Ambikairajah etal.， Longitudinal Changes in Fat Mass and the Hippocampus https://doi.org/10.1002/oby.22819）
不过，PD和AD可以说是完全不同的两种疾病。
PD是运动障碍中最常见的疾病，常表现为四肢震颤，肌张力增高，行动迟缓，不明原因的消瘦等症状；而AD是神经系统变性疾病中最常见的疾病，主要表现为记忆和认知功能障碍，甚或出现人格的改变，出现幻觉，妄想，错觉等症状。
尽管PD发展到晚期可能会表现出健忘痴呆的一些现象，而AD发展到晚期也可能逐渐出现运动障碍。
但，这不是合理的解释，因为并没与吸烟联系起来。
PD和AD两种完全不同的疾病为什么吸烟都有可能的保护作用，其背后的机制到底是什么呢。
大多数的看法是与尼古丁（烟碱）刺激多巴胺的释放有关，目前一项使用尼古丁贴片来减缓PD进程的临床试验（NCT01560754）正在进行之中。
本发明人不这样认为。
我们知道，香烟的烟气是多种化合物组成的复杂混合物。
烟气粒相物的主要化学成分有：脂肪烃、芳香烃、萜类化合物、酚类化合物和有机酸。
烟气中非挥发性的饱和脂肪酸(Saturated fatty acid,SFA )主要有硬脂酸(SA，沸点183-184℃) 和软脂酸（PA，沸点351-271.5℃）。
点燃的香烟温度，在吸与不吸以及不同的部位具有较大差异。烟头中心温度达700℃～800℃，烟头表面温度约250℃，烟头火星温度约200℃。
硬脂酸(Stearic acid, SA)，即十八烷酸。化学式：C18H36O2,结构简式：CH3(CH2)16COOH，分子量：284.48。
SA微溶于冷水，溶于乙醇、丙酮，易溶于苯、三氯甲烷、乙醚、四氯化碳、二硫化碳、醋酸戊酯和甲苯等。其中每克SA溶于2ml三氯甲烷，5ml苯, 6ml四氯化碳和21ml乙醇。
小鼠、大鼠静注LC50：（23±0.7）mg/kg、（21.5±1.8）mg/kg。
硬脂酸(SA)和软脂酸（palmitic acid，PA，十六烷酸，又称棕榈酸）是饱和脂肪酸(SFA)的典型代表，具有重要的生理功能。
SA自然界广泛存在，几乎所有油脂中都有含量不等的SA。SA的纯品是白色柔软带有光泽的小片，存在于烤烟烟叶、白肋烟烟叶、香料烟烟叶和烟气中。
动物脂肪中的含量较高，牛油中含量可达24%，植物油中含量较少，茶油为0.8%，棕榈油为6%，但可可脂中的含量则高达34%。
德国德莱斯顿大学的研究人员曾做过一次“巧克力对帕金森病的作用”的试验。招募了30名帕金森病患者（男女各半，分为两组），一组口服白巧克力（不含可可粉），另一组口服黑巧克力（含85%可可粉）。50g/d，分2次吃完，连服2周。
试验期间观察到：黑巧克力组的头和手震颤情况均有所减轻，而白巧克力组则没有。表明黑巧克力具有缓解PD的作用。
在此之前，有研究人员利用PD动物模型做过试验，试验动物服用可可粉能改善PD症状，表明可可粉是防治PD的关键。
德国临床医学研究人员认为，黑巧克力之所以具有改善PD症状的神奇作用，原因与其所含的大量可可粉有关，而可可粉里含有天然植物化学成分苯乙胺，其进入人体后能激活脑细胞产生更多的多巴胺，从而具有改善PD症状的作用。（黑巧克力可预防帕金森氏症中国医药报 2015.10.08.）
本发明人不是这样认为。
如前所述，硬脂酸(SA)在可可脂中的含量高达34%，甚至比牛油中的含量还要高出10%。
大量研究表明，饱和脂肪酸（SFA）可以通过调节脂类代谢，减少机体炎症反应及抗氧化应激。其中SA可通过PI-3K和PPARγ途径来拮抗氧化应激造成的脑片损伤。(WANGZJ,et a1．Neuropro tectiveeffect of the stearic acid against oxid ative stressvia phosphatidy1inositol 3-kinase pathway (J)．Chem Biol Interact，2006，160(1)：8O-87 ）
研究表明，SA和PA处于一个合理的比值于机体健康十分重要。(郝丽红 等 棕榈酸和硬脂酸对HepG2细胞血红素加氧酶-1和核转录因子Nrf2表达的影响 Acta Veterinaria etZootechnica Sinica 2016，47(3)：603—608)
