阅读说明：本技术 苯乙醇苷类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用 (Application of phenylethanoid glycosides compounds in preparation of anti-hepatic fibrosis drugs ) 是由 沈婷 胡卫成 纪丽莲 于 2020-05-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及药物技术领域,尤其是涉及苯乙醇苷类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用。苯乙醇苷类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用,其中,所述苯乙醇苷类化合物包括化合物1-12中的任一种或多种。本发明通过体外抗纤维化实验,首次提出并证实了上述苯乙醇苷类化合物对TGFβ1刺激的大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖具有一定的抑制作用,从而实现抗肝纤维化的作用。(The invention relates to the technical field of medicines, in particular to application of phenylethanoid glycosides compounds in preparation of anti-hepatic fibrosis medicines. The application of the phenylethanoid glycosides compounds in preparing anti-hepatic fibrosis drugs, wherein the phenylethanoid glycosides compounds comprise any one or more of compounds 1-12. The invention firstly provides and proves that the phenethyl alcohol glycoside compound has certain inhibition effect on rat hepatic stellate cell HSC-T6 cell proliferation stimulated by TGF beta 1 through an in-vitro anti-fibrosis experiment, thereby realizing the anti-hepatic fibrosis effect.)

苯乙醇苷类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物技术领域，尤其是涉及苯乙醇苷类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用。

背景技术

肝纤维化(hepatic fibrosis)是病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、药物中毒性肝病、全身疾病的肝脏损害等引起的病理过程，是慢性肝病发展至肝硬化的中间环节，如何对其进行有效控制是困扰医学界的重大难题。晚期肝硬化病人3年存活率仅为16％，全世界直接死于肝硬化的人数位居人类总死亡数的第6位。正确选择抗肝纤维化药物，不仅可以抑制或逆转肝纤维化，也为进一步的治疗奠定基础，因此寻找有效逆转肝纤维化的药物已成为医学界研究的重点之一。

肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质(extra cellular matrix，ECM)过度沉积。肝星状细胞(HSC)是肝纤维化时过量ECM的主要来源，激活的HSC大量增殖，发生表型改变并分泌过多的ECM沉积于肝脏是肝纤维化形成的关键。肝细胞在损伤后释放的氧自由基(ROS)能够诱导HSC活化增生并且刺激胶原基因表达，并且凋亡后的肝细胞能够促进HSC分泌胶原。抑制静息的HSC转化成活化的HSC是治疗肝纤维化的重要策略。

目前，对肝纤维化的治疗主要为阻断肝纤维化的诱因，抗肝纤维化的药物如秋水仙碱、青霉胺等具有较大的毒副作用，在临床上不易推广。天然药物具有结构和生物活性多样性等优点，为设计理想的新药提供了独特的化学结构和药理活性。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供苯乙醇苷类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用。

本发明的第二目的在于供一种抗肝纤维化药物组合物。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

苯乙醇苷类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用，其中，所述苯乙醇苷类化合物包括化合物1-12中的任一种或多种；

所述化合物1-12的结构式分别如下：

肝纤维化是由多种细胞因子和多条PI3K-Akt细胞信号通路共同参与的复杂的病理过程，目前已知有TGFβ1-Smad通路、Rho-ROCK通路、MAPK通路等。转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)是肝纤维化最关键的细胞因子，能够抑制肝细胞的增殖，激发HSC活化，促进ECM产生，并调节肝细胞的凋亡。研究表明，NF-κB能通过调控炎症因子和抗炎因子表达增加或减少来影响肝脏炎症反应的损伤修复，从而影响肝纤维化的发展。在静息状态下，NF-κB以p50/p65异源二聚体与抑制性蛋白IκBα结合的形式而存在于胞质中。激活过程是通过磷酸化抑制性蛋白IκB-α使其构象改变而从NF-κB脱落，使得NF-κB活化，活化的NF-κB进入细胞核，与DNA接触，并启动或抑制相关基因的转录。活化的NF-κB可以促进TNF-α、MIP-2、ICAM-1等细胞因子的释放，促进炎症反应，激活HSC。肝纤维化发生时，各种炎症因子激活NF-κB加重损伤肝组织，引发脂质过氧化，促进肝细胞调亡和HSC活化增殖，阻断NF-κB信号可减轻肝纤维化和肝星状细胞的凋亡。

本发明通过体外抗纤维化实验，首次提出并证实了上述苯乙醇苷类化合物对TGFβ1刺激的大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖具有一定的抑制作用，从而实现抗肝纤维化的作用。利用计算机靶标分析平台和分子对接技术发现上述苯乙醇苷类化合物的抗肝纤维化的可能靶点NF-κB(PDB code:4G3D)，该靶点是激活NF-κB的重要激酶，对它的抑制可以减弱NF-κB下游信号的传导。通过荧光素酶基因进一步证实上述苯乙醇苷类化合物可以抑制NF-κB表达。

