具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

一种抑制淀粉样蛋白产生的稀有人参皂苷的应用。

本发明提供了稀有人参皂苷Compound K在益智、预防智力衰退、防治神经退行疾病中的应用。

包括稀有人参皂苷Compound K用于制备抑制Aβ42淀粉样蛋白产生的、益智、预防智力衰退、防治神经退行疾病等的功能食品、保健品和生物医药制品或其组合物。以及稀有人参皂苷Compound K用于制备β分泌酶或γ分泌酶抑制剂及组合物。

其中，由稀有人参皂苷Compound K制备的具有抑制Aβ42淀粉样蛋白产生的、益智、预防智力衰退、防治神经退行疾病等的功能食品、保健品和生物医药制品或其组合物可为任何可接受的剂型形式，包括口服剂型形式和外给药剂型形式。口服剂型包括片剂、压片糖果、硬胶囊、软胶囊、口服液、糖浆、颗粒、滴丸、口崩片、缓释片、缓释胶囊、控释片以及控释胶囊等。外给药制剂包括水针、冻干粉针、无菌粉针以及输液等。

(一)人参皂苷Compound K对细胞活力的影响

材料准备：

取对数生长期的细胞，吸去细胞培养液，用0.25％胰酶37℃消化2-3分钟，加2mLDMEM培养液，制成单细胞悬液，显微镜下细胞计数后，用培养液调整细胞浓度至2.5×10⁵个/mL，96孔细胞培养板每孔加入200μL细胞悬液，在37℃、5％二氧化碳浓度的二氧化碳培养箱中培养6小时后，吸出培养液，用37℃预温的DMEM培养液冲洗1次。

实验处理：

实验组：在上述细胞材料中分别加入含有有效浓度分别为5、10和20μg/mL的稀有人参皂苷compound K的DMEM培养液。

对照组：在上述细胞材料中添加培养基。

处理方法：

上述实验组和对照组均每组处理3个复孔，继续培养12h后，每孔加入5mg/mL MTT20μL，继续培养4h后吸弃上清，每孔加入200μL DMSO，在微孔板振荡器上振荡10min直至晶体完全溶解。

将96孔培养板置于酶标仪上，在490nm下测定各孔光密度值，根据各孔光密度值计算细胞活性。

细胞活性的计算公式为：细胞活性％＝实验组样品的光密度值/对照组光密度值×100％。

实验结果：

根据酶标仪下测定的各孔光密度值计算细胞活性如表1所示，可知人参皂苷compound K对细胞活力有提高作用。

表1不同浓度人参皂苷compound K对细胞活力的影响

(二)稀有人参皂苷Compound K对Aβ42淀粉样蛋白形成的抑制作用

实验处理：

实验组：取对数生长期的细胞，分别加入含有有效浓度分别为5、10和20μg/mL的稀有人参皂苷Compound K的DMEM培养液。

阴性对照组：向对数生长期细胞中加入DMEM培养液。

阳性对照组：向对数生长期细胞中加入含有有效浓度为20μg/mL的β分泌酶抑制剂Verubecestat的DMEM培养液；Verubecestat是一种有效的、选择性的β分泌酶的抑制剂。

处理方法：

上述组别中每个处理三次重复，所有处理在37℃、5％二氧化碳浓度的二氧化碳培养箱中培养12小时后，收集上清液，用于Aβ42含量的测定。

按照“人β淀粉样多肽42(Aβ42)Elisa试剂盒”的操作要求，进行标准品和供试样品的Aβ42含量测定，制作标准品的标准曲线，根据标准曲线计算出供试样品的Aβ42的含量(pg/ml)，供试样品对Aβ42产生的抑制率计算公式为：

抑制率％＝(阴性对照Aβ42的含量-实验组或阳性对照组Aβ42的含量)/阴性对照Aβ42的含量x 100％。

实验结果：

表2试剂盒测定的标准品Aβ42淀粉样蛋白的不同浓度的OD值。

根据表2绘制标准品Aβ42淀粉样蛋白的不同浓度下OD值标准曲线，如图1所示。

根据图1中标准曲线得到标准计算公式：

Y＝0.0032x+0.1312,

R²＝0.9866；

将“人β淀粉样多肽42(Aβ42)Elisa试剂盒”测出的实验组和阳性对照组的OD值代入到公式中，得到相应的Aβ42淀粉样蛋白浓度。

再通过对Aβ42淀粉样蛋白产生的抑制率计算公式，计算实验组和阳性对照组样品对Aβ42淀粉样蛋白产生的抑制率，如表3所示：

表3阳性对照组与实验组对Aβ42淀粉样蛋白产生的抑制率。

结论：根据上述实验结果表明，稀有人参皂苷Compound K对Aβ42淀粉样蛋白的形成具有明显的抑制作用，且抑制效果优于β分泌酶抑制剂(Verubecestat)，因此在益智、预防智力衰退、防治神经退行疾病等方面具有有益效果，可应用于益智、预防智力衰退、防治神经退行疾病等的功能食品、保健品和生物医药制品或其组合物等。

上述实施方式并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的技术人员在本发明的技术方案范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也均属于本发明的保护范围。