有文献报道，健康男性每天高硬脂酸（SA）饮食，4周后与高软脂酸（PA）饮食相比，血栓和动脉硬化发病概率明显降低，血小板平均体积、凝集因子Ⅶ的活性以及血脂浓度在摄食SA后都有了一定程度的降低，而摄食PA后血小板的凝集显著增加。（FD Kelly, et al. Astearic acid-rich diet improves thrombogenic and atherogenic risk factorprofiles in healthy males [J]．EUR J CLIN NUTR volume 55, pages88–96(2001)）
美国埃默里大学医学院的Aliza P. Wingo 博士、Nicholas T. Seyfried 博士、AllanI. Levey教授、以及Thomas S. Wingo 教授等人联合，旨在证据性地揭示大脑动脉粥样硬化（cerebral atherosclerosis，CA）和阿尔茨海默病之间的联系。2020年5月18以Sharedproteomic effects of cerebral atherosclerosis and Alzheimer’s disease on thehuman brain为题在线发表于Nature Neuroscience。（https://doi.org/10.1038/s41593-020-0635-5）
近期，一项19万人的研究发现：较高的乳制品摄入量，与较低的代谢综合征、糖尿病及高血压患病率有关，而且这种关联在全脂乳制品中更显著。（Balaji Bhavadharini, etal. (2020). Association of dairy consumption with metabolic syndrome,hypertension and diabetes in 147 812 individuals from 21 countries. BMJ OpenDiab Res Care, DOI：10.1136/bmjdrc-2019-000826.）
这颠覆了长期以来人们认为脱脂奶比全脂奶更健康的“常识”。
游离脂肪酸(FFA)，又称非酯化脂肪酸（nonestesterified fatty acid NEFA），FFA是由油酸，软脂酸，硬脂酸和亚油酸等组成。血液中其浓度很低，正常值为0.3～0.9mmol/L。血清中FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能等有关。
2002年2月22日发表在Journal of Internal Medicine期刊上，来自挪威奥斯陆大学医学院、奥斯陆国家健康筛查服务和挪威stfold中央医院的一项关于血清游离脂肪酸(FFA)模式与心肌梗死风险的病例对照研究发现：硬脂酸（SA）含量的增加与风险的降低有关。
硬脂酸（SA）与细胞间黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）呈显著负相关，而油酸与ICAM-1呈显著正相关。（JIM Serum free fatty acidpattern and risk of myocardial infarction: a case‐control study）
ICAM-1，正常情况很少在组织细胞中表达或仅低表达，当受到炎性因子等刺激后，ICAM-1可表达于多种细胞表面，从而增强白细胞之间或与细胞外基质之间的黏糊，促进炎性反应。（Melotti, P et al.，Activation of NF-kB mediates ICAM-1 induction inrespiratory cells exposed to an adenovirus-derived vector gene ther 2001 8(18):1436-42 DOI： 10.1038/sj.gt.3301533）
当然，关于膳食中饱和脂肪酸(SFA)，特别是膳食中硬脂酸（SA）与健康的关系有不少研究证据并不一致。