在本发明一

具体实施方式

中，所述苯乙醇苷类化合物作为NF-κB信号通路抑制剂。

在本发明一具体实施方式中，所述苯乙醇苷类化合物抑制肝星状细胞HSC-T6细胞的增殖。

在本发明一具体实施方式中，所述肝星状细胞HSC-T6细胞的增殖由TGFβ1诱导产生。

在本发明一具体实施方式中，所述苯乙醇苷类化合物在制备抗氧化应激药物中的应用。

在本发明一具体实施方式中，所述苯乙醇苷类化合物为从角蒿属植物中提取得到的。其中，所述角蒿属植物包括密生波罗花的根茎、两头毛的根茎以及西藏罗花的根茎中的任一种。所述提取的方法包括：采用水提取后经大孔吸附树脂柱层析，梯度洗脱分离得到。结构通过核磁共振技术以及液质联用技术进行了验证。

本发明还提供了一种抗肝纤维化药物组合物，所述组合物包括化合物1-12中的任一种或多种，和/或所述化合物1-12任一种或多种的药学上可接受的盐。

在本发明一具体实施方式中，所述药学上可接受的盐包括硫酸盐、磷酸盐和盐酸盐中的任一种或多种。可根据实际需求进行调整。

在本发明一具体实施方式中，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料。

其中，所述辅料可以选自以下一种或多种：溶剂、增溶剂、助溶剂、矫味剂、防腐剂、润滑剂、润湿剂、乳化剂、崩解剂、填充剂、渗透压调节剂、pH值调节剂、渗透促进剂、稳定剂、助流剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂以及释放阻滞剂等等。

在本发明一具体实施方式中，所述药物组合物为经胃肠道给药剂型或非经胃肠给药剂型，优选为经胃肠道给药剂型。

其中，所述经胃肠道给药剂型是指药物组合物经过口服后，进入胃肠道，经吸收发挥作用的剂型，包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂以及混悬剂等等。

非经胃肠道给药剂型是给药途径除口服以外的其他剂型，包括注射给药剂型、皮肤给药剂型、呼吸道给药剂型等等。其中，注射给药剂型如注射剂，包括静脉注射、皮内注射剂等等；呼吸道给药剂型如喷雾剂等。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明中，通过体外抗纤维化实验，首次提出并证实了上述苯乙醇苷类化合物对TGFβ1刺激的大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖具有一定的抑制作用，从而实现抗肝纤维化的作用；

(2)本发明通过研究验证上述苯乙醇苷类化合物可以抑制NF-κB表达，抑制肝星状细胞HSC-T6细胞的增殖同时能够抗氧化应激；并采用分子对接的方法评价靶标与活性分子相互作用的强弱，并结合配体与药效团模型的匹配程度，进行构效关系分析；采用分子生物学的方法对上述苯乙醇苷类化合物的抗肝纤维化作用机制进行深入研究，为抗肝纤维化的药物开发与制备提供了新的思路。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明提供的苯乙醇苷类化合物对TGFβ1刺激的HSC-T6细胞增殖的影响；

图2为本发明利用SEAWare靶标分析平台预测的靶标预测结果；

图3为本发明的苯乙醇苷类化合物与靶点4G3D的对接结果；

图4为本发明提供的苯乙醇苷类化合物的荧光素酶基因检测NF-κB核转移的结果。

具体实施方式

下面将结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

化合物1-4对CCl₄诱导HepG2细胞损伤的保护作用

从图1可知，化合物1-4对HepG2细胞在50ppm浓度下，对细胞没有毒性；从MTT法检测正常对照组、CCl₄损伤组以及各保护组的细胞活性，结果显示，各成分对CCl₄损伤均有明显的保护作用。

实施例2

化合物对TGFβ1刺激的HSC-T6细胞增殖的影响

从图中可知，化合物对HSC-T6细胞增殖具有一定的抑制作用。

实施例3

化合物抗肝纤维化作用的靶点

利用SEAWare靶标分析平台预测化合物的靶点，发现与抗肝纤维化作用相关的可能作用靶点：NF-κB(PDB code:4G3D)，该靶点具有NF-κB激酶作用，对它的抑制可以调控NF-κB下游信号的传导。图2为靶标预测的结果。

实施例4

化合物与靶点的对接结果

利用分子对接软件Discovery studio 4.0的Libdock对接程序评价化合物与靶点4G3D的相互作用，如图3所示，结果表明化合物可以对接到靶点的活性口袋。

实施例5

化合物抑制NF-κB核转移

从图4的中可知，化合物可以抑制NF-κB核转移，进一步验证了分子对接的结果。

由上述实施例1-5的结果可知，苯乙醇苷类化合物包括化合物1-12可以通过抑制氧化应激和NF-κB信号通路，抑制肝纤维化形成。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。