阅读说明：本技术 新型冠状病毒环介导等温扩增快速检测试剂盒及使用方法 (Novel coronavirus loop-mediated isothermal amplification rapid detection kit and use method thereof ) 是由 不公告发明人 于 2020-04-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种用于新型冠状病毒检测的逆转录实时荧光定量环介导等温扩增试剂盒及其使用方法。所述试剂盒,由新型冠状病毒核衣壳(N)基因环介导等温扩增引物组构成,试剂盒成分主要由新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组溶液、环介导等温扩增反应预混液、AMV逆转录酶、新冠病毒N基因阳性质控品构成,可采用逆转录实时荧光检测方法,进行新冠病毒的快速检测。本方法在30分钟之内可以完成检测,特异性强,灵敏度高,为新型冠状病毒的防控及流行趋势调查分析提供了一种简便、快速的途径。(The invention discloses a reverse transcription real-time fluorescence quantitative loop-mediated isothermal amplification kit for detecting novel coronavirus and a using method thereof. The kit is composed of a novel coronavirus nucleocapsid (N) gene loop-mediated isothermal amplification primer group, and the kit mainly comprises a novel coronavirus N gene loop-mediated isothermal amplification primer group solution, a loop-mediated isothermal amplification reaction premix solution, AMV reverse transcriptase and a novel coronavirus N gene positive quality control product, and can be used for rapidly detecting the novel coronavirus by adopting a reverse transcription real-time fluorescence detection method. The method can complete detection within 30 minutes, has strong specificity and high sensitivity, and provides a simple, convenient and quick way for prevention and control of the novel coronavirus and investigation and analysis of epidemic trend.)

新型冠状病毒环介导等温扩增快速检测试剂盒及使用方法

技术领域

本发明涉及一套用于病毒快速检测的引物组、试剂盒及使用方法，尤其涉及一套用于检测新型冠状病毒（简称新冠病毒）环介导等温扩增引物组、试剂盒及其使用方法，属于新冠病毒检测领域。

背景技术

新冠病毒在分类学上属于冠状病毒科(Corona viridae)冠状病毒属(Corona virus)中的β类型冠状病毒，具有囊膜和刺突细胞学特征，基因组为线性单股正链的ＲNA病毒。该病毒基因组包含两个位于侧翼的非编码区(5'-UTＲ和3'-UTＲ)、由12个开放阅读框(orf1ab， Spike，orf3a，orf3b，E，M，orf6，orf7a，orf7b，orf8/orf8b，N和orf9b)组成的一个编码多蛋白开放阅读框、1个前导序列、9个转录调控序列组成。其基因组的排列顺序为5'-复制酶(orf1/ab)-结构蛋白［Spike(S) Envelope(E)-Membrane(M)-Nucleocapsid(N)］3'，其编码产物依次是复制酶(orf1/ab)、刺突糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)、核衣壳(N)及其它假想蛋白，但缺乏在β类型冠状病毒A系中所特有的血凝素脂酶(HE) 基因。

目前，新冠病毒的临床检测方法主要为实时荧光定量 RT-PCR 检测。然而，由于荧光定量RT-PCR反应对温度具有一定的依赖性，要求精密控温系统，检测时间长，实验成本高，不适于现场快速检测，面对新冠病毒的世界范围大规模流行，急需开发快速检测方法。环介导等温扩增（LAMP）法是2000年由日本Notomi博士发明的一种新的核酸扩增技术，更具有简便、快速、敏感性高和特异性强等优点。经过二十年的发展，该方法得到不断完善，尤其在结果判定方面，已有多种肉眼可视的方法及实时荧光检测法得到广泛应用，可从源头上控制住由电泳开盖造成的气溶胶污染，尤其适合于现场快速检测以及床旁检测。

目前，新冠病毒的临床检测方法主要为实时荧光定量 RT-PCR 检测。然而，由于荧光定量RT-PCR反应对温度具有一定的依赖性，要求精密控温系统，检测时间长，实验成本高，不适于现场快速检测，面对新冠病毒的世界范围大规模流行，急需开发快速检测方法。环介导等温扩增（LAMP）法是2000年由日本Notomi博士发明的一种新的核酸扩增技术，更具有简便、快速、敏感性高和特异性强等优点。经过二十年的发展，该方法得到不断完善，尤其在结果判定方面，已有多种肉眼可视的方法及实时荧光检测法得到广泛应用，可从源头上控制住由电泳开盖造成的气溶胶污染，尤其适合于现场快速检测以及床旁检测。