例如，2012年09月在糖尿病领域顶级期刊Diabetes上发表的文章就认为：:高浓度硬脂酸导致胰岛素抵抗。（Xia Chu et al.，Sterol Regulatory Element–BindingProtein-1c Mediates Increase of Postprandial Stearic Acid, Potential Targetfor Improving Insulin Resistance, in Hyperlipidemia. doi: 10.2337/db12-0139）
这或与脂肪(fat)的消化与吸收比较特殊，游离脂肪酸(FFA)血清中含量很少，测定必须采用灵敏的方法，而且也脂肪水解产生的脂肪酸的干扰等因素有关。当然还有就是如何评价看待变量之间的因果关系的分析角度有差异。
脂类分为两大类，脂肪(fat)和类脂(lipids)。正常人一般每日每人从食物中消化55克左右的脂类，其中甘油三脂占到90%以上，除此以外还有少量的磷脂、胆固醇及其酯和一些游离脂肪酸(FFA)。
由于脂肪不溶于水，而体内的酶促反应是在水溶液中进行，所以脂肪必须先乳化才能进行消化，来自胆囊的胆盐在脂肪消化中有很重要的作用。
一项对大鼠的研究发现，通过膳食硬脂酸（SA）降低胆固醇吸收的机理在于SA部分降低了胆固醇的溶解，同时SA可能对胆酸的生成进行调节。（Russell L Cowles , et al.Dietary Stearic Acid Alters Gallbladder Bile Acid Composition in Hamsters FedCereal-Based Diets J Nutr. 2002 Oct;132(10):3119-22.）
长链脂肪酸的吸收是在小肠中穿过肠粘膜进入到肠粘膜的末端淋巴管，重新与在淋巴管中的甘油进行脂化，发生甘油三酯的再合成作用后进入血液。而且脂肪酸从脂肪细胞动员出来后，需要通过载脂蛋白的携带进行运输，但血脑屏障（brainbloodbarrier，BBB）不允许大分子通过。
血脑屏障（BBB）存在于中枢神经系统（CNS）与血液间，是维持大脑内环境稳定的重要生理元件。其屏障作用不仅仅是被动性保护，还能选择性地泵出脑内的代谢废物、有害物质包括药物。只有脂溶性高且相对分子质量小于 400 的小分子药物可以通过。
不少专家学者认为， “1970年代后期，欧美地区官方媒体渠道的多种形式提出了众多的饮食和营养建议的失误致肥胖泛滥”。（彭婵，安徽省肿瘤医院肿瘤营养与代谢治疗科 营养建议失误致肥胖泛滥 微信公号：肿瘤代谢营养治疗 2019-03-06）
有文献报道，“膳食硬脂酸导致裸鼠（Nude Mouse）内脏脂肪组织减少”。（Ming-CheShen , et al. Dietary Stearic Acid Leads to a Reduction of Visceral AdiposeTissue in Athymic Nude Mice. PLoS ONE;Sep 2014, Vol. 9 Issue 9, p1.）
内脏脂肪（Visceral Adipose）并不是一种新发现的脂肪类型。内脏脂肪是人体脂肪中的一种，与皮下脂肪（ 触手可及的“肥肉”）不同，它围绕着人的脏器，主要存在于腹腔内。
我们大多数人都会积累一定数量的内脏脂肪，这于机体于脏器的保护有益。然而真正对我们的健康有害的是当它变得过量，过多的内脏脂肪与许多疾病有着密切关联。
除了扰乱胰岛素之外，内脏脂肪过多，还会抑制脂肪细胞因子如瘦素等的分泌。此外，内脏脂肪过多还会释放促炎细胞因子，增加炎症反应，导致炎症发生、疾病恶化。（Schwarz J. et al. Effects of Dietary Fructose Restriction on Liver Fat, DeNovo Lipogenesis, and Insulin Kinetics in Children With Obesity.Gastroenterology. 2017 Sep;153(3):743-752.；Guifen Qiang, et al. The obesity-induced transcriptional regulator TRIP-Br2 mediates visceral fat endoplasmicreticulum stress-induced inflammation Nature Communications, 2016; 7: 11378DOI: 10.1038/ncomms11378）
脂肪酸合酶（Fatty Acid Synthase，FASN；也缩写成 FAS）,又称为脂肪酸合成酶，位于细胞胞浆，是一个具有多种功能的多酶复合体,在脂肪酸的从头合成（De NovoBiosynthesis）中催化合成C16的软脂酸（或C18的硬脂酸）。正常情况下FASN 主要表达于脑、肺、肝脏、脂肪、泌乳期乳腺等组织中。
目前，普遍认为其在能量代谢中发挥着重要作用,与许多疾病如癌症、多发性硬化症、心血管疾病、肥胖症、脂肪肝、神经细胞损伤、不同形式的炎症以及血源性肿瘤的发生及发展相关联。
2020年5月7日Cell Stem Cell发表长文首次报道了脂肪酸合酶介导的脂质代谢紊乱与大脑认知功能之间存在的功能性联系。（Megan Bowers, Tong Liang, DanielGonzalez-Bohorquez, et al. FASN-Dependent Lipid Metabolism Links NeurogenicStem/Progenitor Cell Activity to Learning and Memory Deficits, Cell Stem Cell(2020) doi:10.1016/j.stem.2020.04.002）
研究者说，希望将来用于治疗认知功能障碍的疗法及与神经细胞死亡相关的多种疾病，包括帕金森病（PD）和阿尔兹海默病（AD）。
纳米颗粒具有许多特殊的理化性质,并引发出一些特殊的生物效应。即所谓纳米效应。纳米材料的概念只出现了几十年，但是人类使用纳米材料的历史可追溯到两千年前。
中国古代收集蜡烛的烟灰作为墨的原料，所作字画历经千年而不褪色，其原因就在于所使用的烟灰实际上是纳米级的炭黑。
纳米级药可以进入毛细血管，在血液循环系统自由流动，还可穿过细胞，被组织与细胞以胞饮的方式吸收，提高生物利用率；可消除特殊生物屏障对药物作用的限制，如血脑屏障、血眼屏障及细胞生物膜屏障等。
在药物传输系统领域一般将纳米粒的尺寸界定在1-1000nm，显然，该范围包括了大小在100nm以上的亚微米粒子。根据药剂领域界定的纳米尺寸范围以及药物在纳米载体中多以分子状态存在，药物的根本性质并无改变，许多纳米产品的实质与纳米技术的科学内涵还有着不小的差距。
纳米材料的制备方法根据制备原料状态分为固体法、液体法及气体法。现今采用分类方法较多。一般分为化学法:水热法、水解法、熔融法等；物理法:蒸气冷凝法、爆炸法、电火花法、离子溅射法、机械研磨法、低温等离子体法等；还有综合法：如等离子加强化学沉积法 (PECVD)、激光诱导化学沉积 (LICVD)等。
回到前面，吸烟为什么对PD、AD和肥胖都有可能的保护作用的问题。
日本日清奥利友集团株式会社的专利“帕金森病患者的内脏脂肪减少抑制剂”（授权公告号：CN102665710B）其发明人在专利说明书中这样描述：
本发明人着眼于作为身体脂肪要素之一的内脏脂肪，进行深入研究后发现，对健康人的内脏脂肪减少有效的油脂，能够抑制帕金森病模型大鼠内脏脂肪含量的减少，由此完成了本发明。
该内脏脂肪减少抑制剂是以C8或C10饱和脂肪酸（SFA）为结构脂肪酸的油脂。如辛癸酸甘油酯，一种中等碳链的酯类产品，也称为MCT（或称ODO）。
本发明人多年来一直坚持从香烟烟气中含有的一般认为是“坏脂肪酸”的饱和脂肪酸（SFA）着手研究探索吸烟对PD、AD和肥胖可能的保护机制，本着“现象即本质”和“存在即合理”这两个具有异曲同工之妙的中西哲学观点，层层剖析。
本发明人发现，给予实验鼠纳米态的硬脂酸可以抵抗肥胖鼠增加体重，提高AD鼠记忆和认知，改善PD鼠的健康状态。
尽管给予纳米硬脂酸的治疗方案其作用机制并没有从所述疾病的源头加以解决问题，像胰岛素并不治疗糖尿病，止痛药并不解决痛的根源一样。但见效快，利于迅速阻止所述疾病恶性发展的进程。
纳米硬脂酸作为活性成分在制备产品中的用途没有相关文献和专利。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种纳米硬脂酸作为活性成分在制备药物、食品、食品添加剂或饲料添加剂中的用途及其制备方法，用于改善哺乳动物的健康。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种纳米硬脂酸的用途，所述纳米硬脂酸作为活性成分在用于制备药物、食品、食品添加剂或饲料添加剂中的用途。
所述纳米硬脂酸其纳米粒的尺寸界定在1-1000nm，优选小于600nm，更优选小于100nm。
进一步，所述药物用于治疗和/或预防与脂类代谢相关的疾病，所述疾病是肥胖症、阿尔茨海默病或帕金森病。
所述疾病包括但不限于肥胖症、阿尔兹海默病（AD）和帕金森病（PD）。
非酒精性脂肪性肝（NAFLD）已正式更名为代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）。在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者的肝细胞内可检测到高水平的ICAM-1，同时ICAM-1的水平越高，非酒精性脂肪性肝病患者出现动脉粥样硬化的风险越高。
如前所述，血液中游离态硬脂酸与ICAM-1负相关。
进一步预期所述纳米硬脂酸可用于生产抗脂肪性肝病的产品，包括代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）。
进一步，所述药物的剂型是颗粒、胶囊、微囊、软胶囊、凝胶、口服液、片剂、粉剂、栓剂、针剂、舌下含片、滴耳剂、滴鼻剂或喷雾剂，所述剂型均为生理上接受的制剂。
进一步，所述制剂可以以每剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位形式给予。这种单位可根据治疗的病症、给予方法和所需者的年龄、体重和状况来确定。所述纳米硬脂酸，或其制剂可以以每剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位形式给予。按每日给予活性成分纳米硬脂酸的量来说，人类需要者，优选，不小于10mg/d，不少于1次/d。
所述制剂可适于通过任何所需的合适方法给予，包括通过经口（包括口腔或舌下）、直肠、经鼻、局部（包括口腔、舌下或经皮）、阴道或肠道外（包括皮下、肌内、静脉内或皮内）方法给予。并且使用公知领域中已知的所有方法通过例如将活性成分与赋形剂或辅助剂合并来制备这样的制剂。
适合口服给予的制剂可作为独立单位，例如胶囊或片剂；粉剂或颗粒剂；溶液或悬浮液；食用泡沫或泡沫食品；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂给予。
而且在以片剂或胶囊形式口服给药的情况下，可以将活性成分与口服、无毒和惰性赋形剂，包括可食用的碳水化合物、淀粉或甘露醇混合。还可存在香料、防腐剂、分散剂和染料。
可用其填充成形明胶壳，制造胶囊。在填充操作之 前可以将助流剂和润滑剂，例如固体形式的高分散硅酸、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或聚乙二醇添加到该粉末混合物中。
口服液，例如溶液、糖浆和酏剂，包括以剂量单位形式制备以使所给的量包含预定量的所述纳米硬脂酸。也可以加入增溶剂和乳化剂，防腐剂、香料添加剂，例如薄荷油，或天然甜味剂或糖精，或其它人工甜味剂等。
本发明的另一个目的在于提供一种纳米硬脂酸的制备方法，包括以下步骤：
1）将表面活性剂制备成水溶液；
2）将反应容器置于65～90℃的恒温水浴中，再把步骤1）制得的水溶液加入到所述反应容器中；
3）将硬脂酸溶于有机溶剂，然后匀速注入所述反应容器内；
4）持续搅拌，当反应容器内溶液呈乳状时加入冷却水，然后把反应容器置于冰上在0.7k～1.3k rpm转速下继续搅拌0.5～3.0 h；
5）搅拌结束，将反应容器内的反应物移至离心管，用水洗涤，冷冻干燥，即得所述纳米硬脂酸。
本发明人是基于香烟烟气中非挥发性饱和脂肪酸着手进行的本研究，脂肪酸只是其中的一种，C18-0。本发明并没有排除而是包含其它饱和脂肪酸及其饱和脂肪酸的混合物，例如C8和/或C10饱和脂肪酸及其混合物。
进一步，所述表面活性剂是MYRJ59、MYRJ53或吐温80，所述有机溶剂是三氯甲烷或者三氯甲烷与丙酮或者三氯甲烷与甲醇以2:1体积比混合的溶液中的一种或多种。
进一步，所述硬脂酸是动物源性硬脂酸、植物源性硬脂酸或两种混合的硬脂酸。
优选地，所述硬脂酸是植物源性硬脂酸，所属三氯甲烷含有0.6%～0.9%的乙醇作稳定剂。
进一步，所述步骤1）中表面活性剂与蒸馏水的用量比为：表面活性剂每100mg～350mg溶于30mL的水中。
进一步，所述步骤4）中冷却水的加入量为7～13mL。
本发明一种纳米硬脂酸及其制备方法和用途的有益效果：本发明的纳米硬脂酸作为活性成分应用于制备药物、食品、食品添加剂或饲料添加剂，改善了哺乳动物的健康，不仅可以抵抗人体体重的增加，减少肥胖症，还可以提高AD患者的记忆和认知，改善PD患者的健康状态，为肥胖症、阿尔茨海默病（AD）或帕金森病的治疗提供了新方法、新途径和新药物，扩大了纳米硬脂酸的用途。
附图说明
图1 —为纳米硬脂酸制备方法A电镜显示图 (×60000)。
具体实施方式
以下结合附图及实施例对本发明作进一步说明，但这些具体实施方案不以任何方式限制本发明的保护范围。
实施例 1 纳米硬脂酸的制备
1）称取0.3g表面活性剂Tween 80，溶于30ml蒸馏水中形成水相；
2）将三口烧瓶固定置于恒温磁力搅拌水浴锅，待水温升至85℃加入制备好的水相；
3）称取500mg 硬脂酸于10ml有机溶剂(三氯甲烷和甲醇以体积比2：1混合得到的混合溶液)中，震荡超声，用6号注射器匀速注入水相中
4）1200rpm搅拌约1.5h，待混合溶液呈乳状，加入12ml冷却的蒸馏水，并将三口烧瓶置于冰上继续搅拌2h；
5）搅拌结束后将样品转移到离心管中，用蒸馏水4℃，20000rpm洗涤3次；冷冻干燥，即得，并在4℃下保存备用。
实施例2 纳米硬脂酸的制备
1）称取0.25g表面活性剂MYRJ59，溶于30ml蒸馏水中；
2）将三口烧瓶固定置于恒温磁力搅拌水浴锅，直到水温升至65℃加入制备好的2.1的制备物；
3）称取0.26g硬脂酸，溶于10ml三氯甲烷中，震荡超声，用6号注射器匀速注入2.2中；
4）1100rpm搅拌约0.5h，混合溶液呈乳状，加入10ml冷却蒸馏水，并将三口烧瓶置于冰上继续搅拌2h；
5）搅拌结束将样品移至到离心管，用蒸馏水4℃，20000rpm洗涤2次；冷冻干燥，即得固体纳米硬脂酸，于4℃下保存备用。
实施例 3 纳米硬脂酸的制备
1）称取0.2g表面活性剂MYRJ53，溶于30ml蒸馏水中；
2）将三口烧瓶固定置于恒温磁力搅拌水浴锅，待水温升至70℃加入制备好的水相；
3）称取245mg 硬脂酸、混合溶于10ml有机溶剂(三氯甲烷和丙酮以体积比2：1混合得到的混合溶液)中，震荡超声，用6号注射器匀速注入水相中；
4）700rpm搅拌约1h，待混合溶液呈乳状，加入8ml冷却的蒸馏水，并将三口烧瓶置于冰上继续搅拌2h；
5）搅拌结束后将样品转移到离心管中，用蒸馏水4℃，20000rpm洗涤3次；洗涤后冷冻干燥，即得，在4℃下保存备用。
以下将纳米硬脂酸简称M30K。
实施例4 纳米硬脂酸对Obese鼠的影响
材料与方法
实验动物
18只8周龄wistar大鼠按随机数字表法分为3组，标准饮食对照组组、高脂饮食组和高脂＋M30K组，每组6只；
操作方法
对照组每日采用标准饲料喂养，高脂组每日供应充足的高脂饲料，M30K组在高脂饲料的基础上每日给予300mg/kg的M30K灌胃，其他组采用等体积的生理盐水。每周一早晨9点记录一次大鼠的体重。8周时，空腹12h后，经腹腔麻醉后处死。
指标检测
血清糖脂代谢通过内眦静脉采血，血液样本在室温下放置1h后离心，将收集到的血清置于-70℃冰箱保存；空腹血糖测定运用葡萄糖氧化酶法，瘦素通过ELISA测定。
统计学分析
定量数据均表示为（均数±标准差），采用SPSS19.0软件，组间的比较采用单因素方差分析(One Way ANOVA)，两两比较采用Tukey检验，以p<0.05为有统计学差异。
表1 大鼠体重和糖脂代谢的比较
与对照组相比，a Ｐ＜0.05；与M30K组比较，b Ｐ＜0.05
实施例5 纳米硬脂酸对PD鼠的影响
材料与方法
动物10月龄雄性C5BL小鼠,体重30～35g，30只随机分为3组，即模型组11只、M30K组11只和正常组8只；所有动物均分笼饲养。模型组每天腹腔注射MPTP30mg／kg ，连续3天；M30K于给MPTP前7天开始每天灌胃M30K450mg／kg，连续15天，于灌胃后第8天每天腹腔注射MPTP30mg／kg，连续3天；正常组给予等量生理盐水。各组于给MPTP后第5天观察。
小鼠肢体运动功能检测：
每只小鼠均记录悬挂实验和游泳实验得分。
悬挂实验：将受试小鼠悬挂于一水平电线上，如小鼠用两前爪抓住电线记3分，用一前爪抓住电线记2分，两前爪均抓不住电线记1分。
游泳实验：将受试小鼠放入一个20cm×30cm ×20cm规格的水箱中，水温为22～25℃，在受试时间内(10min)能连续不断游泳者记3分，大部分时间游泳偶尔漂浮者记2.5分，漂浮占50％以上者记2 分，偶尔游泳者记1.5分，偶尔用后肢游动并漂浮在一边者记1分 。上述两项实验最后计算得分情况。
统计学方法：采用SPSS统计软件进行t检验。
结果
小鼠造模情况：
小鼠每次注射MPTP后，先有短暂兴奋，表现为乱窜乱跳，后均出现全身剧烈震颤，皮毛及尾巴竖立，活动减少，均持续20～30min后震颤消失，随后出现活动减少，并在实验时间内一直存在 。
小鼠运动功能测定：
与正常组比较 ，模型组悬挂和游泳实验得分均显著降低 (P <0.01)，说明模型成功；与模型组比较，M30K两项运动实验分均降低(P <0.05)，说明提示短时间给药能改善小鼠运动功能障碍。
表2小鼠运动功能测定结果比较 (分，)
与正常组比较，* P <0.01，与模型组比较，# P <0.05。
实施例6 纳米硬脂酸对AD鼠的影响
试验动物和方法
SPF级SD大鼠，采用长期腹腔注射D-半乳糖法造模，制备衰老痴呆模型。造模后，正常对照组、模型组分别以2ml/d生理盐水灌胃，M30K低剂量组（150mg/kg/d）、M30K高剂量组（300mg/kg/d），持续给药8周。8周后，通过Morris水迷宫评估大鼠的空间学习记忆能力，结果见表3和表4。
表3 水迷宫测试潜伏期的影响结果 （n=6）
表4 水迷宫测试平台期的影响结果 （n=6）
由表3可以看出，不同测试时间点，与正常组相比较，模型组潜伏期显著延长，差异具有统计学意义(P<0.05)，提示本实验模型制备成功。与模型组相比较，各给药组潜伏期明显缩短，其中M30K高剂量组优于M30K低剂量组(P<0.05)。
由表4可以看出，正常组在第三象限游泳时间长于其他象限，差异具有显著性，说明大鼠已对平台形成记忆。与正常组比较，模型组在第三象限游泳时间明显较短，说明D-半乳糖具有损害大鼠记忆功能；与模型组比较，M30K高剂量组在第三象限游泳时间明显延长(P<0.05)，提示M30K具有改善记忆功能障碍的作用。
实施例7
纳米硬脂酸的制备也可以用纳米领域公知的方法，例如高压乳匀法等。还可以对纳米硬脂酸加以不同的各种修饰，例如PEG修饰，冰片修饰、大麻二酚（CBD）修饰等。以适应其不同类型的产品和剂型。本实施例提供另外一种制备硬脂酸的方法，具体步骤如下：
1）称取硬脂酸75mg加至丙酮5.0ml中超声使充分溶解 ，加入适量溶血磷脂，三氯甲烷和少量稳定剂乙醇液混匀和缓冲液 (pH 5.5) 2ml ，超声60s形成乳剂 ；
2）另取 poloxamerl88 400mg 溶于蒸馏水25ml，将乳剂以6号针头注入置冰浴的 1000r／min 磁力搅拌器中 ，继续搅拌4h ，挥发完全 ，补充水至50ml，
3）用0.22 μm微孔滤膜过滤，即得纳米硬脂酸粒胶体；
4）纳米硬脂酸粒胶体的表征：
用3%磷钨酸溶液染色，固定l5min，于透射电镜下观察其形态并照相 ，粒度仪测定其平均粒径和多分散性。
纳米粒平均粒径为55.3 nm ，多分散性指数为1.00，透射电镜照片显示 ，大小较均匀基本呈圆整球形。见图1
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。